王存才 李 康 郝智慧*

(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)院/中獸醫(yī)藥研究中心，北京 100193；2.青島農(nóng)業(yè)大學(xué) 農(nóng)用生物制藥實(shí)驗(yàn)室，山東 青島 266109)

生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng)(Biopharmaceutics classification system, BCS)是促進(jìn)藥品開(kāi)發(fā)和監(jiān)管的重要工具，通過(guò)了解化合物在生物相關(guān)介質(zhì)中的溶解度及其透過(guò)生物膜的滲透性，可以確定影響藥物吸收速率和程度的限制因素。并根據(jù)藥物的溶解度和滲透性將其分為以下四類:第一類:高溶解度，高滲透性(吸收良好的化合物)；第二類：低溶解度，高滲透性(表現(xiàn)為溶解率有限的吸收)；第三類：高溶解度，低滲透性(表現(xiàn)出滲透性限制的吸收)；第四類：低溶解度，低滲透性(口服生物利用度極差的化合物)。早在2000年時(shí)，美國(guó)食品和藥物管理局(FDA)就已將BCS納入到FDA的工業(yè)指南中，世界衛(wèi)生組織(WHO)和歐洲藥品管理局(EMA)隨后也將BCS引入到了其藥品管理規(guī)范中用于指導(dǎo)藥物開(kāi)發(fā)。此后，BCS成為了仿制藥在體內(nèi)生物等效性研究的豁免依據(jù)，不僅加快了藥物篩選和新藥研發(fā)速率，而且顯著減少了研發(fā)成本。

隨著近年來(lái)獸醫(yī)藥的快速發(fā)展，BCS的概念也逐漸被引入到了獸藥領(lǐng)域。在2005年，Davis等率先探討了BCS應(yīng)用于馬內(nèi)服藥物的可能性。此后，Martinez等和Guo等分別研究了藥物在牛和豬體內(nèi)的溶解度分類，并提出了相應(yīng)的BCS溶解度標(biāo)準(zhǔn)。Liu等更是成功建立了適用于雞的BCS分類系統(tǒng)，為其他物種BCS的建立提供了參考。令人遺憾的是，由于犬與人在胃腸道生理解剖結(jié)構(gòu)上存在的巨大差異，現(xiàn)有的BCS分類標(biāo)準(zhǔn)的適用性尚未外推到犬中，這限制了其在犬類藥物開(kāi)發(fā)中的應(yīng)用。

眾所周知，藥物溶解度是建立BCS的基本挑戰(zhàn)之一。其中犬用內(nèi)服藥物的溶解主要取決于胃液體積，因?yàn)槿诮o藥時(shí)通常沒(méi)有水共服。根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室前期對(duì)犬生理常數(shù)的研究，得到了24 mL空腹胃液容積，這為犬用藥物溶解度的研究提供了數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。此外，溫度與pH也是影響藥物溶解的關(guān)鍵因素，特別是對(duì)于具有pH依賴性的藥物尤為重要。因此，如何獲得犬胃腸道生理參數(shù)并得到合適的溶解度條件是建立犬用BCS亟需解決的問(wèn)題。

建立BCS的另一個(gè)挑戰(zhàn)是藥物在胃腸道中的滲透性。目前，藥物的吸收分?jǐn)?shù)(Fa)是衡量?jī)?nèi)服藥物在腸道中滲透性的主要參數(shù)，根據(jù)質(zhì)量平衡測(cè)定或與靜脈參考劑量比較，當(dāng)被測(cè)藥物在胃腸道中的吸收分?jǐn)?shù)Fa≥85%時(shí)被認(rèn)為是高滲透性，反之為低滲透性。在臨床研究中，吸收分?jǐn)?shù)可以通過(guò)平行人工膜滲透性試驗(yàn)(PAMPA)、體外細(xì)胞培養(yǎng)、腸外翻法和原位腸灌注等方法進(jìn)行研究，其中原位腸灌注法的結(jié)果最接近體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，也是FDA指南推薦的方法，其可靠性已在大鼠和人等研究中被證實(shí)。然而，藥物在犬胃腸道中滲透性的研究目前還未見(jiàn)報(bào)道。

基于此，本研究擬通過(guò)測(cè)量犬的胃腸道生理常數(shù)和單通道腸灌注(Single-pass intestinal perfusion, SPIP)技術(shù)建立起用于測(cè)定犬用藥物溶解度條件和滲透性方法，并以此為依據(jù)初步建立犬用生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng)(BCS)，為今后犬類內(nèi)服藥物的開(kāi)發(fā)提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑

美托洛爾、阿莫西林、氨芐西林、多西環(huán)素、地高辛、林可霉素、鹽酸美洛沙星均由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供；色譜級(jí)甲醇、色譜級(jí)乙腈購(gòu)于美國(guó)Fisher公司；KOH、HCl、K-R溶液、生理鹽水均購(gòu)于中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)有限公司。

