王前程，張迎迎，戴陶宇，尤佳琪，郭世榮，朱為民*

(1 南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 園藝學(xué)院，南京 210014；2 上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院 園藝研究所，上海市設(shè)施園藝重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 201403)

番茄枯萎病是由尖孢鐮刀菌(Fusariumoxysporum) 引起的維管束疾病，是一種嚴(yán)重危害番茄品質(zhì)和產(chǎn)量的土傳性病害，鐮刀菌酸(fusaric acid, FA)被認(rèn)為是番茄枯萎病發(fā)生過(guò)程中的一個(gè)重要致病因子[1]。番茄幼苗期到成株期均可受到病原菌的侵染，很難徹底根除，因此番茄枯萎病又被稱為“番茄癌癥”[2]。癥狀具體表現(xiàn)為植株生長(zhǎng)發(fā)育不良，比健康番茄植株矮小瘦弱、葉片發(fā)黃，植株因嚴(yán)重缺水而葉片枯萎，最終整株植物枯萎死亡[3]。番茄枯萎病常在開(kāi)花期發(fā)病，在盛果期出現(xiàn)植株死亡現(xiàn)象，造成果實(shí)減產(chǎn)、品質(zhì)不佳[4]。近些年來(lái)，伴隨著番茄集約化種植產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，露天和大棚番茄的枯萎病發(fā)生呈現(xiàn)持續(xù)上升的趨勢(shì)，嚴(yán)重制約了番茄的產(chǎn)量和質(zhì)量。

木霉菌(Trichodermaspp.)是自然界廣泛分布的真菌，被普遍應(yīng)用于作物土傳病害的生物防治[5]。真菌寄生和誘導(dǎo)植物防御系統(tǒng)抗性被認(rèn)為是木霉生物防治的重要機(jī)制[6]。研究發(fā)現(xiàn)茉莉酸/乙烯信號(hào)通路在木霉菌誘導(dǎo)植物抗性中普遍發(fā)揮作用[7-8]。也有研究表明，木霉可以通過(guò)調(diào)控植物激素茉莉酸和水楊酸兩個(gè)不同的信號(hào)通路，進(jìn)而調(diào)節(jié)植物的生長(zhǎng)發(fā)育和激活植物的防御系統(tǒng)[9]。

T-51是一株具有生防潛力的擬康寧木霉(Trichodermakoningiopsis)。研究表明T-51菌株顯著促進(jìn)西瓜種子萌發(fā)和番茄幼苗生長(zhǎng)，并且可以增強(qiáng)番茄對(duì)灰霉病的抗病性[10-11]。但T-51菌株對(duì)番茄枯萎病的防治工作目前還沒(méi)有相關(guān)報(bào)道。本試驗(yàn)采用不同的處理方式和檢測(cè)手段，對(duì)T-51菌株與田間分離獲得的尖孢鐮刀菌展開(kāi)體外和體內(nèi)試驗(yàn)，從而明確T-51菌株對(duì)番茄枯萎病的防治效果。

1 材料和方法

1.1 供試材料

供試番茄品種為感枯萎病的櫻桃番茄材料‘SHy9’。種子采用常規(guī)消毒處理，催芽后播種于育苗盆中，生長(zhǎng)3周后供接菌試驗(yàn)。供試病原真菌為尖孢鐮刀菌，由本實(shí)驗(yàn)室從番茄枯萎病病株上分離獲得。供試生防木霉菌是擬康寧木霉T-51，分離自湖北省武漢市油菜田土壤[11]，由上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院尤佳琪老師篩選獲得，保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，編號(hào)M2015729。

1.2 平板對(duì)峙試驗(yàn)

將活化好的T-51菌株和尖孢鐮刀菌同時(shí)轉(zhuǎn)接到PDA固體培養(yǎng)基(馬鈴薯 200 g；葡萄糖 20 g； 瓊脂15 g)平板上，2塊菌餅(5 mm×5 mm)對(duì)稱分布，相距約7 cm，以單獨(dú)轉(zhuǎn)接尖孢鐮刀菌的平板為對(duì)照組，每種處理重復(fù)3次，25 ℃恒溫培養(yǎng)7 d，采用十字交叉法測(cè)量?jī)煞N菌的生長(zhǎng)直徑。以T-51對(duì)尖孢鐮刀菌菌絲生長(zhǎng)的抑制率評(píng)價(jià)競(jìng)爭(zhēng)作用。抑制率(%)=(對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑)/對(duì)照菌落直徑×100%。

