●張孝忠（青島市即墨區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局 山東 青島 266200）

1 發(fā)病情況

即墨市某生豬養(yǎng)殖場于2021年10月發(fā)現(xiàn)經(jīng)產(chǎn)母豬染病癥狀，據(jù)養(yǎng)殖戶反映，10月下旬母豬出現(xiàn)發(fā)熱畏寒癥狀，養(yǎng)殖戶對其進行體溫測定，溫度達41℃，病豬呼吸急促，被毛粗亂，出現(xiàn)便秘和腹瀉交替，養(yǎng)殖戶對其進行強力霉素、恩諾沙星口服用藥，連續(xù)用藥3 d 癥狀有所緩解，但病豬皮膚出現(xiàn)紅色斑點，隨后耳尖部、腹部、肢蹄末端出現(xiàn)青紫色斑塊，而保育豬舍也有類似發(fā)病癥狀，養(yǎng)殖戶對其進行板藍根注射液治療，效果不佳，經(jīng)產(chǎn)母豬出現(xiàn)一例死亡。遂前來就診。

2 臨床癥狀

病豬精神沉郁，嗜睡，食欲銳減，出現(xiàn)厭食癥狀，體溫升高到41.5℃，感染的病豬出現(xiàn)明顯的氣喘、畏寒、發(fā)抖、扎堆現(xiàn)象。發(fā)病初期，糞便干燥有便秘癥狀，隨后出現(xiàn)腹瀉，糞便中夾雜黏液，伴有明顯的惡臭味。部分病豬有嘔吐癥狀，口腔內(nèi)有泡沫樣分泌物，夾雜血液。病豬臥地不起，驅(qū)趕時發(fā)現(xiàn)無法正常行走，伴有痛苦呻吟，四肢運動失衡，出現(xiàn)共濟失調(diào)，病情不嚴重的生豬呈犬坐姿勢。感染病豬被毛粗亂，其耳尖、耳根、背部、臀部、四肢皮膚出現(xiàn)紅色出血點，并有紫色斑塊，眼瞼腫脹，鼻腔內(nèi)黏性分泌物增多，病豬消瘦[1]。

3 病理解剖

剖檢3 例病死豬，病死豬的內(nèi)臟組織病理變化相似。病豬胸腔內(nèi)有積液，下頜淋巴結、腹股溝淋巴結均出現(xiàn)腫大、出血癥狀，切面如黑白相間的大理石花紋。病豬胃底黏膜有出血癥狀，直腸黏膜內(nèi)有許多潰瘍病變，呈紐扣狀，回腸和盲腸內(nèi)有壞死組織。膀胱黏膜有彌散性出血癥狀。腎臟表面有許多出血斑，腎盂出血。病豬脾臟腫大，質(zhì)地變軟，表面有出血點，類似丘疹，也有病豬脾臟上有暗紫色出血點。病死豬的喉頭黏膜有許多出血點，肺部體積變大，充血明顯，顏色呈暗紫色，病變肺部和健康部位分界明顯，病變肺部質(zhì)地變脆，切面顏色呈紫紅色，肺間質(zhì)內(nèi)有許多血色膠狀物質(zhì)滲出，氣管和支氣管內(nèi)有許多出血樣滲出物，夾雜大量泡沫。肝臟腫大、充血。

4 實驗室診斷

4.1 涂片鏡檢

無菌條件下采集病死豬肺臟或肝臟組織，制作涂片，結晶紫溶液染色60 s，水洗，碘液染色60 s，水洗，95%乙醇脫色15～30 s，直至無紫色脫落，水洗，沙黃復染液染色60 s，水洗，染色結束后置于顯微鏡下觀察。鏡下發(fā)現(xiàn)病原微生物呈紅色，兩極染色的桿菌，呈單個或成對存在。因此，病豬存在革蘭氏陰性細菌感染。

4.2 分離培養(yǎng)

無菌條件下采集病死豬心肌、肺臟或脾臟組織，接種到普通瓊脂平板和血瓊脂平板上，置于37℃ 10%二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)16～24 h，發(fā)現(xiàn)血瓊脂平板上長出乳白色的菌落，并在周邊有溶血癥狀，而普通瓊脂平板上無任何菌落。然后從血瓊脂平板選取單菌落，再接種到巧克力瓊脂平板上，相同培養(yǎng)條件下發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基表面長出圓形、灰白色的菌落。

