曹西月，付亞麗，謝娜娜，張亞峰，張源淑

(南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院/農(nóng)業(yè)部動物生理生化重點開放實驗室，南京 210095)

脂肪組織是機體儲存多余脂質(zhì)的主要場所，同時也是機體的一個重要的內(nèi)分泌器官，可影響機體糖脂代謝、胰島素敏感性等，參與機體多種生理病理過程。脂質(zhì)在脂肪組織的過度沉積會直接引起肥胖，也大大增加了患高血脂、高血壓、糖尿病等代謝相關(guān)疾病的風(fēng)險，已成為嚴(yán)重影響公共衛(wèi)生健康的主要社會問題之一。在畜牧業(yè)中，動物脂肪的過度沉積不僅降低了飼料利用率，直接影響動物產(chǎn)品的品質(zhì)，而且會影響動物的繁殖能力。因此，尋找改善動物機體脂質(zhì)過度沉積的藥物或調(diào)節(jié)劑成為畜牧工作者共同關(guān)心的問題。

腎素-血管緊張素系統(tǒng)(renin-angiotensin system，RAS)在調(diào)節(jié)機體體液和電解質(zhì)平衡以及心血管穩(wěn)態(tài)方面至關(guān)重要，主要包括ACE/Ang Ⅱ/AT1R經(jīng)典軸和ACE2/Ang1-7/Mas調(diào)節(jié)軸兩條調(diào)節(jié)通路，后者在一定程度上拮抗前者。近年來，越來越多的研究表明，RAS兩條調(diào)節(jié)通路參與了體內(nèi)的糖脂代謝、胰島素抵抗及糖尿病并發(fā)癥等多種過程。并證實經(jīng)典軸上的關(guān)鍵肽分子Ang II的過度活躍，會加重不同器官和系統(tǒng)的代謝紊亂，引起胰島素抵抗，而ACE2/Ang1-7/Mas軸的激活則能夠促進嚙齒動物能量消耗，抑制Ang II過多導(dǎo)致的肥胖或脂肪沉積。RAS系統(tǒng)中的主要成員血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2(Angiotensin converting enzyme 2, ACE2)可以通過將Ang II水解成Ang 1-7減少脂肪組織炎癥，改善葡萄糖穩(wěn)態(tài)，被認為是治療肥胖或脂肪沉積的潛在靶點。

二脒那秦(diminazene aceturate，DIZE)是一種常見的獸用抗寄生蟲藥物，2011年發(fā)現(xiàn)其可內(nèi)源性激活A(yù)CE2，給小鼠口服可降低體重，減少白色脂肪組織沉積，并改善小鼠的代謝狀況。隨后有研究發(fā)現(xiàn) DIZE可通過激活A(yù)CE2改善糖尿病鼠的心臟功能障礙和視網(wǎng)膜病變，提示DIZE作為ACE2的內(nèi)源性激活劑。顯示出巨大的研究或開發(fā)潛力。但目前對DIZE的應(yīng)用研究多局限于糖尿病腎病、心血管疾病方面，其在脂肪組織脂肪沉積及代謝紊亂中的作用及機制的研究尚未見報道。

本試驗以小鼠前脂肪細胞(3T3-L1)為對象，通過誘導(dǎo)分化獲得脂肪細胞，確定DIZE與脂肪沉積及ACE2的相互關(guān)系，再用siACE2處理細胞抑制ACE2的表達，探討DIZE介導(dǎo)ACE2的內(nèi)源性激活對3T3-L1前脂肪細胞脂質(zhì)沉積的影響，并從脂質(zhì)合成及葡萄糖攝取和氧化代謝方面探討其相關(guān)機制，為從ACE2的角度改善脂肪沉積的開發(fā)研究提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 細胞株

3T3-L1小鼠前脂肪細胞由南京醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生化研究室惠贈。

1.2 試劑與儀器

DIZE購自美國SIGMA公司；3-異丁基-1-甲基黃嘌呤(3-Isobutyl-1-methylxanthine，IBMX)和地塞米松(Dexamethasone，DEX)購自上海陶術(shù)生物科技有限公司；重組人胰島素購自南京凱默爾生物科技中心；Opti-MEM培養(yǎng)基購自美國Gibco公司；Lipofectamine 3000 購自賽默飛世爾科技有限公司；無毒快速油紅O染液、葡萄糖和三酰甘油定量測定試劑盒均購自南京建成生物工程研究所；4% 多聚甲醛購自南京壽德實驗器材有限公司；RIPA蛋白裂解液購自南京碧云天生物技術(shù)有限公司；PVDF膜購自美國Millipore公司；ECL化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒購自上海天能科技有限公司等。

