熊 瑛，吳愫青

（珠海市食品藥品檢驗所，廣東 珠海 519000）

海藻是常用的清熱化痰藥，其味苦、咸，性寒，歸肝、胃、腎經(jīng)，具有消痰、軟堅散結(jié)、利水消腫的作用[1]?，F(xiàn)代研究表明，海藻具有抗氧化[2-3]、抗腫瘤[4-5]、降血糖[6-7]、免疫調(diào)節(jié)[8-9]等作用，用于治療單純性甲狀腺腫、乳腺增生、淋巴結(jié)核等疾病[10]。海藻在我國藥用歷史悠久，最早載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，且歷代本草均有收載?！吨腥A人民共和國藥典》[11]中海藻項下規(guī)定其基源為馬尾藻科植物海蒿子Sargassum pallidum（Turn.）C.Ag.或羊棲菜Sargassum fusiforme（Harv.）Setch.的干燥藻體。前者習(xí)稱“大葉海藻”，后者習(xí)稱“小葉海藻”。海藻生長在低潮線以下淺海水激蕩處的巖石上。大葉海藻（海蒿子）主產(chǎn)于山東、遼寧等地，小葉海藻（羊棲菜）主產(chǎn)于福建、浙江、廣東等地[1]。海藻的炮制方法為曬干、凈制，近代本草中關(guān)于海藻的品質(zhì)描述也以身干、色黑、霜少、枝嫩、無沙石者為佳。雖然海藻在我國用藥歷史悠久，藥用價值明確，藥用資源豐富，市場需求量大，但是關(guān)于海藻的質(zhì)量控制方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究相對落后，對海蒿子和羊棲菜兩者的功效差異、商品規(guī)格、質(zhì)量差異等均未有明確的標(biāo)準(zhǔn)。筆者針對海藻的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)情況及質(zhì)量控制技術(shù)進(jìn)行綜述，以期為加強(qiáng)海藻的質(zhì)量控制、海藻資源的臨床應(yīng)用及開發(fā)等提供基礎(chǔ)。

1 海藻質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究現(xiàn)狀

1963年版《中華人民共和國藥典》（以下簡稱《中國藥典》）開始收載海藻，至2020年版《中國藥典》海藻的基源保持一致，均為海蒿子及羊棲菜的干燥藻體。歷經(jīng)10版藥典，自1977年版《中國藥典》以后，海藻的性狀描述一直未加改動。1963年版《中國藥典》及1977年版《中國藥典》[12-13]均認(rèn)為海藻“以色黑褐，白霜少者為佳”，之后歷版藥典再無類似描述。1977年版《中國藥典》增加了【鑒別】項，該項目是甘露醇的化學(xué)反應(yīng)，反應(yīng)原理為甘露醇與三氯化鐵試液反應(yīng)生成棕色沉淀，再加氫氧化鈉試液后沉淀溶解。1990年版《中國藥典》[14]【鑒別】項刪除了后半部分滴加過量氫氧化鈉試液后沉淀溶解的試驗。2015年版《中國藥典》[15]中海藻在原有基礎(chǔ)上增加了【檢查】項及【含量測定】項，并在【檢查】項下規(guī)定了水分、重金屬及有害元素（鉛、汞、鎘、銅）的限度。此外，【含量測定】項下使用蒽酮-硫酸顯色法采用紫外分光光度法進(jìn)行測定，以巖藻糖計算海藻多糖的含量，規(guī)定其不得少于1.70%。海藻的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)由簡單的性狀描述提升至條目相對完整的質(zhì)量體系。

全國有20個省、自治區(qū)、直轄市的中藥材炮制規(guī)范收載了海藻的炮制方法。絕大部分地區(qū)炮制方法基本與《中國藥典》一致，均為凈制后切段，僅甘肅省收載的炮制方法為凈制后切絲。2010年版《湖南省中藥飲片炮制規(guī)范》另收載了海藻超微飲片。就質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)而言，《上海市中藥飲片炮制規(guī)范》中質(zhì)量項目最全面，覆蓋【鑒別】、【檢查】、【含量測定】。其他地區(qū)的炮制規(guī)范的標(biāo)準(zhǔn)相對簡單，有的僅有炮制方法，無相應(yīng)炮制后對藥材性狀的描述，具體詳見表1～2。