4.3 生化鑒定

4.3.1 糖發(fā)酵試驗不同細菌的產(chǎn)酸產(chǎn)氣特點不同，可以作為診斷依據(jù)。

在pH 7.4 的酚紅肉湯基礎培養(yǎng)基內(nèi)分別加入葡萄糖、果糖、麥芽糖、甘露醇、鼠李糖、山梨醇，然后加入適量的菌源（培養(yǎng)24 h），在35℃條件下培養(yǎng)2 h 后若細菌可產(chǎn)酸，培養(yǎng)基顏色會從粉紅色變?yōu)榈S色，若細菌產(chǎn)氣，液體培養(yǎng)基內(nèi)會有氣泡，葡萄糖、果糖、麥芽糖、甘露醇的鑒定結果均為陽性，而鼠李糖、山梨醇為陰性。

4.3.2 VP 試驗將菌液（培養(yǎng)24 h）接種到葡萄糖蛋白胨溶液內(nèi)，35℃條件下培養(yǎng)6 h 后加入適量的VP 試液甲液，再混入乙液，搖勻發(fā)現(xiàn)試劑顏色不變色，35℃條件下培養(yǎng)4 h 后仍無顏色變化，表明VP 試驗為陰性。

4.3.3 ONPG 試驗將菌液（培養(yǎng)24 h）接種到ONPG 肉湯內(nèi)，35℃條件下培養(yǎng)20 h 后鑒定結果顯示肉湯顏色為亮黃色，表明ONPG 試驗結果為陽性。

4.3.4 尿素酶試驗將菌液（培養(yǎng)24 h）接種到含尿素酶的培養(yǎng)基內(nèi)，35℃條件下培養(yǎng)2 h 后鑒定結果顯示培養(yǎng)基顏色為粉紅色，表明尿素酶試驗結果為陽性。

4.3.5 甲基紅試驗將菌液（培養(yǎng)24 h）接種到葡萄糖磷酸鹽蛋白胨溶液內(nèi)，35℃條件下培養(yǎng)48 h后加入幾滴甲基紅指示劑，試劑顏色為桔黃色，表明甲基紅試驗結果為陰性。

上述生化試驗可推測該病原菌為陰性，與豬傳染性胸膜肺炎病原菌的生化鑒定結果相符。

4.4 PCR 檢測

根據(jù)診斷經(jīng)驗來看，豬瘟是一種不受生豬品種、年齡和性別的病毒性疾病，臨床上以發(fā)熱、抽搐、運動失調(diào)、皮膚表面有多處紅色出血點或出血斑為主[2]。豬藍耳病是一種主要感染哺乳仔豬和妊娠母豬的病毒性疾病，臨床上以發(fā)熱、腹瀉、運動失調(diào)、耳尖和體表多處皮膚有紫色斑塊為主[3]。從病豬發(fā)病癥狀和病理解剖特點來看，病豬可能存在病毒感染，需要進一步的檢測提高診斷準確率。

無菌條件下采集病豬心肌、肺臟等病變組織，在液氮條件下加入Trizol 研磨成勻漿，加入適量氯仿分層后置于12 000 g 離心15 min，將上層水溶液轉(zhuǎn)移到新離心管內(nèi)，加入等量的異丙醇，顛倒混勻，12 000 g 離心10 min 棄上清，加入適量75%酒精，懸浮沉淀，12 000 g 離心10 min 棄上清，吸棄干凈后徹底干燥，加入少量DEPC 水溶解沉淀，-80℃條件下保存。病豬RNA 提取后需要及時反轉(zhuǎn)錄，然后分別通過豬瘟病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒檢測試劑盒進行RT-PCR 擴增，試驗過程中同時做好陰性和陽性擴增。豬瘟病毒單重熒光PCR 檢測試劑盒、豬藍耳病病毒單重熒光PCR 檢測試劑盒結果若Ct值為0 則為陰性，Ct 值≤35 為陽性，35 ＜Ct 值≤40 為可疑樣本。試驗檢測結果顯示為豬瘟陽性、豬藍耳病陽性。

鑒于涂片鏡檢結果為革蘭氏陰性，結合病豬臨床上的發(fā)熱、呼吸困難、氣喘、皮膚發(fā)紺癥狀，病豬可能存在胸膜肺炎放線菌感染，可通過豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌單重熒光PCR 檢測試劑盒進行檢測，采集病料，提取病料DNA，加入熒光PCR 反應液，進行RT-PCR 擴增，若Ct 值為0 則為陰性，Ct 值≤35 為陽性，35 ＜Ct 值≤40為可疑樣本，試驗檢測結果顯示為豬傳染性胸膜肺炎陽性。

