陳旭，盧靜靜，王涵馳，李延華

（1.武漢設(shè)計(jì)工程學(xué)院食品與生物科技學(xué)院，武漢 430205；2.浙江工商大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，杭州 310018）

山楂在我國有兩千多年食用和藥用歷史。山楂葉中富含黃酮、多酚及三萜類化合物等活性成分，具有預(yù)防心血管疾病、降糖、降脂、抗氧化、抑菌等功效。目前對山楂葉中活性物質(zhì)研究主要集中在黃酮類化合物提取、功能特性等，對多酚類物質(zhì)研究較少。

多酚類化合物廣泛存在于植物中，具有抗菌、消炎、抗癌、抗氧化等生理功能，近年研究表明，天然多酚還具有降血糖功效。Prathapan等研究發(fā)現(xiàn)木橘果肉多酚提取物可劑量依賴性抑制α-淀粉酶和α-葡糖苷酶活性，有效降低血糖，預(yù)防糖尿病[1]。目前，α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶合成抑制劑藥物，如阿卡波糖、二甲雙胍等是糖尿病患者常用藥物，但對人體有副作用，尋找天然降血糖物質(zhì)成為研究重點(diǎn)，具有降糖活性的山楂葉多酚高效制備受到學(xué)界關(guān)注。

多酚傳統(tǒng)提取方法主要為有機(jī)溶劑、索氏提取法等。劉繼攀等采用水溶劑提取真姬菇多酚，提取4 h時(shí)，多酚得率最高[2]。多酚具有一定抗氧化能力，但這類方法耗時(shí)長、效率低、提取物活性低。近年來，在溶劑提取基礎(chǔ)上輔以微波和超聲等現(xiàn)代技術(shù)，可有效提高多酚提取率并保護(hù)其生物活性。楊立風(fēng)等采用微波輔助提取黑枸杞多酚，結(jié)果顯示，微波時(shí)間6 s時(shí)，多酚提取得率可達(dá)（3.58±0.07）%，對DPPH自由基清除率可達(dá)（85.76±1.40）%[3]。郝霄鵬研究指出，微波輔助提取效率高，可有效保護(hù)活性成分[4]。李映新等優(yōu)化超聲波輔助提取黑老虎果皮多酚工藝條件，超聲提取50 min，總多酚得率為（2.03±0.04）%，且該多酚對DPPH和ABTS+自由基清除率均在90%以上[5]。D'Alessandro等研究發(fā)現(xiàn)，相同條件下，超聲波提取野櫻莓多酚提取率顯著高于未使用超聲波[6]?？梢?，微波和超聲處理可有效促進(jìn)多酚物質(zhì)溶出，提高多酚提取效率，較好保持其生物活性。

本研究將兩種提取方法相結(jié)合，以山楂葉為原料，采用微波預(yù)處理和超聲波輔助提取法，探討乙醇濃度、超聲溫度、超聲時(shí)間、液料比對山楂葉多酚得率的影響，通過Box-Behnken優(yōu)化山楂葉多酚提取工藝，在此基礎(chǔ)上檢測多酚對α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制效果，測定小鼠血糖、胰島素含量、臟器指數(shù)和相關(guān)代謝酶等指標(biāo)探討其降糖作用。研究可為山楂葉多酚高效制備及降糖功能性食品、低糖食品添加劑開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

山楂葉，購自山東臨沂愛康藥業(yè)有限公司；沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品、無水乙醇、福林酚、NKA-9大孔樹脂、α-淀粉酶（活力≥250 U·mg-1）、α-葡萄糖苷酶（活力≥50U·mg-1Protein），購自武漢華玖醫(yī)藥科技有限公司；鏈脲佐菌素（STZ），購自北京索萊寶生物工程有限公司；鹽酸二甲雙胍緩釋片，購自山東司邦得制藥有限公司；葡萄糖（YX-CB500）、胰島素（KLC9037）、糖原（BC0345）、糖化血紅蛋白（YB-E12235）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（C009-1）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（C010-1）測定試劑盒，購自南京建成生物技術(shù)有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為昆明小鼠，體重（20±2）g，標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境下喂養(yǎng)1周，試驗(yàn)過程中對小鼠所有處置均按《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》規(guī)定執(zhí)行。