表1 歷版《中國藥典》海藻標(biāo)準(zhǔn)的變化

表2 各地方炮制規(guī)范收載情況

由此可知，目前海藻的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)相對簡單，無特征性的質(zhì)量控制項目，存在一定的缺陷。對海藻的質(zhì)量控制方法進(jìn)行梳理，建立海藻質(zhì)量特征性控制方法是迫在眉睫的。

2 海藻的質(zhì)量控制方法現(xiàn)狀

影響中藥材質(zhì)量的因素有很多，質(zhì)量控制的方法也多種多樣?！吨袊幍洹吠ǔ７?個方面來進(jìn)行藥材整體質(zhì)量的控制。（1）原植物來源的控制，即保證藥材的基源、藥用部位、成熟度等正確；（2）外源性物質(zhì)的控制，如水分、灰分、農(nóng)藥殘留量、二氧化硫殘留量、重金屬含量等；（3）指標(biāo)性成分或者功效性成分的控制，如含量測定和浸出物。下面將從這3個方面闡述海藻藥材現(xiàn)有的質(zhì)量控制方法。

2.1 基源的控制 傳統(tǒng)的藥材鑒別一般依靠經(jīng)驗鑒別，即從外觀、斷面、色、味、質(zhì)感等多方面綜合評價藥材的真?zhèn)?。隨著技術(shù)的發(fā)展，顯微技術(shù)成熟以后，顯微特征成為辨別藥材真?zhèn)蔚闹匾卣?。其利用顯微鏡對中藥材（飲片）、粉末及含粉末的制劑中的組織、細(xì)胞或者內(nèi)含物等特征進(jìn)行鑒別，具有專屬性和易操作性，是中藥材質(zhì)量控制的常用方法之一。現(xiàn)行《中國藥典》及各地方標(biāo)準(zhǔn)中海藻項下均無顯微特征相關(guān)項目。海藻屬于馬尾藻屬植物，在褐藻門藻類植物中分化較為復(fù)雜，生長環(huán)境不同，其藻體的外形差異也大，僅僅依靠藻體的外形來鑒定具體品種，鑒定難度系數(shù)高，通常會導(dǎo)致市場上混偽品多，正品難尋。董焱等[41]通過性狀和顯微特征對海藻及幾種類同品進(jìn)行鑒別，發(fā)現(xiàn)羊棲菜主干橫切面髓部較大，由類圓形小細(xì)胞緊密排列而成，葉狀體橫切面表面波浪狀細(xì)胞狹長，外被蠟質(zhì)薄膜，內(nèi)含大量黏液質(zhì)，縱向緊密排列。海蒿子主干橫切面的髓部為多角細(xì)胞組成，葉狀體橫切面中表皮由橢圓形縱向緊密排列的細(xì)胞組成，外壁披蠟質(zhì)薄膜；中間部隆起，具有類似葉脈狀結(jié)構(gòu)，由此可將其與另外5種馬尾藻屬植物區(qū)分開。因此，開發(fā)顯微鑒別的方法，輔助性狀鑒別，可提升海藻基源鑒定的準(zhǔn)確率。

2.2 外源性物質(zhì)的控制 隨著海洋資源的開發(fā)與利用，海洋的環(huán)境也受到影響，污染問題也隨之而來。重金屬、有機(jī)物、農(nóng)藥等殘留隨著徑流、雨水沖刷等途徑進(jìn)入海洋，是海洋重要污染物之一。20世紀(jì)90年代，接連發(fā)生多起“中藥重金屬超標(biāo)”事件后，人們開始重視中藥材中外源性污染物的影響，《中國藥典》也開始完善重金屬、二氧化硫、農(nóng)藥殘留量、真菌毒素等污染物的檢驗檢測方法。2020年版《中國藥典》中二氧化硫殘留量及33種禁用農(nóng)藥殘留量是植物類中藥材的必檢項目。關(guān)注較多的重金屬殘留量也有很多的文獻(xiàn)報道。