另外，將活化好的尖孢鐮刀菌轉(zhuǎn)接到PDA平板上培養(yǎng)3 d后，再轉(zhuǎn)接T-51菌株，取對(duì)峙培養(yǎng)2周后尖孢鐮刀菌生長(zhǎng)區(qū)域的菌餅進(jìn)行二次轉(zhuǎn)接，培養(yǎng)5 d后觀察生長(zhǎng)狀態(tài)并鑒定。

1.3 T-51菌株抑制尖孢鐮刀菌最適溫度和pH值篩選試驗(yàn)

將對(duì)峙培養(yǎng)的平板放置在不同的溫度環(huán)境(15 ℃、20 ℃、25 ℃、30 ℃和35 ℃)中培養(yǎng)，每一種處理3次重復(fù)；調(diào)整用于對(duì)峙培養(yǎng)的平板中PDA培養(yǎng)基的pH值(3、5、7、9和11)，并在室溫條件(25 ℃)下進(jìn)行平板對(duì)峙試驗(yàn)，每一處理3個(gè)重復(fù)；均培養(yǎng)7 d后按照1.2的測(cè)量方法進(jìn)行記錄分析。

1.4 T-51菌株防治番茄苗期枯萎病盆栽試驗(yàn)

首先，進(jìn)行T-51菌株和尖孢鐮刀菌孢子洗脫液的制備。將T-51轉(zhuǎn)接到PDA固體培養(yǎng)基上，22 ℃光照培養(yǎng)3 d，用含有0.05% Tween-20的滅菌水刮洗平板得到洗脫液，過(guò)濾菌絲獲得孢子液，濃度調(diào)整為1×107個(gè)/mL，即得到T-51孢子洗脫液。尖孢鐮刀菌孢子液制備時(shí)平板培養(yǎng)條件為25 ℃黑暗培養(yǎng)，其余步驟同上。T-51和尖孢鐮刀菌混合孢子液制備步驟同上，二者終濃度均為1×107個(gè)/mL。

其次，對(duì)長(zhǎng)勢(shì)健壯的3周齡番茄幼苗洗根，隨后把根部分別放入清水和制備好的3種孢子液中浸泡15 min，然后重新栽種到盆中，置于溫度25 ℃、相對(duì)空氣濕度55%～65%下生長(zhǎng)，每種處理24株番茄幼苗[12]。3周后調(diào)查番茄發(fā)病情況，番茄枯萎病參照張素平的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[13]，病情指數(shù)參照宗兆鋒和康振生[14]的計(jì)算方法。根據(jù)發(fā)病等級(jí)計(jì)算病情指數(shù)和發(fā)病率，并在各處理番茄幼苗葉片取樣，進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)測(cè)定。

病情指數(shù)(%)=∑(各級(jí)病株數(shù)×相應(yīng)病級(jí))/(總株數(shù)×最高病級(jí))×100%。

發(fā)病率(%)=該處理發(fā)病植株數(shù)/該處理植株總數(shù)×100%。

1.5 防治試驗(yàn)中葉片相關(guān)指標(biāo)觀測(cè)

1.5.1 葉綠素?zé)晒鈪?shù)利用調(diào)制葉綠素?zé)晒獬上裣到y(tǒng)(德國(guó) WALZ,IMAG-MAX/L)測(cè)定葉綠素?zé)晒鈪?shù)，測(cè)量前將番茄幼苗葉片暗適應(yīng)15 min，隨后對(duì)光合系統(tǒng) Ⅱ(PSⅡ)最大光化學(xué)效率(Fv/Fm)、非光化學(xué)淬滅系數(shù)(non-photochemical quenching, NPQ)、光化學(xué)淬滅系數(shù)(qP)和表觀光合電子傳遞速率(apparent photosynthetic electron transport rate, ETR)進(jìn)行測(cè)定，每一處理分別選取6株番茄相同部位的葉片，每一葉片避開(kāi)葉脈隨機(jī)選取3個(gè)測(cè)定點(diǎn)。

1.5.2 抗病性相關(guān)物質(zhì)和酶活性對(duì)防治試驗(yàn)各處理的番茄幼苗葉片取樣，進(jìn)行過(guò)氧化氫(H2O2)含量、過(guò)氧化氫酶(CAT)、過(guò)氧化物酶(POD)和超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測(cè)，每種檢測(cè)重復(fù)3次，檢測(cè)方法均按照蘇州科銘生物技術(shù)有限公司的試劑盒說(shuō)明書(shū)操作步驟進(jìn)行測(cè)定。