兔源β-actin抗體(貨號AC026)、辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗(貨號AS014)均購自武漢愛博泰克生物科技有限公司；兔源檸檬酸合酶抗體(CS，貨號GB111883)和兔源脂肪酸合酶抗體(FAS，貨號GB11546)購自武漢賽維爾生物科技有限公司；兔源葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白 4 型抗體(GLUT4，貨號BS3680)和ACE2抗體(貨號BS66001)均購自南京巴傲得生物科技有限公司；兔源乙酰 CoA 羧化酶抗體(ACC，貨號D155300)和固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c 抗體(SREBP1c，貨號NB100)購自生工生物工程(上海)股份有限公司。

Tecan Spark多功能酶標(biāo)儀(瑞士，Tecan公司)；POWER-PAC300電泳儀(美國，Bio-Rad公司)；POWER-PAC HC轉(zhuǎn)印儀(美國，Bio-Rad公司)；Tanon-3900全自動化學(xué)發(fā)光圖像分析系統(tǒng)(上海天能科技有限公司)等。

1.3 細胞培養(yǎng)與處理

1.3.1 細胞誘導(dǎo)分化 參照張許等方法。3T3-L1前脂肪細胞接種于6孔板內(nèi)，常規(guī)DMEM高糖培養(yǎng)基，10% 胎牛血清，37 ℃、5% CO條件下培養(yǎng)，待細胞生長至完全融合，加入分化誘導(dǎo)劑 Ⅰ(10% FBS， 0.5 mmol·LIBMX，10 μg·mL胰島素和 2.0 mmol·LDEX 的誘導(dǎo)分化劑)，繼續(xù)培養(yǎng)，待80% 左右的細胞內(nèi)出現(xiàn)脂滴后，換分化誘導(dǎo)劑 Ⅱ(10% FBS，10 μg·mL胰島素)，48 h后棄誘導(dǎo)劑 Ⅱ，改用常規(guī)培養(yǎng)液，直至95% 以上細胞出現(xiàn)脂滴。

1.3.2 DIZE處理及細胞活力檢測 首先用不同濃度DIZE(0、6.25、12.5、25、50和100 μmol·L)處理分化成功的3T3-L1脂肪細胞24、48、72 h，常規(guī)MTT法測定細胞活力，于490 nm處測定吸光度。篩選DIZE作用合適濃度和時間。按如下公式計算：

細胞活力值(%)=(樣品孔A490-空白孔A490)/(對照孔A490-空白孔A490)×100。

確定DIZE作用濃度為12.5和25 μmol·L，處理時間為48 h，用于后續(xù)試驗。

1.3.3 siACE2轉(zhuǎn)染干擾細胞ACE2表達 參照本實驗室劉穎建立的方法。以3×10個·孔的密度將細胞接種于6孔板中，誘導(dǎo)分化至倒數(shù)第3天；用200 μL Opti-MEM稀釋適量siRNA(siRNA序列見表1)，混勻，室溫靜置5 min；用200 μL Opti-MEM加7.5 μL Lipofectamine 3000，混勻，室溫5 min； 將上述兩步的溶液混合，室溫孵育20 min；無血清培養(yǎng)基漂洗細胞，然后在每孔中加入常規(guī)培養(yǎng)液1.5 mL；每孔加入上述混合溶液400 μL；將細胞置于培養(yǎng)箱中孵育6 h，繼續(xù)培養(yǎng)48 h。

1.3.4 試驗分組及處理 將誘導(dǎo)分化成功的3T3-L1脂肪細胞進行分組：1)對照組(control group)，細胞培養(yǎng)基為常規(guī)培養(yǎng)液。2)DIZE試驗組(12.5和25 μmol·LDIZE group)，其中，一組為分化誘導(dǎo)劑 Ⅱ +12.5 μmol·LDIZE溶液，一組為分化誘導(dǎo)劑 Ⅱ +25 μmol·LDIZE溶液。3)siACE2 組(siACE2 group)，即siACE2 干擾處理誘導(dǎo)分化成功的3T3-L1脂肪細胞。4)siACE2+DIZE組(siACE2+DIZE group)，即siACE2 干擾預(yù)處理誘導(dǎo)分化成功的3T3-L1脂肪細胞，加25 μmol·LDIZE。以上分組處理完畢后，37 ℃、5% CO繼續(xù)培養(yǎng)48 h。