1.3 試驗(yàn)設(shè)備

HHA-4數(shù)顯恒溫水浴鍋，購自杭州聚同電子有限公司；TU-1810紫外可見分光光度計(jì)，購自北京普析通用儀器有限公司；ES120A電子天平，購自廈門萊斯德科學(xué)儀器有限公司；R206B旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，購自上海旦鼎國際貿(mào)易有限公司；G80F23CN3L-Q6（P0）型微波爐，購自廣東格蘭仕微波爐電器制造有限公司；NYUC-150NP型數(shù)控超聲波清洗器，購自無錫諾源儀器設(shè)備有限公司；WD2102型自動(dòng)酶標(biāo)儀，購自北京市六一儀器廠。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 山楂葉微波預(yù)處理

山楂葉，60℃干燥24 h，粉碎，過50目篩。取山楂葉粉，加入5倍石油醚，室溫?cái)嚢?4 h，脫脂處理，烘干備用[7]。精確稱取脫脂后山楂葉粉2 g放入直徑90 mm培養(yǎng)皿中，加入蒸餾水，使之均勻潤濕，靜置一段時(shí)間，將充分潤濕山楂葉粉放入微波爐，在微波功率為350 W條件下，微波90 s預(yù)處理，收集預(yù)處理后樣品，備用[8]。

1.4.2 山楂葉多酚超聲輔助提取工藝研究

1.4.2.1單因素試驗(yàn)

以多酚得率為測定指標(biāo)，分別研究乙醇濃度（40%、50%、60%、70%、80%）、液料比（30∶1、40∶1、50∶1、60∶1、70∶1（mL·g-1））、超聲溫度（50、55、60、65、70℃）和超聲時(shí)間（10、15、20、25、30 min）對山楂葉多酚得率的影響。

1.4.2.2響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)

根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)[9]，因素水平設(shè)計(jì)見表1。

表1 響應(yīng)面試驗(yàn)因素與水平Table 1 Response surface test factors and levels

1.4.2.3多酚得率測定

以沒食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品，采用Folin-Ciocalteu比色法(FC法)測定多酚含量[10]。

標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為Y=0.133X+0.035，R2=0.9985，線性關(guān)系良好。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算多酚濃度，計(jì)算公式如下：

式中，Y為山楂葉提取液多酚得率（%）；C為測定液多酚質(zhì)量濃度（mg·mL-1）；N為稀釋倍數(shù)；V為提取液體積（mL）；W為山楂葉干粉末質(zhì)量（g）。

1.4.3 山楂葉多酚純化處理

參照文獻(xiàn)[11]方法，利用NKA-9大孔樹脂純化山楂葉多酚，上樣液濃度為2 mg·mL-1，pH為5.0，體積為350 mL，進(jìn)樣流速為1 mL·min-1，充分吸附，采用120 mL 70%乙醇以1 mL·min-1速度動(dòng)態(tài)洗脫，冷藏備用純化后山楂葉多酚。

1.4.4 山楂葉多酚體外降糖效果

1.4.4.1山楂葉多酚對α-葡萄糖苷酶抑制作用

參照文獻(xiàn)[12]方法，以α-葡萄糖苷酶抑制率為指標(biāo)，阿卡波糖為對照，在波長為400 nm處檢測，明確山楂葉多酚對α-葡萄糖苷酶抑制效果。

按如下公式計(jì)算：

式中，A0為空白吸光值；A1為樣品吸光值；A2為樣品背景吸光值。

1.4.4.2山楂葉多酚對α-淀粉酶抑制作用

參照文獻(xiàn)[13]方法，以α-淀粉酶抑制率為指標(biāo)，阿卡波糖為對照，在波長為540 nm處檢測，研究山楂葉多酚對α-淀粉酶抑制效果。

式中，A0為空白吸光度值，A1為樣品吸光度值；A2為對照吸光度值。

1.4.5 山楂葉多酚體內(nèi)降糖效果

1.4.5.1糖尿病小鼠模型的建立、分組與給藥

取部分小鼠禁食12 h后，一次性腹腔注射STZ（320 mg·kg-1），72 h后，檢測血糖，選取血糖濃度＞11 mmol·L-1小鼠為合格糖尿病模型[14]。

取健康小鼠10只為正常對照組（Con），另取糖尿病小鼠60只分為模型組（Mod）、二甲雙胍（60 mg·kg-1）對照組（Met）、山楂葉多酚600（H）、400（M）、200（L）mg·kg-1劑量組，每組10只；灌胃給藥，1次·d-1，連續(xù)4周，給藥期間檢測相關(guān)指標(biāo)。

