佘永紅 楊德泉 向 君

湘西土家族苗族自治州食品藥品檢驗(yàn)所，湖南 吉首 416000

天麻為蘭科植物天麻GastrodiaelataBI.的干燥塊莖，具有息風(fēng)止痙、平抑肝陽(yáng)、祛風(fēng)通絡(luò)的功能。用于治療小兒驚風(fēng)、癲癇抽搐、破傷風(fēng)、頭痛眩暈、手足不遂、肢體麻木、風(fēng)濕痹痛。明代《普濟(jì)方》[1]提出 “ 炙黃”“ 麩炒黃”和 “ 酒炙”等炮制方法。在臨床應(yīng)用中，炒天麻與人參、炒白術(shù)、炒白僵蠶等同用，如醒脾散用于治療小兒慢驚風(fēng)，吐瀉不止，脾困昏沉，默默不食；與石決明(醋煅)、炒白蒺藜、蟬蛻等同用，如天麻退翳散用于治療垂簾障，昏暗失明。天麻的現(xiàn)代炮制方法主要為潤(rùn)制和蒸制?！吨袊?guó)藥典》[2]2020 年版一部： “ 洗凈，潤(rùn)透或蒸軟，切薄片，干燥?！笔蛰d了天麻飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，麩炒天麻未收載。各省、市、自治區(qū)仍沿用歷代方法，主要有酒天麻、姜天麻、麩炒天麻、煨制天麻等，麩炒天麻是《湖南省中藥飲片炮制規(guī)范》[3]2010年版收載品種，但是質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)亟待提升。為了使麩炒天麻飲片質(zhì)量得到更有效地控制，本標(biāo)準(zhǔn)研究修訂了麩炒天麻的成品性狀、鑒別及含量測(cè)定，增訂了水分、總灰分、二氧化硫殘留量的檢查及浸出物測(cè)定，為保障臨床療效提供有效依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1260 高效液相色譜儀(含VWD 檢測(cè)器、YMC HPLC Column C18色譜柱、Rev.B.04.03色譜工作站)、AUW220D電子天平(島津)、ZOOMWO Water Environmental超純水機(jī)、KM5200D中文液晶超聲波清洗器(功率200W,40KHz)；DZTW電子調(diào)溫電熱套；XMTD-4000電熱恒溫水浴鍋；TDZ5-WS醫(yī)用離心機(jī)。

1.2 試藥 天麻素對(duì)照品(批號(hào)： 110807-202010，含量以95.5%計(jì))、對(duì)羥基苯甲醇對(duì)照品(批號(hào)： 111970-201702，含量以99.4%計(jì))、天麻對(duì)照藥材(批號(hào)： 120944-201611)均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。硅膠G板(德國(guó)默克公司)，甲醇、乙腈為色譜純；水為純凈水；其他試藥均為分析純。15批麩炒天麻由湖南省5家飲片生產(chǎn)企業(yè)，產(chǎn)地分別為四川、安徽、湖南、云南。

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀 通過(guò)考察15批麩炒天麻的性狀特征，標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定： 本品呈不規(guī)則的薄片。外表皮黃色至黃棕色，有時(shí)可見(jiàn)點(diǎn)狀排成的橫環(huán)紋。切面黃色至黃棕色。角質(zhì)樣，半透明，略有焦斑。有特異氣，味甘。如圖1所示。

天麻 麩炒天麻

2.2 薄層鑒別 照《中國(guó)藥典》2020年版一部升麻鑒別(2)方法，取本品粉末1 g，加甲醇 10 mL，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液濃縮至干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取天麻對(duì)照藥材1 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取天麻素對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法《中國(guó)藥典》2020年版四部通則0502試驗(yàn)，吸取供試品溶液和對(duì)照藥材溶液各10 μL，對(duì)照品溶液5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(2∶4∶2.5∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以對(duì)羥基苯甲醛溶液(取對(duì)羥基苯甲醛0.2 g，溶于乙醇 10 mL 中，加50%硫酸溶液 1 mL，混勻)，在120 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置日光下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。結(jié)果如圖2所示。

1 2 3 4 5 S1 S2

2.3 檢查

2.3.1 水分 照《中國(guó)藥典》2020年版四部通則0832第二法，測(cè)定15批麩炒天麻樣品的水分。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.3.2 總灰分 照《中國(guó)藥典》2020年版四部通則2302，測(cè)定15批麩炒天麻樣品的總灰分。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.3.3 二氧化硫殘留量 照《中國(guó)藥典》2020年版四部二氧化硫殘留量測(cè)定法通則2331測(cè)定。15批麩炒天麻的二氧化硫殘留量結(jié)果見(jiàn)表1。

