譚潔冰,王 偉,王慧娟,張 偉,楊云凱,謝志強,楊旭琴,黃麗莉,馮光偉,王 輝,盧 潔,施學(xué)忠,張云濤,王彥霞,黃保英

1)河南省疾病預(yù)防控制中心疫苗臨床研究中心 鄭州 450016 2)北京生物制品研究所有限責(zé)任公司科研管理部 北京 1001763)中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所中心實驗室 北京 102206 4)中國生物技術(shù)股份有限公司科研管理部 北京 100024 5)鄭州大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院計算機與衛(wèi)生統(tǒng)計學(xué)教研室 鄭州 450001

目前，新型冠狀病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2)仍在全球大規(guī)模流行。鑒于新型冠狀病毒肺炎(coronavirus disease of 2019,COVID-19)的高傳染性，世界各地研究人員正在競相研發(fā)SARS-CoV-2疫苗[1]。截至2021年11月28日，國內(nèi)外已有132種SARS-CoV-2疫苗進入臨床試驗，194種處于臨床前研究，包括DNA質(zhì)粒疫苗、滅活疫苗、腺病毒載體疫苗、RNA疫苗、蛋白質(zhì)亞單位疫苗和病毒樣顆粒疫苗。與其他類型疫苗相比，前期的研究[2]已證實滅活疫苗具有良好的安全性及較好的免疫保護；另外，關(guān)于其免疫持久性方面的相關(guān)研究仍在繼續(xù)。本研究對18～59歲人群按兩針程序接種SARS-CoV-2滅活疫苗后的免疫持久性進行研究，以期為第3針疫苗接種的時間選擇提供參考。

1 對象與方法

1.1 研究對象自2020年4月29日起始，以河南省疾病預(yù)防控制中心作為該項臨床試驗的負(fù)責(zé)機構(gòu)，選取商丘市梁園區(qū)疾病預(yù)防控制中心作為試驗現(xiàn)場，招募18～59歲當(dāng)?shù)爻Ｗ∪丝?，?jīng)其知情同意后進行SARS-CoV-2抗體檢測、尿妊娠檢測(育齡女性)、體格檢查(體溫、身高、體重、心肺聽診、血壓等)和病史詢問等，評估志愿者的健康狀況，最終確定研究對象。本研究選用符合方案數(shù)據(jù)集，該數(shù)據(jù)集內(nèi)的受試者對方案更具依從性、在研究期間未服用任何禁用藥物、對試驗方案無重大的違反、并按方案要求進行了疫苗接種，有相應(yīng)時間點采血檢測結(jié)果。該臨床試驗已獲得國家藥品監(jiān)督管理局審批(批號：2020L00019)。其方案和知情同意書也已獲得河南省疾病預(yù)防控制中心倫理委員會批準(zhǔn)(批號：2020-YM-001-02)，所有志愿者均簽署知情同意書并自愿參加該臨床研究。

1.2 研究設(shè)計本研究為隨機、雙盲、安慰劑對照設(shè)計的Ⅱ期臨床試驗。選取該試驗中按照兩針免疫程序接種的18～59歲人群，共入組280名受試者。將280名受試者按照兩劑研究疫苗的免疫程序時間分為第0、14天，第0、21天和第0、28天3個程序組，人數(shù)分別為112、56和112例。應(yīng)用Stata 12.0以隨機化方法產(chǎn)生隨機編碼(區(qū)組長度設(shè)為8)，將試驗疫苗和對照疫苗隨機編成序列號(每人份疫苗有唯一的序列號)；將各組受試者按照3∶1的比例隨機分配到試驗組或安慰劑組，分別接種試驗疫苗或安慰劑。通過對疫苗編盲來實現(xiàn)盲法和隨機，使受試者和研究者均處于盲態(tài)。

