杜麗波，李金玉，張 曉，李永紅，潘衛(wèi)東，*

(1.貴州中醫(yī)藥大學(xué) 研究生院，貴州 貴陽(yáng) 550025；2.貴州省中國(guó)科學(xué)院天然產(chǎn)物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(貴州醫(yī)科大學(xué))，貴州 貴陽(yáng) 550014；3.南開(kāi)大學(xué) 化學(xué)學(xué)院，天津 300071；4.農(nóng)藥國(guó)家工程研究中心(天津)(南開(kāi)大學(xué))，天津 300071)

毛紅椿Toonaciliatavar.pubescens為楝科Meliaceae香椿屬Toona多年生喬木植物，主要分布于我國(guó)江西、云南、貴州、四川、湖南、廣西、廣東等低海拔至中海拔的山地密林或疏林中。因其素有“中國(guó)桃花心木”之稱(chēng)，是一種珍貴的藥材樹(shù)種，具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和開(kāi)發(fā)前景[1]，但對(duì)其藥用價(jià)值的挖掘很少吸引人們的注意。目前有關(guān)毛紅椿植物中化學(xué)成分及生物活性的報(bào)導(dǎo)相對(duì)較少，有少量文獻(xiàn)報(bào)道[2]從毛紅椿枝葉中分離純化得到部分香豆素、木脂素、萜類(lèi)及苯丙素類(lèi)等化合物。毛紅椿作為香椿屬植物，其中可能包含類(lèi)似香椿屬其他植物的化學(xué)成分[3]。此外，香椿屬植物的果實(shí)、枝葉、皮等在民間常用來(lái)治療痢疾、腸炎、出血等[4]?，F(xiàn)代藥理活性也表明該屬植物具有較好的生物活性，如從香椿屬植物滇紅椿中發(fā)現(xiàn)了具有較強(qiáng)抗炎及抗腫瘤的活性成分[5]；從香椿中分離得到了對(duì)多種癌細(xì)胞具有抑制作用的三萜[6]。最近，研究人員又從紅椿中分離得到一系列具有抗炎癥小體活性的化合物，部分化合物還可作為炎癥反應(yīng)疾病的潛在候選藥物[7]。

為進(jìn)一步尋找毛紅椿的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，并為香椿屬植物的后續(xù)開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)，本文對(duì)目前研究較少的毛紅椿皮進(jìn)行深入的化學(xué)成分及藥理活性研究，從其95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位分離鑒定了20個(gè)單體化合物，如圖1所示，分別為toonacilin(1)、odoratone(2)、bourjotinolone A(3)、dyvariabilin H(4)、piscidinol A(5)、piscidinol B(6)、3-episapelin A(7)、8(14),15-isopimaradiene-2α,3α,18-triol(8)、labd-13-ene-8α,15-diol(9)、nidorellol(10)、兒茶素(11)、1-linolenoylglycerol(12)、天師酸(13)、(-)-neoechinulin A(14)、aurantiamide acetate(15)、dibutylphthalate(16)、4,7-二甲氧基-5-甲基香豆(17)、東莨菪素(18)、(22E)-5a,8a-epidioxyergosta-6,22-dien-3b-ol(19)和β-谷甾醇(20)。其中化合物1～3、5～10、12～15和19均為首次從該植物中分離得到。抑菌活性研究表明：化合物1～4在50 mg/L對(duì)番茄早疫霉病菌A.solani、黃瓜灰霉病菌B.cinerea和辣椒疫霉病菌P.capsici等3種病原菌顯示出不同程度的抑制活性；化合物1表現(xiàn)出一定的廣譜抑菌活性，對(duì)3種病菌真菌均具有潛在的抑制活性；化合物4在50 mg/L對(duì)黃瓜灰霉病菌的抑制作用較強(qiáng)，抑制率達(dá)76.5%?？鼓[瘤活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：化合物2、3、5、7對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-23、人橫紋肌瘤細(xì)胞株A-673及人紅細(xì)胞白血病細(xì)胞株HEL有不同程度的抑制增殖活性，特別是化合物2和5對(duì)3種腫瘤細(xì)胞株顯示出選擇抑制活性。

圖1 化合物1～20的結(jié)構(gòu)

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

所用藥材于2019年9月采自貴州省興義市南盤(pán)江流域，由貴州省黔西南州林業(yè)科學(xué)研究所鄧朝義研究員鑒定為楝科香椿屬植物毛紅椿T.ciliatevar.pubescens的樹(shù)皮。植物標(biāo)本(PTC2019B)保存于貴州省中國(guó)科學(xué)院天然產(chǎn)物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

菌種：番茄早疫病菌A.solani、黃瓜灰霉病菌B.cinerea和辣椒疫霉病菌P.capsici由南開(kāi)大學(xué)農(nóng)藥國(guó)家工程研究中心提供。菌株：人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231、人橫紋肌瘤細(xì)胞株A-673及人紅細(xì)胞白血病細(xì)胞株HEL 由貴州省中國(guó)科學(xué)院天然產(chǎn)物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供。

柱層析硅膠(60～80目(粒徑178～250 μm)和300～400目(粒徑38～48 μm)，青島海洋化工廠(chǎng))；薄層層析硅膠GF254(粒徑75～150 μm，青島海洋化工廠(chǎng))；色譜用甲醇及乙腈(美國(guó)TEDIA天地試劑公司)。所用試劑除色譜純及純凈水外，均購(gòu)自上海泰坦科技股份有限公司。

