張慧敏，李朝一，劉詩(shī)語(yǔ)，趙麗霞，李麗娟

（晉中信息學(xué)院，山西 太谷 030800）

0 引言

金合歡素不但具有解郁安神、理氣通絡(luò)的作用，還具有抗氧化、消炎、抗菌、抗病毒、抗腫瘤等作用[1]。酒精性脂肪肝是由肝臟負(fù)責(zé)代謝的，超過(guò)90%的酒精會(huì)在肝內(nèi)被分解，使肝細(xì)胞膜內(nèi)的脂質(zhì)被氧化，從而損害肝細(xì)胞的膜，從而影響到脂肪酸的分解和代謝[2]。本次課題研究實(shí)驗(yàn)將小鼠分為3組，分別為對(duì)照組、酒精組和金合歡素組。通過(guò)構(gòu)建金合歡素模型，用酒精溶液對(duì)小鼠進(jìn)行干預(yù)，在無(wú)菌環(huán)境下取出小鼠肝臟進(jìn)行肉眼觀察及顯微鏡鏡下觀察。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中觀察小鼠的身體狀況的變化。經(jīng)解剖對(duì)小鼠的肝臟進(jìn)行病理分析，觀察小鼠肝臟是否有病變等特征，分析血清ALT及AST，探討金合歡素對(duì)小鼠酒精性脂肪肝的影響。結(jié)果表明酒精干預(yù)組的小鼠體重明顯下降，肝臟表面出現(xiàn)大小不等的白色空泡，有明顯的出血點(diǎn)，顏色變?yōu)榘导t色，且質(zhì)地變?cè)闫伞ｇR下觀察可見(jiàn)酒精干預(yù)組小鼠的細(xì)胞核分布較分散，且邊緣模糊，無(wú)明顯界限。而金合歡素藥治組的小鼠體重?zé)o明顯變化，肝臟表面顏色為鮮紅色，并且光澤透亮。鏡下觀察其細(xì)胞核分布密集且輪廓清晰，界限明顯。與對(duì)照組比較，酒精組和金合歡素組血清AST、ALT的差異性較顯著，與酒精組比較，金合歡素組的指標(biāo)明顯降低。在對(duì)小鼠灌胃金合歡素溶液后，小鼠的酒精性脂肪肝病變癥狀顯著減輕，揭示了金合歡素抗腫瘤的一種機(jī)制，在治療酒精性脂肪肝疾病方面有良好的應(yīng)用價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 溶液的配置

以PEG∶蒸餾水=0.05 g∶100 mL的比例，用蒸餾水將PEG顆粒溶解；

取金合歡素最大溶解度為60 mg/kg，用被溶解后的PEG溶液將其分化，然后加入蒸餾水稀釋；

將濃度為100%的酒精以酒精∶蒸餾水=60∶40的比例配置成濃度為60%的酒精。

1.2 用藥方式

取ICR級(jí)健康雌鼠15只，體重為18～22 g，將其分為3組，1組5只。分組后各組小鼠的體重?zé)o明顯差異。第1組小鼠為空白對(duì)照組，單獨(dú)連續(xù)灌胃PEG溶液7 d；第2組小鼠連續(xù)灌胃PEG溶液6 d，第7天對(duì)其灌胃濃度為60%的酒精溶液；第3組小鼠先灌胃金合歡素溶液及PEG溶液6 d，造模成功后第7天進(jìn)行酒精溶液灌胃；隨后對(duì)所有實(shí)驗(yàn)所用小鼠進(jìn)行稱重，與第1次所稱體重進(jìn)行對(duì)比并將小鼠脫頸處死，取出小鼠的肝臟，并做出切片，在顯微鏡下觀察其肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)的變化。

表1 藥物注射情況

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處置、標(biāo)本采集

實(shí)驗(yàn)所用小鼠均采用頸椎脫臼法將其處死，碘伏液消毒腹部切口，打開(kāi)腹腔，取出肝臟。將肝臟進(jìn)行脫水，石蠟包埋，切片，HE染色，封片后，在顯微鏡下觀察其病理變化。

2 結(jié)果

2.1 一般形態(tài)觀察

肉眼可見(jiàn)正常肝臟及建模后的肝臟顏色鮮紅，表面光澤透亮；而病變的肝臟表面有大小不等的白色空泡，質(zhì)地變?cè)闫?，顏色變?yōu)榘导t色，見(jiàn)圖1。

圖1 病理解剖肝臟

2.2 體重

第1組小鼠體重前后無(wú)明顯變化；而第2組小鼠體重明顯降低，差異性較大；第3組小鼠體重差異衛(wèi)浴第1組和第2組之間，差異性較小，見(jiàn)表2、圖2。

表2 小鼠體重 單位：g

圖2

2.3 鏡下觀察

用HE染色方法對(duì)切片進(jìn)行染色，然后在顯微鏡下觀察肝細(xì)胞。第一張圖片可觀察到肝小葉橫斷面呈不規(guī)則多邊形，其中央有一條縱貫長(zhǎng)軸的中央靜脈，其外周是放射狀相間排列的肝板和肝血竇，細(xì)胞核分布較密集，界限明顯，輪廓清晰。而第二張病變組圖片中，其細(xì)胞核分布較分散，細(xì)胞核邊緣模糊，無(wú)明顯界限。經(jīng)治療后可見(jiàn)第三張圖中細(xì)胞核界限依舊分布密集且邊緣清晰，可見(jiàn)明顯的界限，見(jiàn)圖3。

3 討論與結(jié)論

個(gè)別小鼠在灌胃酒精進(jìn)行干擾之前有食欲不振情況，可被認(rèn)為是灌胃過(guò)程對(duì)其食道產(chǎn)生影響。從而影響小鼠正常進(jìn)食，因此會(huì)導(dǎo)致其體重下降。

酒精對(duì)肝細(xì)胞的毒性主要是通過(guò)影響肝臟的代謝，使肝細(xì)胞膜表面的脂質(zhì)成分過(guò)度氧化，從而破壞了肝細(xì)胞膜[3]。肝細(xì)胞腫脹，壞死，對(duì)脂肪酸的分解和代謝發(fā)生障礙，引起肝內(nèi)脂肪沉積，形成脂肪肝。90%以上的乙醇都在肝內(nèi)分解代謝[4]。

本實(shí)驗(yàn)在建立金合歡素的模型后，用酒精對(duì)其進(jìn)行干預(yù)，在無(wú)菌環(huán)境下取出小鼠肝臟進(jìn)行肉眼觀察以及顯微鏡下觀察，探討金合歡素對(duì)小鼠酒精性脂肪肝的影響。