王曉芝 趙冰怡 叢 琳 潘啟誠(chéng) 楊洪芹 李雪竹

1.上海新高姿化妝品有限公司，廣東廣州，510000；2.廣州澳希亞實(shí)業(yè)有限公司，廣東廣州，510000

保濕是皮膚的基本需求，皮膚角質(zhì)層中的水分可滋潤(rùn)皮膚，維持皮膚健康，角質(zhì)層中水分不足會(huì)引起皮膚干燥。水分常常以結(jié)合水的方式與角質(zhì)層結(jié)合，能夠保持皮膚角質(zhì)層中水分的各種物質(zhì)稱為皮膚保濕劑[1]。按保濕機(jī)制分類，保濕劑可以分為封閉劑、吸濕劑。封閉劑是一類不溶性脂類物質(zhì)，在皮膚表面形成潤(rùn)滑膜層，通過(guò)封閉作用防止皮膚內(nèi)水分蒸發(fā)，達(dá)到保濕效果，其主要包括礦油類、蠟類、硅油類、動(dòng)植物脂肪、脂肪酸和酯類、膽固醇類等；吸濕劑是一類與表皮中天然保濕因子和人體蛋白質(zhì)、多糖等相似的物質(zhì)，當(dāng)皮膚水分丟失時(shí)，保濕劑通過(guò)毛孔進(jìn)入皮膚內(nèi)部，或攜帶水分，或?qū)⑵つw內(nèi)尚未丟失的水分包裹起來(lái)使其不再丟失，達(dá)到保濕效果，其主要包括甘油、山梨糖醇、吡咯烷酮羧酸、殼聚糖、透明質(zhì)酸鈉等[2-3]。隨著皮膚保濕機(jī)制相關(guān)研究的深入，市面上還涌現(xiàn)出很多新穎的保濕劑，如泛醇、神經(jīng)酰胺、糖類同分異構(gòu)體等。

根據(jù)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)，僅使用一種保濕劑保濕效果不顯著，因此在實(shí)際應(yīng)用中常常將幾種保濕劑復(fù)配后使用。本文選擇吸濕劑中具有代表性的甘油、透明質(zhì)酸鈉與泛醇（右旋體）復(fù)配應(yīng)用于化妝品中，根據(jù)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)及原料商建議確定配比，甘油4%、透明質(zhì)酸鈉0.02%、泛醇0.5%，評(píng)價(jià)其保濕功效。

1 保濕劑介紹

1.1 甘油

甘油亦稱丙三醇，被廣泛應(yīng)用于化妝品行業(yè)，幾乎所有的保濕類護(hù)膚品中都含有甘油，它最大可以吸收自身重量一倍的水分，主要由于分子結(jié)構(gòu)中含有多個(gè)羥基基團(tuán)，它們可以通過(guò)氫鍵與水結(jié)合達(dá)到使角質(zhì)層長(zhǎng)效保濕的效果[4]。

1.2 透明質(zhì)酸鈉

透明質(zhì)酸鈉分子鏈之間相互纏繞形成連續(xù)的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，水分子通過(guò)極性鍵和氫鍵與其直接作用，可以吸收和保持其自身重量上千倍的水分。當(dāng)加入化妝品中涂于皮膚表面時(shí)，會(huì)形成一層黏彈性透明水化膜，這層膜具有很好的保水作用，能增加皮膚角質(zhì)層的水分，另外一部分則可滲透到真皮層，調(diào)節(jié)皮膚新陳代謝，使皮膚濕潤(rùn)光滑、細(xì)膩柔嫩[5]。

1.3 泛醇

泛醇亦稱維生素原B5，溶于水和醇，微有吸濕性。泛醇有2種形式，即D-泛醇（右旋）和DL-泛醇（混旋），其中只有右旋體具有生物活性。D-泛醇被人體吸收后，會(huì)轉(zhuǎn)化為D-泛酸-輔酶A合成的前體，呈現(xiàn)維生素的生物活性，是一種滲透性好的潤(rùn)濕劑和調(diào)節(jié)劑[6]。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 主要試劑與儀器

甘油，豐益油脂科技有限公司；透明質(zhì)酸鈉，華熙生物科技股份有限公司；泛醇，帝斯曼營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品有限公司；去離子水，自制；EpiGrowth培養(yǎng)液，廣東博溪生物科技有限公司。

