田靜，尹祥，樊楊，李鑫琴，張建國(guó)

（華南農(nóng)業(yè)大學(xué)南方草業(yè)中心，廣東 廣州 510642）

象草（Pennisetum purpureum）是熱帶、亞熱帶地區(qū)廣泛栽培的牧草，具有栽培成本低、產(chǎn)量高、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值較高等特點(diǎn)［1］，但其生長(zhǎng)具有季節(jié)性，且調(diào)制干草較為困難，因此，象草常被調(diào)制成青貯飼料以保障反芻動(dòng)物飼料的常年供應(yīng)［2-3］。一般象草收獲時(shí)水分含量（80%~84%）和緩沖能力較強(qiáng)，青貯飼料的生產(chǎn)受到限制［4］。高水分含量會(huì)導(dǎo)致青貯發(fā)酵不良和可溶性營(yíng)養(yǎng)成分損失［5］，通過(guò)晾曬或添加吸附材料增加原材料的干物質(zhì)含量，或添加糖源增加水溶性碳水化合物以改善其發(fā)酵品質(zhì)［6］。除此之外，青貯飼料的發(fā)酵品質(zhì)可能會(huì)受環(huán)境溫度的影響［7］。有研究報(bào)道，20~30 ℃下青貯飼料的主要發(fā)酵產(chǎn)物是乳酸［8］，而高于30 ℃青貯飼料的主要發(fā)酵產(chǎn)物是乙酸［8-9］。在青貯初期，植物體不斷呼吸和有氧微生物活動(dòng)可能使溫度升至40 ℃或更高，導(dǎo)致青貯期間產(chǎn)生大量乙酸、丁酸和酒精［10］。因此，有必要采取適當(dāng)措施改善溫度對(duì)象草青貯發(fā)酵的影響，從而為農(nóng)戶帶來(lái)益處。

近幾年，隨著高通量測(cè)序的發(fā)展，關(guān)于不同溫度下青貯飼料微生物群落的研究日益增多［11-12］。Li 等［7］研究表明乳桿菌屬（Lactobacillus）和腸桿菌屬（Enterobacter）可能是引起熱帶青貯飼料產(chǎn)生乙酸的主要原因。而Zhang等［13］在40 ℃條件下青貯苜蓿（Medicago sativa），硫酸鹽還原菌屬（Garciella）是優(yōu)勢(shì)菌屬。不同的溫度條件和原材料本身附著的微生物可能也會(huì)影響青貯飼料中的微生物，從而影響發(fā)酵過(guò)程［14］。然而，有關(guān)溫度對(duì)象草青貯發(fā)酵品質(zhì)和微生物的影響以及如何改善的研究較少，了解細(xì)菌多樣性可能有助于了解獨(dú)特的發(fā)酵條件并改善象草的青貯飼料質(zhì)量。

因此，本試驗(yàn)通過(guò)將象草晾曬，或不晾曬直接添加玉米粉或蔗糖，再分別置于20、30 和40 ℃的環(huán)境下青貯，探究晾曬和添加物處理下環(huán)境溫度對(duì)象草青貯發(fā)酵品質(zhì)與微生物的影響，為提高象草發(fā)酵質(zhì)量提供理論支持。

1 材料與方法

1.1 象草種植與試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)所用象草于2020 年8 月在華南農(nóng)業(yè)大學(xué)第五教學(xué)試驗(yàn)田收獲。收回實(shí)驗(yàn)室后用鍘草機(jī)切割，長(zhǎng)度為1~2 cm，將切碎的象草混合均勻。一部分放置室外晾曬（WS），另一部分不晾曬，設(shè)置為無(wú)任何處理（對(duì)照，CK）、添加鮮草10%的玉米粉（CS）或2%的蔗糖（SS），其中，玉米粉干物質(zhì)（dry matter，DM）含量為93.79%，粗蛋白（crude protein，CP）含量為10.22% DM，中性洗滌纖維（neutral detergent fiber，NDF）和酸性洗滌纖維（acid detergent fiber，ADF）含量分別為8.44% DM 和5.00% DM，可溶性碳水化合物（water-soluble carbohydrate，WSC）含量為20.41% DM。然后將晾曬和添加物處理的象草分別混合均勻后裝至20 cm×30 cm 的聚乙烯塑料袋中，每袋約200 g，每個(gè)處理9 個(gè)重復(fù)，用真空封口機(jī)抽真空密封保存，最后分別放置于20、30 和40 ℃的恒溫培養(yǎng)箱中貯藏，即4 個(gè)處理×3 個(gè)溫度×3 個(gè)重復(fù)，共36 袋。60 d 后開(kāi)袋取樣分析，檢測(cè)其青貯飼料的發(fā)酵品質(zhì)、微生物數(shù)量和細(xì)菌多樣性。