1.2 試驗(yàn)儀器

十萬(wàn)分之一分析天平(SA124S-CW)購(gòu)于北京楚齊儀表有限責(zé)任公司；玻璃水銀溫度計(jì)購(gòu)自江蘇宇威醫(yī)療器械有限公司；便攜式pH計(jì)購(gòu)于上海雷克斯科學(xué)儀器有限公司；往復(fù)水浴恒溫振蕩器(SHZ-88A) 購(gòu)于上海滬粵明科學(xué)儀器有限公司，蠕動(dòng)泵(BT100-8)購(gòu)于上海滬西公司；液相色譜儀(Agilent-1260)購(gòu)于美國(guó)Agilent公司。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物

12只平均體重為10 kg健康的成年比格犬(6公6母)，均購(gòu)于山東博龍實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。本研究經(jīng)青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)專業(yè)委員會(huì)批準(zhǔn)[許可證號(hào):SYXK(SD)20170005]，并按照青島農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物護(hù)理和使用指南進(jìn)行飼養(yǎng)。試驗(yàn)結(jié)束后，將這些動(dòng)物實(shí)施安樂(lè)死，并被無(wú)害化處理。

1.4 方法

1

.

4

.

1

體溫測(cè)量

將玻璃水銀溫度計(jì)的前部均勻涂上凡士林以減少犬的不適，旋轉(zhuǎn)入直腸2～3 cm，直到獲得穩(wěn)定的溫度讀數(shù)(約3～5 min)。犬體溫由兩名獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行測(cè)量和讀取，以便減少誤差。

1

.

4

.

2

胃腸液pH測(cè)定

通過(guò)外科手術(shù)的方法，分別刮取胃、十二指腸、空腸和回腸中的液體置于西林瓶中，將pH測(cè)量?jī)x的探針快速插入到西林瓶中進(jìn)行測(cè)量，待儀器讀數(shù)穩(wěn)定后記錄數(shù)值。在兩次測(cè)量之間需要重新校準(zhǔn)pH儀的準(zhǔn)確性，并用蒸餾水徹底清洗電極。

1

.

4

.

3

標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

用十萬(wàn)分之一天平精密稱取美托洛爾、阿莫西林、氨芐西林、多西環(huán)素、地高辛、林可霉素和鹽酸洛美沙星各50 mg到50 mL容量瓶中，用色譜級(jí)甲醇溶解并定容，配制成1 mg/mL的母液。用移液器分別從中吸取0.125、0.625、1.250、2.500、6.250和12.500 mL的母液到25 mL容量瓶中，再用色譜級(jí)甲醇定容至刻度，配制成濃度為5、25、50、100、250和500 μg/mL系列標(biāo)準(zhǔn)液。用0.22 μm有機(jī)濾頭過(guò)濾，取續(xù)濾液到進(jìn)樣瓶中，然后經(jīng)高效液相 (HPLC)檢測(cè)，色譜條件參考《中國(guó)獸藥典》2015版。

1

.

4

.

4

藥物計(jì)量數(shù)(

Do

)的計(jì)算將過(guò)量的阿莫西林、氨芐西林、多西環(huán)素、地高辛、林可霉素和鹽酸洛美沙星置于含50 mL不同pH(3.0、5.0、6.8、7.6和8.0)緩沖液的燒瓶中，在38.5 ℃恒溫水浴震蕩器中，以30 r/min的轉(zhuǎn)速震蕩24 h后再在38.5 ℃恒溫水浴震蕩器中靜置0.3 h。取上清液并適當(dāng)稀釋，經(jīng)0.22 μm濾膜過(guò)濾后，用HPLC測(cè)定藥物平衡溶解度，并根據(jù)平衡溶解度結(jié)果計(jì)算各藥物的計(jì)量數(shù)(

D

)。式(1)為劑量數(shù)(

D

)的計(jì)算公式：

(1)

式中：

M

為單次給藥的最大劑量，mg；

V

為犬胃液體積，mL；

C

為藥物平衡溶解度，mg/mL。當(dāng)

D

≤1時(shí)為高溶解度，當(dāng)

D

>1時(shí)為低溶解度。

1

.

4

.