2.4 浸出物 照《中國(guó)藥典》2020年版四部通則2201水溶性浸出物測(cè)定法項(xiàng)下的熱浸法，測(cè)定15批麩炒天麻飲片的浸出物。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 麩炒天麻水分、總灰分、二氧化硫殘留量、浸出物測(cè)定結(jié)果

2.5 含量測(cè)定

2.5.1 對(duì)照品溶液 取天麻素對(duì)照品，精密稱定①22.14 mg、②11.02 mg，分置50 mL、25 mL量瓶中，加乙腈-水(3∶97)混合溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得天麻素對(duì)照品儲(chǔ)備液(422.8740 μg/mL、420.9640 μg/mL)。另精密稱取對(duì)羥基苯甲醇對(duì)照品①22.98 mg、 ②11.42 mg分置50 mL、25 mL量瓶中，加乙腈-水(3∶97)混合溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)羥基苯甲醇對(duì)照品儲(chǔ)備液(456.8424 μg/mL、454.0592 μg/mL)。精密吸取天麻素對(duì)照品儲(chǔ)備液及對(duì)羥基苯甲醇對(duì)照品儲(chǔ)備液各2 mL及1 mL，加乙腈-水(3∶97)混合溶液依次稀釋成含天麻素42.28740 μg/mL、對(duì)羥基苯甲醇22.84212 μg/mL的混合對(duì)照品溶液Ⅰ及含天麻素42.09640 μg/mL、對(duì)羥基苯甲醇22.70296 μg/mL混合對(duì)照品溶液Π。

2.5.2 供試品溶液 取本品粉末(過(guò)三號(hào)篩)約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，稱定重量，超聲處理(功率120W，40KHz)30 min，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，精密量取濾液10 mL，濃縮至近干無(wú)醇味，殘?jiān)右译?水(3∶97)混合溶液溶解，轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，用乙腈-水(3∶97)混合溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

A.天麻素、對(duì)羥基苯甲醇混合對(duì)照品；B.麩炒天麻樣品圖3 樣品的HPLC色譜圖

2.5.3 色譜條件 色譜柱： YMC HPLC Column C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流動(dòng)相乙腈-0.05%磷酸溶液(3∶97)；流速1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm；柱溫30 ℃。理論板數(shù)按天麻素峰計(jì)算，不低于5000。

取混合對(duì)照品溶液Ⅰ、供試品溶液按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖(圖3)。結(jié)果表明，樣品中其他成分對(duì)天麻素、對(duì)羥基苯甲醇的測(cè)定無(wú)干擾。

2.5.4 線性關(guān)系考察 精密吸取濃度為422.8740 μg/mL的天麻素對(duì)照品儲(chǔ)備液10 mL及濃度為456.8424 μg/mL的對(duì)羥基苯甲醇對(duì)照品儲(chǔ)備液5 mL，置20 mL量瓶中，加乙腈-水(3∶97)混合溶液稀釋成含天麻素211.4370 μg/mL、對(duì)羥基苯甲醇114.2106 μg/mL的混合對(duì)照品儲(chǔ)備液，吸取上述混合對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，依次稀釋成天麻素濃度為2.6430 μg/mL、10.5718 μg/mL、21.1437 μg/mL、42.2874 μg/mL、63.4311 μg/mL、105.7185 μg/mL、211.4370 μg/mL及對(duì)羥基苯甲醇濃度為1.4276 μg/mL、5.7105 μg/mL、11.4211 μg/mL、22.8421 μg/mL、34.2632 μg/mL、57.1053 μg/mL、114.2106 μg/mL的混合對(duì)照品溶液，精密吸取上述混合對(duì)照品溶液各5 μL， 注入液相色譜儀，測(cè)定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，濃度(μg/mL )為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。天麻素回歸方程為：y=9.9956x-11.245，r=0.9999；對(duì)羥基苯甲醇回歸方程為：y=20.75x-11.314，r=0.9999。結(jié)果表明： 天麻素和對(duì)羥基苯甲醇對(duì)照品分別在2.6430～211.4370 μg/mL和1.4276～114.2106 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5.5 精密度試驗(yàn) 取同一麩炒天麻供試品溶液(批號(hào)2019102206)，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次5μL，記錄色譜峰面積，天麻素峰面積RSD為0.32%(n=6)，對(duì)羥基苯甲醇RSD為1.8%(n=6)，表明儀器精密度良好。