1.2 主要儀器

Bruker Avance NEO 600 MHz 超導(dǎo)核磁共振儀(德國(guó)Bruker公司)；QE Focus 型串聯(lián)四極桿飛行時(shí)間液質(zhì)譜聯(lián)用儀(賽默飛世爾科技有限公司)；Agilent 1200高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫科技有限公司)；Eyela-1100型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(日本東京理化器械株式會(huì)社)；安捷倫ZORBAXSB-C18半制備柱色譜柱(250 mm×9.4 mm，5 μmol/L，美國(guó)安捷倫科技有限公司)；Milli-Q 超純水儀(Millipore公司)；多功能酶標(biāo)儀(Gene 公司)；Sephadex LH-20(Merck公司)。

1.3 提取與分離

取干燥粉碎后的毛紅椿樹(shù)皮25.0 kg，用95%乙醇(每次50 L)回流提取3次，每次4 h，合并提取液，減壓濃縮除去乙醇，乙酸乙酯萃取4次，合并乙酸乙酯萃取液，濃縮后得浸膏1.26 kg。取浸膏加適量甲醇溶解，用2.50 kg的硅膠(60～80目)拌樣，再經(jīng)硅膠(300～400 目)柱層析進(jìn)行梯度洗脫(石油醚-乙酸乙酯50∶1～1∶2，體積比，余同)。每次接餾分約1.20 L，將濃縮后的組分用薄層色譜(TLC)展開(kāi)，分別觀察組分在紫外燈下的熒光顯色和5%硫酸乙醇試液的顯色情況，合并相似組分，共獲得11個(gè)洗脫部位(Fr.A～Fr.K)。其中Fr.I部位經(jīng)中壓液相色譜梯度洗脫(甲醇-水30∶70～100∶0)，得到8個(gè)組分(Fr.I.1～Fr.I.8)。Fr.I.2組分經(jīng)過(guò)硅膠柱層析梯度洗脫(石油醚-丙酮40∶1～1∶1)，再經(jīng)HPLC半制備液相色譜分離(甲醇-水70∶30)后得到化合物1(75 mg)。Fr.I.3組分先后經(jīng)過(guò)硅膠柱梯度洗脫(氯仿-甲醇90∶1～1∶1)，Sephadex LH-20凝膠柱層析(氯仿-甲醇1∶1)后，再經(jīng)HPLC半制備液相色譜(乙腈-水35∶65)分離得到化合物2(43 mg)。組分Fr.I.4經(jīng)過(guò)硅膠柱層析梯度洗脫(石油醚-丙酮30∶1～1∶1)后進(jìn)一步重結(jié)晶純化得到化合物3(251 mg)和4(66 mg)。

Fr.B部位經(jīng)過(guò)反相中壓液相色譜梯度洗脫(甲醇-水30∶70～100∶0)，得到10個(gè)組分(Fr.B.1～Fr.B.10)。Fr.B.2組分經(jīng)過(guò)Sephadex LH-20凝膠柱層析(氯仿-甲醇1∶1)后得到9個(gè)小組分(Fr.B.2-1～Fr.B.2-9)，其中Fr.B.2-4進(jìn)一步經(jīng)HPLC半制備液相色譜(甲醇-水60∶40)純化得到化合物17(14 mg)、18(15 mg)和19(8 mg)。Fr.B.2-6經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜洗脫(氯仿-甲醇1∶1)，再經(jīng)重結(jié)晶純化得化合物20(8 mg)。

Fr.J部位經(jīng)過(guò)反相中壓液相色譜梯度洗脫(甲醇-水30∶70～100∶0)，得到14個(gè)組分(Fr.J.1～Fr.J.14)。Fr.J.12組分經(jīng)過(guò)Sephadex LH-20凝膠柱層析(氯仿-甲醇1∶1)后得到10個(gè)小組分(Fr.J.12-1～Fr.J.12-10)，其中Fr.J.12-6進(jìn)一步經(jīng)HPLC半制備液相色譜(甲醇-水60∶40)純化得到化合物5(14 mg)、6(6 mg)、7(8 mg)和8(8 mg)。Fr.J.12-8經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜洗脫(氯仿-甲醇1∶1)，再經(jīng)HPLC半制備液相色譜純化(甲醇-水50∶50)后，得到化合物9(6 mg)。組分Fr.J.12-9經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜洗脫后(氯仿-甲醇1∶1)，再經(jīng)重結(jié)晶純化得化合物10(8 mg)。

Fr.K部位經(jīng)過(guò)反相中壓液相色譜梯度洗脫(甲醇-水30∶70～100∶0)，得到10個(gè)組分(Fr.K.1～Fr.K.10)。組分Fr.K.1經(jīng)硅膠柱梯度洗脫(氯仿∶甲醇20∶1～1∶1)后得9個(gè)流分(Fr.K.1-1～Fr.K.1-9)，其中，F(xiàn)r.K.1-4經(jīng)重結(jié)晶純化后得到化合物11(607 mg)和12(17 mg)。組分Fr.K.2經(jīng)硅膠柱層析梯度洗脫(氯仿∶甲醇30∶1～1∶1)后得7個(gè)流分(Fr.K.2-1～Fr.K.2-7)，F(xiàn)r.K.2-3進(jìn)一步經(jīng)HPLC半制備液相色譜(甲醇-水70∶30)洗脫后得到化合物13(27 mg)和14(19 mg)。Fr.K.3經(jīng)硅膠柱層析梯度洗脫(氯仿∶甲醇30∶1～1∶1)后得10個(gè)流分(Fr.K.3-1～3-10)，其中Fr.K.3-7經(jīng)HPLC半制備液相色譜(乙腈-水55∶45)純化后得到化合物15(38 mg)。Fr.K.9經(jīng)硅膠柱層析梯度洗脫(氯仿∶甲醇30∶1～1∶1)后得7個(gè)流分(Fr.K.9-1～Fr.K.9-7)，其中Fr.K.9-4經(jīng)HPLC半制備液相色譜(乙腈-水75∶35)純化后得到化合物16(38 mg)。