2.2.1 重金屬污染 海洋植物重金屬的含量與海域分布有關(guān)，藻類通過生化反應(yīng)吸附海水中的重金屬離子，有可能引起重金屬的富集。對人體毒害最大的重金屬有汞、鎘、鉛、砷、鉻等。常用的重金屬檢測方法有原子吸收光譜法（AAS）、氫化物發(fā)生-原子熒光光譜法（HG-AFS）、電感耦合等離子體質(zhì)譜法（ICP-MS）等。在《中國藥典》中鉛、鎘、汞、砷、銅5種重金屬的檢測即用到AAS和ICP-MS。AAS檢測成本相對較低，其靈敏度也能滿足重金屬檢測的需求，但分析多種元素需要選擇不同的離子化方式，操作復(fù)雜。ICP-MS是利用以電感耦合等離子體為離子源，進(jìn)入質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測，具有分析范圍廣、靈敏度高、線性范圍寬的特點，常用于藥材中各種微量元素的含量測定。陳星星等[42]采用ICP-MS測定浙江沿海藻類多種重金屬的含量，發(fā)現(xiàn)羊棲菜中鉛、砷含量較高，需要重點關(guān)注。陳發(fā)榮等[43]用毛細(xì)管電泳-電感耦合等離子體質(zhì)譜（CE-ICP-MS）聯(lián)用測定羊棲菜中的總砷及各種形態(tài)砷的含量，結(jié)果顯示羊棲菜中主要是未知結(jié)構(gòu)的有機(jī)砷。原子熒光光譜（AFS）檢測原理是原子態(tài)的待測物能發(fā)射一定特征波長的熒光，其熒光強(qiáng)度與待測物含量成正比。氫化物發(fā)生-原子熒光光譜法（HG-AFS）是我國20世紀(jì)60年代發(fā)展起來的一種新型檢測技術(shù)，儀器具有靈敏度高、操作簡單、檢出限低、抗干擾能力強(qiáng)的特點，該技術(shù)常用于汞和砷的檢測。張金玲[44]采用HG-AFS法測定羊棲菜中總砷的含量，其總砷含量為40.208 mg/kg，遠(yuǎn)高于其他品種。此外，砷的毒性不僅與砷的總量有關(guān)，還與砷的形態(tài)密切相關(guān)，液相色譜與氫化物發(fā)生-原子熒光光譜法的聯(lián)用技術(shù)（HPLC-HG-AFS）常用于砷形態(tài)的分析。于卓然[45]利用HPLC-HG-AFS法研究海洋藻類中砷的形態(tài)，該方法檢測分析簡便、快速、靈敏度高，可以檢測和確證6種不同形態(tài)的砷，可以更為具體地檢測海藻樣品中主要砷的形態(tài)含量。

2.2.2 農(nóng)藥的污染 農(nóng)藥的種類繁多，陸地上使用的農(nóng)藥可以通過雨水沖刷進(jìn)入海洋生態(tài)中。我國水體受到有機(jī)氯、有機(jī)磷、氨基甲酸酯類農(nóng)藥的廣泛污染[46]。農(nóng)藥本身具有易富集、難降解、殘留量高的特點。目前農(nóng)藥殘留量通常采用氣相色譜法（GC）、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（HPLC-MS）、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS）進(jìn)行檢測。使用聯(lián)用技術(shù)可以大幅提高檢測目標(biāo)物的品種，提高檢測的效率。靳貴英等[47]使用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定海藻羊棲菜中的19種有機(jī)氯農(nóng)殘，發(fā)現(xiàn)樣本中的有機(jī)氯的農(nóng)藥殘留均低于檢測限。彭全材等[48]對5種海藻中有機(jī)氯農(nóng)殘的含量進(jìn)行分析，研究發(fā)現(xiàn)海藻中有六六六及滴滴涕類農(nóng)藥的殘留。2020年版《中國藥典》則將液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法聯(lián)合使用測定中藥飲片中33種禁用農(nóng)藥殘留量。

2020年版《中國藥典》及2018年版《上海市中藥飲片炮制規(guī)范》中“海藻”項下規(guī)定鉛不得過5 mg/kg、鎘不得過4 mg/kg、汞不得過0.1 mg/kg、銅不得過20 mg/kg，未有砷殘留量相關(guān)規(guī)定。今后的研究可根據(jù)海藻中重金屬殘留量的情況及農(nóng)藥污染的現(xiàn)狀，對海藻中砷的殘留量及砷的形態(tài)進(jìn)行調(diào)研分析，探索砷殘留量的控制方法。

