鄧聰聰，左 麗，曠年玲，石玉祥

（河北工程大學(xué)生命科學(xué)與食品工程學(xué)院，河北邯鄲 056000）

植物性飼料添加劑逐漸成為養(yǎng)殖戶的首選，廣泛應(yīng)用于畜禽養(yǎng)殖，如中草藥、植物精油等[1-2]。在減抗、限抗的條件下，添加植物性飼料添加劑成為畜禽養(yǎng)殖業(yè)的關(guān)注點(diǎn)[3-5]。艾草又稱艾蒿，為菊科蒿屬，主要含有揮發(fā)油類、黃酮類、多糖類和三萜類等化學(xué)成分。

現(xiàn)代藥理研究顯示，艾草具有抗蟲、抗菌、抗病毒和抗癌等藥理作用[6-8]。隨著現(xiàn)代藥理學(xué)發(fā)展，艾草的更多藥理作用不斷被揭示，具有廣闊的應(yīng)用前景[9-12]?；诖?，本試驗(yàn)主要探究艾草對(duì)肉雞抗氧化、免疫功能以及腸道菌群的影響，以期為后期艾草相關(guān)研究及其在肉雞養(yǎng)殖中的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.2 試劑與儀器

主要試劑：普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（北京索萊寶生物科技有限公司）、MRS 培養(yǎng)基（北京索萊寶生物科技有限公司）、碳酸鈣（北京化工廠）、生理鹽水（四川科倫藥業(yè)股份有限公司）等。

主要儀器：滅菌鍋（廈門致微儀器有限公司）、分析天平（常州奧豪斯儀器有限公司）、恒溫培養(yǎng)箱（力辰科技有限公司）、無(wú)菌操作臺(tái)（蘇州凈化設(shè)備有限公司）、高速冷凍離心機(jī)（北京京立離心機(jī)有限公司）等。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)選用120 只120 日齡羅斯308 肉雞，隨機(jī)分為3組，公、母各半，每組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10只雞。采用全自動(dòng)3層籠養(yǎng)，常規(guī)飼養(yǎng)。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)Ⅰ組飼喂基礎(chǔ)日糧加2%艾草，試驗(yàn)Ⅱ組飼喂基礎(chǔ)日糧加4%艾草。試驗(yàn)期30 d，每日記錄飼喂情況和試驗(yàn)雞狀態(tài)。按照NRC（1994）營(yíng)養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制的玉米-豆粕型基礎(chǔ)日糧，其原料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平Tab.1 Composition and nutritional composition of basel diet

1.4 測(cè)定指標(biāo)及方法

試驗(yàn)結(jié)束后，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)挑選3 只肉雞，心臟采血，-20 ℃儲(chǔ)存，解剖取其盲腸，做好標(biāo)記放入液氮，轉(zhuǎn)至-80 ℃冰箱保存。

1.4.1 血清抗氧化指標(biāo)測(cè)定

血清樣品完全融化，測(cè)定丙二醛（MDA）含量與超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）的活性以及總抗氧化能力（T-AOC）等血清抗氧化指標(biāo)。按照試劑盒內(nèi)說(shuō)明書進(jìn)行操作，試劑盒購(gòu)自南京建成生物公司。

1.4.2 血清免疫指標(biāo)測(cè)定

血清樣品完全融化，測(cè)定白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素-2（IL-2）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）和免疫球蛋白M（IgM）含量等血清免疫指標(biāo)。按照試劑盒內(nèi)說(shuō)明書進(jìn)行操作，試劑盒購(gòu)自南京建成生物公司。

第一，企業(yè)應(yīng)該不斷弘揚(yáng)工匠精神。對(duì)于高職院?，F(xiàn)代學(xué)徒制而言，企業(yè)是其實(shí)施的主體，很大程度上做到了招生即招工，很多學(xué)生在的發(fā)展過(guò)程中，大多是在企業(yè)中度過(guò)的。所以，企業(yè)應(yīng)該加大對(duì)自身文化的宣傳，以保證可以有效提升學(xué)生的工匠精神。比如：企業(yè)可播放一些視頻以及紀(jì)錄片等，加大工匠精神的宣傳力度，保證學(xué)生能夠?qū)⒐そ尘竦暮x合理運(yùn)用的實(shí)際工作和生活中，保證在提升自身水平和工作效率的同時(shí)，還可以為企業(yè)創(chuàng)造很大的利益。[2]