1.4 抑菌活性實(shí)驗(yàn)

將供試樣品化合物1～4溶解在DMSO中，制成30 g/L的母液。取藥液167 μL注入培養(yǎng)皿內(nèi)，加入9.85 mL PSA培養(yǎng)基，制成最終濃度為50 mg/L含藥平板。將培養(yǎng)好的供試菌種用打孔器打取直徑4 mm菌餅，每皿3塊，置于含藥平板內(nèi)，呈等邊三角形擺放。以不加藥劑處理做空白對(duì)照。將各處理于(24±1)℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48 h后，量取各處理菌絲擴(kuò)展直徑，并與對(duì)照相比較，計(jì)算相對(duì)抑制百分率?；钚苑旨?jí)指標(biāo)為：A級(jí)≥90%；B級(jí)70%～90%；C級(jí)50%～70%；D級(jí)<50%。

1.5 抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)

采用MTT法測(cè)定毛紅椿皮中部分化合物對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231、人橫紋肌瘤細(xì)胞株A-673及人紅細(xì)胞白血病細(xì)胞株HEL的抑制活性。分別選用含10%牛血清的RPMI1640 培養(yǎng)基和DMEM培養(yǎng)基配制細(xì)胞懸液，用96孔板接種，置于體積分?jǐn)?shù)5% CO2培養(yǎng)箱中，過(guò)夜。將待測(cè)化合物用DMSO配成5個(gè)濃度梯度的培養(yǎng)基。陽(yáng)性對(duì)照用阿霉素配置成等濃度梯度，陰性對(duì)照為等體積0.25% DMSO的培養(yǎng)基，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔。加藥后，培養(yǎng)48 h，離心去除上清液，加入5 g/L MTT的培養(yǎng)基培養(yǎng)孵育至甲瓚晶體充分溶解。于酶標(biāo)儀490 nm處測(cè)OD值，每次實(shí)驗(yàn)均設(shè)阿霉素陽(yáng)性化合物，以濃度為橫坐標(biāo)，細(xì)胞存活率為縱坐標(biāo)繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)，應(yīng)用兩點(diǎn)法(Reed and Muench法)計(jì)算化合物的IC50值。

2 結(jié)果與分析

2.1 化合物鑒定

化合物1：白色粉末(氯仿)，ESI-MS(m/z): 577[M+Na]+，分子式C31H38O9。1H-NMR(CDCl3, 600 MHz)∶0.97(3H, s, H-18), 1.02(3H, s, H-19), 1.09(3H, s, H-29), 1.10(3H, s, H-28), 1.81(3H, s,—OCOCH3), 2.01(3H, s,—OCOCH3), 2.27(1H, dd,J=18.0, 6.0 Hz, H-16), 2.59(1H, s, H-9), 3.66(3H, s,-COOCH3), 3.95(1H, s, H-15), 5.34(1H, d,J=4.4 Hz, H-12), 5.37(1H, d,J=4.4 Hz, H-11), 6.19(1H, d,J=10.4 Hz, H-2), 7.26(1H, d,J=10.4 Hz, H-1)。13C-NMR(CDCl3, 150 MHz): 151.8(C-1), 126.7(C-2), 202.6(C-3), 46.0(C-4), 44.7(C-5), 32.0(C-6), 174.0(C-7), 135.7(C-8), 57.2(C-9), 44.2(C-10), 74.6(C-11), 70.3(C-12), 41.9(C-13), 72.4(C-14), 60.3(C-15), 32.8(C-16), 38.5(C-17), 14.3(C-18), 20.0(C-19), 122.9(C-20), 140.1(C-21), 111.3(C-22), 142.3(C-23), 23.0(C-28), 22.7(C-29), 120.8(C-30), 169.8(11-OCOCH3), 20.8(11-OCOCH3), 168.9(12-OCOCH3), 20.6(12-OCOCH3), 51.9(1-COOCH3)。結(jié)合文獻(xiàn)[8]比對(duì)，鑒定化合物1為toonacilin。

化合物2：白色粉末(甲醇)，ESI-MS(m/z): 495[M+Na]+，分子式C30H48O4。1H-NMR(CDCl3, 600 MHz): 0.84(3H, s, H-19), 0.86(3H, d,J=6.4 Hz, H-21), 1.02(3H, s, H-18), 1.06(6H, s, H-28, H-29), 1.13(3H, s, H-30), 1.24(3H, s, H-27), 1.37(3H, s, H-26), 2.74(1H, dd,J=12.0, 6.0 Hz, H-2a), 3.67(1H, d,J=6.0 Hz, H-24), 3.84(1H, dd,J=6.4, 1.5 Hz, H-22), 3.99(1H, dd,J=12.6, 6.6 Hz, H-23), 5.32(1H, dd,J=6.6, 3.0 Hz, H-7)。13C-NMR(CDCl3, 150 MHz): 38.6(C-1), 24.9(C-2), 217.4(C-3), 47.9(C-4), 49.3(C-5), 24.5(C-6, C-29), 117.8(C-7), 145.9(C-8), 48.5(C-9), 35.0(C-10), 18.3(C-11), 33.5(C-12), 43.5(C-13), 51.2(C-14), 34.1(C-15), 27.8(C-16), 52.4(C-17), 24.4(C-18), 12.4(C-19), 37.5(C-20), 12.8(C-21), 83.7(C-22), 81.0(C-23, C-25), 77.3(C-24), 26.3(C-26), 21.6(C-27), 21.3(C-28), 27.7(C-30)。結(jié)合文獻(xiàn)[9]比對(duì)，鑒定化合物2為odoratone。

