蔣逸婷 鄭巧靈 楊映紅 馮昌銀 陳瑚 林琳

乳腺癌是全世界女性最為普遍的惡性腫瘤之一，最近幾年時(shí)間以來(lái)患病比例逐步增加并且表現(xiàn)年輕化的發(fā)展趨勢(shì)[1]。依據(jù)乳腺癌遺傳分子基因生物表達(dá)譜，就能夠劃分為幾大類重要的乳腺癌亞型，最具備特點(diǎn)性的被叫做管腔A型、管腔B型、HER2過(guò)表達(dá)型和三陰性乳腺癌。即使伴隨著醫(yī)療綜合應(yīng)用水平的持續(xù)提升，乳腺癌的治療獲得了非常大的發(fā)展進(jìn)度，但是由于其異質(zhì)性強(qiáng)，預(yù)后及生存差異很大。鑒于此，臨床上要更加關(guān)注于乳腺癌的發(fā)生和進(jìn)展機(jī)制，了解乳腺癌病變的發(fā)生發(fā)展情況，研究腫瘤的發(fā)展過(guò)程和影響因素，通過(guò)分析生物學(xué)行為，為治療方案的制定尋找并確定全新的靶點(diǎn)，這也可以為乳腺癌的早期診斷、治療和預(yù)后提供豐富并且堅(jiān)實(shí)可靠的基本概念原理。B慢性淋巴生物細(xì)胞白血病/淋巴瘤11A遺傳物質(zhì)基因是BCL家族的組員，位于人類2P 16.1染色體，在惡性實(shí)體腫瘤中存在異常表達(dá)，與多種腫瘤的發(fā)生有關(guān)[2-3]。本次深入研究分析經(jīng)過(guò)檢測(cè)BCL 11A遺傳物質(zhì)基因在乳腺癌病例中的基因傳達(dá)實(shí)際狀況，全面研究和探索討論BCL 11A遺傳分子基因生物表達(dá)和乳腺癌產(chǎn)生發(fā)展相互之間已有的內(nèi)部相互聯(lián)系，為乳腺癌的產(chǎn)生機(jī)理供應(yīng)一些可能的理論參考依據(jù)，為乳腺癌的靶向治療供應(yīng)新發(fā)展思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料

病例納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）2013年1月—2020年12月于福建省醫(yī)科大學(xué)附屬協(xié)和醫(yī)院手術(shù)治療的乳腺癌患者；（2）研究中歸類于的所有患者均經(jīng)病理學(xué)檢測(cè)，且均已經(jīng)證實(shí)為乳腺癌；（3）術(shù)前所有患者均未接受任何治療；（4）研究中的所有患者均有完整的臨床及隨訪資料；（5）本次研究無(wú)論是病例納入還是研究方法均通過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，符合醫(yī)學(xué)研究的倫理要求。全面去除參考標(biāo)準(zhǔn)：（1）復(fù)發(fā)性乳腺癌；（2）術(shù)前接受了治療的患者。收集乳腺癌的組織122例，其對(duì)應(yīng)的癌旁組織中隨機(jī)抽取29例?；颊呔鶠榕?；年齡29～83歲，中位年齡48歲。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

（1）實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-qPCR）。實(shí)驗(yàn)材料：BCL 11A引物、GAPDH 引物都是購(gòu)買(mǎi)于上海生工生物有限公司，RT-PCR逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、Real time qPCR試劑盒均購(gòu)自美國(guó)Promega公司，BCL 11A鼠抗人單克隆Ig抗體購(gòu)自美國(guó)Abcam公司。

隨機(jī)選取所收集病例中的44例乳腺癌組織以及16例癌旁乳腺組織。查閱相關(guān)文獻(xiàn)獲得的引物序列[4]，由Promega公司GoTaq?提供qPCR Master Mix化學(xué)試劑盒，在檢測(cè)過(guò)程中嚴(yán)格按照試劑盒上的要求進(jìn)行操作，對(duì)乳腺癌組織及癌旁乳腺組織做實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)操作。最后可知3個(gè)復(fù)孔Ct數(shù)值相差均低于1個(gè)周期性循環(huán)，溶解處理曲線都表現(xiàn)出銳利對(duì)稱的單峰。

（2）免疫組織化學(xué)染色。收集病例中的乳腺癌的組織122例，癌旁乳腺組織29例所有展開(kāi)免疫組織化學(xué)染色，操作步驟按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3 觀察指標(biāo)

實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)中參照國(guó)外參考數(shù)據(jù)文獻(xiàn)，內(nèi)參遺傳分子基因選擇管家遺傳分子基因GAPDH，ΔCt= CtGAPDH平均數(shù)值-CtBCL11A平均數(shù)值，ΔΔCt=ΔCt實(shí)驗(yàn)組-ΔCt對(duì)照組。

