龍一飛，肖英倫，鄂順梅，張宏遠，陳茶，林冬玲(廣州中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院 廣東省中醫(yī)院檢驗科，廣州 510006)

目前市場上主流品牌血細胞分析儀的體液模式在檢測腦脊液、漿膜腔積液等體液標本時，有核細胞和紅細胞檢測結(jié)果具有重復性好、線性范圍寬、操作簡單方便等優(yōu)點，能有效避免手工計數(shù)結(jié)果重復性差、操作繁瑣、耗時長等不足[1]。因此，腦脊液標本的自動化檢測逐漸普及。但不同品牌或同一品牌不同型號血細胞分析儀的體液模式往往存在儀器間的系統(tǒng)誤差，易導致實驗室內(nèi)部結(jié)果不可比。目前體液檢測模式下血細胞分析儀系統(tǒng)間的對比研究較少。因此，比較不同品牌自動化檢測系統(tǒng)體液檢測模式間結(jié)果的重復性、一致性以及可比性很有必要。本研究主要參照CLSI EP9-A3文件，對BC-6000Plus和Sysmex XN-1000系統(tǒng)的體液模式下體液總有核細胞計數(shù)(TC-BF)、體液白細胞計數(shù)(WBC-BF)、體液紅細胞計數(shù)(RBC-BF)、單個核細胞計數(shù)(MN)、多個核細胞計數(shù)(PMN)檢測結(jié)果進行方法間比較和偏移評估。

1 材料與方法

1.1標本收集 收集2021年7月廣東省中醫(yī)院大學城醫(yī)院檢驗科新鮮腦脊液標本40份。所有腦脊液標本采集與送檢均符合WS/T 662—2020《臨床體液檢驗技術(shù)要求》[2]，細胞計數(shù)均在2個檢測系統(tǒng)線性范圍內(nèi)并均勻分布。本研究方案經(jīng)廣東省中醫(yī)院倫理委員會批準(批準文號：ZE2021-202-01)。

1.2主要儀器與試劑 BC-6000Plus全自動血細胞分析儀及配套試劑(深圳邁瑞公司)；XN-1000全自動血細胞分析儀及配套試劑(日本Sysmex公司)。上述檢測系統(tǒng)體液模式的檢測范圍為：WBC-BF，0～10 000×106/L；RBC-BF，0～5 000×109/L。檢測下限為：WBC-BF，4×106/L；RBC-BF，4×109/L。

1.3重復性 取高值與低值濃度水平的新鮮腦脊液標本作為重復性驗證標本，經(jīng)手工計數(shù)復核，高濃度水平WBC-BF為81×106/L，RBC-BF為49.3×109/L；低濃度水平WBC-BF為24×106/L，RBC-BF為9.4×109/L。標本經(jīng)充分混勻后，分別用2個品牌檢測系統(tǒng)按常規(guī)方法連續(xù)重復檢測11次，選取后10次檢測結(jié)果，分別計算2個儀器TC-BF、WBC-BF、RBC-BF、MN、PMN的變異系數(shù)(CV)，以科室設定的質(zhì)量目標作為判斷標準。

1.4結(jié)果可比性與一致性分析 參照本實驗室標準操作規(guī)程，分別用2個檢測系統(tǒng)的體液模式檢測40份腦脊液標本，并記錄2個檢測系統(tǒng)的TC-BF、WBC-BF、RBC-BF、MN、PMN結(jié)果。

1.4.1離群值檢查 按照EP9-A3文件以及文獻[3-4]要求，通過ESD(extreme studentized deviate)法檢驗離群值，如存在離群值標本，則補充相應濃度范圍的標本重新測定并記錄。

1.4.2檢測系統(tǒng)間比對與偏移評估 繪制差值偏差圖，評估差值偏移類型；然后選用合適的普通線性回歸(ordinary linear regression，OLR)、加權(quán)最小二乘法(weighted least squares，WLS)、Deming、Passing-Bablok(P-B)模型擬合回歸方程，并計算各參數(shù)的95%置信區(qū)間(CI)和醫(yī)學決定水平處的偏移。

1.4.3一致性分析 采用組內(nèi)相關(guān)系數(shù)法評估2個檢測系統(tǒng)間結(jié)果的一致性。

2 結(jié)果

2.1重復性 見表1。2個品牌檢測系統(tǒng)TC-BF、WBC-BF、RBC-BF、MN與PMN的高、低濃度水平標本結(jié)果的重復性均在科室質(zhì)量目標要求的允許范圍內(nèi)。

表1 兩品牌檢測系統(tǒng)體液模式檢測結(jié)果的重復性

2.22個品牌檢測系統(tǒng)間結(jié)果的可比性

2.2.1離群值檢驗結(jié)果 ESD法定量檢驗結(jié)果顯示，40個標本檢測數(shù)據(jù)中，TC-BF、WBC-BF、RBC-BF、MN、PMN分別有1、1、1、1、2個離群值；剔除離群值后，分別補充相似濃度的腦脊液標本。數(shù)據(jù)經(jīng)再次分析，未發(fā)現(xiàn)離群值。