化合物3：白色粉末(氯仿)，ESI-MS(m/z): 495[M+Na]+，分子式C30H48O4。1H-NMR(CDCl3, 600 MHz): 0.79(3H, s, H-19), 1.01(3H, s, H-21), 1.04(6H, s, H-18, H-29), 1.05(3H, s, H-28), 1.12(3H, s, H-30), 1.28(3H, s, H-27), 1.32(3H, s, H-26), 2.76(1H, td,J=14.4, 5.4 Hz, H-2a), 3.40(1H, dd,J=11.4, 2.4 Hz, H-24), 3.93(1H, d,J=2.4 Hz, H-22), 3.95(1H, d,J=2.4 Hz, H-23), 5.33(1H,m, H-7)。13C-NMR(CDCl3, 150 MHz):38.5(C-1), 34.9(C-2), 217.1(C-3), 47.9(C-4), 52.3(C-5), 24.5(C-6, C-28), 118.0(C-7), 145.6(C-8), 48.4(C-9), 35.0(C-10), 18.2(C-11), 32.9(C-12), 43.3(C-13), 50.8(C-14), 33.9(C-15), 27.4(C-16), 44.7(C-17), 23.8(C-18), 12.8(C-19), 37.5(C-20), 70.1(C-21), 86.4(C-22, C-24), 64.6(C-23), 74.2(C-25), 24.4(C-26), 28.5(C-27), 22.3(C-29), 27.5(C-30)。結(jié)合文獻(xiàn)[10]比對(duì)，鑒定化合物3為bourjotinolone A。

化合物4：白色粉末(氯仿)，ESI-MS(m/z): 479[M+Na]+，分子式C30H48O3。1H-NMR(CDCl3, 600 MHz): 0.84(3H, s, H-18), 1.00(3H, d,J=6.4 Hz, H-21), 1.01(3H, s, H-19), 1.02(3H, s, H-28), 1.05(3H, s, H-29), 1.12(3H, s, H-30), 1.25(3H, s, H-27), 1.21(3H, s, H-26), 2.24(1H, t,J=3.6 Hz, H-2), 3.86(2H, d,J=7.2 Hz, H-24), 5.31(1H, m, H-7), 5.45(1H, dd,J=15.6, 7.2 Hz, H-23)。13C-NMR(CDCl3, 150 MHz): 38.5(C-1), 34.9(C-2，C-17), 217.1(C-3), 47.9(C-4), 52.4(C-5), 24.5(C-6), 118.0(C-7), 145.7(C-8), 48.4(C-9), 35.0(C-10), 18.2(C-11), 33.5(C-12), 43.6(C-13), 51.2(C-14), 34.1(C-15), 28.5(C-16), 34.9(C-17), 23.7(C-18), 12.8(C-19), 40.3(C-20), 72.9(C-21), 140.8(C-22), 126.0(C-23), 79.6(C-24), 76.8(C-25), 24.4(C-26), 21.6(C-27), 23.7(C-28), 22.1(C-29), 27.4(C-30)。結(jié)合文獻(xiàn)[11]比對(duì)，鑒定化合物4為dyvariabilin H。

化合物5：白色粉末(氯仿)，ESI-MS(m/z): 511[M+Na]+，分子式C30H50O4。1H-NMR(CDCl3, 600 MHz): 0.79(3H, s, H-18), 0.89(3H, d,J=6.4 Hz, H-21), 0.98(3H, s, H-30), 0.99(3H, s, H-28), 1.01(3H, s, H-29), 1.09(3H, s, H-19), 1.26(3H, s, H-27), 1.28(3H, s, H-26), 3.13(1H, d,J=6.9 Hz, H-24), 4.09(1H, d,J=7.2 Hz, H-23), 5.28(1H, d,J=3.0 Hz, H-7)。13C-NMR(CDCl3, 150 MHz): 38.5(C-1), 35.0(C-2, C-10), 217.3(C-3), 43.5(C-4), 52.3(C-5), 24.3(C-6), 117.8(C-7), 145.8(C-8), 48.4(C-9), 18.3(C-11), 34.0(C-12), 47.9(C-13), 51.2(C-14), 33.8(C-15), 28.4(C-16), 53.8(C-17), 22.0(C-18), 12.8(C-19), 33.6(C-20), 18.9(C-21), 40.3(C-22), 69.7(C-23), 75.0(C-24), 74.3(C-25), 26.3(C-26), 27.3(C-27), 24.5(C-28), 21.6(C-29), 27.4(C-30)。結(jié)合文獻(xiàn)[12]比對(duì)，鑒定化合物5為piscidinol A。

化合物6：白色粉末(甲醇)，ESI-MS(m/z): 499[M+Na]+，分子式C30H52O4。1H-NMR(CDCl3, 600 MHz): 0.77(3H, s, H-18), 0.85(3H, s, H-21), 0.88(3H, s, H-30), 0.95(3H, s, H-28), 0.99(3H, s, H-29), 1.00(3H, s, H-19), 1.28(3H, s, H-27), 1.33(3H, s, H-26), 3.19(1H, s, H-24), 3.51(1H,s, H-3), 4.14(1H, m, H-23), 5.29(1H, d,J=3.0 Hz, H-7)。13C-NMR(CDCl3, 150 MHz): 37.2(C-1), 27.6(C-2), 79.3(C-3), 39.0(C-4), 50.6(C-5), 24.0(C-6), 118.0(C-7), 145.6(C-8), 48.9(C-9), 34.9(C-10, C-20), 18.1(C-11), 33.7(C-12), 43.6(C-13), 51.2(C-14), 33.9(C-15), 28.5(C-16), 53.8(C-17), 22.0(C-18), 13.1(C-19), 18.9(C-21), 40.6(C-22), 69.7(C-23), 74.9(C-24), 74.3(C-25), 26.3(C-26), 27.5(C-27), 27.7(C-28), 14.7(C-29), 27.3(C-30)。結(jié)合文獻(xiàn)[13]比對(duì)，鑒定化合物6為 piscidinol B。