陰性對(duì)照是PBS替代一抗，陽(yáng)性對(duì)比分析是預(yù)實(shí)驗(yàn)篩出的相互對(duì)應(yīng)陽(yáng)性生物組織，內(nèi)對(duì)照是切片里的癌旁導(dǎo)管上皮。BCL 11A分子有機(jī)蛋白陽(yáng)性生成物定位在乳腺癌細(xì)胞漿和細(xì)胞核，表現(xiàn)平均彌漫的棕黃色或者棕褐色的基因表達(dá)；癌旁生物組織中BCL 11A分子有機(jī)蛋白呈均勻分布的細(xì)胞膜棕黃色或者棕褐色的基因表達(dá)[5]，HER-2免疫生物組織化學(xué)染色結(jié)果判斷參考《乳腺癌HER2檢測(cè)指南（2019版）》[6]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

分析數(shù)據(jù)的軟件是SPSS 25.0，非正態(tài)分布所得計(jì)量資料的表示方法是[M（P25，P75）]，計(jì)數(shù)資料表示為n（%），用χ2檢驗(yàn)，多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)樣品比較用Kruskal-WallisH秩和檢測(cè)，P＜0.05是差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 BCL 11A mRNA在乳腺癌病例及癌旁中的遺傳表達(dá)

BCL 11A mRNA在4成分子分種類型的乳腺癌病例生物個(gè)體組織和癌旁中均有生物特征遺傳表達(dá)，參考表1和表2數(shù)據(jù)。

表1 BCL 11A mRNA在44例乳腺癌及16例正常乳腺組織中的相對(duì)表達(dá)量P值

表2 三陰性乳腺癌與其他4組組織的組間比較

2.2 BCL 11A mRNA與蛋白表達(dá)的關(guān)系

對(duì)44例乳腺癌16例癌旁生物組織展開(kāi)免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)，最終分析結(jié)果可知，參考表3數(shù)據(jù)，BCL 11A mRNA表達(dá)高者，其BCL 11A蛋白表達(dá)陽(yáng)性超過(guò)陰性者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表3 44例乳腺癌和16例癌旁組織BCL 11A mRNA與蛋白表達(dá)的關(guān)系

2.3 BCL 11A蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá)

BCL 11A分子蛋白在不同分子分型的乳腺癌里具有不同水平的生物表達(dá)，參考表4數(shù)據(jù)，在這其中結(jié)構(gòu)三陰性乳腺癌中BCL 11A分子蛋白的基因表達(dá)（41/67）顯著超過(guò)管腔A型（3/17）、管腔B型（3/18）和Her-2過(guò)表達(dá)（4/20）型乳腺癌，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表4 BCL 11A蛋白在122例乳腺癌組織中的表達(dá)

2.4 BCL 11A表達(dá)與臨床及病理學(xué)指標(biāo)的關(guān)系

BCL 11A蛋白在生物組織學(xué)Ⅲ級(jí)組織中的基因表達(dá)要顯著超過(guò)Ⅰ級(jí)和Ⅱ級(jí)，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.876、12.541，P＜0.05）。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的表達(dá)水平更高，ER陰性組、PR陰性組、Her-2陰性組的基因表達(dá)水平均明顯超過(guò)陽(yáng)性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。而年紀(jì)和腫瘤大小和BCL 11A分子有機(jī)蛋白的基因表達(dá)水平并沒(méi)有明顯的關(guān)聯(lián)性。參考表6數(shù)據(jù)。

表6 122例乳腺癌組織中BCL 11A 免疫組化表達(dá)與臨床及病理學(xué)指標(biāo)的關(guān)系（例）

3 討論

BCL 11A遺傳物質(zhì)基因處于人類2P 16.1遺傳染色體，最開(kāi)始從鼠類的白血病遺傳物質(zhì)基因中脫離出來(lái)[7-8]，主要調(diào)控胎兒型血紅蛋白向成人血紅蛋白轉(zhuǎn)換的過(guò)程，在淋巴造血系統(tǒng)腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著關(guān)鍵作用[9]。近年研究[10]發(fā)現(xiàn)BCL11A在惡性實(shí)體腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用，是一種轉(zhuǎn)錄因子輔助因子，可促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，并與患者的不良預(yù)后相關(guān)[11-12]。

BCL 11A對(duì)乳腺干生物細(xì)胞及祖生物細(xì)胞的分化和成長(zhǎng)發(fā)育發(fā)揮著關(guān)鍵的影響作用。在青春發(fā)展期，乳腺終端乳芽的帽生物細(xì)胞里具有BCL 11A的基因表達(dá)[13]。在成年乳腺成長(zhǎng)發(fā)育階段，懷孕最開(kāi)始階段其生物表達(dá)會(huì)明顯增高[14-15]。