2.2.2偏差圖分析2個品牌檢測系統(tǒng)間差值的變化特征 差值偏差圖顯示，2個品牌檢測系統(tǒng)TC-BF、WBC-BF的差值變化為恒定CV變化，采用WLS回歸分析；RBC-BF、MN、PMN的差值為混合變化，采用P-B回歸分析。

2.2.3偏移初步估算 繪制2個品牌檢測系統(tǒng)間差值頻數(shù)柱狀圖，結(jié)果顯示，TC-BF、WBC-BF、MN、PMN為正態(tài)分布，可利用差值平均數(shù)來估算偏移，各平均值分別為1.16%、0.52%、4.55%、-3.37%；RBC-BF為非正態(tài)分布，可利用中位數(shù)來估算偏移，其中位值為0%，所有參數(shù)偏移均小于質(zhì)量目標值。

2.2.4回歸分析 TC-BF、WBC-BF采用WLS回歸分析，RBC-BF、MN、PMN采用P-B回歸分析，回歸方程及其各參數(shù)結(jié)果見表2，將各參數(shù)醫(yī)學決定水平分別代入回歸方程，其偏移結(jié)果見表3。

表2 BC-6000Plus與XN-1000比對回歸方程及各參數(shù)結(jié)果

表3 BC-6000Plus與XN-1000比對回歸模型醫(yī)學決定水平處的偏移結(jié)果

2.3組內(nèi)相關(guān)系數(shù)一致性分析 組內(nèi)相關(guān)系數(shù)一致性分析顯示，2個品牌檢測系統(tǒng)的TC-BF、WBC-BF、RBC-BF、MN、PMN的組內(nèi)相關(guān)系數(shù)(ICC)值(95%CI)分別為0.998(0.997～0.999)、0.998(0.997～0.999)、0.999(0.998～0.999)、0.995(0.991～0.997)、0.995(0.990～0.997)，P值均<0.001；表明2個儀器的體液檢測模式上述檢測參數(shù)的結(jié)果具有較好一致性。

3 討論

本研究結(jié)果顯示，驗證BC-6000Plus與XN-1000檢測系統(tǒng)體液模式檢測高、低濃度標本的重復性時，TC-BF、WBC-BF、RBC-BF、MN、PMN檢測項目的CV均能滿足科室的質(zhì)量目標要求。組內(nèi)相關(guān)系數(shù)一致性分析測量的是同一組內(nèi)觀察對象某定量測量結(jié)果的相似程度，ICC值越大則系統(tǒng)誤差與隨機誤差引起的變異越小[5]。ICC>0.80為良好，0.61～0.80為中等，0.41～0.60為一般，0.11～0.40為較低，小于0.1為無一致性，Landis和Koch建議結(jié)果一致性ICC值應大于0.80[6]。本研究對BC-6000Plus與XN-1000檢測系統(tǒng)進行檢測結(jié)果一致性分析，結(jié)果顯示2個檢測系統(tǒng)體液模式的TC-BF、WBC-BF、RBC-BF、MN、PMN參數(shù)結(jié)果具有較好一致性，上述參數(shù)的ICC值介于0.979～0.999(ICC值均大于0.900，P值均<0.001)，其中一致性最好的項目是RBC-BF(ICC值為0.999)。

本研究依據(jù)CLSI EP9-A3文件指南要求對2個品牌系統(tǒng)體液模式結(jié)果進行比較分析。首先用ESD法排除數(shù)據(jù)的離群點，并補充對應離群數(shù)據(jù)后再分析，在確保數(shù)據(jù)無離群值的前提下，進一步分析2個系統(tǒng)間差值偏差圖與頻數(shù)柱狀圖，圖示TC-BF、WBC-BF、MN、PMN為正態(tài)分布，利用差值平均數(shù)來估算偏移；RBC-BF為非正態(tài)分布，利用中位數(shù)來估算偏移。經(jīng)估算，上述參數(shù)偏移均在質(zhì)量目標允許范圍內(nèi)。然而這種偏移初步評估方法準確性與適用性不高，因此須進一步選用最佳的回歸模型進行回歸方程分析。結(jié)果2個系統(tǒng)間5個參數(shù)的偏移分別為-1.397%～3.526%、-2.427%～3.279%、-3.840%～0.000%、0.290%～9.004%、-7.865%～0.880%，均在質(zhì)量目標允許范圍內(nèi)。將TC-BF、WBC-BF、RBC-BF高、低水平濃度值分別代入回歸方程中，偏移也在質(zhì)量目標允許范圍內(nèi)。

綜上所述，BC-6000Plus與XN-1000 2個品牌系統(tǒng)體液模式在檢測腦脊液標本時，結(jié)果重復性均較好；系統(tǒng)間結(jié)果具有較強的一致性與可比性。值得注意的是，人工鏡檢仍然是腦脊液檢測的金標準，不能被儀器自動化檢測完全替代。當標本細胞數(shù)低于檢出下限值或分類散點圖異常時(如異常腫瘤細胞、細胞碎片或凝塊)，仍需要按照科室程序文件要求進行人工鏡檢復檢。