聶興玉 張鐵耀 郝 昌

垂體腺瘤是比較常見的顱內(nèi)腫瘤，大多為良性，手術(shù)切除能夠取得較好的治療效果。然而，部分垂體腺瘤表現(xiàn)為侵襲性生長，可累及周圍組織，手術(shù)徹底切除難度非常大，術(shù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險較高。垂體腺瘤的發(fā)生機制較復(fù)雜，可能與免疫功能低下、轉(zhuǎn)錄因子、基因突變等有關(guān)。研究表明微小核糖核酸（microRNA，miRNA）與腫瘤形成密切相關(guān)。miR-26b-5p能通過沉默轉(zhuǎn)錄因子表達，調(diào)控膠質(zhì)瘤細胞凋亡、侵襲。miR-26b-5p 還可靶向調(diào)節(jié)人類Jagged1 基因，抑制腫瘤細胞增殖。本文探討垂體腺瘤組織miR-26b-5p 表達變化及其與術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系，為臨床提供參考。

1 資料與方法

1.1 標本來源 收集2018 年1 月～2020 年1 月月手術(shù)切除的124例垂體腺瘤組織，其中男67例，女57例；年齡25～55 歲，平均（40.65±13.11）歲；吸煙史31 例，飲酒史28例。本研究方案獲倫理委員會批準。

1.2 納入與排除標準 納入標準：術(shù)后病理證實為垂體腺瘤；年齡≥18歲；術(shù)前無免疫治療、放/化療史；知曉研究目的與意義，簽署同意書。排除標準：有腦膜炎、腦梗死等病史；合并心臟、肝臟等重要臟器功能不全；有自身免疫疾病、血液系統(tǒng)疾病病史；患其他原發(fā)性腫瘤；長期使用激素、免疫抑制劑；患可影響免疫功能的疾?。ɡ缃Y(jié)核病、類風(fēng)濕性疾病等）。

1.3 miR-26b-5p 表達水平的檢測 利用實時逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法（quantitative real-time reverse tran?scription polymerase chain reaction，qRT-PCR）檢測垂體腺瘤組織miR-26b-5p相對表達水平。利用Trizol法提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)合成cDNA，然后行PCR反應(yīng)，反應(yīng)條件：94 ℃、10 min（預(yù)變性）；94 ℃、30 s（變性），60 ℃、30 s（退火），72 ℃、30 s（延伸），循環(huán)30次。引物序列：miR-145-5p 上游引物為5′-CTA?AATGCAGAAGTGCAC- 3′ ，下 游 為 5′- TTTG?GAAAGTCAGGTGCAATT-3′；內(nèi)參U6上游引物序為5′-GGAAATTCGTGTCGGTCT-3′，下游為5′-GTA?AGACACGGGTACGAAA-3′。利用2計算miR-26b-5p 的相對表達量。根據(jù)miR-26b-5p 表達水平均值分成高表達與低表達。

1.4 隨訪及術(shù)后復(fù)發(fā)的定義 術(shù)后隨訪48 個月。復(fù)發(fā)的定義：術(shù)后已消失的癥狀再次出現(xiàn)；內(nèi)分泌指標達到緩解標準后再次升高；影像學(xué)檢查再次出現(xiàn)腫瘤生長。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 20.0軟件分析；正態(tài)分布的計量資料采用±

s

表示，行

t

檢驗；計數(shù)資料行

χ

檢驗；利用多因素logistic 回歸模型分析垂體腺瘤術(shù)后復(fù)發(fā)的危險因素；繪制受試者工作特征（receiver op?erating characteristic，ROC）曲 線 分 析miR- 26b-5p 表達水平判斷術(shù)后復(fù)發(fā)的效果；

P

<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 術(shù)后復(fù)發(fā)率124例中，術(shù)后復(fù)發(fā)34例，復(fù)發(fā)率為27.42%（34/124）。90例未見復(fù)發(fā)。

2.2 miR-26b-5p 表達與垂體腺瘤術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系復(fù)發(fā)垂體腺瘤miR-26b-5p 相對表達量（1.25±0.43）明顯低于非復(fù)發(fā)垂體腺瘤[（1.87±0.49）；

P

<0.001]。2.3 垂體腺瘤術(shù)后復(fù)發(fā)的危險因素 單因素分析顯示，腫瘤侵襲性、腫瘤大小和病程、腫瘤切除程度、術(shù)后輔助治療、miR-26b-5p表達水平與垂體腺瘤術(shù)后復(fù)發(fā)有關(guān)（

P

<0.05，表1）。多因素logistic回歸分析顯示，腫瘤侵襲性生長、腫瘤最大徑≥40 mm、病程≥12個月、miR-26b-5p低表達是術(shù)后復(fù)發(fā)的獨立危險因素（