表1 siRNA片段序列

1.4 指標(biāo)測定

1.4.1 細胞上清中三酰甘油和葡萄糖含量測定 三酰甘油采用GPO-PAP法，操作按試劑盒說明書方法進行。510 nm處空白孔調(diào)零，測各孔OD值，按如下公式計算含量：

葡萄糖測定采用葡萄糖氧化酶法，按試劑盒說明書方法進行?？瞻卓渍{(diào)零，505 nm測各孔OD值，按如下公式計算含量：

葡萄糖吸收量(mmol·L)=培養(yǎng)液葡萄糖(mmol·L)-處理組葡萄糖(mmol·L)

1.4.2 細胞油紅O染色 脂滴染色操作參照無毒快速油紅O染液試劑盒說明書。在6孔板中處理細胞，4% 多聚甲醛固定，油紅O染液，洗滌。復(fù)染液染色，洗滌，鏡下觀察并拍照。棄PBS，100% 異丙醇回收油紅，測每孔OD值，進行定量分析。

1.4.3 細胞ACE2、FAS、ACC、SREBP-1c及GLUT4和CS的蛋白檢測 1)蛋白裂解液制備：RIPA裂解(含1% PMSF)獲得總蛋白提取物。BCA法測定蛋白濃度，統(tǒng)一蛋白濃度，-20 ℃儲存?zhèn)溆谩?)SDS-PAGE：采用10% 分離膠和5% 濃縮膠的聚丙烯酰胺凝膠，蛋白上樣量為30 μg，蛋白Marker 2 μL；電泳條件：濃縮膠80 V，分離膠110 V。3)轉(zhuǎn)印：濕法轉(zhuǎn)印，選用PVDF膜，90 V，轉(zhuǎn)膜90 min。 4)雜交和顯色：轉(zhuǎn)膜結(jié)束后，取出PVDF膜，5% 脫脂奶粉封閉2 h，TBST洗膜。分別加入一抗(β-actin兔源抗體1∶10 000稀釋；ACE2、FAS、ACC、SREBP-1c、GLUT4及CS兔源抗體1∶1 000稀釋)，4 ℃孵育過夜。TBST洗膜，加入山羊抗兔IgG二抗(1∶10 000稀釋)，室溫孵育，最后洗膜。ECL發(fā)光(A液∶B液=1∶1)，凝膠成像系統(tǒng)曝光并拍照。5)數(shù)據(jù)處理：Image J軟件檢測各蛋白條帶灰度值，以β-actin作內(nèi)參，目的條帶與其相比得到目的蛋白的相對表達量，然后對數(shù)值進行歸一化處理。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

2 結(jié) 果

2.1 細胞轉(zhuǎn)分化結(jié)果

由圖1可見，至誘導(dǎo)分化的第14天，95% 細胞出現(xiàn)脂滴，說明前脂肪細胞誘導(dǎo)成功，可用于后續(xù)的研究。

圖1 誘導(dǎo)分化成功的3T3-L1脂肪細胞Fig.1 3T3-L1 adipocytes successfully induced and differentiated

2.2 DIZE對細胞活力的影響

MTT法檢測經(jīng)DIZE處理后的細胞活力，結(jié)果由圖2所示，0～12.5 μmol·LDIZE處理24、48和72 h。對細胞活力無明顯抑制作用，濃度達25 μmol·L時，細胞活力有所下降，至100 μmol·L時，細胞活力顯著下降(<0.05)。同時結(jié)果顯示，50 μmol·L以上的DIZE濃度處理72 h均可顯著抑制細胞活力(<0.05)。因此，在后續(xù)試驗中，確定DIZE作用濃度為12.5和25 μmol·L， 處理時間為48 h。

與對照組相比，#.P<0.05Compared with CON, #. P<0.05圖2 DIZE對細胞活力的影響(n=6)Fig.2 The effect of DIZE on cell viability (n=6)