1.5.3 水楊酸和茉莉酸含量及相關(guān)基因表達(dá)量對(duì)防治試驗(yàn)各處理的番茄幼苗葉片取樣，定量測(cè)定植物內(nèi)源激素水楊酸(SA)和茉莉酸(JA)含量，每種測(cè)定重復(fù)3次，本試驗(yàn)由南京瑞源公司采用液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS/ MS)方法測(cè)定分析。

同時(shí)，對(duì)上述材料提取RNA，反轉(zhuǎn)錄成 cDNA，進(jìn)行qRT-PCR表達(dá)量分析，每個(gè)反應(yīng)3個(gè)重復(fù)，相對(duì)表達(dá)量的計(jì)算方法采用2-ΔΔCT法，將目標(biāo)基因的表達(dá)量與內(nèi)參基因[15]的信號(hào)進(jìn)行歸一化。利用引物設(shè)計(jì)軟件Primer5對(duì)SA與JA合成及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)基因設(shè)計(jì)引物，引物設(shè)計(jì)如表1所示。

表1 引物名稱及序列Table 1 Primer name and sequence

1.6 數(shù)據(jù)處理與分析

使用Excel進(jìn)行數(shù)據(jù)整理，并利用SPSS對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)與顯著性分析，使用GraphPad Prism 8進(jìn)行繪圖，表型觀察拍照使用佳能相機(jī)，后期用Photoshop進(jìn)行圖片處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 擬康寧木霉T-51菌株對(duì)尖孢鐮刀菌的抑制作用

平板對(duì)峙試驗(yàn)顯示，與對(duì)照相比，同一PDA平板上轉(zhuǎn)接的T-51菌株隨著時(shí)間的推移，快速占據(jù)生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)和空間，并且顯著限制尖孢鐮刀菌菌絲擴(kuò)展(圖1, Ⅰ)。統(tǒng)計(jì)分析對(duì)峙培養(yǎng)7 d的2種菌的生長(zhǎng)半徑，發(fā)現(xiàn)T-51菌株顯著抑制了尖孢鐮刀菌的生長(zhǎng)直徑(圖1, Ⅱ)。培養(yǎng)后期木霉菌可在尖孢鐮刀菌的菌落上生長(zhǎng)，并逐漸覆蓋其生長(zhǎng)的周邊區(qū)域；從共培養(yǎng)平板中尖孢鐮刀菌菌絲生長(zhǎng)區(qū)域取下一塊菌餅轉(zhuǎn)接到新的PDA培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)3 d，觀察鑒定培養(yǎng)皿中生長(zhǎng)的是T-51菌株(圖1, Ⅲ)。說(shuō)明與T-51平板對(duì)峙后的尖孢鐮刀菌已沒(méi)有生長(zhǎng)活性，T-51對(duì)尖孢鐮刀菌有顯著抑制作用。

2.2 擬康寧木霉T-51菌株抑制尖孢鐮刀菌的最適溫度和pH值

為探究擬康寧木霉T-51菌株有效抑制尖孢鐮刀菌的最適溫度和pH，進(jìn)行了不同溫度和pH下的平板對(duì)峙試驗(yàn)(圖2)。其中，不同溫度環(huán)境下T-51菌株和尖孢鐮刀菌的對(duì)峙培養(yǎng)結(jié)果(圖2, Ⅰ)顯示，隨著溫度的升高，各時(shí)期T-51菌株對(duì)尖孢鐮刀菌的抑制率均呈現(xiàn)先升高后下降趨勢(shì)，并均在環(huán)境溫度為20 ℃時(shí)達(dá)到最高，且與同期其他溫度處理存在顯著差異；隨著處理時(shí)間的增加，各溫度處理的尖孢鐮刀菌的抑制率均逐漸增加，在處理第7天時(shí)分別達(dá)到38.65%、63.56%、57.26%、43.13%和15.17%。這可能與擬康寧木霉T-51菌株和尖孢鐮刀菌各自生長(zhǎng)的最適溫度有關(guān)。綜合分析認(rèn)為，T-51菌株在20 ℃～25 ℃范圍內(nèi)對(duì)尖孢鐮刀菌有較顯著的抑制效果。