HWS-12電熱恒溫水浴鍋，上海一恒科學(xué)儀器有限公司；EUROSTAR 40 digital攪拌器，IKA；T25 digital均質(zhì)器，IKA；PL2002電子天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；150I CO2培養(yǎng)箱，Thermo；SW-CJ-1F超凈工作臺(tái)，蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司；Corneometer?CM 825皮膚含水量測(cè)試儀，Courage+Khazaka electronic；VapoMeter皮膚經(jīng)皮水分流失測(cè)量?jī)x，DELFIN。

2.2 樣品制備及穩(wěn)定性測(cè)試

2.2.1 樣品制備

按照化妝品常規(guī)制備工藝配制，配方見(jiàn)表1～表4。

表1 護(hù)膚水配方

表4 護(hù)膚霜配方

2.2.2 穩(wěn)定性測(cè)試

將護(hù)膚水、護(hù)膚精華、護(hù)膚乳、護(hù)膚霜分別在光照、低溫（5℃）、高溫（50℃）、高低溫循環(huán)下放置28天，恢復(fù)室溫后與實(shí)驗(yàn)前無(wú)明顯性狀差異則合格，結(jié)果見(jiàn)表5。

表2 護(hù)膚精華配方

表3 護(hù)膚乳配方

表5 穩(wěn)定性測(cè)試結(jié)果

2.3 基于3D表皮皮膚模型（Epikutis?）的皮膚含水量檢測(cè)法[7]

根據(jù)表6測(cè)試方案，將模型轉(zhuǎn)移到6孔板中（提前添加0.9 ml EpiGrowth培養(yǎng)液），在6孔板上標(biāo)注測(cè)試組編號(hào)。樣品組添加相應(yīng)濃度的工作液，將樣品均勻分布于模型表面，置于CO2培養(yǎng)箱（37℃，5%CO2）中孵育24 h。將模型表面的樣品清洗干凈，并用棉簽將表面殘留的水輕輕擦干，結(jié)束后，根據(jù)模型數(shù)量準(zhǔn)備24孔板，并做相應(yīng)標(biāo)記。每孔加入0.3 ml的EpiGrowth培養(yǎng)液。將裝有模型的24孔板放置于超凈工作臺(tái)內(nèi)，打開24孔板的蓋子，靜置30 min后進(jìn)行測(cè)量。將模型底部的水分擦干，用手術(shù)刀片將模型從細(xì)胞小室底部環(huán)切下來(lái)，用鑷子將模型放置在Corneometer?CM 825皮膚含水量測(cè)試探頭上，保證模型的角質(zhì)層一面與探頭完全接觸，然后按壓探頭進(jìn)行測(cè)量，每個(gè)模型測(cè)量3次，獲得9個(gè)數(shù)據(jù)，取平均值。測(cè)試方案見(jiàn)表6。

表6 測(cè)試方案

2.4 人體測(cè)試法

選取20名年齡在18～40歲的健康男性或女性受試者，恒溫恒濕，溫度（21±1）℃、濕度（50±10）%的環(huán)境下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)前受試者需在該環(huán)境下靜坐30 min，待環(huán)境達(dá)到平衡后，采用隨機(jī)、單盲、對(duì)照測(cè)試，于受試者左右前臂按照隨機(jī)原則分別使用空白對(duì)照、護(hù)膚水、護(hù)膚精華、護(hù)膚乳、護(hù)膚霜，按（2.0±0.1）mg/cm2的劑量涂抹于測(cè)試部位。

2.4.1 皮膚含水量測(cè)試

皮膚含水量值（MMV值）可直接反映皮膚的干燥程度，進(jìn)而反映產(chǎn)品的保濕功效。

受試者在使用樣品前、4 h后由測(cè)試人員使用Corneometer?CM 825皮膚含水量測(cè)試儀測(cè)試實(shí)驗(yàn)部位皮膚含水量，每位受試者測(cè)量5次，獲得100個(gè)數(shù)據(jù)，取平均值，皮膚含水量變化率計(jì)算公式見(jiàn)式1。

2.4.2 經(jīng)表皮失水值測(cè)試

經(jīng)表皮失水值（TEWL值）是評(píng)價(jià)皮膚屏障功能強(qiáng)弱的一項(xiàng)重要標(biāo)志，數(shù)值越低，表示皮膚屏障越好，皮膚角質(zhì)層的保水能力越好，是保濕功效評(píng)價(jià)的重要指標(biāo)之一。