1.2 試驗(yàn)指標(biāo)測(cè)定

1.2.1原材料營(yíng)養(yǎng)成分及緩沖能的測(cè)定 取20 g 樣品，加入80 mL 蒸餾水，使樣品完全浸沒(méi)，放置4 ℃冰箱18 h 后，用中性濾紙過(guò)濾，得到浸提液，采用Mettler Toledo FE28 pH 計(jì)測(cè)定pH；采用鹽酸、氫氧化鈉滴定法測(cè)定緩沖能［15］。再取約150 g 樣品，稱重后置于70 ℃恒溫烘箱中，烘干至恒重稱重測(cè)定干物質(zhì)含量；粉碎過(guò)1.0 cm 篩，用于測(cè)定營(yíng)養(yǎng)成分，采用凱氏定氮法測(cè)定粗蛋白［16］含量；粗纖維（crude fiber，CF）、中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維含量在范氏法（van Soest）的基礎(chǔ)上使用改進(jìn)的濾袋分析法［17］（ANKOM A200i，北京）；可溶性碳水化合物含量采用硫酸-蒽酮法測(cè)定［18］。

1.2.2發(fā)酵品質(zhì)和產(chǎn)氣的測(cè)定 青貯開(kāi)袋前，采用排水法測(cè)定青貯飼料的產(chǎn)氣量。開(kāi)袋后，用1.2.1 中的方法測(cè)定pH；采用凱氏定氮法測(cè)定氨態(tài)氮（ammonia nitrogen，NH3-N）含量；將2 mL 浸提液12000 r·min-1在4 ℃離心3 min，用0.45 μm 的微孔濾膜過(guò)濾后，用島津LC-20AT 型高效液相色譜儀（日本東京）分析有機(jī)酸含量。色譜條件：色譜柱為Eleven Organic Acids on Transgenomic COREGel 87H3；檢測(cè)器：RID-10A；流動(dòng)相：0.1 mmol·L-1的磷酸溶液；流速：1 mL·min-1；柱溫40 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm；進(jìn)樣量20 μL。

1.2.3微生物計(jì)數(shù)及測(cè)序 無(wú)菌操作下稱取20 g 樣品，加入90 mL 無(wú)菌水，在200 r·min-1搖床中振蕩30 min。吸取1 mL 稀釋至不同濃度后，分別采用MRS 瓊脂培養(yǎng)基（MRS agar medium，MRS）［酪蛋白酶消化物10 g·L-1，牛肉膏粉10 g·L-1，酵母膏粉4 g·L-1，檸檬酸三銨2 g·L-1，乙酸鈉5 g·L-1，硫酸鎂0.2 g·L-1，硫酸錳0.05 g·L-1，磷酸氫二鉀2 g·L-1，葡糖糖20 g·L-1，吐溫-80 1.08 g·L-1，瓊脂15 g·L-1］、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（nutrient agar，NA）［蛋白胨10 g·L-1，牛肉膏粉3 g·L-1，氯化鈉5 g·L-1，瓊脂15 g·L-1］、孟加拉紅培養(yǎng)基（rose bengal agar，RBA）［蛋白胨5 g·L-1，葡糖糖10 g·L-1，磷酸二氫鉀1 g·L-1，硫酸鎂0.5 g·L-1，瓊脂15 g·L-1，孟加拉紅0.033 g·L-1，氯霉素0.1 g·L-1］和亞硫酸鐵瓊脂培養(yǎng)基（iron sulfite agar，ISA）［胰蛋白胨15 g·L-1，大豆蛋白胨5 g·L-1，酵母浸膏5 g·L-1，偏重亞硫酸鈉1 g·L-1，枸櫞酸鐵銨1 g·L-1，瓊脂15 g·L-1］進(jìn)行乳酸菌（lactic acid bacteria，LAB）、好氧性細(xì)菌、酵母菌、霉菌和梭菌劃板培養(yǎng)后計(jì)數(shù)。LAB 和梭菌用厭氧罐37 ℃培養(yǎng)1~2 d；好氧性細(xì)菌、酵母菌和霉菌在有氧條件下30 ℃培養(yǎng)2~3 d。

