謝駿，高鳳敏，符北京

（牡丹江醫(yī)學(xué)院附屬紅旗醫(yī)院心內(nèi)科，黑龍江牡丹江 157011）

缺血性心肌病居世界致死原因的首位，具有高發(fā)病率和病死率等特點(diǎn)，而缺血再灌注與其病死率居高不下密切相關(guān)[1-2]。缺血再灌注損傷主要指血流灌注逐漸恢復(fù)后，組織結(jié)構(gòu)受損或功能喪失進(jìn)一步加重的現(xiàn)象[3-4]。缺血再灌注后造成的損傷較先前更為嚴(yán)重，且持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)，可直接影響患者的重要臟器，致其結(jié)構(gòu)和功能受損。盡早、盡快恢復(fù)冠狀動(dòng)脈的血流灌注是治療心肌梗死，提高患者存活率的關(guān)鍵。MURRY 等[5]提出，心肌缺血預(yù)處理可對(duì)心肌起到保護(hù)作用。有研究證實(shí)，吸入麻醉藥預(yù)處理和后處理可有效減輕心肌缺血再灌注損傷。近年來(lái)有研究顯示，AMPK 在調(diào)節(jié)人體氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡、增殖等過(guò)程中發(fā)揮了較大作用[6]。激活后的AMPK 可通過(guò)多種途徑促進(jìn)ATP 的生成和脂肪酸的氧化?，F(xiàn)有臨床證據(jù)顯示，激活狀態(tài)的AMPK可對(duì)心肌細(xì)胞起到保護(hù)作用[7-8]。CTRP9 是一種新發(fā)現(xiàn)的脂肪組織源性細(xì)胞因子，參與吞噬細(xì)胞清除凋亡細(xì)胞、調(diào)控機(jī)體炎癥反應(yīng)及免疫耐受等生理過(guò)程[9]。

目前關(guān)于CTRP9 調(diào)控AMPK 途徑參與遠(yuǎn)端缺血預(yù)處理對(duì)心肌梗死模型心肌缺血再灌注致腦損傷的保護(hù)作用的報(bào)道較少。因此本研究通過(guò)復(fù)制缺血再灌注模型大鼠，分別給予后處理和CTRP9 抑制劑干預(yù)來(lái)明確CTRP9 通過(guò)調(diào)控AMPK 途徑發(fā)揮心肌保護(hù)作用的機(jī)制，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雄性SD 大鼠40 只，SPF 級(jí)，體重220～250 g，購(gòu)自遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)股份有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（遼）2020-0001，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（黑）2021-0002。

1.1.2 主要試劑戊巴比妥鈉、蘇木精、CTRP9 抑制劑LiCI（美國(guó)Sigma 公司），TUNRL 試劑盒（美國(guó)羅氏公司），p-AMPK（1∶1 000，批號(hào)：2535，美國(guó)Cell Signaling 公司）、一抗LC3（1∶1 000，批號(hào)：136F3，美國(guó)Santa Cruz 公司）、一抗P62（1∶1 000，批號(hào)：8G10，美國(guó)Santa Cruz 公司）、內(nèi)參GAPDH（1∶1 000，批號(hào)：AG019，上海碧云天生物技術(shù)有限公司），苦味酸、伊紅Y、二甲苯、石蠟、中性樹膠（北京中國(guó)國(guó)藥集團(tuán)），拘橡酸、拘橡酸鈉（北京華科盛精細(xì)化工產(chǎn)品貿(mào)易公司），鏈霉菌抗生素蛋白-過(guò)氧化物酶、SABC 試劑盒、DAB 顯色試劑盒、白細(xì)胞介素-6（Interleukin-6,IL-6）多克隆抗體、IL-8 多克隆抗體、IL-10 多克隆抗體（武漢博士德生物工程有限公司），Bal-2 多克隆抗體、Bax 多克隆抗體（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）。