2.5.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一麩炒天麻供試品溶液(批號(hào)2019102206)，分別于配制后的0 h、6 h、9 h、12 h、24 h，精密吸取5 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，天麻素峰面積RSD為0.20%，對(duì)羥基苯甲醇峰面積RSD為0.81%，表明供試品溶液在配制后24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一麩炒天麻供試品溶液(批號(hào)2019102206)，依法制備6份供試品溶液，按干燥品計(jì)算，含天麻素和對(duì)羥基苯甲醇的總量分別為3.064、2.963、2.959、2.964、2.960、3.027，RSD為1.6%，天麻素的平均含量為2.034 mg·g-1，對(duì)羥基苯甲醇的平均含量為0.956 mg/g。

2.5.8 回收率試驗(yàn) 取已測(cè)定含量(含天麻素2.034mg/g、對(duì)羥基苯甲醇0.956mg/g)的同一麩炒天麻供試品(批號(hào)2019102206)供試品6份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，按干燥品計(jì)算(水分9.10%)，按100%的水平精密加入濃度為422.8740 μg/mL的天麻素對(duì)照品儲(chǔ)備液及濃度為456.8424 μg/mL對(duì)羥基苯甲醇對(duì)照品儲(chǔ)備液各適量(見(jiàn)表2、3)，依法制備供試品溶液，測(cè)定并計(jì)算，結(jié)果天麻素及對(duì)羥基苯甲醇平均加樣回收率分別為101.4%、96.6%。

表2 天麻素加標(biāo)回收率試驗(yàn)

表3 對(duì)羥基苯甲醇加標(biāo)回收率試驗(yàn)

2.5.9 樣品含量測(cè)定結(jié)果 分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液各5 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 樣品含量測(cè)定結(jié)果

表4(續(xù))

表5 麩炒天麻與天麻飲片含量變化情況

3 討論

3.1 檢查項(xiàng)目和浸出物限度的擬定 根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，水分最低值為7.13%，最高值為11.27%，平均值為9.29%，中位數(shù)為9.72%，水分定為“ 不得過(guò)12.0%”；總灰分最低值為2.29%，最高值為3.00%，平均值為2.58%，中位數(shù)為2.42%，總灰分限度定為“ 不得過(guò)4.0%”；二氧化硫殘留量同《中國(guó)藥典》2020年版天麻藥材及飲片標(biāo)準(zhǔn)不得過(guò)400 mg/kg；浸出物中最低值為42.35%，最高值為66.32%，平均值為52.58%，中位數(shù)為51.02%，麩炒天麻的浸出物限度定為“ 不得少于40.0%”。

3.2 含量測(cè)定限度的擬定 15批次麩炒天麻含量測(cè)定結(jié)果顯示，含量在0.26%～0.58%之間，平均值為0.36%。在天麻炮制加工過(guò)程中，使用硫磺熏蒸，飲片整潔美觀且具保鮮、防霉、防蟲(chóng)效果，尹珉等[4]采用 RP-HPLC對(duì)不同產(chǎn)地經(jīng)過(guò)硫磺熏蒸與未經(jīng)過(guò)硫磺熏蒸的天麻進(jìn)行天麻素測(cè)定，得出結(jié)論，經(jīng)過(guò)硫磺熏蒸后天麻中天麻素的含量普遍低于現(xiàn)行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。本實(shí)驗(yàn)含量最低值為0.26%，為硫磺熏蒸品種，但未超過(guò)規(guī)定的二氧化硫殘留量400 mg/kg，綜合考慮，麩炒天麻中天麻素及對(duì)羥基苯甲醇含量總量限度同《中國(guó)藥典》2020年版天麻藥材及飲片標(biāo)準(zhǔn)，即“ 本品按干燥品計(jì)算，含天麻素(C13H18O7)和對(duì)羥基苯甲醇(C7H8O2)的總量不得少于0.25%。

3.3 天麻麩炒的作用 天麻臨床多用生品，味甘，質(zhì)潤(rùn)，善治一切風(fēng)證，以平肝息風(fēng)止痙見(jiàn)長(zhǎng)，通過(guò)對(duì)1批天麻飲片和用其加工成的3批麩炒天麻的含量測(cè)定變化情況比較，天麻飲片麩炒后的含量有所降低，可能天麻飲片經(jīng)過(guò)麩炒后使天麻的藥性緩和，利于兒童、老年患者用藥治療，同時(shí)可以矯正天麻的特異氣味，減少黏膩之性，便于服用。

綜上，本研究從麩炒天麻的性狀、薄層色譜鑒別、水分、總灰分、二氧化硫殘留量、浸出物及含量測(cè)定方面對(duì)麩炒天麻的質(zhì)量進(jìn)行了評(píng)價(jià)，為臨床用藥安全提供了有效的控制手段。