化立凡，劉兆陽(yáng)，李天平，劉鳳軍*

（1.河南科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，河南 洛陽(yáng) 471000；2.洛陽(yáng)王城動(dòng)物園，河南 洛陽(yáng) 471000）

圈養(yǎng)野生動(dòng)物的健康問(wèn)題日益凸顯，有袋目動(dòng)物的健康問(wèn)題困擾著全世界范圍內(nèi)的動(dòng)物園[1]。赤頸袋鼠（rednecked wallaby）屬哺乳綱有袋目，在世界各地的動(dòng)物園中普遍展出，是澳大利亞的特有物種[2]，恒齒公式為I 3/1、C 0/0、P 2/2和M 4/4[3-4]。巨足動(dòng)物進(jìn)行性牙周?。╩acropod progressive periodontal disease，MPPD）又稱(chēng)“粗頜病”，具有發(fā)病率、病死率、復(fù)發(fā)率高的特點(diǎn)，一直是全球圈養(yǎng)巨足動(dòng)物飼養(yǎng)的難題。MPPD侵害口腔牙齒健康的同時(shí)，還會(huì)引起腸梗阻、腸套疊、腸破裂和腹膜炎等多種并發(fā)癥[5-7]。MPPD在巨足動(dòng)物中的危害非常嚴(yán)重，各種類(lèi)的袋鼠均受此疾病危害[8-10]。在世界范圍內(nèi)，MPPD感染細(xì)菌種類(lèi)繁多，且多數(shù)細(xì)菌對(duì)常見(jiàn)抗生素已經(jīng)產(chǎn)生耐藥性[11-17]。因此，致病菌的分離、培養(yǎng)、鑒定和耐藥性試驗(yàn)以及了解、掌握致病菌對(duì)機(jī)體產(chǎn)生的病理變化至關(guān)重要。

普通變形桿菌屬于革蘭氏陰性桿菌，在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上形成同心圓樣、厚薄交替的波紋狀菌苔，具有“遷徙生長(zhǎng)”的現(xiàn)象[18-20]。目前尚無(wú)普通變形桿菌致赤頸袋鼠進(jìn)行性牙周病的報(bào)道。本研究對(duì)象為洛陽(yáng)王城動(dòng)物園飼養(yǎng)6只患MPPD的赤頸袋鼠。自2019年3月起，洛陽(yáng)王城動(dòng)物園的飼養(yǎng)員發(fā)現(xiàn)一只赤頸袋鼠出現(xiàn)目光呆滯、嚴(yán)重消瘦，食欲廢絕、嚴(yán)重流涎等，見(jiàn)圖1。使用頭孢曲松鈉進(jìn)行治療，但于3 d后死亡。兩年時(shí)間內(nèi)，共有8只赤頸袋鼠陸續(xù)發(fā)生牙周病，總發(fā)病率為80%；其中兩只患病袋鼠使用傳統(tǒng)治療方法，即常規(guī)皮下注射廣譜抗生素治療，全部死亡，治愈率為0。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

診斷所需材料包括：無(wú)菌手套、無(wú)菌注射器、止血鉗、牙挺、止血棉、紗布、無(wú)菌生理鹽水；E7239X數(shù)字化X光機(jī)（佳能）、喉鏡（江蘇維樂(lè)醫(yī)療器械科技有限公司）。

藥敏試驗(yàn)所需材料包括：無(wú)菌注射器、無(wú)菌采樣管、革蘭氏染色劑；光學(xué)顯微鏡（上海徠卡儀器有限公司）；全自動(dòng)微生物鑒定及藥敏檢測(cè)分析儀、鑒定用生化試劑和藥敏試劑（西門(mén)子MicroScan WalkAway96 Plus）；血平板培養(yǎng)基、血培養(yǎng)箱、恒溫培養(yǎng)箱、無(wú)菌鹽水。

1.2 診斷方法

通過(guò)觸診、視診以及影像學(xué)技術(shù)，分析來(lái)自洛陽(yáng)王城動(dòng)物園6只患有MPPD疾病的赤頸袋鼠診斷疾病發(fā)展程度，根據(jù)牙齒、軟組織受累程度判定，將該疾病分為輕癥和重癥。輕癥為小面積的潰瘍、組織壞死，輕度組織機(jī)化和包囊形成，3顆以下牙齒壞死、脫落以及良好的預(yù)后效果；重癥為大范圍的潰瘍、組織壞死，大面積、多部位的組織機(jī)化和包囊形成，3顆及以上的牙齒壞死、脫落以及較差的預(yù)后甚至死亡。