稱取的分析樣品添加至20 倍體積滅菌的磷酸鹽緩沖液（pH=7.4）中進(jìn)行DNA 提取，再通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR，95 ℃持續(xù)2 min，然后在95 ℃持續(xù)30 s，55 ℃持續(xù)30 s，72 ℃的25 個(gè)循環(huán)）進(jìn)行擴(kuò)增細(xì)菌16S 核糖體RNA基 因 的V3~V4 區(qū) 域，引 物 為338F（ACTCCTACGGGAGGCAGCAG）和806R（GGACTACHVGGGTW TCTAAT），進(jìn)行30 s 的擴(kuò)增［7］，最后在72 ℃延伸5 min。最后將PCR 產(chǎn)物在Illumina MiSeq 平臺(tái)上測(cè)序，使用Trimmomatic v0.33 軟件，對(duì)測(cè)序得到的Raw Reads 進(jìn)行過(guò)濾；然后用Cutadapt 1.9.1 軟件進(jìn)行引物序列的識(shí)別與去除，得到不包含引物序列的高質(zhì)量Reads，再拼接序列即Clean Reads，使用UCHIME v4.2 軟件，鑒定并去除嵌合體序列，得到最終有效數(shù)據(jù)。使用QIIME 2 軟件，對(duì)樣品Alpha 多樣性指數(shù)進(jìn)行評(píng)估。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

微生物數(shù)量的計(jì)數(shù)轉(zhuǎn)換為log10cfu·g-1FM。采用SPSS 19.0 進(jìn)行獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)，分析晾曬對(duì)青貯前原材料的化學(xué)特性和微生物數(shù)量的影響，用雙因素方差分析和Duncan 法對(duì)晾曬、添加物和溫度處理下象草青貯后發(fā)酵品質(zhì)進(jìn)行多重比較，P<0.05 為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 象草青貯前的特性

象草原料特性如表1 所示。象草原材料的DM 含量約17%，晾曬后增加至約25%，晾曬處理顯著（P<0.05）增加了象草的pH、緩沖能和除梭菌外的其他微生物數(shù)量，顯著降低了WSC 含量。

表1 象草晾曬前后的化學(xué)特性和微生物數(shù)量Table 1 The characteristic and microbial composition of fresh and wilting napier grass

2.2 象草青貯的發(fā)酵品質(zhì)

由表2 可知，青貯60 d 后，對(duì)照在30 ℃下的青貯飼料的DM 和乳酸含量顯著高于20 ℃（P<0.05），且40 ℃下的乙酸含量最高，溫度對(duì)其pH 無(wú)顯著影響（P>0.05）。原材料晾曬后，所有溫度下青貯料的pH 提高，乳酸含量降低，尤在30 ℃，發(fā)酵品質(zhì)最差，表現(xiàn)為pH、乙酸、丁酸和NH3-N 含量最高，乳酸含量最低（P<0.05）。20 和40 ℃條件下，雖晾曬后pH 高于對(duì)照，但降低了丁酸和NH3-N 含量。添加10%玉米粉后，與對(duì)照相比，每個(gè)溫度下的pH 均降低，30 ℃的pH 下降最顯著（P<0.05），但有機(jī)酸含量均有所降低，同時(shí)，20 和40 ℃下的NH3-N 含量降低，但30 ℃下增加。添加2%蔗糖后的pH 顯著低于對(duì)照和除40 ℃的添加玉米粉處理（P<0.05），同時(shí)，乳酸含量也較高，乙酸、丁酸和NH3-N 含量降低。方差分析結(jié)果表明，溫度除對(duì)DM 無(wú)顯著影響，NH3-N 顯著影響（P<0.05）外，對(duì)其他指標(biāo)均有極顯著影響（P<0.01），晾曬和添加物處理對(duì)所有指標(biāo)均有極顯著影響（P<0.01），二者的交互作用對(duì)pH、乳酸、乙酸和丁酸含量均有極顯著影響（P<0.01）。

表2 不同處理下青貯象草的發(fā)酵品質(zhì)比較Table 2 The fermentation quality comparison of napier grass silage at different treatments