另外，T-51菌株和尖孢鐮刀菌在不同pH培養(yǎng)基上對(duì)峙試驗(yàn)結(jié)果(圖2, Ⅱ)表明，在培養(yǎng)基不同酸堿度環(huán)境下，T-51菌株對(duì)尖孢鐮刀菌抑制率變化趨勢(shì)與溫度處理相似，但變化幅度不如溫度處理間大；其中，T-51菌株對(duì)尖孢鐮刀菌在pH為5-11范圍內(nèi)均有抑制效果，在處理7 d時(shí)抑制率分別是46.45%、63.53%、56.85%和54.06%，且處理間差異均達(dá)到顯著水平。這說(shuō)明T-51菌株在不同酸堿環(huán)境下均有較好的抑菌效果，并以pH為7時(shí)抑菌率顯著較高。

2.3 擬康寧木霉T-51菌株對(duì)番茄苗期枯萎病的防治效果

不同處理的番茄幼苗生長(zhǎng)3周后出現(xiàn)明顯的表型差異，尖孢鐮刀菌孢子液處理的番茄幼苗莖基部皺縮，葉片由上至下逐漸發(fā)黃枯萎；經(jīng)混合孢子液處理的番茄植株無(wú)明顯的感病癥狀，植株生長(zhǎng)狀態(tài)與對(duì)照組的番茄幼苗無(wú)顯著差異；浸泡T-51孢子液的番茄植株長(zhǎng)勢(shì)健壯，葉色深綠、莖部粗壯、株高較高(圖3, Ⅰ)。

進(jìn)一步統(tǒng)計(jì)分析各處理番茄幼苗的發(fā)病情況(圖3, Ⅱ、Ⅲ)發(fā)現(xiàn)，清水處理組和T-51處理組的番茄植株發(fā)病率均是0；單獨(dú)接種尖孢鐮刀菌的番茄幼苗發(fā)病情況嚴(yán)重，發(fā)病率達(dá)83.33%，病情指數(shù)高達(dá)81.25%； T-51菌株與尖孢鐮刀菌混合孢子液處理組病情指數(shù)降至13.54%，發(fā)病率降低為12.5%，與單獨(dú)接種病原菌組差異顯著，相對(duì)防效是87.5%。以上結(jié)果表明T-51能夠有效抑制尖孢鐮刀菌，降低番茄枯萎病的發(fā)病率和病情指數(shù)，提高植株抗病性。

2.4 擬康寧木霉T-51菌株對(duì)番茄苗期生理生化指標(biāo)的影響

首先，葉綠素?zé)晒獗硇头治鼋Y(jié)果顯示，尖孢鐮刀菌處理組番茄葉片明顯感病，混合孢子液處理組番茄葉片弱感病，對(duì)照組和T-51孢子液處理組的番茄葉片無(wú)明顯感病狀態(tài)(圖4, Ⅰ)。同時(shí)，單施尖孢鐮刀菌、施加混合孢子液、清水處理和單施T-51處理的番茄葉片葉綠素?zé)晒鈪?shù)PSⅡ最大光化學(xué)效率(Fv/Fm)、表觀光合電子傳遞速率(ETR)和光化學(xué)淬滅系數(shù)(qP)呈現(xiàn)依次遞增趨勢(shì)，而非光化學(xué)淬滅系數(shù)(NPQ)呈現(xiàn)依次遞減趨勢(shì)；施加混合孢子液處理組番茄葉片的Fv/Fm、ETR和qP與尖孢鐮刀菌處理組相比分別顯著提高了22.41%、27.19%和39.21%，而其NPQ卻顯著降低了34.54%，幾乎恢復(fù)到對(duì)照組水平(圖4, Ⅱ-Ⅴ)。結(jié)果表明，T-51菌株能夠有效抑制尖孢鐮刀菌的侵染，保護(hù)番茄光合系統(tǒng)免受破壞，顯著提高幼苗的抗病性和光合能力。

其次，由圖5可知，單施尖孢鐮刀菌孢子液的番茄葉片中H2O2含量顯著高于其他3種處理，施加混合孢子液處理組H2O2含量稍低于對(duì)照，單施T-51孢子液處理葉片中H2O2含量最低并顯著低于對(duì)照；與清水對(duì)照相比，單施尖孢鐮刀菌孢子液的番茄葉片中CAT和SOD活性顯著降低，而其POD活性顯著增加，施加混合孢子液和單施T-51孢子液處理的CAT、POD活性顯著增加，而SOD活性無(wú)顯著變化；與單施尖孢鐮刀菌孢子液處理組相比，施加混合孢子液和單施T-51孢子液的番茄葉片的CAT、POD和SOD活性均顯著升高，其中混合孢子液處理組酶活分別是尖孢鐮刀菌處理組的2.58倍、1.64倍和1.16倍?？梢?jiàn)，T-51能夠顯著提高番茄植株體內(nèi)的抗氧化物酶的活性，清除過(guò)量活性氧，提高植株抗枯萎病能力。