1.1.3 主要儀器高精度電子天平、pH 計(jì)（PB10）（德國(guó)Sartorius 公司），移液器、離心機(jī)（德國(guó)Eppendorf 公司），切片機(jī)（德國(guó)Leica 公司），PVDF 膜（美國(guó)Millipore 公司），熒光顯微鏡（德國(guó)Axiophot 公司），全自動(dòng)生化分析儀（美國(guó)Beckman 公司），Image-Pro6.0 計(jì)算機(jī)圖像分析軟件（美國(guó)Media Cybemetics 公司），凝膠成像系統(tǒng)、電泳槽（美國(guó)Bio-Rad 公司），普通光學(xué)顯微鏡、BX50 顯微攝影系統(tǒng)（日本Olympus 公司），V30 掃描儀（日本Epson 公司），-70℃深低溫冰箱（日本SANYO 公司），Bene View T5 型監(jiān)護(hù)儀（中國(guó)西安巨田醫(yī)療設(shè)備有限公司），動(dòng)物呼吸機(jī)（上海嘉鵬科技有限公司），微型漩渦混合儀（上海滬西分析儀器有限公司），TGL-16G型高速臺(tái)式離心機(jī)（上海醫(yī)用電子儀器廠）。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物模型復(fù)制及分組所有大鼠插管開胸后，復(fù)制心肌缺血再灌注模型前，置于手術(shù)臺(tái)約10 min，期間不做任何處理，便于大鼠適應(yīng)呼吸機(jī)、開胸操作的損傷及胸腔壓力的改變。實(shí)驗(yàn)期間對(duì)動(dòng)物的處理均嚴(yán)格按照相關(guān)倫理學(xué)規(guī)定進(jìn)行。將大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為4 組，每組10 只：①假手術(shù)組（NS組）：大鼠在左心耳下緣位置心肌組織穿線，但對(duì)冠狀動(dòng)脈左前降支不做結(jié)扎。②缺血再灌注組（NIR組）：大鼠在左心耳下緣位置穿線結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支，進(jìn)行缺血再灌注處理，缺血時(shí)長(zhǎng)30 min，松開結(jié)扎線后繼續(xù)灌注2 h。③缺血預(yù)處理組（NIPost組）：大鼠在左心耳下緣位置穿線結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支，缺血時(shí)長(zhǎng)30 min，松開結(jié)扎線后再行3 次處理（將結(jié)扎線放松再灌注10 s，拉緊結(jié)扎線缺血10 s，循環(huán)3 個(gè)周期，最后松開結(jié)扎線行2 h 再灌注）。④缺血預(yù)處理+CTRP9 抑制劑組（NIPostI 組），術(shù)前10 min灌注0.3 mmol/kg 0.5% LiCl 抑制劑，余下后處理操作方法與NIPsot 組一致。

1.2.2 標(biāo)本采集再灌注120 min 后迅速取腦，4℃、PBS 溶液清洗，去除殘余血液，取適量腦組織置于-80℃冰箱備用。用10%甲醛溶液固定剩余腦組織，用于制作組織切片。

1.2.3 蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin, HE）染色觀察大鼠腦組織病理學(xué)變化取適量腦組織，梯度乙醇脫水處理，透明劑（二甲苯）處理后包埋至蠟塊中，冷凍后切成約4 μm 厚切片。組織脫蠟、水化后，蘇木精染色5～8 min，70%乙醇1 min，2%碳酸氫鈉返藍(lán)5～10 s，二甲苯透明處理2 min，最后以中性樹膠封片。封片后置于光鏡下觀察腦組織病理學(xué)變化。

1.2.4 免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)大鼠腦組織凋亡因子、炎癥因子取1.2.3 中組織切片置于40℃水浴鍋中攤片，60℃烤箱烤片3 h 后脫蠟處理。采用微波對(duì)脫蠟水化的組織切片進(jìn)行抗原修復(fù)，滴加3%過(guò)氧化氫溶液，以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的影響。使用免疫組織化學(xué)筆在組織周圍畫圈，滴加合適濃度的山羊血清予以封閉。依次加一抗、酶標(biāo)二抗、顯色劑，蘇木精復(fù)染后脫水、風(fēng)干后切片，以中性樹膠進(jìn)行封片，并于顯微鏡下觀察切片并拍照。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：相同光強(qiáng)度下，400 倍顯微鏡下各個(gè)切片隨機(jī)挑選5 個(gè)互不重疊的視野，細(xì)胞內(nèi)有棕黃色顆粒即為陽(yáng)性。