2.3 DIZE對3T3-L1脂肪細胞內(nèi)脂滴合成的影響

2.3.1 DIZE對3T3-L1脂肪細胞上清三酰甘油和葡萄糖含量的影響 結(jié)果見表2。與對照組相比，不同濃度DIZE處理48 h后，均可極顯著降低細胞上清中三酰甘油含量(<0.01)，siACE2組顯著降低(<0.05)，siACE2+DIZE組極顯著降低(<0.01)。 siACE2組較25 μmol·LDIZE組極顯著升高(<0.01)，但仍低于對照組；siACE2+DIZE組較25 μmol·LDIZE組無顯著差異。即DIZE處理能夠促進脂肪動員，降低3T3-L1脂肪細胞上清三酰甘油的含量。

表2 DIZE對細胞三酰甘油和葡萄糖含量的影響

與對照組相比，不同濃度DIZE處理48 h后葡萄糖含量均顯示上調(diào)，25 μmol·LDIZE組差異顯著(<0.05)。siACE2組和siACE2+DIZE組較對照組和25 μmol·LDIZE組均顯著下調(diào)(<0.05)。

2.3.2 DIZE對3T3-L1脂肪細胞內(nèi)脂滴沉積的影響 油紅O染色可以衡量出脂肪細胞內(nèi)的脂肪蓄積程度，細胞內(nèi)積累的脂質(zhì)越多，油紅染色結(jié)果越深。同時，利用吸光度檢測對油紅O染色結(jié)果進行定量分析。結(jié)果見圖3。與對照組相比，不同濃度DIZE處理48 h后，細胞內(nèi)脂滴顯著減少(<0.05，圖3B和3C)，siACE2組和siACE2+DIZE組的脂滴蓄積較25 μmol·LDIZE組顯著增加(<0.05，圖3D和3E)。

A. 正常對照組; B. 12.5 μmol·L-1 DIZE組; C. 25 μmol·L-1 DIZE組; D: siACE2組; E. siACE2+DIZE組; F. 油紅染色定量分析；圖中數(shù)值均以“mean±Sem”表示。與對照組相比，#.P<0.05；與25 μmol·L-1DIZE組相比，*.P<0.05A. CON group; B. 12.5 μmol·L-1 DIZE group; C. 25 μmol·L-1 DIZE group; D. siACE2 group; E. siACE2+DIZE group; F. Quantitative analysis of oil red staining; Values represent the “means±Sem”. Compared with CON, #. P<0.05; Compared with 25 μmol·L-1 DIZE group,*. P<0.05圖3 DIZE對3T3-L1脂肪細胞內(nèi)脂滴合成的影響Fig.3 Effects of DIZE and siACE2 on lipid droplet accumulation in 3T3-L1 cells

2.3.3 DIZE對細胞內(nèi)ACE2蛋白表達的影響 由圖4可見，與對照組相比，不同濃度DIZE處理48 h均可上調(diào)3T3-L1脂肪細胞中ACE2的表達水平。25 μmol·LDIZE組較對照組差異顯著(<0.05)， siACE2組和siACE2+DIZE組較對照組和DIZE組顯著下調(diào)(<0.05)。

與對照組相比，#.P<0.05；與25 μmol·L-1DIZE組相比，*.P<0.05Compared with CON, #. P<0.05; Compared with 25 μmol·L-1 DIZE group, *. P<0.05圖4 DIZE對3T3-L1脂肪細胞內(nèi)ACE2蛋白表達的影響(n=6)Fig.4 Effect of DIZE on the expression of ACE2 protein in 3T3-L1 cells (n=6)

2.3.4 DIZE對3T3-L1細胞內(nèi)FAS、ACC和SREBP1c蛋白表達的影響 結(jié)果見圖5。由圖5可以看出，與對照組相比，不同濃度DIZE處理48 h可下調(diào)3T3-L1脂肪細胞中的FAS表達水平，但無統(tǒng)計學(xué)差異。siACE2組的FAS蛋白表達較對照組和DIZE組顯著下調(diào)(<0.05)，siACE2+DIZE組的FAS蛋白表達較siACE2組有所下降，但仍高于DIZE組(<0.05)。

與對照組相比，#. 差異顯著(P<0.05)，##. 差異極顯著(P<0.01)；與25 μmol·L-1 DIZE組相比，*. 差異顯著(P<0.05)，**. 差異極顯著(P<0.01)Compared with CON, #. P<0.05; ##. P<0.01; Compared with 25 μmol·L-1 DIZE group, *. P<0.05, **. P<0.01圖5 DIZE對3T3-L1脂肪細胞內(nèi)FAS、ACC和SREBP1c蛋白表達的影響(n=6)Fig.5 Effect of DIZE on FAS, ACC and SREBP1c protein expression in 3T3-L1 cells (n=6)