1.3 治療方法

治療方案分為4種方式，分別為：手術(shù)清創(chuàng)治療、局部性治療、藥物注射全身性治療以及飼料調(diào)整。

手術(shù)清創(chuàng)治療包括對(duì)壞死軟組織及異物清除，壞死牙齒拔除等操作。局部治療包括使用甲硝唑氯化鈉注射液（吉林省廣春藥業(yè)有限公司）或5%過(guò)氧化氫溶液（南昌白云藥業(yè)有限公司）對(duì)口腔內(nèi)壞死部位進(jìn)行清洗，使用復(fù)方氯己定地塞米松膜（西安康華藥業(yè)有限公司）貼于口腔潰瘍處，每次2~4片。

藥物注射全身治療包括在袋鼠后肢皮下注射硫酸慶大霉素注射液（0.4萬(wàn)單位/kg，上海全宇生物科技動(dòng)物藥業(yè)有限公司）以及美洛昔康注射液（0.2 mg/kg，齊魯動(dòng)物保健品有限公司），通過(guò)袋鼠尾靜脈輸入葡萄糖、氯化鈉注射液（5%葡萄糖以及0.9%氯化鈉，上海百特醫(yī)療用品有限公司）以及復(fù)方氯化鈉溶液（0.03%KCl、0.033%CaCl2、0.85%NaCl，吉林省廣春藥業(yè)有限公司）。

根據(jù)診斷結(jié)果，所有袋鼠進(jìn)行一次手術(shù)清創(chuàng)治療，若干次局部性治療和藥物注射全身性治療。自袋鼠恢復(fù)食欲開(kāi)始，對(duì)其飼料進(jìn)行調(diào)整。原飼料中干枯、堅(jiān)硬的飼草，易粘牙的窩頭以及糖分過(guò)高的水果等停止飼喂，改為新鮮購(gòu)買(mǎi)的芹菜、茼蒿、生菜、莜麥菜、蘿卜、雞蛋以及苜蓿草。

1.4 死亡赤頸袋鼠剖檢

剖檢前，對(duì)死亡赤頸袋鼠進(jìn)行稱(chēng)重，觀察其外觀有無(wú)異常，被毛光澤、潔凈程度，天然孔道有無(wú)分泌物。剖檢時(shí)，從腹腔正中線(xiàn)沿大體長(zhǎng)軸依次切開(kāi)皮膚、腹壁、腹膜，依次取出腹腔臟器觀察、剖檢；再沿胸骨剖開(kāi)胸腔，觀察心臟和肺臟；最后對(duì)面部進(jìn)行剖檢。

1.5 細(xì)菌分離、培養(yǎng)、鑒定、藥敏試驗(yàn)

細(xì)菌培養(yǎng)按照操作規(guī)范，采集發(fā)病袋鼠的口腔分泌物，在無(wú)菌環(huán)境下，采用滅菌接種環(huán)蘸取采集到的唾液樣本，接種于血平板培養(yǎng)基（添加10%脫纖維牛血），在37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。24 h后觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況，染色，使用油鏡放大1 000倍進(jìn)行觀察，再使用全自動(dòng)微生物鑒定/藥敏檢測(cè)分析儀進(jìn)行鑒定和藥敏試驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 6只患牙周病赤頸袋鼠的診斷結(jié)果（見(jiàn)圖2）

經(jīng)過(guò)診斷，該群6只患牙周病的赤頸袋鼠中，4只袋鼠為輕癥，表現(xiàn)為包括牙齦紅腫（4/4）、牙齦潰爛（4/4）、上臼齒壞死脫落（1/4）、下臼齒壞死脫落（4/4）、上門(mén)齒壞死脫落（2/4）、下門(mén)齒壞死脫落（1/4）、下頜骨骨髓炎導(dǎo)致骨質(zhì)增生（1/4）、下頜組織機(jī)化、鈣化、包囊形成（1/4）以及輕度的下唇組織分離。

由圖2（a）可知，箭頭所指右側(cè)下臼齒齒齦潰瘍部位，有大范圍的潰爛和出血，可見(jiàn)前臼齒的牙菌斑；由圖2（b）可知，箭頭所指下門(mén)齒齒齦潰瘍部位，牙周軟組織已壞死、腐爛，散發(fā)出惡臭氣味；由圖2（d）可知，拔除的壞死牙齒，包括3顆臼齒和1顆前臼齒；由圖2（e）可知，箭頭所指下頜部機(jī)化的包囊，質(zhì)地堅(jiān)硬，無(wú)滲出；由圖2（f）可知，箭頭所指通過(guò)DR拍攝的下頜包囊。