1.2.5 TUNEL 法檢測(cè)大鼠腦組織細(xì)胞凋亡取1.2.3 中組織切片貼附在多聚賴氨酸預(yù)處理后的載玻片上，確保切片的平整且不重疊。將切片置于62℃溫箱中烤片12 h，組織切片脫蠟、水化，二甲苯溶液沖洗玻片2 次，3 min/次；無(wú)水乙醇沖洗玻片2 次，3 min/次；95%和75%乙醇溶液分別清洗1 次，3 min/次；蒸餾水清洗2 次，5 min/次；PBS 洗2 次，5 min/次；37℃條件下20 μg/mL 蛋白酶K 溶液消化15 min，去除組織蛋白；蒸餾水沖洗4 次，2 min/次。將含2%過(guò)氧化氫的PBS 溶液加入色缸中，室溫條件下反應(yīng)5 min，PBS 沖洗2 次，5 min/次，使用濾紙將組織周圍水分吸干后，即刻在切片上滴加約50 μL TUNEL 反應(yīng)液，置于37℃濕盒中孵育1 h。PBS 液沖洗3 次，3 min/次，將切片周圍水分甩干后，滴加50 μL 辣根過(guò)氧化酶抗體至切片上，置于37℃溫箱中孵育30 min。蘇木精復(fù)染，PBS 液沖洗3 次，3 min/次，甩干水分，將2 滴DAB 溶液滴加在各組織切片上，室溫條件下顯色3～6 min。PBS 液沖洗3 次，3 min/次，二甲苯脫水，以中性樹膠封片、干燥。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)胞核呈棕色為細(xì)胞凋亡陽(yáng)性；細(xì)胞核染藍(lán)色為未發(fā)生凋亡。在400 倍顯微鏡下，通過(guò)雙盲法對(duì)每個(gè)視野中的陽(yáng)性細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。

1.2.6 Western blotting檢測(cè)大鼠心肌組織p-AMPK/t-AMPK、LC3Ⅰ/Ⅱ及P62蛋白的表達(dá)將大鼠左心室心尖部組織約300 mg 剪碎后置于勻漿機(jī)，依次加入裂解液、蛋白酶及磷酸酶抑制劑，低溫條件下，在超聲細(xì)胞破碎儀中進(jìn)行3 次裂解，裂解后靜置30 min，移入EP 管進(jìn)行離心，將上清液分裝至1.5 mL離心管中，保存于低溫冰箱。上述所有操作需在冰面進(jìn)行，用BCA 蛋白定量試劑盒檢測(cè)蛋白濃度，并將其稀釋至相同濃度。將緩沖液倒入樣品中并完全混勻，95℃煮5 min，待蛋白質(zhì)全部變性后轉(zhuǎn)移至低溫冰箱。采用BCA 試劑盒檢測(cè)蛋白樣品含量，并通過(guò)裂解液將其調(diào)至相同濃度，在97℃金屬浴條件下持續(xù)加熱5 min。每個(gè)樣品提取20 μg 蛋白置于12%聚丙烯酰胺凝膠中電泳，分離蛋白。電泳結(jié)束后，切取目的條帶，并將其轉(zhuǎn)移至PVDF 膜上。5%脫脂奶粉封閉2 h，分別加入一抗p-AMPK、一抗LC3、一抗P62、內(nèi)參GAPDH，4℃一抗孵育過(guò)夜。TBST 溶液漂洗3 次后加入二抗搖床，孵育120 min。采用ECL 試劑盒進(jìn)行顯色，然后進(jìn)行增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，將工作液滴加在PVDF 膜上，反應(yīng)5 min 左右待出現(xiàn)明顯的熒光帶，用濾紙吸去剩下的底物液，蓋上保鮮膜，X 射線膠片壓片后分別放入顯影液、定影液，放置適宜時(shí)間后沖洗膠片。將膠片晾干，掃描，使用Image 軟件測(cè)定條帶灰度值，以目的條帶灰度值與GAPDH 灰度值比值表示蛋白相對(duì)表達(dá)量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，比較用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較用LSD-t檢驗(yàn)，P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠腦組織病理學(xué)變化

HE 染色結(jié)果顯示，NS 組皮層神經(jīng)元胞漿豐富，核圓，堿染后呈藍(lán)色，分布均勻且排列整齊；NIR 組神經(jīng)元結(jié)構(gòu)受損，分布不均勻，胞漿空泡化，胞核固縮，堿染后呈淡紅色；NIPost 組細(xì)胞結(jié)構(gòu)基本恢復(fù)正常，大部分神經(jīng)元包膜完整，胞核清晰可見；NIPostI 組經(jīng)CTRP9 抑制劑LiCl 干預(yù)后，后處理的保護(hù)效應(yīng)消失。見圖1。