化合物7：白色粉末(氯仿)，ESI-MS(m/z): 497[M+Na]+，分子式C30H50O4。1H-NMR(CDCl3, 600 MHz): 0.75(3H, s, H-28), 0.78(3H, s, H-29), 0.86(3H, s, H-19), 1.00(3H, s, H-18), 1.05(3H, s, H-30), 1.27(3H, s, H-26), 1.30(3H, s, H-27), 2.90(1H, d,J=9.0 Hz, H-24), 3.39(1H, dd,J=11.4, 3.0 Hz, H-21b), 3.91(1H, m, H-23a), 3.95(1H, dd,J=11.4, 2.2 Hz, H-21a), 5.27(1H, d,J=3.0 Hz, H-7)。13C-NMR(CDCl3, 150 MHz): 37.2(C-1), 27.6(C-2, C-28), 79.2(C-3), 38.9(C-4), 50.7(C-5), 24.0(C-6, C-26), 118.1(C-7), 145.5(C-8), 48.9(C-9), 34.9(C-10), 18.0(C-11), 33.0(C-12), 43.3(C-13), 51.2(C-14), 33.9(C-15), 27.3(C-16, C-30), 44.7(C-17), 22.3(C-18), 13.1(C-19), 37.5(C-20), 70.1(C-21), 36.3(C-22), 64.6(C-23), 86.3(C-24), 74.1(C-25), 28.4(C-27), 14.7(C-29)。結(jié)合文獻(xiàn)[12]比對(duì)，鑒定化合物7為 3-episapeline A。

化合物8：白色粉末(甲醇)，ESI-MS(m/z): 319[M-H]-，分子式C20H32O3。1H-NMR(CDCl3, 600 MHz): 0.72(3H, s, H-20), 0.95(3H, s, H-18), 1.00(3H, s, H-17), 1.20(1H, dd,J=12.6, 4.5 Hz, H-6a), 1.30, 1.42(1H, m, H-12), 1.44(2H, m, H-1), 1.46(1H, d,J=3.6 Hz, H-6b), 1.45～1.55(2H, m, H-11), 1.57(1H, m, H-5), 1.72(1H, m, H-9), 1.93(1H, td,J=13.8, 4.8 Hz, H-7a), 2.20(1H, dd,J=13.8, 4.2 Hz, H-7b), 3.20(1H, d,J=10.8 Hz, H-19a), 3.50(1H, d,J=10.8 Hz, H-19b), 3.61(dd,J=3.0, 2.4 Hz, H-7), 3.72(1H,m, H-2), 4.88(2H, m, H-16), 5.19(1H, s, H-14), 5.75(1H, dd,J=17.4, 10.5 Hz, H-15)。13C NMR(CDCl3, 150 MHz): 40.5(C-1), 65.5(C-2), 72.9(C-3), 44.7(C-4), 48.3(C-5), 22.0(C-6), 36.2(C-7), 137.0(C-8), 50.5(C-9), 39.0(C-10), 19.0(C-11), 34.4(C-12), 37.5(C-13), 128.9(C-14), 149.1(C-15), 110.9(C-16), 26.3(C-17), 23.4(C-18), 64.1(C-19), 17.1(C-20)。結(jié)合文獻(xiàn)[14]比對(duì)，鑒定化合物8為8(14), 15-isopimaradiene-2α,3α,18-triol。

化合物9：白色結(jié)晶(甲醇)，ESI-MS(m/z): 331[M+Na]+，分子式C20H36O2。1H-NMR(CDCl3, 600 MHz): 0.81(3H, s, H-20), 0.82(3H, s, H-19), 0.89(3H, s, H-18), 1.15(3H, s, H-17), 1.71(3H, d,J=1.2 Hz, H-16), 4.16(2H, d,J=6.9 Hz, H-15), 5.46(1H, t,J=6.9 Hz, H-14)。13C NMR(CDCl3, 150 MHz): 39.3(C-1), 20.6(C-2, C-5), 42.0(C-3), 33.3(C-4), 56.1(C-6), 42.9(C-7), 74.1(C-8), 61.2(C-9), 39.8(C-10), 23.9(C-11, C-17), 44.6(C-12), 140.9(C-13), 123.3(C-14), 59.3(C-15), 18.5(C-16), 33.4(C-18), 21.5(C-19), 15.5(C-20)。結(jié)合文獻(xiàn)[15]比對(duì)，鑒定化合物9為labd-13-ene-8α,15-diol。

化合物10：白色結(jié)晶(氯仿)，ESI-MS(m/z): 329[M+Na]+，分子式C20H34O2。1H-NMR(CDCl3, 600 MHz): 0.84(3H, s, H-18), 0.87(3H, s, H-19), 0.92(3H, s, H-20), 1.18(3H, s, H-17), 1.81(3H, s, H-16), 4.94(1H, t,J=10.8 Hz, H-15a), 5.10(1H, d,J=17.4 Hz, H-15b), 5.59(1H, t,J=7.2 Hz, H-12), 6.37(1H, dd,J=17.4, 10.8 Hz, H-14)。13C NMR(CDCl3, 150 MHz): 39.8(C-1), 18.5(C-2), 41.6(C-3), 33.3(C-4), 53.6(C-5), 27.7(C-6), 80.4(C-7), 78.1(C-8), 60.3(C-9), 39.3(C-10), 23.9(C-11), 135.5(C-12), 132.8(C-13), 141.5(C-14), 110.7(C-15), 11.7(C-16), 17.9(C-17), 33.5(C-18), 21.6(C-19), 15.6(C-20)。結(jié)合文獻(xiàn)[16]比對(duì)，鑒定化合物10為nidorellol。