1.4.5.2指標(biāo)測定

給藥期間，分別于第0、4、8、12、16、20、24、28天，小鼠禁食12 h，眼眶靜脈取血，測定血糖含量；給藥第28天，一次性灌胃葡萄糖2 g·kg-1，尾靜脈取血測定0、0.5、1、2 h血糖含量；解剖小鼠稱取適量肝臟、胰腺，檢測肝糖原含量、肝臟及胰腺指數(shù)；按照試劑盒說明書，分別測定小鼠血清胰島素水平、糖化血紅蛋白含量、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）活性。

1.5 數(shù)據(jù)處理與分析

采用SPSS 23.0、Excel 2020和Design-Expert 8.0.6軟件分析數(shù)據(jù)，通過ANOVA判定（Tukey′s檢驗(yàn)）不同組間差異顯著，通過t檢驗(yàn)判定兩組間顯著性差異，P＜0.05為顯著性差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 山楂葉多酚提取工藝研究

2.1.1 各單因素對山楂葉多酚得率的影響

由圖1a可知，在40%~60%范圍內(nèi)，山楂葉多酚得率隨乙醇濃度增加而增大，當(dāng)乙醇濃度為60%時(shí)，多酚溶出量達(dá)高峰，多酚得率最高為0.63%，當(dāng)乙醇濃度＞60%，多酚得率逐漸下降。

液料比對山楂葉多酚得率影響如圖1b所示，山楂葉多酚得率隨液料比增加呈先增后減趨勢，當(dāng)液料比為50∶1時(shí)，多酚得率高達(dá)0.65%，繼續(xù)增大液料比山楂葉多酚得率下降。

由圖1c可知，溫度升高，山楂葉多酚得率增加，超聲溫度55℃時(shí)，多酚得率最高，溫度繼續(xù)升高多酚得率反而下降。

超聲時(shí)間對山楂葉多酚得率影響如圖1d所示，隨超聲時(shí)間增加，山楂葉多酚得率先增后減，超聲20 min時(shí)，多酚得率最高為0.68%，繼續(xù)增加超聲時(shí)間多酚得率下降。

圖1 各因素對山楂葉多酚得率的影響Fig.1 Effects of various factors on the yield of polyphenols from Hawthorn Leaves

2.1.2 響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)結(jié)果

2.1.2.1 Box-Behnken試驗(yàn)回歸模型的建立及方差分析

選擇乙醇濃度（A）、液料比（B）、超聲時(shí)間（C）、超聲溫度（D）為自變量，山楂葉多酚得率為響應(yīng)值，利用Box-Bohnken法優(yōu)化提取試驗(yàn)。Box-Behnken試驗(yàn)結(jié)果見表2，方差分析見表3。

表2 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果Table 2 Response surface test results

對表2中數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析，得到二次回歸模型如下：

多酚得率=0.64-4.167×10-3A+1.667×10-3B+0.072C+0.085D-0.095AB+5×10-3AC-0.063AD-0.080BC-0.030BD+0.032CD-0.012A2-0.018B2-0.089C2-0.18D2

由表3可知，模型P＜0.0001，多酚得率與各自變量之間回歸關(guān)系極顯著，失擬項(xiàng)P=0.8335＞0.05，不顯著，說明該試驗(yàn)數(shù)據(jù)和模型符合度高，試驗(yàn)可靠?；貧w模型下，C、D、AB、AD、BC、BD、CD、A2、B2、C2、D2達(dá) 到差 異 極 顯 著 水 平（P＜0.01），A、B、AC差異不顯著（P＞0.05）。R2=0.9975，R2adj=0.9951，兩系數(shù)較接近，說明得率理論值與實(shí)際值擬合良好。由F值可知，各因素對山楂葉多酚得率影響順序?yàn)镈（超聲溫度）＞C（超聲時(shí)間）＞A（乙醇濃度）＞B（液料比）。

表3 Box-Behnken試驗(yàn)方差分析Table 3 Variance analysis of Box-Behnken test

2.1.2.2響應(yīng)面試驗(yàn)中交互項(xiàng)作用

由圖2可知，乙醇濃度與液料比等高線呈馬鞍形，乙醇濃度與超聲時(shí)間、乙醇濃度與超聲溫度、液料比與超聲時(shí)間、超聲時(shí)間與超聲溫度等高線圖呈橢圓形，說明4個(gè)因素兩兩間交互作用顯著，其中超聲時(shí)間與超聲溫度曲面圖坡度最陡，說明二者之間交互作用對山楂葉多酚得率影響顯著。