1.4.3 腸道菌群測(cè)定

采用混合平板計(jì)數(shù)法進(jìn)行計(jì)數(shù)。

腸道總菌落計(jì)數(shù)：稱取一定量的盲腸內(nèi)容物，倍比稀釋，選擇10-6、10-7、10-8等3個(gè)濃度，每個(gè)濃度各吸取100 μL 接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，每個(gè)濃度3 個(gè)重復(fù)，37 ℃培養(yǎng)24 h，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。

乳酸菌計(jì)數(shù)：稱取一定量的盲腸內(nèi)容物，倍比稀釋，選擇10-6、10-7、10-8等3個(gè)濃度，每個(gè)濃度各吸取100 μL于無(wú)菌培養(yǎng)皿中，加入50～55 ℃含碳酸鈣的MRS培養(yǎng)基，混勻，每個(gè)濃度3個(gè)重復(fù)，凝固后37 ℃培養(yǎng)48 h，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，僅計(jì)數(shù)溶鈣圈明顯菌落。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析（One-way ANOVA），Duncan's 法進(jìn)行多重比較。結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 艾草對(duì)肉雞血清抗氧化指標(biāo)的影響（見表2）

由表2 可知，與對(duì)照組相比，各試驗(yàn)組肉雞血清T-AOC 提高，GSH-Px 和CAT 活性增加，MDA 的含量有所降低，但差異均不顯著（P＞0.05）。試驗(yàn)Ⅰ組肉雞血清中SOD活性顯著高于試驗(yàn)Ⅱ組（P＜0.05），但兩試驗(yàn)組與對(duì)照組相比差異均不顯著（P＞0.05）。

表2 艾草對(duì)肉雞血清抗氧化指標(biāo)的影響Tab.2 Effect of Artemisia argyi on serum antioxidant indexes of broilers

2.2 艾草對(duì)肉雞血清免疫指標(biāo)的影響（見表3）

由表3 可知，與對(duì)照組相比，各試驗(yàn)組肉雞血清IgG、IgA、IgM含量差異均不顯著（P＞0.05）。試驗(yàn)Ⅱ組肉雞血清IL-2含量高于對(duì)照組，但差異不顯著（P＞0.05）。試驗(yàn)Ⅱ組肉雞血清IL-1β、IL-6的含量顯著高于試驗(yàn)Ⅰ組（P＜0.05），但兩試驗(yàn)組與對(duì)照組相比差異均不顯著（P＞0.05）。

表3 艾草對(duì)肉雞血清免疫指標(biāo)的影響Tab.3 Effect of Artemisia argyi on serum immune indexes of broilers

2.3 艾草對(duì)肉雞腸道菌群的影響（見表4）

由表4可知，與對(duì)照組相比，各試驗(yàn)組肉雞盲腸的菌落總數(shù)和乳酸菌總數(shù)均顯著提高（P＜0.05）。試驗(yàn)Ⅱ組肉雞盲腸的菌落總數(shù)和乳酸菌總數(shù)均顯著高于試驗(yàn)Ⅰ組（P＜0.05）。

表4 艾草對(duì)肉雞腸道菌群的影響Tab.4 Effect of Artemisia argyi on intestinal flora of broilers單位：×108 CFU/mL

3 討論

3.1 艾草對(duì)肉雞血清抗氧化指標(biāo)的影響

當(dāng)機(jī)體受到病原菌入侵或呈亞健康狀態(tài)時(shí)，機(jī)體抗氧化能力減弱，出現(xiàn)氧化損傷[13]。抗氧化還原系統(tǒng)通過(guò)協(xié)調(diào)氧化與抗氧化之間的穩(wěn)定性，進(jìn)而降低自由基水平。當(dāng)抗氧化還原系統(tǒng)中各種酶的活性升高時(shí)，即可有效地抑制自由基的生成和制止脂質(zhì)過(guò)氧化。因此，SOD、T-AOC等指標(biāo)常應(yīng)用于評(píng)價(jià)抗氧化能力[14]。