化合物11：白色結(jié)晶(氯仿)，ESI-MS(m/z): 313[M+Na]+，分子式C15H14O6。1H NMR(CD3OD, 600 MHz): 2.49(1H, dd,J=16.2, 8.2 Hz, H-4b), 2.82(1H, dd,J=16.2, 5.4 Hz, H-4a), 3.97(1H, td,J=7.8, 5.4 Hz, H-3), 4.56(1H, d,J=7.8 Hz, H-2), 5.86(1H, d,J=2.4 Hz, H-8), 5.92(1H, d,J=2.4 Hz, H-6), 6.68(1H, dd,J=8.4, 2.4 Hz, H-6′), 6.73(1H, d,J=8.4 Hz, H-5′), 6.81(1H, d,J=2.4 Hz, H-2′)。13C NMR(CD3OD, 150 MHz): 82.3(C-2), 68.2(C-3), 28.5(C-4), 157.4(C-5), 96.0(C-6), 157.0(C-7), 95.2(C-8), 131.8(C-1′), 115.0(C-2′), 145.4(C-3′), 145.5(C-4′), 115.6(C-5′), 119.9(C-6′), 100.4(C-4a), 156.6(C-8a)。結(jié)合文獻(xiàn)[17]比對(duì)，鑒定化合物11為兒茶素。

化合物12：白色粉末(甲醇)，ESI-MS(m/z): 353[M+Na]+，分子式C21H36O4。1H-NMR(CDCl3,600 MHz): 0.95(3H, t,J=7.5 Hz, H-23), 1.20～1.35(8H, m, 4×CH2), 1.65(2H, m, COOCH2CH2CH2), 2.09(4H, m, CH2CH=CHCH2CH=CHCH2CH=CHCH2), 2.32(2H, t,J=7.2 Hz, COOCH2CH2CH2), 2.83(4H, t,J=5.7 Hz, CH2CH=CHCH2CH=CHCH2CH=CHCH2), 3.57(1H, dd,J=11.4, 5.7 Hz, OCH2CHCH2O), 3.72(1H, dd,J=11.4, 3.6 Hz, OCH2CHCH2O), 3.90(1H, m, CH2CHOCH2), 5.38(6H, m, 3CH=CH)。13C NMR(CDCl3,150 MHz): 65.2(C-1), 70.3(C-2), 34.2(C-3), 29.6(C-4, C-7), 63.4(C-5), 174.4(C-6), 29.2(C-8), 29.1(C-9), 27.2(C-10), 25.6(C-11), 25.5(C-12), 24.9(C-13), 132.0(C-14), 130.3(C-15), 20.5(C-16), 128.3(C-17), 128.3(C-18), 14.3(C-19), 127.8(C-20), 127.2(C-21)。結(jié)合文獻(xiàn)[18]比對(duì)，鑒定化合物12為1-linolenoylglycerol。

化合物13：白色粉末(氯仿)，ESI-MS(m/z): 353[M+Na]+，分子式C18H34O5。1H-NMR(CD3OD, 600 MHz): 0.91(3H, t,J=6.6 Hz, H-18), 1.35(14H, m, H-4～6, H-14～17), 1.50(4H, m, H-7, 13), 1.59(2H, m, H-3), 2.28(2H, t,J=7.2 Hz, H-2), 3.41(1H, m, H-12), 3.92(1H, m, H-11), 4.05(1H, dd,J=12.0, 6.4 Hz, H-8), 5.67(1H, dd,J=15.6, 6.0Hz, H-10), 5.70(1H, dd,J=11.4, 6.0 Hz, H-9)。13C NMR(CD3OD, 150 MHz): 177.7(C-1), 35.0(C-2), 26.1(C-3, C-6), 30.2(C-4), 30.4(C-5), 38.3(C-7), 73.0(C-8), 131.0(C-9), 136.5(C-10), 76.5(C-11), 75.8(C-12), 33.5(C-13), 26.6(C-14), 30.1(C-15), 33.1(C-16), 23.7(C-17), 14.5(C-18)。結(jié)合文獻(xiàn)[19]比對(duì)，鑒定化合物13為天師酸。

化合物14：白色結(jié)晶(丙酮)，ESI-MS(m/z): 346[M+Na]+，分子式C19H21N3O2。1H NMR(DMSO-d6,600 MHz):1.37(3H, d,J=6.9 Hz, CH3-20), 1.48(6H, s, CH3-18, 19), 4.16(1H, q,J=6.9 Hz, H-12), 5.02(1H, s, H-17b), 5.05(1H, d,J=11.4 Hz, H-17a), 6.08(1H, dd,J=16.8, 10.5 Hz, H-16), 6.89(1H, s, H-8), 7.00(1H, t,J=7.5 Hz, H-5), 7.09(1H, t,J=7.5 Hz, H-6), 7.19(1H, d,J=7.8 Hz, H-4), 7.42(1H, d,J=7.8 Hz, H-7), 8.33(1H, s, NH-11), 8.67(1H, s, NH-14), 11.04(1H, s, NH-1)。13C NMR(DMSO-d6, 150 MHz): 144.5(C-2), 126.4(C-3a), 103.4(C-3b), 119.4(C-4), 119.9(C-5), 121.2(C-6), 112.1(C-7), 135.1(C-7a), 110.2(C-8), 125.3(C-9), 160.4(C-10), 51.0(C-12), 166.9(C-13), 39.0(C-15), 145.6(C-16), 110.7(C-17), 28.0(C-18, C-19), 20.1(C-20)。結(jié)合文獻(xiàn)[20]比對(duì)，鑒定化合物14為(-)-neoechinulin A。