所有在20 ℃下發(fā)酵的青貯飼料中，LAB 和好氧細(xì)菌數(shù)量最多，且隨溫度升高而下降，晾曬處理在每個(gè)溫度下均增加了LAB 和好氧細(xì)菌數(shù)量，而添加玉米粉和蔗糖則降低了其數(shù)量，尤其在40 ℃時(shí)，效果最顯著（P<0.05）。所有青貯飼料的酵母和霉菌均低于2 log10cfu·g-1FM。方差分析結(jié)果表明，溫度、晾曬和添加物處理及兩者交互作用對(duì)LAB 數(shù)量均有極顯著影響（P<0.001，表3）。

表3 晾曬、添加物和貯藏溫度對(duì)青貯象草微生物數(shù)量的影響Table 3 Effects of wilting，additives and storage temperature on microbial composition of napier grass silage in 60 days

由圖1 可知，對(duì)照、添加玉米粉和蔗糖的青貯飼料在20 ℃下發(fā)酵的產(chǎn)氣量均高于30 和40 ℃，但除對(duì)照在20 ℃顯著高于40 ℃外，其余差異不顯著，而晾曬處理后，20 和30 ℃條件下的青貯飼料的產(chǎn)氣量相當(dāng)，均顯著高于40 ℃和其他處理（P<0.05）。40 ℃下各處理間青貯飼料的產(chǎn)氣量差異不顯著（P>0.05）。

圖1 象草青貯的產(chǎn)氣量Fig.1 Gas production of napier grass silage in 60 days

2.3 象草青貯的細(xì)菌群落

通過(guò)16S rRNA 基因擴(kuò)增子的高通量測(cè)序，共獲得2239912 個(gè)細(xì)菌序列（每個(gè)樣品約158282 個(gè)有效序列）。經(jīng)過(guò)生物信息學(xué)分析，如表4 所示，這些序列共聚類7582 個(gè)可操作分類單元（operational taxonomic units，OTUs）。每個(gè)樣本的OTUs 從334 到771 不等，其中，新鮮象草的最多（771）。用來(lái)評(píng)估細(xì)菌多樣性的Chao 1 指 數(shù)，Simpson 和Shannon 指 數(shù) 顯 示 出 與OTUs 相似的趨勢(shì)，均是新鮮象草的細(xì)菌豐度高，晾曬后降低。所有處理在40 ℃條件下發(fā)酵的青貯飼料的Chao 1、Simpson 和Shannon 指數(shù)基本上均高于20 和30 ℃。所有樣品的覆蓋度均為0.99，表明大多數(shù)細(xì)菌群落被檢測(cè)出。

表4 新鮮象草和青貯飼料的細(xì)菌群落多樣性統(tǒng)計(jì)Table 4 Diversity statistics of bacterial community of fresh napier grass and its silage

圖2顯示了象草青貯前后在科屬水平上的細(xì)菌群落的差異。新鮮象草中主要以變形菌門(mén)（Proteobacteria）和厚壁菌門(mén)（Firmicutes）為主，分別占40% 和29%，晾曬后變形菌門(mén)增加至90%，主要是腸桿菌科（Enterobacteriaceae）的腸桿菌屬（Enterobacter）和泛菌屬（Pantoea），分別占27%和47%。與LAB 相關(guān)的乳球菌屬（Lactococcus）、乳桿菌屬（Lactobacillus）和魏斯氏菌屬（Weissella）的相對(duì)豐度下降。青貯后，飼料中主要由腸桿菌科的腸桿菌屬和鏈球菌科（Streptococcaceae）的乳球菌屬細(xì)菌代替。其中，20 ℃下發(fā)酵的所有青貯飼料中，腸桿菌屬和乳球菌屬豐度均高于30 和40 ℃，且除晾曬處理30 ℃下腸桿菌屬豐度最低外，對(duì)照和添加物處理均是40 ℃下的豐度最低。在晾曬后20 和30 ℃青貯時(shí)，腸球菌屬豐度約15%，高于40 ℃。腸桿菌屬豐度在20 ℃下添加玉米粉處理發(fā)酵時(shí)豐度最高，達(dá)到近55%，乳球菌屬豐度在20 ℃下添加蔗糖時(shí)最高，達(dá)到近38%，而乳桿菌屬豐度在對(duì)照30 ℃和添加蔗糖20 ℃條件下較高，約為4.1%，稍高于青貯前的新鮮象草。