2.3 功效性成分或者指標(biāo)性成分的控制 海藻化學(xué)成分豐富，含有人體不能合成的必需氨基酸[49]、植物甾醇[50-51]、脂肪酸[52]、多酚類[53]化合物等。近年來，對海藻化學(xué)成分的研究主要集中在海藻多糖。海蒿子多糖和羊棲菜多糖均有抗氧化[2-3]、抗腫瘤[4-5]、降血糖[6-7]、免疫調(diào)節(jié)[8-9]等作用，是海藻重要的功效性成分及質(zhì)量標(biāo)志物。海藻的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高依賴于多糖檢測技術(shù)的完善。但多糖結(jié)構(gòu)復(fù)雜，單糖的種類、連接方式、連接位置、相對分子量、二級結(jié)構(gòu)、三級結(jié)構(gòu)等均影響多糖的質(zhì)量。現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)僅以蒽酮-硫酸法測定總糖含量，缺乏海藻多糖特征性檢測方法。目前關(guān)于海藻多糖的研究主要集中在多糖的提取分離及藥理作用方面，海藻多糖質(zhì)量控制方法研究的文獻(xiàn)較少。因此，本文根據(jù)多糖結(jié)構(gòu)特征將相對較成熟的多糖質(zhì)量控制方式進(jìn)行簡單的闡述，為建立海藻多糖的質(zhì)量控制方法提供參考依據(jù)。

2.3.1 多糖總量的測定方法 總糖含量的測定方法有苯酚-硫酸法、蒽酮-硫酸法、3,5-二硝基水楊酸比色法和間接碘量法等。其中3,5-二硝基水楊酸比色法不適用于自帶顏色樣品的檢測，間接碘量法受到滴定速度的影響較大，因此蒽酮-硫酸法和苯酚-硫酸法是常用的檢測方法。這兩個方法操作簡單，對儀器的要求低，儀器普及率高，接受度高。

2.3.2 單糖的種類和含量的檢測 海藻多糖主要由巖藻糖、半乳糖、木糖、葡萄糖、甘露糖和阿拉伯糖等[54-55]組成。檢測多糖的單糖種類，需要先將多糖水解，主要的水解方式有酸水解及酶水解等。單糖種類主要的檢測方法如下。

2.3.2.1 薄層色譜法（TLC）TLC是一種快速的方法，可以對單糖的種類進(jìn)行鑒別。目前暫無使用TLC法鑒別海藻多糖中單糖組成情況的研究，但是有研究采用TLC法對湖北麥冬多糖[56]、五味子多糖膠囊[57]中的單糖進(jìn)行定性鑒別，為海藻多糖中單糖的組成研究提供了參考。

2.3.2.2 高效液相色譜法（HPLC） 由于單糖無紫外和熒光生色基團(tuán)，采用HPLC法進(jìn)行檢測時一般采用通用型檢測器，如蒸發(fā)光檢測器（ELSD）、電噴霧檢測器（CAD）或示差檢測器（RID）。使用紫外（UV）或熒光檢測器（FLD）時，需要將其進(jìn)行柱前衍生化，其中1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）是常用的衍生化試劑。李溢真等[58]使用三氟乙酸降解提取到的海蒿子多糖中單糖的組成為甘露糖、半乳糖和巖藻糖。胡淑曼等[59]采用水提法提取海藻藥材得到海藻粗多糖，經(jīng)過三氯乙酸降解、PMP衍生后，采用紫外檢測器，在254 nm處，利用HPLC測定海藻藥材質(zhì)量標(biāo)志物巖藻糖的含量。研究者優(yōu)化了單糖制備、柱前衍生及除去游離衍生試劑的條件。該方法相對蒽酮-硫酸顯色法干擾因素小、精密度高、重復(fù)性好，可用于海藻藥材的質(zhì)量控制。

2.3.2.3 氣相色譜法（GC）GC法比較適合中性多糖的測定，可搭配FID檢測器測定多糖的組成。測定時需將水解后的單糖進(jìn)行衍生化，該方法靈敏度高，但是衍生化過程中有副產(chǎn)物，需加以甄別。魏曉蕾等[60]利用該方法測定從海蒿子中分離純化的3種褐藻糖膠，發(fā)現(xiàn)3種多糖均含有巖藻糖。