圖1 各組大鼠腦組織病理切片 （HE染色×400）

2.2 各組大鼠腦組織凋亡因子表達(dá)水平比較

NS 組、NIR 組、NIPost 組、NIPostI 組Bax 和Bcl-2表達(dá)水平比較，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=2.368 和2.135，P=0.003 和0.005）。進(jìn)一步兩兩比較結(jié)果：NIR 組、NIPost 組及NIPostI 組Bax 表達(dá)水平高于NS 組（P＜0.05），Bcl-2 表達(dá)水平低于NS 組（P＜0.05）；NIPost 組較NIR 組Bax 表達(dá)水平降低（P＜0.05），Bcl-2 表達(dá)水平升高（P＜0.05）；NIPostI 組較NIPost 組Bax 表達(dá)水平升高（P＜0.05），Bcl-2 表達(dá)水平降低（P＜0.05）。見表1。

表1 各組大鼠腦組織Bax和Bcl-2表達(dá)水平比較（n=10，±s）

表1 各組大鼠腦組織Bax和Bcl-2表達(dá)水平比較（n=10，±s）

注：①與NS 組比較，P ＜0.05；②與NIR 組比較，P ＜0.05；③與NIPost組比較，P ＜0.05。

Bcl-2 14.48±0.63 5.45±0.51①11.96±0.62①②6.34±0.76①②③2.135 0.005組別NS組NIR組NIPost組NIPostI組F 值P 值Bax 4.91±0.44 12.51±0.73①7.55±0.46①②11.33±0.75①②③2.368 0.003

2.3 各組大鼠腦組織炎癥因子表達(dá)水平比較

NS 組、NIR 組、NIPost 組、NIPostI 組IL-6、IL-8 和IL-10表達(dá)水平比較，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=2.123、2.671 和2.935，P=0.011、0.002 和0.001）。進(jìn)一步兩兩比較結(jié)果：NIR 組、NIPost 組及NIPostI 組IL-6、IL-8表達(dá)水平高于NS組（P＜0.05），IL-10表達(dá)水平低于NS 組（P＜0.05）；NIPost 組較NIR 組IL-6、IL-8表達(dá)水平降低（P＜0.05），IL-10 表達(dá)水平升高（P＜0.05）；NIPostI 組較NIPost 組IL-6、IL-8 表達(dá)水平升高（P＜0.05），IL-10表達(dá)水平降低（P＜0.05）。見表2。

表2 各組大鼠腦組織IL-6、IL-8及IL-10表達(dá)水平比較（n=10，±s）

表2 各組大鼠腦組織IL-6、IL-8及IL-10表達(dá)水平比較（n=10，±s）

注：①與NS 組比較，P ＜0.05；②與NIR 組比較，P ＜0.05；③與NIPost組比較，P ＜0.05。

IL-10 14.96±0.67 5.12±0.54①12.45±0.64①②6.28±0.55①②③2.935 0.001組別NS組NIR組NIPost組NIPostI組F 值P 值IL-6 5.41±0.43 13.91±0.85①8.31±0.74①②13.15±0.66①②③2.123 0.011 IL-8 6.16±0.54 14.83±0.63①9.12±0.56①②13.91±0.63①②③2.671 0.002

2.4 各組大鼠腦組織細(xì)胞凋亡情況

NS 組、NIR 組、NIPost 組、NIPostI 組凋亡細(xì)胞數(shù)分別為（55.41±6.43）個(gè)/HP、（213.91±20.85）個(gè)/HP、（138.31±15.74）個(gè)/HP、（163.15±10.66）個(gè)/HP，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=2.813，P=0.001）。進(jìn)一步兩兩比較結(jié)果：NIR 組、NIPost 組和NIPostI 組凋亡細(xì)胞多于NS 組（P＜0.05）；NIPost 組和NIPostI 組較NIR 組凋亡細(xì)胞減少（P＜0.05）。NIPost 組和NIPostI組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見圖2。