圖2 各因素交互對山楂葉多酚得率影響的響應(yīng)面及等高線圖Fig.2 Response surface of interaction of various factors on polyphenols yield of hawthorn leaves

2.1.2.3提取工藝優(yōu)化

通過響應(yīng)面優(yōu)化得到多酚提取最佳條件為乙醇濃度70.18%、液料比40.55∶1（mL·g-1）、超聲時(shí)間24.98 min、超聲溫度56.39℃，多酚得率理論預(yù)測值為0.77%。為驗(yàn)證響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果，且便于實(shí)際操作，將條件調(diào)整為乙醇濃度70%、液料比40∶1（mL·g-1）、超聲時(shí)間25 min、超聲溫度56℃，3次平行試驗(yàn)得到山楂葉多酚得率平均值為0.75%，結(jié)果與預(yù)測值接近，具有一定實(shí)用價(jià)值。

2.2 山楂葉多酚體外降糖研究

2.2.1 山楂多酚對α-淀粉酶活性的影響

由圖3可知，隨山楂葉多酚濃度增加，其對α-淀粉酶抑制作用逐漸增強(qiáng)，山楂葉多酚IC50為1.05 mg·mL-1，低于阿卡波糖1.33 mg·mL-1，在濃度為4.5 mg·mL-1時(shí)，山楂葉多酚對α-淀粉酶抑制率可達(dá)88.5%。尹國利等研究表明，苦丁茶多酚對α-淀粉酶抑制IC50值為1.31 mg·mL-1[15]，本研究制備的山楂葉多酚對α-淀粉酶抑制效果與其研究結(jié)果相近，說明山楂葉多酚可有效抑制α-淀粉酶活性，可作為較強(qiáng)α-淀粉酶活性抑制劑。

圖3 山楂葉多酚對α-淀粉酶抑制作用Fig.3 Inhibitory effect of hawthorn leaf polyphenols on α-amylase

2.2.2 山楂多酚對α-葡萄糖苷酶活性的影響

由圖4可知，山楂葉多酚濃度增加，其對α-葡萄糖苷酶抑制率也增大，山楂葉多酚IC50為1.89 mg·mL-1，低于阿卡波糖2.01 mg·mL-1，在濃度為4.5 mg·mL-1時(shí)，抑制率可達(dá)82.8%。尹國利等研究結(jié)果顯示，苦丁茶多酚對α-葡萄糖苷酶抑制IC50為1.15 mg·mL-1[15]；林寶妹等研究表明，嘉寶果葉片多酚提取物對α-葡萄糖苷酶抑制IC50值小于阿卡波糖[16]，本研究制備山楂葉多酚對α-葡萄糖苷酶抑制效果與上述研究結(jié)果相近。說明山楂葉多酚可作為較好α-葡萄糖苷酶活性抑制劑。

圖4 山楂葉多酚對α-葡萄糖苷酶抑制作用Fig.4 Inhibitory effect of hawthorn leaf polyphenols on α-glucosidase

2.3 山楂葉多酚體內(nèi)降糖研究

2.3.1 山楂葉多酚對糖尿病小鼠血糖值的影響

由圖5可知，第0天時(shí)，與正常組相比，模型組小鼠FBG顯著增加（P＜0.05），此時(shí)糖尿病小鼠FBG大于11.1 mmol·L-1，表明造模成功。

圖5 山楂葉多酚對糖尿病小鼠血糖值的影響Fig.5 Effects of hawthorn leaf polyphenols on blood glucose level in diabetic mice

喂養(yǎng)過程中，正常組和模型組FBG均無明顯變化，而對照組和山楂葉多酚各劑量組FBG逐漸下降，高劑量組與對照組下降幅度最大，且在第4天后高劑量組FBG低于對照組，說明山楂葉多酚各劑量組對糖尿病小鼠有降低空腹血糖值作用，高劑量組作用更為顯著。

2.3.2 山楂葉多酚對糖尿病小鼠糖耐量的影響

由圖6a可知，口服葡萄糖溶液后，小鼠血糖值呈先升后降趨勢，在30 min時(shí)，各組血糖達(dá)到峰值，其中糖尿病小鼠組血糖升高明顯，均高于18 mmol·L-1，正常組血糖升高不明顯，在10 mmol·L-1以下。隨時(shí)間延長，各組血糖迅速下降，120 min時(shí)，高劑量組和對照組血糖值與正常組最接近，中劑量組比正常組稍高，而低劑量組和模型組仍高于15 mmol·L-1?？梢?，高劑量山楂葉多酚對改善糖尿病小鼠糖耐量效果最顯著，中劑量稍差，低劑量作用不明顯。