2.3.2.4 離子色譜法（IC） 離子色譜搭配電化學(xué)檢測器也可以用于單糖的檢測。該方法也無需衍生化。有研究在靈芝孢子粉多糖[61]和葛根多糖[62]的單糖組成檢測中采用了IC法，發(fā)現(xiàn)不管是靈芝孢子粉還是葛根，其來源不同，多糖的單糖組成的亦不相同。

2.3.2.5 高效毛細(xì)管電泳法（HPCE）該方法分離效率高，有機(jī)溶劑消耗少，操作簡便，也可以用于單糖組分的檢測。林曉燕等[63]建立了柱前衍生-HPCE法分析太子參多糖中的單糖組成，該方法操作簡便、耗時少、準(zhǔn)確度高。

2.3.3 糖苷鍵的連接方式及連接位置 糖苷鍵是指連接糖分子苷元與糖基或者糖基與糖基之間的化學(xué)鍵，是多糖中重要的化學(xué)特征之一。其測定方法主要有紅外光譜法（IR）、核磁共振波譜法（NMR）、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS）等。

2.3.3.1紅外光譜法（IR） 在紅外輻射下，不同類型糖苷鍵特征吸收不同，可以鑒定多糖的構(gòu)型。海藻多糖[6,58,60]的特征吸收是3 400 cm-1左右的寬峰，對應(yīng)羥基的O-H；2 900 cm-1峰對應(yīng)是C-H鍵的特征吸收峰；α糖苷鍵特征吸收峰約在840 cm-1，而β糖苷鍵的特征吸收峰約在890 cm-1，磷酸基在1 300～1 250 cm-1處有P=O伸縮振動峰；吡喃糖苷因有醚鍵C-O-C在1 100～1 010 cm-1處有3個吸收峰，而呋喃糖苷在相應(yīng)的區(qū)域只出現(xiàn)2個峰。

2.3.3.2 氣相-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS）GC-MS是最常用的測定糖苷鍵連接方式的方法：通常先將多糖樣品中單糖的游離羥基全部甲基化，然后水解、還原后得到的羥基即為單糖殘基的連接位點；再將產(chǎn)物乙?；蟮玫骄哂袚]發(fā)性的甲基化的糖醇乙酸酯進(jìn)入GC-MS進(jìn)行分析；根據(jù)質(zhì)譜碎片的信息來判斷結(jié)構(gòu)。測試步驟較為繁瑣，需要一定的解析圖譜的能力。如王瑩等[64]采用GC-MS法判斷黃芪多糖中糖苷鍵主要有1,4、1,6位連接及端基葡萄糖。

2.3.3.3 核磁共振波譜法（NMR）核磁波譜是強(qiáng)磁場中的原子核吸收射頻輻射形成的圖譜，可以提供豐富的結(jié)構(gòu)信息，是化合物結(jié)果鑒定的重要手段。核磁波譜一般分為氫譜和碳譜。氫譜[1H NMR譜、H-H COSY譜和TOCSY（HOHAHA）譜]可推出單糖上各碳上氫的化學(xué)位移，碳譜[13C NMR譜和1H-13C COSY譜（HMQC譜和HSQC譜）]可推出碳的連接方式。NMR可以用來判斷單糖殘基的異頭異構(gòu)形式?；羯绞?H NMR譜顯示多糖的異頭氫信號在4.45～4.89 ppm之間；13C NMR譜顯示異頭碳信號在99.2～102.6 ppm之間，為β構(gòu)型[65]。

2.3.4 分子量與分子量分布 凝膠滲透色譜法（GPC）是一種測定相對分子質(zhì)量的方法，是目前2020年版《中國藥典》四部通則中收載的相對分子量測定方法。該方法可對系列標(biāo)識分子量的對照品進(jìn)行測定，通過保留時間的不同來測定待測樣品的相對分子質(zhì)量及其分布。相對分子質(zhì)量及其分布對多糖的控制有重要的意義，提取的多糖通常都需要測定此參數(shù)來控制多糖的質(zhì)量。CAO C L等[6]用HPGPC測定海蒿子多糖的平均分子量為1.036×106Da。此方法在短葶山麥冬多糖[66]、靈芝提取物多糖[67]、黃芪多糖[64]、人參多糖[68]等中均有應(yīng)用。

