黃 燕 周玉珍 潘小虹 朱倩夢(mèng) 張玉英▲

1.江蘇省蘇州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院婦產(chǎn)科，江蘇蘇州 215101；2.蘇州大學(xué)附屬第二醫(yī)院婦產(chǎn)科，江蘇蘇州 215100

子宮肌瘤是女性常見(jiàn)的良性盆腔腫瘤，患者可能 出現(xiàn)月經(jīng)過(guò)多、盆腔疼痛、反復(fù)流產(chǎn)等癥狀，約60%的絕經(jīng)前婦女會(huì)受其影響[1-2]。微RNA（microRNA，miRNA）為單鏈、內(nèi)源性、非編碼RNA，由21～25 個(gè)核苷酸組成，參與細(xì)胞增殖、分化等多個(gè)生物學(xué)過(guò)程，具有十分重要的作用[3-4]。有相關(guān)研究表明[5-6]，miR-590、miR-16 均是miRNA 家族中的成員，表達(dá)水平與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。目前臨床中對(duì)子宮肌瘤組織中miR-590、miR-16 表達(dá)的臨床意義尚不清楚。鑒于此，本研究探討子宮肌瘤組織中miR-590、miR-16表達(dá)的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018 年10 月至2020 年8 月江蘇省蘇州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院收治的186 例子宮肌瘤患者為研究組，并選擇同一時(shí)間段120 例因子宮脫垂實(shí)施手術(shù)治療的患者為對(duì)照組。對(duì)照組年齡31～64 歲，平均（54.48±4.36）歲；體重指數(shù)（body mass index，BMI）18.52～28.87 kg/m2，平均（26.32±1.27）kg/m2。研究組年齡32～65 歲，平均（53.84±4.13）歲；BMI 18.38～28.63 kg/m2，平 均（26.58±1.31）kg/m2；子宮肌瘤大小1～6 cm，平均（3.81±1.02）cm；子宮肌瘤數(shù)目1～5 個(gè)，平均（2.18±0.65）個(gè)。兩組年齡、BMI 比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)江蘇省蘇州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意。

納入標(biāo)準(zhǔn)：研究組術(shù)前經(jīng)陰道超聲和核磁共振檢查[7]并經(jīng)組織病理學(xué)診斷證實(shí)為子宮肌瘤；符合手術(shù)指征，且行子宮肌瘤切除術(shù)治療，手術(shù)由同一組醫(yī)生完成；患者及家屬簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并生殖系統(tǒng)腫瘤或其他惡性腫瘤；全身性感染或有免疫系統(tǒng)疾??；嚴(yán)重盆腔粘連或盆腔急性炎癥；凝血功能障礙；血液系統(tǒng)疾?。粐?yán)重肝腎功能障礙或衰竭；妊娠或哺乳期婦女；盆腔腹部巨大腫塊。

1.2 分析方法

1.2.1 樣本收集及miR-590、miR-16 表達(dá)水平檢測(cè)術(shù)中對(duì)子宮組織樣本進(jìn)行收集，立即放入液氮中保存，后轉(zhuǎn)入-80℃超低溫冰箱中保存待測(cè)。實(shí)時(shí)定量PCR（real-time quantitative PCR，qRT-PCR）檢測(cè)子宮肌瘤組織與正常子宮組織miR-590、miR-16 水平：取子宮組織，使用Trizol 法提取組織miRNA，并檢測(cè)miRNA 的質(zhì)量和濃度，將miRNAs 反轉(zhuǎn)錄為cDNA，miR-590、miR-16 及內(nèi)參U6 序列：miR-590 正向引物：5’-TGGCGGCACCTGACCTACCTG-3’，反向引物：5’-TATTGCAGTCACGGTACGGTA-3’，產(chǎn)物長(zhǎng)度124bp；miR-16 正向引物：5’-CTCCAGGTTCAGGTAACATG-3’，反向引物：5’-CCGGGTAACACTAGTCGTAG-3’，產(chǎn)物長(zhǎng)度118 bp；U6 正向引物：5’-ACCGCTTGCAAAGGCTGCA-3’，反向引物：5’-CCAGGGGTCCGAGGTACGT-3’，產(chǎn)物長(zhǎng)度115 bp。反應(yīng)體系為20 μl：2×SYBR 混合物10 μl，10×cDNA 模板1 μl，正反向引物各1 μl，H2O 7 μl，每樣品3 個(gè)重復(fù)。反應(yīng)程序：95℃預(yù)變性3 min，95℃10 s、60℃30 s，72℃2 min，35 個(gè)循環(huán)，72℃延伸10 min，在PCR 儀上進(jìn)行反應(yīng)，以U6 作為內(nèi)參按照2-ΔΔCt算法分析基因相對(duì)定量表達(dá)。