乳腺癌參考依據(jù)其遺傳分子基因生物表達(dá)譜的不同能夠劃分為幾大類主要亞型，在這其中，最具備特點(diǎn)性的被叫做管腔A型、管腔B型、Her-2過(guò)表達(dá)型和三陰性型。上述亞型在遺傳分子基因生物表達(dá)方式、臨床特點(diǎn)、治療反應(yīng)和預(yù)后上都會(huì)有不同。而三陰性乳腺癌，其具備特點(diǎn)性的生物組織學(xué)轉(zhuǎn)變，包含生物組織學(xué)等級(jí)較高、腫瘤界限較清、實(shí)性的組成構(gòu)造、推擠性的邊緣和（或者）里心纖維組織化等。在這期間，三陰性乳腺癌的ER、PR、HER2都是表現(xiàn)出了陰性。

表5 BCL 11A蛋白在122例乳腺癌生物組織中的基因表達(dá)組間對(duì)比

本次應(yīng)用的生物標(biāo)本，是福爾馬林固定石蠟包埋（formalin fixed paraffin encapsulation，F(xiàn)FPE）生物標(biāo)本，RT-qPCR檢測(cè)結(jié)果和參考數(shù)據(jù)文獻(xiàn)公開(kāi)發(fā)布一致[16-17]。實(shí)驗(yàn)最終分析結(jié)果可知，BCL 11A mRNA在三陰性乳腺癌生物組織中的基因表達(dá)顯著超過(guò)管腔A型、管腔B型和Her-2過(guò)表達(dá)型乳腺癌以及癌旁生物組織，說(shuō)明其可能在推動(dòng)結(jié)構(gòu)三陰性乳腺癌的產(chǎn)生過(guò)程里參加了在這其中的某一個(gè)控制環(huán)節(jié)。Walid T. Khaled等[18]，探究分析了敲除BCL 11A遺傳物質(zhì)基因的小鼠乳腺癌病例模種類型，發(fā)現(xiàn)BCL 11A遺傳物質(zhì)基因的敲除對(duì)生物細(xì)胞活力具有直接性影響。

經(jīng)過(guò)逐漸的實(shí)驗(yàn)研究，Walid T.Khaled等[18]指出三陰性乳腺癌病例中，BCL 11A生物表達(dá)水平較高的機(jī)理可能是復(fù)制數(shù)目的畸變作用，經(jīng)過(guò)對(duì)乳腺癌病例數(shù)據(jù)信息展開(kāi)研究，3大約三分之一的三陰性乳腺癌都會(huì)有BCL 11A復(fù)制數(shù)目的增長(zhǎng)，和剩余患者對(duì)比，其生存比例非常差，并且其復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)化比例也相比較高[19]。

本次深入研究分析確定了乳腺癌里BCL 11A遺傳分子基因和蛋白水平的基因傳達(dá)之后，還與此同時(shí)研究分析了BCL 11A蛋白和乳腺癌的臨床病理學(xué)參考指標(biāo)的相互影響關(guān)系，結(jié)果提醒BCL 11A和乳腺癌的分化作用程度、侵襲轉(zhuǎn)化能力緊密相互聯(lián)系。三陰性乳腺癌為非常具有侵襲力的惡性腫瘤，預(yù)后差、生存比例低并且缺少展開(kāi)高效鑒別的生物標(biāo)記物[20]。BCL 11A會(huì)產(chǎn)生轉(zhuǎn)化。BCL11A能夠明顯向上自動(dòng)調(diào)整β-catenin，從而將Wnt/β-catenin信號(hào)通路激活，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，引起乳腺癌的侵襲與轉(zhuǎn)移，在腫瘤形成中發(fā)揮重要的作用[21-22]。

綜上所述，在三陰性乳腺癌病例中，轉(zhuǎn)錄影響因子BCL 11A的遺傳分子基因遺傳表達(dá)水平非常高，作為一個(gè)十分關(guān)鍵的調(diào)節(jié)控制影響因子，BCL 11A可能逐漸發(fā)展成為結(jié)構(gòu)三陰性乳腺癌靶向治療的全新的遺傳分子基因，遏制BCL 11A遺傳分子基因有可能逐漸發(fā)展成為新治療方向，為未來(lái)乳腺癌免疫治療標(biāo)準(zhǔn)制定提供了借鑒內(nèi)容，對(duì)完善乳腺癌患者的預(yù)后有深遠(yuǎn)的影響作用。