此外，還可采用多角度激光散射技術(shù)（MALLS）對多糖的分子量進(jìn)行測定。多角度激光散射技術(shù)通常需要與示差檢測器（RID）聯(lián)用，選擇示差檢測器的一個數(shù)據(jù)作為濃度來源，計算分子量。如CHENG Y[69]等利用高效分子排阻色譜法（HPSEC）對酶切后的多糖進(jìn)行分離，采用MALLS與RID聯(lián)合檢測太子參非淀粉多糖，發(fā)現(xiàn)其分子量范圍為4.37×104～1.70×105Da。

2.3.5 多糖的指紋圖譜 多糖的復(fù)雜性導(dǎo)致多糖的質(zhì)量不能由單一的指標(biāo)體現(xiàn)，因此提出了多糖的指紋圖譜的概念。目前多糖的指紋圖譜已由一元的指紋圖譜發(fā)展為多元的指紋圖譜。一元的指紋圖譜是指多糖一個指標(biāo)的指紋圖譜，如有基于多糖的紅外光譜或基于單糖組成的HPLC或GC的指紋圖譜。一元指紋圖譜可采用化學(xué)計量學(xué)方法，如主成分分析（PCA）、層級聚類分析（HCA）、偏二乘判別分析（PLS-DA）等分析不同圖譜之間的相似度，進(jìn)行定性的鑒定。由于多糖結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性，一元的指紋圖譜并不能代表多糖的性質(zhì)，因此多元指紋圖譜開始應(yīng)用于多糖的質(zhì)量評價。如CHENG J等[70]研究發(fā)現(xiàn)完全水解多糖的HPLC指紋圖譜或者GC指紋圖譜不能完全區(qū)分不同產(chǎn)地的決明子多糖，但若將部分水解多糖的FI-IR指紋圖譜與HPLC指紋圖譜結(jié)合PCA分析，則可區(qū)分不同產(chǎn)地的決明子。有研究[69,71]使用定位酶切技術(shù)將多糖進(jìn)行水解，結(jié)合熒光輔助凝膠電泳（PACE）和高效薄層色譜（HPTLC）分析水解產(chǎn)物，來定性鑒別不同來源的多糖。這些技術(shù)不僅僅關(guān)注糖的一級結(jié)構(gòu)，開始探索多糖水解的方式和特征。多糖常用的水解方式有酸水解與酶水解。酶水解多糖可以產(chǎn)生特異性的水解片段，選擇性高，反應(yīng)條件溫和，其產(chǎn)物比較穩(wěn)定，在質(zhì)量控制方面具有一定的優(yōu)勢。

2.3.6 多糖的高級結(jié)構(gòu) 多糖的空間結(jié)構(gòu)十分復(fù)雜，對空間結(jié)構(gòu)的研究有助于解釋多糖生理活性的構(gòu)效關(guān)系，也可以對多糖的質(zhì)量進(jìn)行控制。多糖的高級結(jié)構(gòu)的主要研究方法有原子力顯微鏡法（AFM）、X-射線衍射法（X-Ray）和圓二色譜法（CD）等。如JI X L等[72]采用AFM發(fā)現(xiàn)木棗中分離的酸性多糖是球形的結(jié)構(gòu)。REN Y P等[73]發(fā)現(xiàn)藜麥多糖是無定形形式存在的，分離純化后可以形成穩(wěn)定的晶體結(jié)構(gòu)。ZHANG W等[74]發(fā)現(xiàn)超聲纖維酶提取的肉蓯蓉多糖局部形成螺旋結(jié)構(gòu)。這3種方法為研究大分子（包括蛋白質(zhì)、多糖）空間結(jié)構(gòu)的常用方法，可以為多糖提供豐富的空間結(jié)構(gòu)信息。

2.4 其他質(zhì)量控制方法 海藻的成分除多糖外，還有甾醇、巖藻糖、多酚類、植物激素類、氨基酸等多種物質(zhì)。這些物質(zhì)是否可以作為海藻含量控制的標(biāo)志物，還需要進(jìn)一步探索。將這些組分的圖譜特征進(jìn)行數(shù)學(xué)推導(dǎo)或采用統(tǒng)計學(xué)方法進(jìn)行分析，同樣可以鑒別海藻的真?zhèn)巍?/p>