與對照組相比，不同濃度DIZE處理48 h可下調(diào)3T3-L1脂肪細胞中的ACC表達水平，25 μmol·LDIZE組ACC表達顯著降低(<0.05)。siACE2組較對照組和DIZE組極顯著上調(diào)(<0.01)，siACE2+DIZE組較siACE2組有所下降，但仍高于DIZE組(<0.01)。

與對照組相比，不同濃度DIZE處理48 h可顯著下調(diào)3T3-L1脂肪細胞中的SREBP1c表達水平(<0.01)。siACE2組較對照組和DIZE組極顯著上調(diào)(<0.01)，siACE2+DIZE組較siACE2組有所下降，但仍極顯著高于DIZE組(<0.01)。

2.4 DIZE對3T3-L1脂肪細胞葡萄糖攝取和氧化的影響

葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白GLUT4的表達結(jié)果見圖6 A。與對照組相比，25 μmol·LDIZE組表達顯著上調(diào)(<0.05)，siACE2組和siACE2+DIZE組的GLUT4蛋白表達較對照組和25 μmol·LDIZE組均顯著下調(diào)(<0.05)。即，DIZE處理可促進3T3-L1脂肪細胞的葡萄糖攝取。

A. GLUT4蛋白表達變化；B. CS蛋白表達變化。與對照組相比，#.P<0.05，##. P<0.01；與25 μmol·L-1 DIZE組相比，*. P<0.05，**. P<0.01A. GLUT4 protein expression changes; B. Changes in CS protein expression. Compared with CON, #. P<0.05; ##. P<0.01; Compared with 25 μmol·L-1 DIZE group, *. P<0.05, **. P<0.01圖6 DIZE對3T3-L1脂肪細胞葡萄糖攝取和氧化的影響(n=6)Fig.6 Effects of DIZE on glucose uptake and oxidation in 3T3-L1 adipocytes (n=6)

檸檬酸合酶CS的表達結(jié)果見圖6 B。與對照組相比，12.5 μmol·LDIZE組表達有上調(diào)，但無統(tǒng)計學(xué)差異。25 μmol·LDIZE組表達水平極顯著下調(diào)(<0.01)。siACE2組較對照組和25 μmol·LDIZE組均極顯著下調(diào)(<0.01)，siACE2+DIZE組較siACE2組有所升高，但仍極顯著高于對照組(<0.01)。

3 討 論

已有的活體研究數(shù)據(jù)顯示，DIZE處理能夠促進心肌細胞、腎、視網(wǎng)膜、肌肉組織還有腦組織中的ACE2表達，降低小鼠體重、血清膽固醇和三酰甘油的水平，但是與脂肪組織中ACE2的作用存在矛盾。De Macedo等研究顯示，DIZE可以促進正常飲食小鼠附睪脂肪組織中ACE2 mRNA表達，而Bruce等則發(fā)現(xiàn)DIZE僅促進高脂飲食大鼠血清ACE2表達，對腹膜后脂肪組織ACE2 mRNA水平無明顯作用。體外研究方面，DIZE可促進人視網(wǎng)膜色素上皮細胞和小鼠肺部Ⅱ型上皮細胞系(MLE-12)中的ACE2表達，但對人肝星狀細胞系(LX-2)和小鼠枯否細胞系(KUP5)中的ACE2活性無顯著促進作用。本研究在體外應(yīng)用分化的3T3-L1前脂肪細胞進一步驗證。首先，通過細胞活力檢測篩選，確定了12.5、25 μmol·L2個給藥濃度以及作用時間48 h。然后，用該藥物處理時間、濃度及siACE2分別作用于分化后期的3T3-L1細胞，測定了細胞上清三酰甘油和葡萄糖含量，并對脂滴蓄積情況進行油紅染色觀察分析，以及檢測細胞內(nèi)ACE2的表達。DIZE處理使細胞上清三酰甘油含量減少，葡萄糖含量升高，提示DIZE處理可促進細胞脂肪動員及葡萄糖攝取。細胞油紅染色結(jié)果顯示，細胞脂滴顯著減少，該濃度DIZE可促進細胞內(nèi) ACE2 表達。本試驗還采用了siRNA 干擾技術(shù)下調(diào) ACE2，進一步研究 DIZE 的作用。參照本實驗室劉穎已建立的方法，利用 siRNA 轉(zhuǎn)染技術(shù)，使3T3-L1細胞ACE2基因轉(zhuǎn)錄后表達沉默，ACE2基因表達降低，成功建立了ACE2基因表達降低或沉默細胞系，可用于驗證DIZE內(nèi)源性激活A(yù)CE2對細胞脂質(zhì)沉積的抑制效應(yīng)及其機制。結(jié)果顯示，DIZE對ACE2的激活作用可被 siACE2 的預(yù)處理所消除，細胞油紅染色結(jié)果也與其一致。該結(jié)果提示，DIZE通過激活 ACE2 表達而抑制脂質(zhì)積累。