另外兩只袋鼠為重癥，重癥袋鼠的3顆以上的前臼齒和臼齒發(fā)生壞死。其中一只重癥袋鼠為白化赤頸袋鼠，表現(xiàn)為下頜瘺道、嚴(yán)重的組織及下臼齒鈣化，見(jiàn)圖2（g）、圖2（h）；且因該側(cè)上臼齒長(zhǎng)期嚴(yán)重異常磨損，導(dǎo)致上臼齒變得鋒利，見(jiàn)圖2（i）。

另一只重癥袋鼠為原色赤頸袋鼠，表現(xiàn)為上頜組織機(jī)化、鈣化、包囊形成，嚴(yán)重的眼瞼組織機(jī)化、包囊形成，嚴(yán)重的下唇組織壞死、潰瘍、脫離，無(wú)法復(fù)原，見(jiàn)圖2（j）、圖2（k）；患病袋鼠的下門(mén)齒長(zhǎng)期暴露于空氣中，并伴有嚴(yán)重的下頜組織機(jī)化、包囊形成，且已有蠅蛆在壞死部位生出，見(jiàn)圖2（l）。

圖2 6只患牙周病赤頸袋鼠的檢查結(jié)果Fig.2 Examination result of six red-necked wallabieswith MPPD

2.2 6只患牙周病赤頸袋鼠的治療結(jié)果

通過(guò)治療，4只輕癥赤頸袋鼠和一只重癥白化赤頸袋鼠痊愈，而另一只重癥原色赤頸袋鼠治療無(wú)效死亡，治愈率為83.3%，經(jīng)治療后恢復(fù)采食的赤頸袋鼠見(jiàn)圖3。

圖3 經(jīng)治療后恢復(fù)采食的赤頸袋鼠Fig.3 Red-necked wallabiesrecovered after treatment

輕癥的赤頸袋鼠中，一只輕癥袋鼠經(jīng)過(guò)1次手術(shù)清創(chuàng)治療、1次局部性治療和3次藥物注射全身性治療；第3 d逐漸恢復(fù)食欲、飲欲，口腔內(nèi)異味消散；第7 d恢復(fù)正常采食，流涎停止。另3只輕癥袋鼠經(jīng)過(guò)一次手術(shù)清創(chuàng)治療、5次局部性治療以及7次藥物注射全身性治療，口腔內(nèi)壞死組織徹底清除，壞死牙齒拔除；第5 d逐漸恢復(fù)食、飲欲，但僅能取食纖細(xì)、柔軟的食物，口腔內(nèi)無(wú)再生壞死組織，異味消散，流涎停止，第10 d恢復(fù)正常采食，下頜瘺道恢復(fù)。

重癥白化赤頸袋鼠經(jīng)過(guò)1次手術(shù)清創(chuàng)治療、10次局部性治療以及10次藥物注射全身性治療，口腔內(nèi)嚴(yán)重鈣化組織清除，壞死牙齒拔除，對(duì)牙齦進(jìn)行縫合；第5 d恢復(fù)食欲、飲欲，但僅能夠取食纖細(xì)、柔軟的食物；第10 d恢復(fù)正常采食，但由于長(zhǎng)期鈣化結(jié)節(jié)，上臼齒異常磨損，較難恢復(fù)。

上述5只袋鼠雖經(jīng)治療后痊愈，但由于壞死、脫落牙齒均為恒齒，故無(wú)法再生修復(fù)。

2.3 死亡袋鼠解剖結(jié)果（見(jiàn)圖4）

死亡的重癥赤頸袋鼠生前表現(xiàn)無(wú)異常，采食、飲水、排便、排尿均正常，被毛光澤、干凈，下頜部和右側(cè)下眼瞼腫脹。死亡當(dāng)日傍晚，突發(fā)呼吸急促，隨后倒地、抽搐、死亡，體重9.2 kg。對(duì)死亡赤頸袋鼠尸體解剖，解剖結(jié)果見(jiàn)圖4。