圖2 象草青貯前和青貯后的科（a）和屬（b）水平的細(xì)菌多樣性Fig.2 Family-（a）and genus-（b）level microbiota analysis of fresh napier grass and its silage

3 討論

3.1 象草青貯前的化學(xué)特性

本試驗(yàn)中新鮮象草的CP 含量較高，為11.35% DM，高于Yin 等［19］和Tao 等［20］報(bào)道的10.41% DM 和6.42%DM，低于Gulfam 等［14］報(bào)道的12.7% DM。WSC 含量（6.96% DM）高于Yin 等［19］和Gulfam 等［14］的結(jié)果，滿足優(yōu)質(zhì)青貯飼料制作所需的6%~7% DM［21］。原材料營(yíng)養(yǎng)成分含量的不同，可能是由于不同地理位置以及生長(zhǎng)收獲期等因素影響［22］。晾曬處理顯著提高了象草的DM，降低了WSC 含量，對(duì)CP、NDF 和ADF 含量無(wú)顯著影響，這一結(jié)果與Yin 等［19］報(bào)道的一致。新鮮象草中的LAB 數(shù)量（4.21 log10cfu·g-1FM）沒(méi)達(dá)到5 log10cfu·g-1FM 優(yōu)良青貯飼料的最低要求［3］，而晾曬處理顯著增加了LAB 數(shù)量（7.36 log10cfu·g-1FM），但好氧細(xì)菌、酵母和霉菌數(shù)量也顯著增加，好氧細(xì)菌數(shù)量高達(dá)8.74 log10cfu·g-1FM，可能會(huì)影響象草的青貯發(fā)酵品質(zhì)。

3.2 象草青貯的發(fā)酵品質(zhì)和微生物多樣性

青貯飼料的pH、有機(jī)酸和NH3-N 是衡量青貯飼料發(fā)酵品質(zhì)的重要指標(biāo)。當(dāng)青貯飼料pH 低于4.2 時(shí)，往往青貯發(fā)酵效果較好，而pH 高于4.2 表明發(fā)酵品質(zhì)較差。本試驗(yàn)中晾曬處理在3 個(gè)溫度下的pH 均高于5.0，對(duì)照和添加玉米粉處理的pH 均是在30 ℃條件下最低（4.28 和4.14）、20 ℃條件下最高（4.37 和4.24），添加蔗糖處理的青貯飼料pH 值均低于4.2，由此可見(jiàn)添加蔗糖對(duì)其青貯品質(zhì)效果較好。

環(huán)境溫度影響青貯料的發(fā)酵品質(zhì)，有研究報(bào)道大麥（Hordeum vulgare）秸稈［23］和柱花草（Stylosanthes guianensias）［24］在30 ℃條件下的青貯飼料比20 ℃青貯產(chǎn)生較少的乳酸，較多的乙酸。苜蓿［25］、小麥（Triticum aestivum）和玉米（Zea mays）等［26］在約40 ℃條件下發(fā)酵比低溫下青貯產(chǎn)生較少的有機(jī)酸，較高的pH 和NH3-N 含量。然而本研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)照和添加玉米粉的象草在不同溫度下青貯對(duì)pH 的影響不顯著。添加蔗糖后，20 ℃保存的青貯料pH 顯著低于40 ℃的青貯飼料，且均與30 ℃青貯飼料的pH 無(wú)顯著差異，而晾曬后，30 ℃保存的青貯飼料pH 達(dá)到5.85，20 和40 ℃條件下pH 為5.5 以下，表明晾曬后的象草在30 ℃青貯時(shí)發(fā)酵較差，而對(duì)照和添加物處理在30 ℃的發(fā)酵與20 和40 ℃差異不顯著。原因可能是晾曬時(shí)空氣濕度大，原材料的水分含量高，下降緩慢，好氧細(xì)菌等有害微生物增多，消耗了較多的WSC，本試驗(yàn)中晾曬只降低了10 個(gè)百分點(diǎn)的水分，未將水分降低至65%以下，因此，晾曬后象草的發(fā)酵品質(zhì)未能改善，反而變差，且30 ℃時(shí)發(fā)酵最差。因?yàn)榕c20 和40 ℃相比，30 ℃條件下青貯需要更高含量的WSC 來(lái)限制丁酸發(fā)酵［27］，且Yang 等［28］曾報(bào)道只有當(dāng)葡萄糖添加率超過(guò)7.0% DM時(shí)，LAB 在30 ℃的小麥秸稈青貯飼料中才能占主導(dǎo)地位。與對(duì)照相比，添加玉米粉后的青貯飼料的pH 和NH3-N含量降低，乳酸含量升高，但效果不顯著，而添加蔗糖的效果顯著（P<0.05）。原因可能是加糖處理可為L(zhǎng)AB 提供充足的底物，相對(duì)較低的pH 抑制了有害微生物的生長(zhǎng)，使蛋白組分得到了較好的保存，故NH3-N 含量較低。有研究報(bào)道高溫（約40 ℃）通常會(huì)促進(jìn)蛋白水解，從而對(duì)發(fā)酵產(chǎn)生不利影響，加劇NH3-N 和丁酸的產(chǎn)生。而本研究結(jié)果表明高溫對(duì)NH3-N 沒(méi)有顯著影響，只是晾曬處理的青貯飼料的丁酸含量有增加趨勢(shì)，原因可能是高溫下乙酸含量的增加抑制了一些蛋白水解微生物［26］。LAB 和好氧細(xì)菌數(shù)量在添加物處理后的每個(gè)溫度下均出現(xiàn)下降，且隨溫度的增加而降低，Li 等［7］也報(bào)道了高溫（40 ℃）會(huì)顯著抑制LAB 的生長(zhǎng)。