圖2 各組大鼠腦組織細(xì)胞凋亡情況 （TUNEL染色×400）

2.5 各組大鼠心肌組織p-AMPK/t-AMPK、LC3Ⅰ/Ⅱ及P62蛋白相對(duì)表達(dá)量比較

NS 組、NIR 組、NIPost 組、NIPostI 組p-AMPK/t-AMPK、LC3Ⅰ/Ⅱ及P62 蛋白相對(duì)表達(dá)量比較，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=2.203、2.772 和2.901，P=0.004、0.002 和0.001）。進(jìn)一步兩兩比較結(jié)果：NIR 組、NIPost 組及NIPostI 組p-AMPK/t-AMPK蛋白相對(duì)表達(dá)量低于NS 組（P＜0.05），LC3Ⅰ/Ⅱ和P62 蛋白相對(duì)表達(dá)量高于NS 組（P＜0.05）；NIPost 組較NIR 組p-AMPK/t-AMPK 蛋白相對(duì)表達(dá)量升高（P＜0.05），LC3Ⅰ/Ⅱ和P62 蛋白相對(duì)表達(dá)量降低（P＜0.05）；NIPostI 組較NIPost 組p-AMPK/t-AMPK 蛋白相對(duì)表達(dá)量降低（P＜0.05），LC3Ⅰ/Ⅱ和P62 蛋白相對(duì)表達(dá)量升高（P＜0.05）。見表3 和圖3～5。

圖3 各組大鼠心肌組織p-AMPK/t-AMPK蛋白的表達(dá)

表3 各組大鼠心肌組織p-AMPK/t-AMPK、LC3Ⅰ/Ⅱ及P62蛋白相對(duì)表達(dá)量比較 （n=10，±s）

表3 各組大鼠心肌組織p-AMPK/t-AMPK、LC3Ⅰ/Ⅱ及P62蛋白相對(duì)表達(dá)量比較 （n=10，±s）

注：①與NS 組比較，P ＜0.05；②與NIR 組比較，P ＜0.05；③與NIPost組比較，P ＜0.05。

P62 0.86±0.07 1.32±0.07①0.95±0.04①②1.08±0.05①②③2.901 0.001組別NS組NIR組NIPost組NIPostI組F 值P 值p-AMPK/t-AMPK 1.41±0.23 0.61±0.05①0.91±0.04①②0.75±0.06①②③2.203 0.004 LC3Ⅰ/Ⅱ0.56±0.04 1.03±0.03①0.72±0.06①②0.91±0.03①②③2.772 0.002

圖4 各組大鼠心肌組織LC3Ⅰ/Ⅱ蛋白的表達(dá)

圖5 各組大鼠心肌組織P62蛋白的表達(dá)

3 討論

臨床上，及時(shí)恢復(fù)患者的氧合和血流灌注是搶救缺血再灌注損傷的基礎(chǔ)。一旦臟器發(fā)生缺血再灌注，所造成的損害將較先前更嚴(yán)重，且更持久，甚至可直接危及心、肺、腦等重要臟器。有研究結(jié)果顯示，缺血再灌注損傷與氧自由基產(chǎn)生、促凋亡因子過(guò)表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)鈣超載及炎癥反應(yīng)的級(jí)聯(lián)效應(yīng)等密切相關(guān)，但具體機(jī)制尚未明確[10-11]。1986年，MURRY等[5]首次觀察到心肌在經(jīng)歷一次或反復(fù)數(shù)次短暫缺血后，可在后續(xù)較長(zhǎng)時(shí)間缺血中得到保護(hù)，對(duì)缺血的耐受性會(huì)明顯提高，并基于此提出了缺血預(yù)處理的概念。目前，大量臨床證據(jù)表明，缺血預(yù)處理對(duì)心肌損傷有保護(hù)作用[12-14]。