由葡萄糖曲線下面積AUC圖6b可知，對照組和各劑量組均可一定程度降低AUC，高劑量和對照組降低最為顯著（P＜0.01），與正常組接近，且顯著低于模型組，而低劑量組降低程度最小，AUC與模型組接近，說明山楂葉多酚能夠提高糖尿病小鼠的葡萄糖耐受能力，高劑量組能力更強(qiáng)。

圖6 山楂葉多酚對糖尿病小鼠糖耐量的影響Fig.6 Effects of hawthorn leaf polyphenols on glucose tolerance in diabetic mice

2.3.3山楂葉多酚對糖尿病小鼠血清胰島素水平的影響

由圖7a可知，模型組血清胰島素含量（8.22 mIU·L-1）比正常組（4.95 mIU·L-1）高，且差異顯著（P＜0.01），與模型組相比較，給藥組均明顯降低（P＜0.01），且高劑量組與對照組接近，可有效降低小鼠血清胰島素水平。

由圖7b、7c可知，與正常對照組比較，模型組HOMA-IR明顯升高（P＜0.01），HOMA-IS明顯降低（P＜0.01），說明胰島素抵抗升高，受體敏感性降低。給藥劑量組均可降低HOMA-IR，增加HOMAIS，且高劑量組效果最顯著。因此，山楂葉多酚可有效降低小鼠血清胰島素水平，緩解胰島素抵抗，且呈劑量依賴性。

圖7 山楂葉多酚對糖尿病小鼠血清胰島素水平的影響Fig.7 Effects of hawthorn leaf polyphenols on serum insulin level in diabetic mice

2.3.4 山楂葉多酚對糖尿病小鼠血清糖化血紅蛋白的影響

由圖8可知，模型組小鼠血清糖化血紅蛋白（GHb）與正常組小鼠相比顯著升高（P＜0.01），GHb結(jié)果與空腹血糖結(jié)果一致。對照組和山楂葉多酚各劑量組血清GHb比模型組小鼠明顯降低（P＜0.01），且給藥組隨用藥劑量增加，血清GHb值逐漸下降，高劑量組與對照組更接近正常水平。說明高劑量山楂葉多酚有效改善糖尿病小鼠持續(xù)高血糖狀態(tài)。

圖8 山楂葉多酚對糖尿病小鼠血清糖化血紅蛋白的影響Fig.8 Effects of hawthorn leaf polyphenols on serum glycosylated hemoglobin in diabetic mice

2.3.5 山楂葉多酚對糖尿病小鼠肝糖原含量的影響

如圖9所示，與正常組（15.28 mg·g-1）比較，模型組（14.85 mg·g-1）肝糖原含量下降，但差異不顯著。對照組和山楂葉多酚各劑量組均可提高小鼠肝糖原含量，且高劑量組肝糖原含量與模型組相比升高顯著(P＜0.01)。由此可知山楂葉多酚能提高體內(nèi)肝糖原含量，降低血糖。

圖9 山楂葉多酚對糖尿病小鼠肝糖原含量的影響Fig.9 Effects of hawthorn leaf polyphenols on liver glycogen content in diabetic mice

2.3.6 山楂葉多酚對糖尿病小鼠肝臟、胰腺指數(shù)的影響

由圖10a可知，與正常組相比，模型組小鼠肝臟指數(shù)上升顯著（P＜0.01），與模型組相比，山楂葉多酚低、中劑量組及對照組小鼠肝臟指數(shù)顯著降低（P＜0.01），說明山楂葉多酚可緩解糖尿病小鼠肝臟病變損傷。

圖10b顯示，較正常組比較，模型組小鼠胰腺指數(shù)顯著降低（P＜0.01），與模型組相比，對照組和山楂葉多酚各劑量組小鼠的胰腺指數(shù)顯著升高（P＜0.01），與對照組相比，山楂葉多酚低劑量組差異明顯，說明山楂葉多酚可降低小鼠胰腺病變。

圖10 山楂葉多酚對糖尿病小鼠肝臟、胰腺指數(shù)的影響Fig.10 Effects of hawthorn leaf polyphenols on liver and pancreatic index of diabetic mice