已知在脂肪組織中，先是乙酰 CoA 羧化酶在脂肪酸合成酶系(主要是乙酰 CoA 羧化酶(ACC)和脂肪酸合成酶(FAS))的作用下從頭合成脂肪酸，然后脂肪酸酯化形成甘油骨架，由二酰甘油?；D(zhuǎn)移酶(DGAT)介導(dǎo)合成三酰甘油(TG)。固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c(SREBP-1c)是脂肪組織中SREBPs的主要表達形式，其在細胞核中與固醇反應(yīng)元件結(jié)合，可誘導(dǎo)幾乎所有參與TG和FA合成的必需基因的轉(zhuǎn)錄，能夠直接啟動 FAS和ACC轉(zhuǎn)錄翻譯，從而促進TG合成。De Macedo等研究顯示,口服DIZE可降低正常飲食小鼠ACC、FAS的基因轉(zhuǎn)錄，改善小鼠的代謝狀況，減少脂肪沉積。本研究檢測了FAS、ACC和SREBP1c蛋白表達的變化，結(jié)果顯示，DIZE處理后，細胞內(nèi)FAS、ACC和SREBP1c蛋白表達下降，且DIZE對FAS、ACC和SREBP1c蛋白的抑制作用可被siACE2消除，證實DIZE確實通過激活A(yù)CE2表達而抑制脂質(zhì)積累，結(jié)果與文獻[15]一致。提示，DIZE處理可通過激活A(yù)CE2表達來下調(diào)脂肪合成關(guān)鍵酶的蛋白表達，抑制細胞內(nèi)的脂質(zhì)蓄積。

有研究顯示，激活 ACE2/Ang1-7/Mas 軸能夠促進基礎(chǔ)水平和胰島素刺激下的葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白的表達，降低肝糖原合成，緩解胰島素抵抗。Takeda等研究發(fā)現(xiàn)，ACE2 敲除的正常飲食小鼠骨骼肌GLUT4表達顯著降低，Ang1-7可以促進GLUT4在ACE2敲除小鼠中的表達，這一效應(yīng)可被Mas受體阻滯劑A779 阻斷。在脂肪組織方面，Mas受體缺失也導(dǎo)致胰島素依賴的葡萄糖轉(zhuǎn)運降低，GLUT4 表達降低。本試驗結(jié)果顯示，DIZE干預(yù)后GLUT4表達增加，與上述的研究結(jié)果一致，即DIZE處理脂肪組織葡萄糖轉(zhuǎn)運增加。

本試驗還對葡萄糖在細胞內(nèi)的代謝去路作了進一步探討。發(fā)現(xiàn)DIZE處理后，隨著葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白的表達上調(diào)，三羧酸循環(huán)關(guān)鍵酶檸檬酸合酶(CS)的表達也隨之上調(diào)，即糖的有氧氧化(三羧酸循環(huán))激活，糖分解代謝加強。結(jié)合DIZE抑制成脂因子表達的結(jié)果，說明DIZE干預(yù)促進攝取的葡萄糖主要進入了糖的有氧氧化途徑，而不是進入成脂途徑，間接抑制了脂肪酸的從頭合成。

4 結(jié) 論

DIZE可以通過激活A(yù)CE2減少細胞脂質(zhì)沉積，提示ACE2或DIZE改善脂質(zhì)沉積的研究和開發(fā)潛力，也為從ACE2的角度對日益增長的肥胖和代謝綜合征的治療提供新的思路。