受試者在使用樣品前、4 h后由測(cè)試人員使用VapoMeter皮膚經(jīng)皮水分流失測(cè)量?jī)x測(cè)試實(shí)驗(yàn)部位經(jīng)表皮失水值，每位受試者測(cè)量5次，獲得100個(gè)數(shù)據(jù)，取平均值，經(jīng)表皮失水率計(jì)算公式見(jiàn)式2。

3 結(jié)果與討論

作圖，結(jié)果表示為Mean±SD。各組間比較采用t-test統(tǒng)計(jì)分析。統(tǒng)計(jì)分析均為雙尾。與空白對(duì)照對(duì)比，顯著性以＊表示，P＜0.05表示為＊，認(rèn)為具有顯著差異；P＜0.01表示為＊＊，認(rèn)為具有極顯著差異。

3.1 基于3D表皮皮膚模型（Epikutis?）的皮膚含水量檢測(cè)法

測(cè)試結(jié)果見(jiàn)圖1。與空白對(duì)照相比，護(hù)膚水、護(hù)膚精華、護(hù)膚乳、護(hù)膚霜皮膚含水量均顯著提高（P＜0.01），皮膚含水量對(duì)比：護(hù)膚霜＞護(hù)膚乳＞護(hù)膚精華＞護(hù)膚水＞空白對(duì)照。表明復(fù)配保濕劑在3D表皮皮膚模型的皮膚含水量測(cè)試中，保濕功效顯著。

圖1 3D表皮皮膚模型皮膚含水量測(cè)試結(jié)果

3.2 人體皮膚含水量測(cè)試

測(cè)試結(jié)果見(jiàn)圖2、圖3。與空白對(duì)照相比，使用護(hù)膚水、護(hù)膚精華、護(hù)膚乳、護(hù)膚霜后皮膚含水量均顯著提高（P＜0.01），分別提高了37.14%、41.36%、46.53%、54.05%，而空白對(duì)照僅提高了3.81%，表明復(fù)配保濕劑在人體皮膚含水量測(cè)試中，保濕功效顯著。

圖2 人體皮膚含水量測(cè)試結(jié)果

3.3 人體經(jīng)表皮失水值測(cè)試

測(cè)試結(jié)果見(jiàn)圖4、圖5。與空白對(duì)照相比，使用護(hù)膚水、護(hù)膚精華、護(hù)膚乳、護(hù)膚霜后經(jīng)表皮失水值均顯著下降（P＜0.01），分別下降了22.20%、25.96%、40.23%、43.72%，而空白對(duì)照僅下降了4.63%，表明復(fù)配保濕劑具有保濕、修護(hù)皮膚屏障效果顯著。

圖4 人體使用后經(jīng)表皮失水值測(cè)試結(jié)果

圖5 人體使用后經(jīng)表皮失水率測(cè)試結(jié)果

4 結(jié)論

在配方的設(shè)計(jì)上，選擇了較具代表性的4種配方劑型，配方中盡可能排除其他具有保濕效果的成分，使得結(jié)果更可靠。護(hù)膚霜含水量高于其他3種劑型，這是因?yàn)樽o(hù)膚霜中含有較高含量的油脂，可提供一定封閉性，與甘油、透明質(zhì)酸鈉和泛醇復(fù)配保濕劑達(dá)到協(xié)同增效的效果。同理，護(hù)膚乳中也含有油脂，但添加量較護(hù)膚霜低，封閉性較護(hù)膚霜差，因此皮膚含水量低于護(hù)膚霜。護(hù)膚精華和護(hù)膚水均不含油脂，護(hù)膚精華中含有可成膜的水溶增稠劑卡波姆和黃原膠，可提供較小的封閉性，因此含水量高于無(wú)封閉性的護(hù)膚水。

將保濕劑甘油4%、透明質(zhì)酸鈉0.02%、泛醇0.5%復(fù)配應(yīng)用于護(hù)膚水、護(hù)膚精華、護(hù)膚乳、護(hù)膚霜中，通過(guò)3D表皮皮膚模型（Epikutis?）皮膚含水量測(cè)試、人體皮膚含水量測(cè)試、人體經(jīng)表皮失水值測(cè)試，結(jié)果表明，甘油、透明質(zhì)酸鈉和泛醇復(fù)配應(yīng)用于化妝中能顯著提升皮膚含水量，可達(dá)到保濕、修護(hù)皮膚屏障功效，與化妝中的油脂、成膜劑可協(xié)同增效提升保濕功效。