2.5 擬康寧木霉T-51菌株對(duì)番茄植株內(nèi)水楊酸和茉莉酸含量及相關(guān)基因表達(dá)的影響

如圖6顯示，與對(duì)照相比，尖孢鐮刀菌處理組番茄幼苗葉片中水楊酸(SA)含量顯著大幅升高，而茉莉酸(JA)含量卻顯著降低，混合孢子液和單施T-51孢子液處理組番茄葉片中的SA和JA含量均有顯著升高；與單施尖孢鐮刀菌孢子液處理相比，混合孢子液處理和單施T-51孢子液處理番茄葉片中SA含量顯著降低，而其JA含量顯著升高(圖6,Ⅰ、Ⅱ)。

以上結(jié)果表明，T-51菌株能有效觸發(fā)番茄幼苗體內(nèi)防御系統(tǒng)，引起激素含量顯著變化，從而提高番茄幼苗的抗病性。

同時(shí)，SA信號(hào)通路和JA合成的關(guān)鍵基因表達(dá)分析結(jié)果顯示，與對(duì)照相比，單獨(dú)尖孢鐮刀菌孢子液、混合孢子液、單獨(dú)T-51孢子液處理的番茄幼苗SA信號(hào)通路上的PR1和TGA2基因表達(dá)量都顯著上調(diào)，并均以單施尖孢鐮刀菌的番茄幼苗上調(diào)幅度最大，顯著高于其余兩處理(圖7, Ⅰ、Ⅱ)。同時(shí)，單施尖孢鐮刀菌孢子液番茄幼苗JA合成基因LoxD的表達(dá)量相比于對(duì)照組顯著下調(diào)，而混合孢子液處理組和單獨(dú)T-51菌株處理組中該基因表達(dá)量均顯著上調(diào)(圖7, Ⅲ)。即番茄幼苗中SA信號(hào)通路和JA合成關(guān)鍵基因的表達(dá)與其激素含量變化趨勢(shì)結(jié)果一致。由此可見(jiàn)，擬康寧木霉T-51可以調(diào)節(jié)番茄植株內(nèi)水楊酸和茉莉酸相關(guān)基因表達(dá)，調(diào)控內(nèi)源激素含量變化，以抵抗尖孢鐮刀菌病原菌的侵染。

3 討 論

木霉菌生防作用機(jī)制是多方面的，其對(duì)致病菌的重寄生作用是防治病原菌的主要機(jī)制之一[16]；另外木霉菌與植物互作改變了植物基因表達(dá)水平，使植物獲得了對(duì)病害和逆境的抗性[5,17]；同時(shí)，木霉與植物共生時(shí)產(chǎn)生的次生代謝物不僅能誘導(dǎo)植物抗性，還參與對(duì)植物碳水化合物代謝和植物生長(zhǎng)發(fā)育的調(diào)控[18-21]；木霉還可以改變植物體內(nèi)源激素SA和JA的含量從而應(yīng)答病原菌的入侵[22]，誘導(dǎo)番茄體內(nèi)抗病基因表達(dá)，激活番茄誘導(dǎo)系統(tǒng)抗性(Induced Systemic Resistance, ISR)，從而對(duì)番茄枯萎病產(chǎn)生防御能力[23]。目前，利用木霉防治作物枯萎病的研究已有較多報(bào)道，主要集中在哈茨木霉、棘孢木霉[24]和綠色木霉[25]等木霉，但有關(guān)擬康寧木霉生防枯萎病的報(bào)道還相對(duì)較少。本研究利用擬康寧木霉T-51菌株防治番茄枯萎病，其生防效果顯著，并在生理、激素和基因水平均有所體現(xiàn)。

本研究通過(guò)平板對(duì)峙試驗(yàn)和苗期接種試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)擬康寧木霉T-51菌株對(duì)引起枯萎病的尖孢鐮刀菌生長(zhǎng)有顯著的抑制效果，并且在環(huán)境溫度20 ℃、pH為7～9時(shí)對(duì)致病菌的抑制效果顯著，說(shuō)明T-51對(duì)酸堿環(huán)境適應(yīng)能力強(qiáng)，并且更適用于中低溫環(huán)境，這一特點(diǎn)更有利于T-51應(yīng)用于實(shí)際栽培生產(chǎn)中番茄枯萎病病害防治。