1.3 試驗疫苗試驗疫苗由北京生物制品研究所有限責(zé)任公司研制，由SARS-CoV-2毒株接種于Vero細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)、滅活、純化、氫氧化鋁佐劑吸附制成，接種后使機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答，用于預(yù)防COVID-19，每1人次用0.5 mL，含滅活的SARS-CoV-2 蛋白4 μg，批號為202003S007。安慰劑為北京生物制品研究所有限責(zé)任公司生產(chǎn)的氫氧化鋁佐劑，每1人次用0.5 mL，批號為202003S009。試驗疫苗和安慰劑均經(jīng)上臂外側(cè)三角肌肌內(nèi)注射。

1.4 免疫持久性檢測所有受試者于首劑免疫前和全程免疫后第28、90、180天分別采集外周血4 mL，分離血清后由中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所進行抗SARS-CoV-2抗體檢測，計算中和抗體及IgG抗體的幾何平均滴度(geometric mean titer，GMT)和抗體4倍增長率，評估疫苗的免疫持久性。抗體4倍增長率=免疫后抗體滴度較免疫前達(dá)到4倍及以上增長的人數(shù)/納入數(shù)據(jù)集的人數(shù)×100%。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理應(yīng)用SPSS 21.0進行分析。采用單因素方差分析和χ2檢驗比較試驗組和安慰劑組間受試者年齡和性別構(gòu)成是否均衡。對抗體滴度進行對數(shù)轉(zhuǎn)換，計算各時間點抗體GMT及95%CI，利用重復(fù)測量數(shù)據(jù)的方差分析比較各時間點抗體GMT的變化。檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 各程序試驗組和安慰劑組受試者年齡和性別比較第0、14天，第0、21天和第0、28天程序試驗組和安慰劑組年齡與性別的差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表1。

表1 各程序試驗組和安慰劑組受試者年齡和性別比較

2.2 免疫持久性檢測結(jié)果

2.2.1分析數(shù)據(jù)集 全程免疫后第28天時，第0、21天程序試驗組有1例受試者采血超窗，因此共有279例受試者納入該時間節(jié)點的免疫原性分析；全程免疫后第90天時，第0、14天程序試驗組有1例受試者未采血，第0、21天程序試驗組有1例受試者采血超窗，因此共有278例受試者納入該時間節(jié)點的免疫持久性分析；全程免疫后第180天時，第0、14天程序試驗組有2例受試者未采血，第0、21天程序試驗組有1例受試者采血超窗，因此共有277例受試者納入該時間節(jié)點的免疫持久性分析(圖1)。

圖1 各程序組分析數(shù)據(jù)集

2.2.2中和抗體 第0、14天，第0、21天和第0、28天程序試驗組首劑免疫前及全程免疫后各時間節(jié)點中和抗體GMT見圖2。全程免疫后第28天至第180天，3個程序試驗組中和抗體GMT隨時間變化的差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(F=65.195、10.496、127.695，P<0.05)；差異主要分布于全程免疫后第90天和第180天。安慰劑組各時間節(jié)點中和抗體GMT均為2。

P1：為全程免疫后第28天與第90天比較；P2：為全程免疫后第90天與第180天比較

第0、14天，第0、21天和第0、28天程序全程免疫后各時間點試驗組中和抗體4倍增長率均為100.0%，見表2。安慰劑組中和抗體4倍增長率均為0.0%。

表2 各程序試驗組全程免疫后第28天至第180天中和抗體4倍增長率

2.2.3特異性IgG抗體 第0、14天，第0、21天和第0、28天程序試驗組首劑免疫前及全程免疫后各時間節(jié)點IgG抗體GMT見圖3。全程免疫后第28天至第180天時，第0、14天和第0、28天程序試驗組IgG抗體GMT隨時間變化的差異具有統(tǒng)計學(xué)差異(F=31.322、42.539，P<0.001)；第0、21天程序試驗組IgG抗體GMT隨時間變化的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(F=2.137，P=0.136)。除第0、21天程序試驗組，其余兩個程序試驗組IgG抗體GMT在全程免疫后第90天和第180天的差異有統(tǒng)計學(xué)意義。安慰劑組各時間節(jié)點IgG抗體GMT均為5。