通過RT-PCR 檢測結果顯示，病豬存在豬瘟、豬藍耳、豬傳染性胸膜肺炎混合感染。

4.5 藥敏試驗

采用紙片擴散法將分離純化的病原菌均勻涂布在三糖瓊脂平板上，將不同藥敏紙片分布到平板上方，置于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)孵育14 h，結果顯示，該病原菌對強力霉素、慶大霉素、恩諾沙星、四環(huán)素4 種抗菌藥物存在耐藥性，對阿莫西林、氯霉素、鏈霉素3 種抗菌藥為中度敏感，對氟苯尼考、頭孢噻肟鈉2 種藥物高度敏感。

5 藥物治療

由于豬瘟病毒的傳播快，病豬可以先停用所有藥物，緊急免疫高效豬瘟細胞苗，肌肉注射劑量為預防的3 倍，建議使用一次性注射器或一豬一針，以防不合理使用注射針頭造成交叉污染。

根據(jù)藥敏試驗結果顯示，病原微生物對氟苯尼考、頭孢噻肟鈉具有高敏性，肌肉注射氟苯尼考注射液，注射量為0.1～0.2 mL/kg·bw，每日1～2次，連續(xù)注射2～3 d。同時健康豬群內(nèi)拌入頭孢噻肟鈉粉末，每1000 kg 飼料添加量為100 g，連續(xù)飼用3～5 d。

病豬和健康豬群飲水中分別添加適量的電解質(zhì)和維生素C，連續(xù)飲用1 周。

6 防控措施

6.1 嚴格人員車輛進出

豬場出入口設立專門的人員、車輛消毒區(qū)域，人員可采用紫外消毒方式，車輛使用噴淋+地表消毒池的方式進行消毒，司機未消毒前若下車需要佩戴好一次性鞋套。

6.2 規(guī)范引種

豬場最好采用自繁自養(yǎng)的方式，若需引種，切勿從疫區(qū)引種，引種前需要做好流行病和血清學調(diào)查，生豬引種后需要進行至少30 d 的隔離，然后健康檢疫、疫苗免疫、消毒驅(qū)蟲后才可進入生產(chǎn)區(qū)。

6.3 控制生物媒介

夏季做好蚊蠅預防，豬舍周邊可以種植薄荷來驅(qū)蚊，并在出入口和窗口下方點蚊香驅(qū)蚊，或放置紫外線滅蚊燈。

6.4 科學防疫消毒

采用全進全出管理方法，豬場入口、生產(chǎn)區(qū)、管理區(qū)、生活區(qū)、隔離舍做好定期消毒工作，可選用2%燒堿、3%來蘇兒、10%石灰乳等消毒液進行每周1次的消毒。

6.5 定期接種免疫

豬瘟防治：每年春、秋季分別肌肉接種豬瘟兔化弱毒疫苗，1 mL/頭，注射后96 h 可產(chǎn)生免疫力。豬場有發(fā)病時可以在仔豬斷奶后接種、驅(qū)蟲，母豬產(chǎn)前45 d 接種1次。

豬藍耳病防治：仔豬23 日齡、28 日齡分別接種高致病性藍耳病疫苗，2 mL/頭，母豬產(chǎn)前30 d 接種1次，4 mL/頭。

豬傳染性胸膜肺炎防治：仔豬35 日齡、63日齡分別接種豬傳染性胸膜肺炎三價滅活疫苗，2 mL/頭，母豬產(chǎn)前30 d、15 d 分別接種1次，2 mL/頭。

7 總結

豬群中如有病豬有精神和食欲不振，發(fā)熱，嗜睡，腹瀉或嘔吐，眼瞼和鼻腔分泌物增多等癥狀，養(yǎng)殖人員需要及時對病豬進行隔離，這就要求中小規(guī)模或散養(yǎng)戶在豬場布局中設有隔離舍，發(fā)病過程中要做好閉群和消毒管理，防止病原微生物擴散傳播。對于豬瘟、豬藍耳病這類致死率較高的病毒性疾病，建議豬場進行至少6個月的閉群管理，同時定期對生豬進行實驗室檢測和疫苗接種，建立陰性后備母豬群。無論是發(fā)病還是日常管理期間，養(yǎng)殖戶都需要制定科學的生物安全防治措施，以預防為主，切勿隨意用藥加劇細菌耐藥性。