2.3.7 山楂葉多酚對糖尿病小鼠血清ALT和AST含量的影響

圖11可知，模型組ALT和AST活性較正常組明顯增強(qiáng)（P＜0.01），與模型組相比，給藥組活性均降低，且高劑量組ALT和AST活性下降更明顯（P＜0.01），活性與正常組接近，說明其對肝細(xì)胞保護(hù)效果最佳，由此可見，山楂葉多酚有效抑制肝細(xì)胞中ALT和AST釋放，有助于修復(fù)糖尿病小鼠受損肝細(xì)胞，對糖尿病小鼠肝臟具有良好保護(hù)作用。

圖11 山楂葉多酚對糖尿病小鼠血清ALT和AST含量的影響Fig.11 Effects of hawthorn leaf polyphenols on serum ALT and AST levels in diabetic mice

4 討論與結(jié)論

微波、超聲輔助提取均具有時(shí)間短、效率高以及提取物生物活性高的特點(diǎn)。陳旭等研究僅采用超聲輔助提取山楂葉多酚，得率為0.65%[17]，本研究結(jié)合二者優(yōu)點(diǎn)，采用微波-超聲聯(lián)合輔助提取山楂葉多酚，得率增加至0.75%，且提取多酚降糖活性與已往結(jié)果相近[17]，說明本研究提取方法可保護(hù)其活性，提高多酚提取效率。

影響多酚得率主要因素是乙醇濃度、液料比、超聲溫度和超聲時(shí)間，山楂葉多酚得率隨各因素增大呈相似變化趨勢，即先增后減，因?yàn)槎喾优c乙醇水體系極性相近，當(dāng)乙醇濃度增加、液料比增大、超聲時(shí)間延長時(shí)，山楂葉與乙醇充分接觸，山楂葉多酚溶解度增大使得山楂葉多酚溶出量增加；同時(shí)超聲溫度升高，多酚分子運(yùn)動(dòng)速度加快，加速多酚溶出，直至多酚溶出量達(dá)到飽和；然而，當(dāng)進(jìn)一步增加乙醇濃度、液料比、延長超聲時(shí)間時(shí)，其他醇溶雜質(zhì)溶出量隨之增加，且溫度過高加劇多酚氧化而破壞其結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致多酚得率下降。該結(jié)論與劉永等和許玲玉等研究結(jié)論一致[18-19]。

糖尿病是一種常見代謝性疾病，發(fā)病率逐年增加，主要表現(xiàn)為血糖升高。碳水化合物進(jìn)入機(jī)體后，在α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶作用下水解為葡萄糖，導(dǎo)致血糖升高，因此，抑制這兩種酶的活性，可降低葡萄糖進(jìn)入血液速率。本文通過測定優(yōu)化工藝后提取的山楂葉多酚對α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶抑制率，評價(jià)其體外降糖活性，結(jié)果顯示其對兩種酶抑制作用隨山楂葉多酚濃度增加逐漸增強(qiáng)，且稍高于阿卡波糖，在其濃度為4.5 mg·mL-1時(shí)，對α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶抑制率分別為88.5%和82.8%，該結(jié)論與尹國利和林寶姝研究結(jié)果相近[15-16]，說明提取的山楂葉多酚有較強(qiáng)體外降糖作用；為進(jìn)一步驗(yàn)證山楂葉多酚降糖效果，進(jìn)行小鼠體內(nèi)試驗(yàn)，結(jié)果顯示山楂葉多酚有效降低糖尿病小鼠空腹血糖、血清胰島素水平、GHb含量、肝臟指數(shù)及ALT和AST活性，提高小鼠肝糖原含量、胰腺指數(shù)，呈劑量依賴，且高劑量山楂葉多酚組能力更強(qiáng)，說明山楂葉多酚具有較好體內(nèi)降糖活性，與趙夢雅等研究結(jié)果相近[14]。

本研究通過響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化微波-超聲提取山楂葉多酚，乙醇濃度70%、液料比40∶1（mL·g-1）、超聲時(shí)間25 min、超聲溫度56℃時(shí)，山楂葉多酚得率為0.75%；體外試驗(yàn)結(jié)果顯示，山楂葉多酚體外對α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶具有較強(qiáng)抑制作用；體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果表明，山楂葉多酚具有較好體內(nèi)降糖能力，且高劑量時(shí)降糖效果更佳。