由圖4（a）~圖4（c）可知，該死亡赤頸袋鼠尸僵正常，血凝不良，血液呈黑色，體脂率較低；胃腸道內(nèi)有飼料，胃壁和腸管無(wú)出血，但胃壁和腸管變薄，內(nèi)有脹氣；由圖4（d）~圖4（e）可知，死亡袋鼠肝臟表面有出血點(diǎn)，且呈嚴(yán)重瘀血，肝臟切面內(nèi)流出的黑色瘀血；由圖4（f）~圖4（h）可知，肺臟質(zhì)地松軟、無(wú)彈性，有干酪樣組織結(jié)節(jié)和出血斑，腎臟有嚴(yán)重瘀血，心包膜內(nèi)有嚴(yán)重積液，為無(wú)色澄清液體；由圖4（i）可知，死亡袋鼠口腔內(nèi)潰瘍已痊愈，下頜部和下眼瞼有機(jī)化的結(jié)締組織形成的包囊，且已連通，與口腔形成瘺道。

2.4 細(xì)菌分離、培養(yǎng)及藥敏試驗(yàn)結(jié)果（見(jiàn)圖5、表1）

由圖5（a）可知，在血瓊脂平板培養(yǎng)基上可觀察到單個(gè)、扁平、圓形、濕潤(rùn)、中等大小的灰白色菌落。菌落邊緣整齊，有明顯的遷徙生長(zhǎng)現(xiàn)象，無(wú)溶血環(huán)，無(wú)特殊氣味。

由圖5（b）可知，該細(xì)菌呈球形和桿狀，兩端鈍圓，散在排列。根據(jù)全自動(dòng)微生物鑒定及藥敏檢測(cè)分析儀分析鑒定，該種細(xì)菌為普通變形桿菌（Proteusvulgaris）。

圖5 從患病袋鼠口腔分離到的細(xì)菌菌落形態(tài)及顯微鏡下形態(tài)Fig.5 Colonial morphology and microscopic morphology of bacteriaisolated from diseased wallabies'mouths

根據(jù)全自動(dòng)微生物鑒定及藥敏檢測(cè)分析儀分析鑒定，其藥敏試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。

由表1可知，從患病袋鼠口腔分離到的普通變形桿菌對(duì)3種抗生素敏感，分別為慶大霉素、亞胺培南、美羅培南；對(duì)3種抗生素中介，分別為替卡西林、頭孢哌酮、美滿(mǎn)菌素；該菌株對(duì)其余14種抗生素耐藥，分別為：氨芐西林、氨芐西林/舒巴坦、環(huán)丙沙星、頭孢曲松、頭孢吡肟、左氧氟沙星、哌拉西林、氯霉素、頭孢唑林、阿米卡星、頭孢西丁、頭孢呋辛、復(fù)方新諾明以及頭孢他啶。

表1 普通變形桿菌對(duì)20種抗生素的敏感性Tab.1 Sensitivity of Proteusvulgaris to 20 antibiotics

3 討論

對(duì)患有MPPD的赤頸袋鼠進(jìn)行外科手術(shù)治療非常有必要。在以往的治療中，頜骨塊狀病變的治療僅限于反復(fù)切開(kāi)、沖洗、引流和使用廣譜抗生素，以期最終組織肉芽化和傷口閉合[21]。然而，隨著時(shí)間的推移，上述方法并不可靠，未取出的壞死牙齒仍然會(huì)長(zhǎng)期刺激牙床，導(dǎo)致MPPD極易復(fù)發(fā)，重復(fù)的簡(jiǎn)單治療無(wú)法徹底解決問(wèn)題。有效的治療可以大大降低MPPD復(fù)發(fā)的概率。通過(guò)化學(xué)保定，可以將袋鼠的口腔打開(kāi)更大，獸醫(yī)可以更加清楚地看到患病部位。要做到徹底、全面地檢查口腔，去除包囊結(jié)節(jié)，將壞死的組織、牙齒和刺入軟組織內(nèi)的異物徹底清理干凈，才能夠使愈合更加迅速，預(yù)后更好。

有效地使用抗生素可大大提高治愈率，但使用了不適合的抗生素不僅會(huì)延誤病程，導(dǎo)致疾病惡化，還會(huì)增加機(jī)體代謝壓力。更換抗生素時(shí)，還要考慮藥物之間互相作用的效果。因此，細(xì)菌培養(yǎng)、鑒定和藥敏試驗(yàn)可以盡早、有效地幫助控制感染。在疾病早期，可采用局部抗菌和全身抗菌相結(jié)合的方法，盡早控制感染。在本治療過(guò)程中針對(duì)性地使用了硫酸慶大霉素注射液，獲得了很好的治療效果，并且未發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重的毒副作用。此外，局部使用抗菌藥物也是一個(gè)有效的方法[22]。局部應(yīng)用緩釋氯己定在臨床實(shí)踐中已被證明治療效果較好，且具有許多優(yōu)點(diǎn)[23]，能夠有效地降低牙齒疾病發(fā)生概率。本治療過(guò)程中，在口腔內(nèi)部使用了甲硝唑氯化鈉進(jìn)行大量沖洗，不僅可以沖洗掉壞死的組織，還可以殺滅口腔內(nèi)厭氧的病原微生物；之后再使用復(fù)方氯己定地塞米松膜能夠減輕牙周炎引起的疼痛，并且起到抗菌消炎的作用。