化合物15：白色粉末(氯仿)，ESI-MS(m/z): 443[M-H]-，分子式C27H28N2O4。1H-NMR(CDCl3, 600 MHz): 2.01(3H, s, H-7), 2.74(2H, m, H-9), 3.08(1H, dd,J=13.8, 8.4 Hz, H-8β), 3.24(1H, dd,J=13.8, 6.0 Hz, H-8α), 3.84(1H, dd,J=11.4, 4.8 Hz, H-2β), 3.95(1H, dd,J=11.4, 4.8Hz, H-2α), 4.38(1H, m, H-1), 4.79(1H, dd,J=8.4, 6.0 Hz, H-3), 6.04(1H, d,J=8.4 Hz, N-Ha), 6.81(1H, d,J=7.8 Hz, N-Hb), 7.00～7.30(10H, m, H-2b-4b, 2c-4c), 7.46(2H, t,J=7.8 Hz, H-3a), 7.54(1H, m, H-4a), 7.74(2H, m, H-2a)。13C NMR(CDCl3, 150 MHz): 170.2(C-1), 49.4(C-2), 37.4(C-3), 136.6(C-4), 128.6(C-5, C-9), 128.7(C-6, C-8), 126.7(C-7), 64.6(C-10), 170.7(C-11), 20.8(C-12), 54.9(C-13), 167.1(C-14), 133.6(C-15), 127.0(C-16, C-20), 128.6(C-17, C-19), 131.9(C-18), 38.4(C-21), 136.7(C-22), 129.1(C-23, C-27), 129.3(C-24, C-26), 127.1(C-25)。結(jié)合文獻(xiàn)[21]比對(duì)，鑒定化合物為aurantiamide acetate。

化合物16：黃色油狀液體，ESI-MS(m/z):301[M+Na]+，分子式C16H22O4。1H NMR(CDCl3, 600 MHz): 0.99(6H, t,J=7.2 Hz, H-6, H-6′),1.47(4H, m, H-5, H-5′), 1.74(4H, m, H-4, H-4′), 4.33(4H, t,J=6.6 Hz, H-3, H-3′), 7.55(2H, dd,J=6.0, 3.0 Hz, H-3″, H-6″), 7.74(2H, dd,J=6.0, 3.0 Hz, H-2″, H-5″)。13C NMR(CDCl3, 150 MHz): 167.7(C-1, C-1′), 65.6(C-3, C-3′), 30.6(C-4, C-4′), 19.2(C-5, C-5′), 13.7(C-6, C-6′), 130.9(C-1″, C-6″), 128.9(C-2″, C-5″), 132.3(C-3″, C-4″)。結(jié)合文獻(xiàn)[22]比對(duì)，鑒定化合物16為dibutylphthalate。

化合物17：白色結(jié)晶(氯仿)，ESI-MS(m/z): 221[M+Na]+，分子式C12H12O4。1H-NMR(CDCl3, 600 MHz): 2.63(3H, s, CH3), 3.85(3H, s, 7-OCH3), 3.95(3H, s, 4-OCH3), 5.55(1H, s, H-3), 6.63(1H, d,J=2.4 Hz, H-6), 6.68(1H, d,J=2.4 Hz, H-8)。13C-NMR(CDCl3, 150 MHz): 163.3(C-2), 87.6(C-3), 169.8(C-4), 138.5(C-5), 115.7(C-6), 161.9(C-7), 98.7(C-8), 156.7(C-9), 107.9(C-10), 56.0(4-OCH3), 55.6(7-OMe), 23.5(5-Me)。結(jié)合文獻(xiàn)[23]比對(duì)，鑒定化合物17為4, 7-二甲氧基-5-甲基香豆素。

化合物18：黃色結(jié)晶(氯仿)，ESI-MS(m/z): 191[M-H]-，分子式C10H8O4。1H-NMR(CDCl3, 600 MHz): 3.97(3H, s, 7-OCH3), 6.28(1H, d,J=9.6 Hz, H-3), 6.87(1H, s, H-5), 6.93(1H, s, H-8), 7.62(1H, d,J=9.6 Hz, H-4)。13C NMR(CDCl3, 150 MHz): 163.3(C-2), 87.6(C-3), 144.1(C-4), 103.2(C-5), 149.8(C-6), 150.2(C-7), 113.3(C-8), 107.5(C-9), 161.5(CO), 56.4(7-OCH3)。結(jié)合文獻(xiàn)[24]比對(duì)，鑒定化合物18為東莨菪素。

化合物19：白色粉末(甲醇)，ESI-MS(m/z)∶451[M+Na]+，分子式C28H44O3。1H-NMR(CDCl3, 600 MHz): 0.83(6H, d,J=3.0 Hz, H-18, H-26), 0.84(3H, d,J=3.0 Hz, H-27), 0.86(3H, s, H-19), 0.90(3H, m, H-28), 1.02(3H, dd,J=6.6, 2.7 Hz, H-21), 3.98(1H, m, H-3), 5.16(1H, dd,J=15.3, 8.4 Hz, H-22), 5.24(1H, m, H-23), 6.26(1H, d,J=8.4 Hz, H-6), 6.52(1H, d,J=8.4 Hz, H-7)。13C NMR(CDCl3, 150 MHz): 34.7(C-1), 30.1(C-2), 66.4(C-3), 37.0(C-4), 82.2(C-5), 135.4(C-6), 130.7(C-7), 79.4(C-8), 51.1(C-9), 36.9(C-10), 23.4(C-11), 39.3(C-12), 44.6(C-13), 51.7(C-14), 20.6(C-15), 28.7(C-16), 56.2(C-17), 12.9(C-18), 18.2(C-19), 39.7 C-20), 20.9(C-21), 135.2(C-22), 132.3(C-23), 42.8(C-24), 33.1(C-25), 19.7(C-26), 19.6(C-27), 17.6(C-28)。結(jié)合文獻(xiàn)[25]比對(duì)，鑒定化合物19為(22E)-5a,8a-epidioxyergosta-6,22-dien-3b-ol。