王琰等[75]采用紅外光譜三級鑒定法對海藻藥材及其混偽品的紅外圖譜進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)不同品種海藻一維譜圖相似，具9個共有吸收峰，主要含糖類、蛋白質(zhì)、不飽和脂肪酸、甾體等成分；然而二階導(dǎo)數(shù)譜圖和二維相關(guān)譜圖差異較大，根據(jù)峰數(shù)、峰位、峰強(qiáng)的差異進(jìn)行區(qū)分，可以快速鑒別海藻藥材。張曉萍等[76]采用氨基酸全自動分析儀測定海藻及其混偽品中17種氨基酸的含量，經(jīng)過聚類分析發(fā)現(xiàn)：海藻真品海蒿子、羊棲菜為一類，銅藻為一類，亨氏馬尾藻、海黍子為一類，瓦氏馬尾藻為一類。該方法聚類的結(jié)果與種質(zhì)鑒定的結(jié)果一致，同時也證明《中國藥典》收載的品種與其混偽品差異較大，不能代替使用。該法可以用于海藻及其混偽品氨基酸含量的定量分析及真?zhèn)螀^(qū)分。CHEN Z等[52]采用GC-MS繪制海藻中脂肪酸的特征圖譜，發(fā)現(xiàn)4種馬尾藻屬海的脂肪酸特征圖譜差異性較大，經(jīng)過主成分分析（PCA）可以鑒別4種不同的海藻；使用正交偏最小二乘判別分析（OPLS-DA）可以鑒別《中國藥典》品種與地方習(xí)用品種。ZHANG X L等[77]建立了一種H-NMR的方法來測定海藻中的總植物甾醇，研究利用植物甾醇中特征質(zhì)子信號H-3α進(jìn)行定量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)羊棲菜中植物甾醇的含量明顯高于海蒿子。該方法不需要衍生化，也不需要被測物的標(biāo)準(zhǔn)品。

3 總 結(jié)

海藻在中國分布廣泛，使用歷史悠久，具有很好的藥理活性。海藻主要的活性物質(zhì)為海藻多糖，目前對海藻多糖的研究主要集中在與中醫(yī)理論相符合的抗腫瘤、抗血管生成、抗炎等作用上。歷版《中國藥典》及各地方標(biāo)準(zhǔn)均有收錄海藻，然而海藻的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)卻十分簡單，因此對海藻質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究是十分必要的。建議在目前標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上增加顯微特征、灰分及重金屬限度等質(zhì)量控制項目，從基源和污染控制兩個方面提升《中國藥典》中海藻的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

對于海藻標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)一步的完善，需要重點關(guān)注海藻多糖的研究，包括其單糖組成、分子量分布情況、糖苷鍵的類型及連接位置、空間結(jié)構(gòu)等。海藻多糖與其活性功能的關(guān)系有待進(jìn)一步明確，建立活性多糖的檢測方法在質(zhì)量控制上更具意義。筆者對海藻中多糖的檢測方法進(jìn)行了闡述，可以發(fā)現(xiàn)目前多糖的質(zhì)量控制方法主要還是對于其初級結(jié)構(gòu)（總糖含量、單糖組成、水解后的寡糖組成、糖苷鍵類型等）的控制。這些方法的準(zhǔn)確性依賴于多糖的提取、分離、純化等步驟的標(biāo)準(zhǔn)化。多糖的高級結(jié)構(gòu)復(fù)雜，高級結(jié)構(gòu)特征與生物活性之間研究尚不夠深入，同時研究高級結(jié)構(gòu)的儀器也相對比較昂貴，企業(yè)和檢驗檢測機(jī)構(gòu)的普及相對困難。多糖指紋圖譜的研究相對活躍，可以在整體上反映多糖的真實質(zhì)量，是多糖質(zhì)量提高的方向之一。

綜上所述，海藻的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)需多方面完善。海藻多糖的質(zhì)量控制方法需要提高，可采用多種方法結(jié)合，如單糖組成、分子量和分子量分布、多糖總量、指紋圖譜技術(shù)等，從而達(dá)到初步控制海藻質(zhì)量的目的。同時加快標(biāo)準(zhǔn)化進(jìn)程是海藻多糖控制的重要一步，包括標(biāo)準(zhǔn)化的提取、分離、水解步驟，標(biāo)準(zhǔn)品及對照品的制備等，以保證分析方法的穩(wěn)定、可靠、準(zhǔn)確。