Li 等［7］報(bào)道乙酸是熱帶地區(qū)牧草青貯產(chǎn)生的主要有機(jī)酸且隨青貯時(shí)間延長(zhǎng)乙酸水平上升。而在本研究中除晾曬處理在30 ℃青貯時(shí)，乳酸與乙酸含量類似外，象草均以乳酸發(fā)酵為主，可能是因?yàn)橄蟛荼砻嬖街木汉铜h(huán)境條件影響到青貯飼料發(fā)酵所涉及的微生物生理和代謝［27］。除晾曬外的其他青貯飼料隨青貯溫度的增加，乙酸含量增加。這與Wang 等［25］的研究結(jié)果相一致，可能歸因于高溫抑制了產(chǎn)乳酸細(xì)菌（如乳桿菌屬）的代謝［13］，而低溫未抑制腸桿菌屬和異型發(fā)酵LAB（如乳球菌屬）等的生長(zhǎng)。本研究的細(xì)菌多樣性也表明腸桿菌屬和乳球菌屬的相對(duì)豐度在20 ℃青貯時(shí)最高，且晾曬后在20 和30 ℃保存的青貯飼料的腸球菌屬豐度顯著高于40 ℃。Chen等［29］的研究結(jié)果也表明青貯過(guò)程中產(chǎn)生的CO2與乳球菌屬、明串珠菌屬（Leuconostoc）等呈正相關(guān)，與沙雷氏菌屬（Serratia）、鞘氨醇桿菌屬（Sphingobacterium）和片球菌屬（Pediococcus）呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）。因此，本研究中腸桿菌、乳球菌和腸球菌屬可能是導(dǎo)致20 ℃下青貯飼料的產(chǎn)氣量高于30 和40 ℃以及晾曬處理在20 和30 ℃青貯時(shí)產(chǎn)氣量均較高的原因。

4 結(jié)論

在本研究中，新鮮象草的對(duì)照、添加玉米粉或蔗糖處理發(fā)酵品質(zhì)均在30 ℃條件下較好，乳酸含量較高，其中添加蔗糖效果最好；隨青貯溫度升高，乙酸的含量趨于增加。晾曬雖增加了象草的DM 含量，但顯著降低其WSC含量，導(dǎo)致乳酸含量下降、青貯發(fā)酵品質(zhì)變差，特別是30 ℃條件下青貯發(fā)酵品質(zhì)最差。晾曬后在20 和30 ℃時(shí)青貯，產(chǎn)氣量顯著高于其他處理。象草青貯前的細(xì)菌多樣性較豐富，青貯后主要是腸桿菌屬和乳球菌屬，尤其在20 ℃青貯時(shí)的相對(duì)豐度較高，晾曬后在20 和30 ℃青貯時(shí)，腸球菌屬的相對(duì)豐度高于40 ℃。因此，在華南地區(qū)潮濕環(huán)境下，相比于晾曬，添加玉米粉或蔗糖對(duì)其發(fā)酵品質(zhì)效果更好。