首先，葉綠素?zé)晒夂糠从沉酥参锕夂献饔玫膹?qiáng)弱[26]，宋明霞等[27]研究表明綠色木霉與枯草芽孢桿菌混合菌液能夠激活番茄光合系統(tǒng)活性，提高光合效率。本試驗(yàn)中，擬康寧木霉T-51菌株通過(guò)顯著提高番茄幼苗葉片葉綠素?zé)晒鈪?shù)Fv/Fm、ETR和qP的同時(shí)顯著降低NPQ，有效減緩尖孢鐮刀菌對(duì)番茄葉片中PSⅡ的破壞，從而提高植株葉片的光合能力，保障植株正常進(jìn)行光化學(xué)能量轉(zhuǎn)化。

同時(shí)，植物抗氧化酶如 SOD、POD、CAT 等活性與植物抗病性是正相關(guān)關(guān)系，而H2O2含量與植物抗病性呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)關(guān)系。木霉菌能夠誘導(dǎo)植物抗病相關(guān)防御酶活性發(fā)生變化，增強(qiáng)植物體的抗病防御能力[28]?；钚匝鹾亢涂寡趸锩富钚允欠从持参锸苊{迫和抗逆能力的重要指標(biāo)。本研究中T-51菌株處理可以顯著提高番茄植株體內(nèi)防御性酶CAT、POD和SOD活性，降低H2O2含量。H2O2含量越高，氧化脅迫程度越高，對(duì)植物體內(nèi)DNA、蛋白質(zhì)和細(xì)胞器的損傷越大；而POD、SOD、CAT等抗氧化物酶的活性越高，則對(duì)活性氧的清除能力越強(qiáng)，抗逆能力越強(qiáng)。以上結(jié)果說(shuō)明T-51菌株通過(guò)提高防御性酶活性以抵抗病原菌侵染植株帶來(lái)的生物逆境脅迫，從而增強(qiáng)番茄植物抗病性。

另外，木霉菌株誘導(dǎo)番茄體內(nèi)抗病相關(guān)基因表達(dá)，激活番茄系統(tǒng)誘導(dǎo)抗性，從而對(duì)番茄枯萎病產(chǎn)生防御能力[17]。茉莉酸與水楊酸在植物抗病中處于不同的信號(hào)通路，SA途徑激發(fā)植物的系統(tǒng)獲得性抗病(systemic acquired resistanc, SAR)通路，而JA/ET信號(hào)通路激發(fā)的是植物誘導(dǎo)性抗病信號(hào)通路[22,29]。研究發(fā)現(xiàn)木霉可以激活植株體內(nèi)茉莉酸通路提高植物的抗病性[30]，哈茨木霉突變體Thc6對(duì)玉米葉斑病菌的抗病性研究，發(fā)現(xiàn)木霉通過(guò)誘導(dǎo)植物茉莉酸依賴性途徑增強(qiáng)植物的抗病性[8]。本試驗(yàn)通過(guò)測(cè)定與植物抗病性相關(guān)的兩個(gè)內(nèi)源植物激素SA和JA含量發(fā)現(xiàn)，當(dāng)單獨(dú)用尖孢鐮刀菌孢子液處理番茄材料時(shí)，其葉片中的SA含量顯著上調(diào)，JA含量顯著下調(diào)，而混合孢子液和單施T-51菌株處理的番茄葉片中SA、JA含量與對(duì)照相比均上調(diào)，但JA上調(diào)幅度較大。推測(cè)尖孢鐮刀菌侵染植株的過(guò)程中激活了番茄幼苗SAR信號(hào)通路，植株進(jìn)行自我保護(hù)；但SAR途徑不是木霉防治枯萎病的主要信號(hào)通路，擬康寧木霉T-51菌株主要是通過(guò)誘導(dǎo)番茄幼苗調(diào)控JA合成，激活植株ISR防御信號(hào)通路，從而防治番茄枯萎病。SA和JA相關(guān)基因表達(dá)水平的變化也證明了這一點(diǎn)。

綜上所述，本研究利用生理生化和分子生物學(xué)等手段，明確了擬康寧木霉T-51菌株對(duì)尖孢鐮刀菌引起的番茄枯萎病防治上具有顯著的生防效果，該菌株是對(duì)番茄枯萎病具有生防潛力的菌株，該工作為研發(fā)番茄枯萎病生物防治制劑提供了優(yōu)良菌株和可靠的理論依據(jù)。