P1：為全程免疫后第28天與第90天比較；P2：為全程免疫后第90天與第180天比較

第0、14天，第0、21天和第0、28天程序試驗組全程免疫后第28天至第180天IgG抗體4倍增長率見表3。安慰劑組IgG抗體4倍增長率均為0.0%。

表3 各程序試驗組全程免疫后第28天至第180天IgG抗體4倍增長率

3 討論

SARS-CoV-2和嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus，SARS-CoV)同屬β-冠狀病毒屬，具有相似的感染通路，機體也產(chǎn)生類似的免疫機制[3]。參考SARS-CoV疫苗的臨床數(shù)據(jù)[4]及本試驗疫苗的臨床前研究[5]，北京生物制品研究所有限責(zé)任公司研制的SARS-CoV-2滅活疫苗被批準(zhǔn)開展臨床試驗。本研究報告了按照第0、14天，第0、21天和第0、28天免疫程序在18～59歲人群中接種疫苗的免疫持久性結(jié)果，顯示該疫苗在免疫后第90天對受試者具有免疫保護，而在第180天時免疫原性明顯下降。

滅活疫苗在失去致病性的同時，保留了病毒衣殼的主要抗原特征，使機體產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng)。本研究結(jié)果顯示在全程免疫后第28天，該試驗疫苗顯示出良好的免疫原性。以往的一些臨床試驗研究[6-7]也表明，疫苗在體內(nèi)刺激產(chǎn)生的中和抗體可能隨著時間的推移而逐漸下降；但最近一項關(guān)于SARS的研究[8]結(jié)果顯示SARS康復(fù)患者在感染17 a后，再次受到SARS-CoV核衣殼蛋白刺激時，體內(nèi)仍存在可快速反應(yīng)的記憶T細(xì)胞。為了探索該試驗疫苗的免疫持久性，本臨床試驗設(shè)計了按照第0、14天，第0、21天和第0、28天程序接種試驗疫苗后第90和180天的中和抗體及IgG抗體GMT檢測，結(jié)果顯示受試者兩劑程序全程免疫后第90天，上述兩指標(biāo)與全程免疫后第28天比較稍升高或無明顯下降，機體仍能維持較高的免疫應(yīng)答水平；然而，在兩劑程序全程免疫后第180天，中和抗體GMT水平僅維持在60～70，IgG抗體GMT水平維持在70～120，相較于全程免疫后第90天機體免疫應(yīng)答水平呈明顯下降。這一結(jié)果表明，該試驗疫苗兩劑程序全程免疫后2～4周時抗體水平達(dá)到平臺期，且平臺期大致能維持3個月。隨后，體內(nèi)的抗體水平將隨時間逐漸下降，至全程免疫后6個月時，體內(nèi)抗體水平下降至平臺期的1/4～1/3。武漢生物制品研究所有限責(zé)任公司研制的SARS-CoV-2滅活疫苗在兩劑疫苗接種后第90天對受試者仍存在免疫保護[9]。最新發(fā)表的關(guān)于SARS-CoV-2滅活疫苗的免疫持久性的研究[10]結(jié)果顯示，盡管接種兩劑疫苗6個月后特異性免疫反應(yīng)下降，但仍有良好的免疫記憶，在8個月后打第3劑可有效增強中和抗體水平。由此表明，在兩劑免疫6個月后進行第3劑接種是必要的。

綜上所述，北京生物制品研究所有限責(zé)任公司研制的SARS-CoV-2滅活疫苗在18～59歲人群中按照兩針的免疫程序接種后，在全程免疫后第90天時仍可維持較高的免疫應(yīng)答水平，在第180天時免疫水平呈明顯下降。

致謝：感謝河南省疾病預(yù)防控制中心和商丘市梁園區(qū)疾病預(yù)防控制中心相關(guān)工作人員給予積極配合和大力協(xié)助。