5

在體原位腸灌注(Single

-

pass intestinal perfu

-

sion, SPIP)試驗(yàn)前12 h禁食，并在前4 h禁水。前肢靜脈注射陸眠寧(0.2 mL/kg)將犬麻醉后，置于加熱裝置上保持38.5 ℃恒溫。經(jīng)手術(shù)打開(kāi)腹腔暴露小腸，結(jié)扎膽管以避免腸肝循環(huán)。分離出十二指腸、空腸和回腸，每段長(zhǎng)約10 cm，并在被測(cè)各腸段的近端和遠(yuǎn)端小心插入兩個(gè)自制EP套管。用生理鹽水輕輕沖洗腸道中內(nèi)容物，直到液體變澄清為止。近端EP管連接到進(jìn)口套管，遠(yuǎn)端連接出口套管，在灌注液與進(jìn)口管之間放置一個(gè)恒流泵控制流速。將空白灌注液在38.5 ℃恒溫下泵入腸道約15 min，以清除任何可能殘留的異物。然后改換為含藥溶液灌注30 min，以便達(dá)到腸道吸收穩(wěn)態(tài)。后每隔15 min(15、30、45、60、75、90、105、120、135和150 min)更換一次標(biāo)有重量的接收瓶。立即離心(10 000 r/min)取上清液，放入-20 ℃冷凍，直到HPLC分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，用飽和氯化鉀處死試驗(yàn)犬，剪取并準(zhǔn)確測(cè)量灌注腸段的長(zhǎng)度和直徑。實(shí)驗(yàn)期間用紗布覆蓋手術(shù)區(qū)域并噴灑生理鹽水以保持濕潤(rùn)。在SPIP研究中，以藥物在胃腸道中的吸收分?jǐn)?shù)(Fa)來(lái)區(qū)分其滲透性的高低，當(dāng)

F

≥85%時(shí)屬于高滲透性，

F

<85%為低滲透性。Fa的計(jì)算公式如式(2)所示：

F

=1-

e

-2

(2)

式中：

An

是吸收常數(shù)，代表口服藥物吸收的基本變量。其計(jì)算公式如式(3)所示：

(3)

式中：

R

為腸直徑，cm；

T

為藥物在腸內(nèi)停留時(shí)間，min；Peff為藥物通過(guò)腸壁的有效滲透率，cm/s；滲透性系數(shù)結(jié)果表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差，SD。

P

的計(jì)算公式如式(4)所示：

(4)

式中：

Q

為進(jìn)口流量，mL/min；

C

′為穩(wěn)態(tài)下的修正出口濃度，mg/mL；

C

為進(jìn)入灌注液中的藥物濃度，mg/mL。

R

、

L

分別為腸段直徑與長(zhǎng)度，cm。

C

′的計(jì)算公式如下，

(5)

式中：

C

為在規(guī)定時(shí)間間隔內(nèi)測(cè)量灌注液中化合物濃度，mg/mL；?為在規(guī)定時(shí)間間隔內(nèi)測(cè)量灌注液出口流量，mL/min。

1

.

4

.

6

灌注液的配制

灌注研究中使用的每種藥物的濃度是基于溶解在24 mL K-R緩沖液中的最高劑量，所有溶液均是現(xiàn)用現(xiàn)配。其中，美托洛爾分別配制成濃度為4、40和400 μg/mL的灌注液各2份，其中一份用鹽酸調(diào)節(jié)pH至6.8，另一份用KOH溶液調(diào)節(jié)pH至7.6，所有藥液均現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.5 數(shù)據(jù)分析

所有動(dòng)物試驗(yàn)均為3次平行試驗(yàn)，采用SPPS 24.0軟件進(jìn)行獨(dú)立t檢驗(yàn)和單因素方差分析，分別評(píng)估兩組和多次比較的差異，數(shù)據(jù)以平均SD表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 藥物溶解度檢測(cè)條件的建立

圖1和表1分別列出了在禁食與進(jìn)食兩種狀態(tài)下，比格犬體溫和胃腸道pH的變化情況。圖1顯示，在禁食與進(jìn)食兩種狀態(tài)下比格犬的直腸溫度沒(méi)有顯著差異，平均溫度為(38.5±0.5) ℃。從表1中可以看出，胃腸道pH范圍為3.8～8.0，平均為6.6。其中胃液pH范圍在3.8～5.4，平均pH為4.6；十二指腸、空腸和回腸的pH范圍為6.1～8.0，平均pH為7.2。結(jié)合比格犬的空腹胃液體積24 mL，可建立一種犬用藥物溶解度體外檢測(cè)模型，即單次給藥的最大劑量能溶解在24 mL，pH 3.8～8.0的38.5 ℃水溶液中時(shí)被定義為高溶解度，反之為低溶解度。

表1 不同胃腸道部位的pH分析
Table 1 pH analysis in different gastrointestinal tract sites

狀態(tài)Condition胃Gastric十二指腸Duodenum空腸Jejunum回腸Ileum進(jìn)食 Feeding3.8±0.76.4±1.17.8±1.07.5±0.6禁食 Fasting5.4±0.86.1±0.47.8±0.77.3±1.2

圖1 不同飼養(yǎng)條件下比格犬的核心體溫Fig.1 Core temperature of Beagles in different feeding conditions