1.2.2 臨床資料收集 收集可能影響子宮肌瘤發(fā)生的相關(guān)資料，主要包括年齡、BMI 及是否合并高血壓、糖尿病、高脂血癥，產(chǎn)次、流產(chǎn)次數(shù)、初潮年齡，是否痛經(jīng)、月經(jīng)紊亂，月經(jīng)情況、遺傳病史、生殖道炎、避孕藥服用史、剖宮產(chǎn)史、白細(xì)胞計(jì)數(shù)（white blood cell count，WBC）及子宮組織miR-590、miR-16 表達(dá)水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 25.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，采用t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，采用χ2檢驗(yàn)；采用多因素logistic 回歸分析探討子宮肌瘤發(fā)病的影響因素；采用Pearson相關(guān)性分析明確r 值。以P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組子宮組織miR-590、miR-16 表達(dá)水平比較

研究組miR-590 表達(dá)水平高于對(duì)照組（P ＜0.05），miR-16 表達(dá)水平低于對(duì)照組（P ＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 兩組子宮組織miR-590、miR-16 表達(dá)水平比較（）

表1 兩組子宮組織miR-590、miR-16 表達(dá)水平比較（）

2.2 兩組臨床資料比較

研究組合并糖尿病、月經(jīng)紊亂、生殖道炎占比高于對(duì)照組，流產(chǎn)次數(shù)多于對(duì)照組（P ＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 兩組臨床資料比較

2.3 影響子宮肌瘤發(fā)生的多因素logistic 回歸分析

以子宮肌瘤發(fā)生情況為因變量（發(fā)生=1，未發(fā)生=0）；合并糖尿病，流產(chǎn)次數(shù)，月經(jīng)紊亂，生殖道炎，子宮組織miR-590、miR-16 表達(dá)水平為自變量，相關(guān)賦值信息見(jiàn)表3。logistic 回歸分析結(jié)果顯示，月經(jīng)紊亂，生殖道炎，子宮組織miR-590、miR-16 表達(dá)水平是子宮肌瘤發(fā)生的影響因素（P ＜0.05）。見(jiàn)表4。

表3 自變量賦值

表4 影響子宮肌瘤發(fā)生的多因素logistic 回歸分析

2.4 miR-590、miR-16 表達(dá)水平與子宮肌瘤大小、數(shù)目的關(guān)系

miR-590 表達(dá)水平與子宮肌瘤大小、數(shù)目呈正相關(guān)（r ＞0，P ＜0.05），miR-16 表達(dá)水平與子宮肌瘤大小、數(shù)目呈負(fù)相關(guān)（r ＜0，P ＜0.05）。見(jiàn)表5。