肥胖導(dǎo)致的脂肪細(xì)胞因子失去平衡是心血管疾病的重要誘因。CTRPs 是一類新發(fā)現(xiàn)的脂肪組織源性細(xì)胞因子，其分子結(jié)構(gòu)與脂聯(lián)素相似，共包含15 個(gè)成員，除CTRP4 外，其他成員均由氨基末端的信號(hào)肽、膠原樣結(jié)構(gòu)域、短的可變結(jié)構(gòu)域及羧基末端與補(bǔ)體成分C1q 同源的球狀結(jié)構(gòu)域等4 個(gè)不同結(jié)構(gòu)域構(gòu)成[15-16]。李浩等[17]發(fā)現(xiàn)，CTRP9 在大鼠心肌缺血再灌注損傷的脂肪組織及血漿中表達(dá)水平明顯下降，脂肪組織NADPH 氧化酶和血漿游離脂肪酸含量明顯增加，且3T3-L1 脂肪細(xì)胞經(jīng)過(guò)氧化氫或如軟脂酸處理后，CTRP9 水平明顯降低，表明心肌缺血性損傷可促進(jìn)脂肪組織氧化應(yīng)激，從而降低CTRP9 表達(dá)水平。本研究中，HE 染色結(jié)果再次驗(yàn)證缺血預(yù)處理可對(duì)腦損傷發(fā)揮保護(hù)作用，且CTRP9 抑制劑干擾可抑制后處理的保護(hù)效應(yīng)。

缺血再灌注損傷是一種炎癥反應(yīng)過(guò)程，其病理生理作用包括補(bǔ)體激活、自由基生成、炎癥因子產(chǎn)生、細(xì)胞凋亡等[18]。本研究通過(guò)免疫組織化學(xué)和TUNEL 檢測(cè)結(jié)果證明心肌缺血再灌注可導(dǎo)致炎癥反應(yīng)級(jí)聯(lián)效應(yīng)和凋亡因子過(guò)表達(dá)，不僅可導(dǎo)致心臟衰竭，同時(shí)還會(huì)對(duì)其他臟器造成不良影響，其中腦組織受到的影響最大，嚴(yán)重的腦損傷會(huì)大幅度降低患者的生活質(zhì)量。此外，后處理可有效減輕心肌缺血再灌注所致炎癥反應(yīng)和凋亡因子過(guò)表達(dá)，CTRP9可通過(guò)激活A(yù)MPK，抑制心肌細(xì)胞凋亡，發(fā)揮心肌保護(hù)作用，與NIEMANN等[19]的結(jié)論基本一致。

AMPK 是一類異源性的三聚體的蛋白激酶，具有調(diào)節(jié)物質(zhì)能量代謝的作用。運(yùn)動(dòng)、AMP/ATP比例升高、缺血低氧及促炎因子等均可促進(jìn)AMPK 磷酸化[20]。激活狀態(tài)的AMKP 可通過(guò)多種途徑參與能量合成、代謝，且對(duì)炎癥反應(yīng)具有抑制作用，可減輕機(jī)體氧化應(yīng)激損傷[21]。AMPK 信號(hào)通路受損與肥胖、糖尿病及心血管疾病關(guān)系密切。心肌缺血時(shí)，心肌組織AMP 含量升高，AMP/ATP 比值升高可激活A(yù)MPK，促使AMPK 磷酸化，進(jìn)而激活下游信號(hào)分子，引發(fā)相應(yīng)的生物學(xué)效應(yīng)。AMPK 激活可加快心肌細(xì)胞攝取、利用葡萄糖的速度，改善能量供應(yīng)[22]。本研究中Western blotting 檢測(cè)結(jié)果表明，AMPK 信號(hào)通路調(diào)節(jié)CTRP9 后處理的心肌保護(hù)作用，給予CTRP9 抑制劑干預(yù)可抑制該保護(hù)作用。CTRP9 抑制劑處理后，再灌注后的溶酶體功能損傷標(biāo)志性蛋白P62 和自噬體標(biāo)志性蛋白LC3 相對(duì)表達(dá)量升高，表明CTRP9 后處理可促進(jìn)再灌注后的自噬流恢復(fù)，進(jìn)而保護(hù)心肌缺血再灌注損傷，與覃琴等[22]的研究結(jié)果大致相同。

綜上所述，CTRP9 對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷有一定的保護(hù)作用，其可能通過(guò)激活A(yù)MPK 信號(hào)通路發(fā)揮作用，使AMPK 磷酸化來(lái)促進(jìn)自噬體與溶酶體結(jié)合，加速自噬達(dá)到消化降解代謝產(chǎn)物再循環(huán)利用的效果，以此來(lái)發(fā)揮保護(hù)心肌缺血再灌注損傷的作用。缺血預(yù)處理時(shí)可通過(guò)調(diào)高CTRP9 水平來(lái)降低缺血再灌注損傷；應(yīng)用CTRP9 抑制劑后，其保護(hù)作用將受到抑制。