疼痛管理對(duì)降低應(yīng)激十分重要。野生動(dòng)物對(duì)疼痛的耐受性比較強(qiáng)，有時(shí)部分牙齒出現(xiàn)問(wèn)題，臨床上不會(huì)表現(xiàn)出很明顯的癥狀[5]。在治療過(guò)程中，盡可能地降低動(dòng)物承受的疼痛能夠有效減少不良刺激對(duì)其機(jī)體的有害應(yīng)激。美洛昔康屬于非甾體類(lèi)解熱鎮(zhèn)痛藥，可以選擇性抑制環(huán)氧化物酶COX-2，減輕軟組織炎性反應(yīng)產(chǎn)生的疼痛、腫脹[24-25]。本治療過(guò)程中，6只赤頸袋鼠均使用了美洛昔康注射液（1 mg/kg），有效地減輕了袋鼠的不安、恐懼和狂躁程度，并且有效地緩解口腔疼痛，盡早地恢復(fù)動(dòng)物采食，大大縮短了治療時(shí)長(zhǎng)。

本治療過(guò)程中飼料方案的調(diào)整對(duì)赤頸袋鼠牙周病的治療效果非常顯著。過(guò)于干枯、堅(jiān)硬的飼草會(huì)長(zhǎng)期對(duì)口腔黏膜和牙齦造成損傷，有時(shí)飼草會(huì)穿破牙齦，留置于口腔內(nèi)，造成感染。自2020年起，王城動(dòng)物園對(duì)該群赤頸袋鼠的飼料方案進(jìn)行了調(diào)整，停止飼喂過(guò)于干枯、堅(jiān)硬的飼草、雜糧窩頭、顆粒飼料、香蕉和蘋(píng)果等飼料，更換為苜蓿草、桑葉、榆葉、芹菜、茼蒿等新鮮的青綠飼料。結(jié)果表明，自飼料調(diào)整之后未出現(xiàn)袋鼠發(fā)病，發(fā)病率降低為0。有研究表明，不干凈的飲水、不均衡的飲食以及含有低粗、高糖飼料的軟食物和粗飼料顆粒會(huì)導(dǎo)致牙齦的傷害，是導(dǎo)致赤頸袋鼠進(jìn)行性牙周病的重要原因[26]。

變形桿菌廣泛存在于含有機(jī)物質(zhì)的污水、土壤、糞便以及爬行動(dòng)物、哺乳動(dòng)物、鳥(niǎo)類(lèi)等的腸道中，是一種人畜共患的條件致病菌[9]，血清型多達(dá)上百種，生存能力強(qiáng)，對(duì)動(dòng)物的危害很大。國(guó)內(nèi)外已有研究表明，變形桿菌能夠感染多種動(dòng)物，引起食物中毒、尿路感染和傷口感染而導(dǎo)致敗血癥[27]。本研究發(fā)現(xiàn)，普通變形桿菌導(dǎo)致赤頸袋鼠牙周病的同時(shí)，還會(huì)引起袋鼠敗血癥而死亡，其癥狀和剖檢病理變化與牛、豬、鵝、梅花鹿相似，包括精神萎靡不振、食欲減退、行動(dòng)遲緩、腸黏膜脫落、血液凝固不良、肺臟充血、瘀血和結(jié)節(jié)以及心包膜有淡黃色積液等。但赤頸袋鼠受到普通變形桿菌侵害時(shí)，并不會(huì)像其他動(dòng)物一樣表現(xiàn)出腹瀉、全身肌肉痙攣，口、鼻流出大量液體，胸腔積液或在短時(shí)間內(nèi)發(fā)生迅速死亡等情況，可能與該普通變形桿菌的毒力存在一定關(guān)聯(lián)。

4 結(jié)論

通過(guò)手術(shù)清創(chuàng)治療、局部性治療、藥物注射全身性治療以及飼料調(diào)整的方式可以有效地降低赤頸袋鼠牙周病的發(fā)病率、病死率和復(fù)發(fā)率。王城動(dòng)物園6只患MPPD赤頸袋鼠的病原微生物為普通變形桿菌，該菌對(duì)慶大霉素、亞胺培南和美羅培南敏感。