P

<0.05，表2），而腫瘤全切除、術(shù)后輔助治療是預(yù)防術(shù)后復(fù)發(fā)的有益因素（

P

<0.05，表2）。

表1 本文124例垂體腺瘤術(shù)后復(fù)發(fā)影響因素的單因素分析（例）

注：與非復(fù)發(fā)組相應(yīng)值比，*<0.05

危險因素性別 男女年齡<40歲≥40歲侵襲性生長 是否病理類型腫瘤最大徑病程腫瘤切除程度術(shù)后輔助治療miR-26b-5p表達無功能性腺瘤功能腺瘤≤10 mm 10～29 mm≥30 mm<12個月≥12個月全切除未全切除有無高表達低表達復(fù)發(fā)組20（58.82%）14（41.18%）15（44.12%）19（55.88%）26（76.47%）*8（23.53%）7（20.59%）27（79.41%）3（8.82%）18（52.94%）13（38.24%）*16（47.06%）18（52.94%）*4（11.76%）30（88.24%）*19（55.88%）*15（44.12%）7（20.59%）27（79.41%）*非復(fù)發(fā)組47（52.22%）43（47.78%）44（48.89%）46（51.11%）22（24.44%）68（75.56%）24（26.67%）66（73.33%）15（16.67%）67（74.44%）8（8.89%）66（73.33%）24（26.67%）44（48.89%）46（51.11%）83（92.22%）7（7.78%）60（66.67%）30（33.33%）

表2 本文124例垂體腺瘤術(shù)后復(fù)發(fā)影響因素的多因素logis?tic回歸分析

危險因素侵襲性生長腫瘤最大徑病程≥12個月腫瘤全切除術(shù)后輔助治療miR-26b-5p低表達95%置信區(qū)間1.825～4.768 P值<0.001≤10 mm 10～29 mm≥30 mm比值比2.950 1.000 2.162 3.152 3.521 0.839 0.948 1.232 0.978～4.779 1.714～5.796 1.260～9.839 0.755～0.932 0.923～0.974 1.058～3.524 0.057<0.001 0.016 0.001<0.001<0.001

2.4 miR-26b-5p表達水平判斷垂體腺瘤術(shù)后復(fù)發(fā)的效果ROC 曲線分析顯示，miR-26b-5p 表達水平評估垂體腺瘤術(shù)后復(fù)發(fā)的曲線下面積（area under curve，AUC）為0.841（95% CI 0.767～0.915；

P

<0.001），最佳截斷值為1.518，敏感度為84.80%，特異度為81.00%。見圖1。

圖1 ROC曲線分析miR-26b-5p表達水平評估垂體腺瘤術(shù)后復(fù)發(fā)的效果

3 討論

垂體腺瘤的形成過程較復(fù)雜，涉及血管生成、細胞粘附、細胞增殖等因素，具體機制尚不清楚。研究顯示垂體腺瘤的發(fā)生是多種因素參與的復(fù)雜過程，可能與基因異常表達所致的細胞增殖、分化有關(guān)。研究表明miR-26 家族與腫瘤發(fā)生、發(fā)展存在密切關(guān)聯(lián)。miR-26b-5p 為miR-26 家族的一員，其異常表達也與腫瘤發(fā)生有關(guān)。本研究顯示，與未復(fù)發(fā)的垂體腺瘤相比，復(fù)發(fā)垂體腺瘤組織miR-26b-5p表達水平明顯下降。miR-26b-5p 在多種腫瘤中起到抑制細胞增殖的作用。研究發(fā)現(xiàn)肝癌組織呈低表達，下調(diào)VE-cadherin、Snail 和基質(zhì)金屬蛋白酶Ⅱ的表達水平，抑制血管生成。miR-26b-5p 還能抑制S100鈣結(jié)合蛋白A7的表達，從而抑制肝內(nèi)膽管癌細胞的遷移與分化、增殖。有研究發(fā)現(xiàn)，垂體腺瘤miR-26b-5p表達下降，且與Ki-67表達呈負相關(guān)，與垂體腺瘤的侵襲性密切相關(guān)。而趙紅陽等發(fā)現(xiàn)Ki-67 指數(shù)越高，垂體腺瘤術(shù)復(fù)發(fā)風(fēng)險也相應(yīng)增高。這提示，miR-26b-5p 對垂體腺瘤有抑制作用，可能涉及對Ki-67的調(diào)控。

垂體腺瘤大多預(yù)后良好，但仍無法完全避免術(shù)后復(fù)發(fā)，部分病人因腫瘤過大，或腫瘤存在侵襲性，導(dǎo)致完全切除難度增加，影響病人預(yù)后。本文發(fā)現(xiàn)垂體腺瘤術(shù)后復(fù)發(fā)與腫瘤大小、侵襲性、病程、腫瘤切除程度、術(shù)后輔助治療等有關(guān)。分析原因可能為腫瘤過大、有侵襲性以及病程長的病人，垂體腺瘤進展較明顯，尤其是侵襲性腫瘤，可侵犯鄰近組織，全切除率低，術(shù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險高。本文還發(fā)現(xiàn)miR-26b-5p低表達增加垂體腺瘤術(shù)后復(fù)發(fā)的風(fēng)險，表達水平越低，則術(shù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險越高；ROC曲線分析顯示miR-26b-5p 表達水平對評估垂體腺瘤術(shù)后復(fù)發(fā)有一定的價值。曹文紅發(fā)現(xiàn)miR-26b-5p 高表達能對高遷移率族蛋白組A1 以及Vimentin 水平進行調(diào)控，降低腫瘤細胞的遷移能力與侵襲能力。這提示miR-26b-5p 表達降低，則抑制細胞增殖、侵襲的能力降低，增加術(shù)后復(fù)發(fā)的風(fēng)險。

總之，復(fù)發(fā)垂體腺瘤的miR-26b-5p表達水平明顯下降，miR-26b-5p 表達變化與術(shù)后復(fù)發(fā)密切相關(guān)，對評估垂體腺瘤術(shù)后復(fù)發(fā)有一定的價值。