表5 miR-590、miR-16 表達(dá)水平與子宮肌瘤大小、數(shù)目的關(guān)系

3 討論

子宮肌瘤是一種能夠根治的良性腫瘤，但易使患者產(chǎn)生心理負(fù)擔(dān)，同時(shí)會(huì)嚴(yán)重影響患者的日常生活、生育功能[8-10]。通過(guò)對(duì)子宮肌瘤組織中miR-590、miR-16 表達(dá)的臨床意義進(jìn)行分析探討，可為臨床診斷、防治提供一定的理論基礎(chǔ)，對(duì)子宮肌瘤患者具有十分重要的臨床意義。

miRNA 由21～25 個(gè)核苷酸組成，其異常表達(dá)與器官纖維化、腫瘤細(xì)胞的侵襲、遷移等有關(guān)[11-12]。隨著學(xué)者們對(duì)分子生物的深入探討，越來(lái)越多的miRNA被發(fā)現(xiàn)并進(jìn)行了研究[13-15]。有研究表明，miR-590 在不同類型的腫瘤中的表達(dá)存在一定的差異，可通過(guò)不同的信號(hào)通路對(duì)腫瘤增殖、凋亡等生物學(xué)行為產(chǎn)生不同的影響[11]。miR-16 是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的與血管生成相關(guān)的miRNA，相關(guān)研究表明[16-18]，miR-16 在乳腺癌、胃癌中呈低表達(dá)，在體外可明顯抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移能力。

本研究結(jié)果顯示，研究組miR-590 表達(dá)水平高于對(duì)照組，miR-16 表達(dá)水平則低于對(duì)照組，提示miR-590 在子宮肌瘤組織中呈高表達(dá)，miR-16 則呈低表達(dá)。本研究結(jié)果表明，研究組合并糖尿病、月經(jīng)紊亂、生殖道炎占比高于對(duì)照組，流產(chǎn)次數(shù)多于對(duì)照組。經(jīng)logistic 回歸分析結(jié)果提示，月經(jīng)紊亂、生殖道炎、子宮組織miR-590、miR-16 表達(dá)水平是子宮肌瘤發(fā)生的影響因素。臨床中需逐一控制各項(xiàng)因素的影響，以降低子宮肌瘤的發(fā)生率。薛宏[19]研究結(jié)果表明，月經(jīng)紊亂、生殖道炎等是子宮肌瘤發(fā)生的相關(guān)因素，與本研究結(jié)果相符。月經(jīng)紊亂為子宮肌瘤發(fā)生的相關(guān)因素，可能是由于發(fā)生月經(jīng)紊亂后多采用激素療法進(jìn)行治療，易導(dǎo)致患者體內(nèi)激素水平發(fā)生紊亂，尤其是雌激素水平的上升，子宮肌瘤又為激素依賴性疾病，故而月經(jīng)紊亂患者子宮肌瘤的發(fā)病率較高[20]。生殖道炎多因癥狀較輕，不易引起患者注意，導(dǎo)致病原體長(zhǎng)期刺激子宮內(nèi)膜使其增生增長(zhǎng)，致使子宮肌瘤的發(fā)生[21]。miR-590 是miRNA 家族中的成員，在胃、子宮等組織中均有表達(dá)，Ma 等[22]研究表明，miR-590 在肺癌、子宮頸鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)明顯增加。miR-16 也是miRNA 家族中的成員，相關(guān)研究表明[23-25]，miR-16 表達(dá)水平與胃癌、前列腺癌等惡性腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，可作為輔助診斷的重要參考指標(biāo)。本研究發(fā)現(xiàn)，miR-590 表達(dá)水平與子宮肌瘤大小、數(shù)目均呈正相關(guān)，miR-16 表達(dá)水平與子宮肌瘤大小、數(shù)目均呈負(fù)相關(guān)，提示子宮肌瘤組織中miR-590、miR-16 表達(dá)水平可能與子宮肌瘤的發(fā)生存在一定的相關(guān)性。

綜上所述，miR-590 在子宮肌瘤組織中呈高表達(dá)，miR-16 則呈低表達(dá)，且miR-590、miR-16 表達(dá)水平與子宮肌瘤的發(fā)生相關(guān)，對(duì)疾病的早期篩查和診斷具有一定的參考價(jià)值，本研究的不足之處在于樣本量較小，在后續(xù)研究中需擴(kuò)大樣本量進(jìn)行大規(guī)模、多中心臨床試驗(yàn)進(jìn)一步進(jìn)行研究。