化合物20：白色結(jié)晶(氯仿)。與β-谷甾醇對(duì)照品薄層色譜點(diǎn)板顯色，用3種不同的展開(kāi)溶劑系統(tǒng)，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，并與文獻(xiàn)[26]報(bào)道一致，故鑒定化合物20為β-谷甾醇。

2.2 抑菌活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

在植物中已發(fā)現(xiàn)數(shù)千種萜類(lèi)化合物具有較好的殺蟲(chóng)和殺菌作用，有些對(duì)昆蟲(chóng)表現(xiàn)出一定的拒食、驅(qū)避、毒殺等活性[27]，有些則可調(diào)控昆蟲(chóng)生長(zhǎng)發(fā)育。目前研究最成熟的萜類(lèi)殺蟲(chóng)物質(zhì)主要是楝科和衛(wèi)矛科的活性成分，毛紅椿皮作為楝科香椿屬植物，本文從中分離得到10個(gè)萜類(lèi)化合物，因?yàn)椴糠州祁?lèi)化合物量少，且在其他藥理活性實(shí)驗(yàn)中已經(jīng)耗盡，因此實(shí)驗(yàn)對(duì)分離得到量較多的化合物1～4進(jìn)行了抑菌活性初步篩選。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，4個(gè)化合物對(duì)番茄早疫病菌、黃瓜灰霉病菌和辣椒疫霉病菌均有一定的抑制作用，其中化合物1表現(xiàn)出一定的廣譜抑菌活性，在濃度為50 mg/L下對(duì)上述3種病原菌均有潛在抑制作用；此外，化合物4在濃度為50 mg/L下對(duì)黃瓜灰霉病菌有較強(qiáng)的抑制作用，抑制率為76.5%。結(jié)果如表1所示。

表1 抑菌活性

2.3 抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

有文獻(xiàn)報(bào)道[28]，從香椿屬分離得到具有清除自由基、抗炎及抗腫瘤活性的一系列化合物，本實(shí)驗(yàn)以此為參考，篩選了從毛紅椿皮中分離得到的9個(gè)萜類(lèi)化合物對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231、人橫紋肌瘤細(xì)胞株A-673及人紅細(xì)胞白血病細(xì)胞株HEL的抑制增殖活性(化合物6因在其他生物活性實(shí)驗(yàn)已經(jīng)耗盡，故無(wú)測(cè)試結(jié)果)。對(duì)抑制率大于60%的化合物進(jìn)行IC50實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，化合物2對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231有一定抑制作用，其IC50值為12.9 μmol/L；化合物3對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231、人橫紋肌瘤細(xì)胞株A-673及人紅細(xì)胞白血病細(xì)胞株HEL均有抑制增殖活性，化合物5對(duì)人紅細(xì)胞白血病細(xì)胞株HEL有抑制作用，其IC50為8.4 μmol/L。化合物7對(duì)人橫紋肌瘤細(xì)胞株A-673 有微弱的抑制作用。如表2、表3所示。

表2 化合物對(duì)癌細(xì)胞株MDA-MB-231、A-673、HEL的抑制作用(20 μmol/L)

表3 化合物對(duì)癌細(xì)胞株MDA-MB-231、A-673、HEL的半數(shù)抑制率(IC50)

3 結(jié)論

香椿屬植物是典型的藥食兩用植物，具有較高的安全性，對(duì)其進(jìn)行全面深入研究不僅具有理論意義，還有著較好的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)意義。該屬主要包含香椿、紅椿、紫椿和紅花香椿4種植物，其余的大多為紅椿變種。隨著對(duì)香椿屬植物化學(xué)成分研究的不斷深入，已從中發(fā)現(xiàn)了不同類(lèi)型的化合物，其主要成分為三萜，且多具有一定的生物活性[29]。本文對(duì)研究較少的毛紅椿皮的化學(xué)成分及生物活性進(jìn)行研究，從中獲得20個(gè)單體化合物，包括7個(gè)三萜、3個(gè)二萜、2個(gè)甾體、3個(gè)酚酸、2個(gè)生物堿、2個(gè)脂肪酸以及1個(gè)黃酮，純化分離實(shí)驗(yàn)表明，毛紅椿皮中的化學(xué)成分雖然具有結(jié)構(gòu)類(lèi)型豐富的特點(diǎn)，但其中的化學(xué)成分主要為萜類(lèi)。

對(duì)毛紅椿皮中所分離得到的部分化合物進(jìn)行抑菌活性和抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)。抑菌活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,其中1個(gè)三萜化合物對(duì)黃瓜灰霉病菌表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制作用，豐富了毛紅椿中次生代謝產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)類(lèi)型及其生物功能，并為其后續(xù)具有抗菌活性成分的挖掘提供了思路；抗腫瘤活性篩選結(jié)果表明，化合物2、3、5和7對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-23、人橫紋肌瘤細(xì)胞株A-673及人紅細(xì)胞白血病細(xì)胞株HEL有不同程度的抑制作用，特別是化合物3和5對(duì)3種腫瘤細(xì)胞株均顯示出抑制活性。以上抗腫瘤活性結(jié)果在一定程度上為毛紅椿后續(xù)的活性篩選提供新方法，也為毛紅椿藥材的臨床藥用提供了理論指導(dǎo)。