張旭等[15]研究發(fā)現(xiàn)，在日糧中添加3% 艾草粉顯著提高了京粉1 號(hào)蛋雞血清CAT、GSH 的活性，增強(qiáng)了機(jī)體抗氧化能力。趙飛[16]在日糧中添加艾蒿水提物，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，肉仔雞血清中MDA 含量顯著降低，各艾蒿水提物添加組肉雞的總抗氧化能力均有不同程度的升高。本試驗(yàn)結(jié)果與前人研究結(jié)論基本一致，表明在日糧中添加艾草可提高肉雞血清中抗氧化能力，改善抗氧化功能。

3.2 艾草對(duì)肉雞血清免疫指標(biāo)的影響

免疫功能在維護(hù)動(dòng)物機(jī)體健康的方面發(fā)揮重要作用，而血清中的免疫球蛋白不僅能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生體液免疫，還可抵制外界病原菌的入侵，提高機(jī)體免疫能力[2]。免疫球蛋白與抗原相結(jié)合，參與體液免疫，其含量直接反應(yīng)機(jī)體免疫能力的強(qiáng)弱，主要包括IgG、IgA、IgM、免疫球蛋白E（IgE）等[17]。研究表明，禽類的免疫球蛋白有3種，即IgG、IgA、IgM[18]。IgG 在免疫應(yīng)答中起到激活補(bǔ)體、中和多種毒素的作用。IgA 在正常血清中的含量?jī)H次于IgG，分為血清型及分泌型，分泌型IgA是機(jī)體黏膜局部抗感染免疫的主要抗體。IgM是免疫應(yīng)答中首先分泌的抗體，主要作用為防止菌血癥。

炎性因子也是免疫功能表現(xiàn)的一個(gè)類型。其中IL-2由Ⅰ型免疫細(xì)胞因子分泌，參與細(xì)胞免疫；IL-6 具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫應(yīng)答和誘導(dǎo)細(xì)胞生長(zhǎng)分化的作用；IL-1β 在免疫應(yīng)答和組織修復(fù)中起到重要作用，能夠介導(dǎo)多種炎癥反應(yīng)。曹振興等[19]研究發(fā)現(xiàn)，在日糧中添加艾蒿粉可提高肉仔雞血清中IgG、IgA、IgM的含量。Yang等[20]研究發(fā)現(xiàn)，在日糧中添加艾蒿黃酮可作為一種天然免疫調(diào)節(jié)劑，改善肉雞生長(zhǎng)性能，提高免疫功能。Zhang等[21]研究發(fā)現(xiàn)，艾蒿多糖可促進(jìn)免疫球蛋白（IgG 和IgM）、細(xì)胞因子（IL-1β 和IL-6）產(chǎn)生，對(duì)肉雞外周血白細(xì)胞起到調(diào)節(jié)作用，進(jìn)而調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能。

3.3 艾草對(duì)肉雞腸道菌群的影響

腸道菌群是一個(gè)復(fù)雜的微生物群落，其代謝能力是肝臟的100倍。腸道菌群一般在人和動(dòng)物出生后不久即可定植，其結(jié)構(gòu)受遺傳、飲食、年齡和健康狀況的影響[22-24]。有益的菌群可通過(guò)增加腸道有益菌落數(shù)量和限制病原體侵入，維護(hù)腸道健康，參與代謝，如乳酸菌[25]。有研究發(fā)現(xiàn)，乳酸菌不僅能提高肉雞生產(chǎn)性能，還能夠穩(wěn)定腸道微生態(tài)，提高消化道免疫系統(tǒng)[26]。江陽(yáng)[27]研究發(fā)現(xiàn)，在日糧中添加不同劑量的艾蒿提純物飼喂肉仔雞可不同程度地增加盲腸中乳酸菌數(shù)量，改善菌群結(jié)構(gòu)。牛壯[28]研究表明，添加不同劑量的艾蒿多糖可顯著降低盲腸大腸桿菌，并提高乳酸菌的數(shù)量。

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，盲腸中菌落總數(shù)以及乳酸菌數(shù)量隨艾草劑量增加而增加，與前人研究結(jié)論一致，且本試驗(yàn)條件下以艾草添加量為4%效果最好。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，在肉雞日糧中添加艾草可提高羅斯308肉雞血清抗氧化能力，增強(qiáng)了肉雞免疫力，改善了腸道菌群組成。在日糧中添加2%艾草對(duì)肉雞血清抗氧化指標(biāo)和免疫指標(biāo)影響較大；添加2%、4% 艾草對(duì)盲腸菌落總數(shù)和益生菌總數(shù)具有顯著影響，且以添加4%艾草影響最大。