2.2 模型藥物的標(biāo)準(zhǔn)曲線

采用HPLC測(cè)定模型藥物的峰面積，以藥物濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)，峰面積(A)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。表2中是7種模型藥物的標(biāo)準(zhǔn)曲線，R表明藥物濃度與峰面積之間有良好的線性關(guān)系。

表2 模型藥物的標(biāo)準(zhǔn)曲線
Table 2 The standard curve of model drugs

藥物Drug標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Standard curve equation相關(guān)系數(shù)R2Correlation coefficient阿莫西林 AmoxicillinY=257.73X+9.060.999 9氨芐西林 AmpicillinY=917.31X+5.390.999 9多西環(huán)素 DoxycyclineY=449.12X+2.710.999 9地高辛 DigoxinY=188.18X-0.640.999 9林可霉素 LincomycinY=380.59X+3.430.999 9鹽酸洛美沙星 Lomefloxacin hydrochlorideY=894.07X-81.490.999 6美托洛爾 MetoprololY=448.68X-0.120.999 8

2.3 藥物溶解度分類

模型藥物的平衡溶解度測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3，其中氨芐西林、鹽酸洛美沙星和美托洛爾受溶液pH影響較大，其他藥物沒(méi)有明顯的變化。根據(jù)藥物平衡溶解度結(jié)果，以最低平衡溶解度為條件對(duì)模型藥物的計(jì)量數(shù)

Do

進(jìn)行了分類，結(jié)果見(jiàn)表4。其中阿莫西林、多西環(huán)素、地高辛被分為低溶解度，氨芐西林、林可霉素、鹽酸洛美沙星和美托洛爾被分為高溶解度。

表3 藥物在不同pH下的平衡溶解度
Table 3 Equilibrium solubility of drugs at different pH values

藥物DrugpH 3.0pH 5.0pH 6.8pH 7.6pH 8.0阿莫西林 Amoxicillin3.403.503.413.663.56氨芐西林 Ampicillin13.1812.6310.0011.5412.99多西環(huán)素 Doxycycline0.510.570.520.600.59地高辛 Digoxin///0.060.09林可霉素 Lincomycin38.2039.0138.0040.2040.23鹽酸洛美沙星 Lomefloxacin hydrochloride15.6415.7315.6020.3528.06美托洛爾 Metoprolol32.7528.8316.1118.7619.03

2.4 美托洛爾在犬腸道中的滲透性

在不同生理pH下，美托洛爾在小腸各區(qū)域段滲透性見(jiàn)圖2和表5。圖中顯示，美托洛爾(400 μg/mL)在小腸各段中的滲透性大小依次為：十二指腸>回腸>空腸，其中在十二指腸中的滲透性約是空腸中的1.4倍，表明該藥物的吸收依賴于腸道不同的部位。為了確定pH對(duì)美托洛爾滲透性的影響，在2個(gè)pH條件下(pH 6.8和7.6)分別測(cè)定了美托洛爾的Peff值。實(shí)驗(yàn)表明，pH增加雖然會(huì)促進(jìn)美托洛爾的吸收，但對(duì)在十二指腸、空腸和回腸中的通透性并沒(méi)有顯著影響(

P

=0.86)。表4顯示了在pH 6.8時(shí)，美托洛爾在小腸各區(qū)域段的吸收分?jǐn)?shù)與Peff值一致，其Fa值均大于0.85，滲透性分類均屬于高滲透性。

表4 藥物溶解度分類
Table 4 Solubility classification of drugs

藥物Drug劑量/mgDoes溶解度/(mg/mL)Solubility計(jì)量數(shù)Does numberBCS分類BCS classification阿莫西林 Amoxicillin110 3.401.35低氨芐西林 Ampicillin11010 0.46高多西環(huán)素 Doxycycline100 0.518.17低地高辛 Digoxin10 0.066.94低林可霉素 Lincomycin22038.000.24高鹽酸洛美沙星 Lomefloxacin hydrochloride11015.600.29高美托洛爾 Metoprolol12516.110.32高

表5 美托洛爾在不同腸道部位的吸收分?jǐn)?shù)
Table 5 Absorption fraction of metoprolol in different intestinal sites

腸道部位Intestinal site有效滲透率/(×10-4 cm/s)Effective permeability吸收分?jǐn)?shù)/%Absorption fraction滲透性Permeability十二指腸 Duodenum1.45±0.1795高空腸 Jejunum1.05±0.1586高回腸 Ileum1.18±0.3290高

圖2 美托洛爾在不同腸段和不同pH下的有效滲透率Fig.2 Effective permeability values of metoprolol in different intestinal segments and pH

使用不同濃度 (4、40和400 μg/mL) 的美托洛爾在空腸進(jìn)行原位灌注，其Peff值見(jiàn)圖3。圖中結(jié)果顯示，藥物在中低濃度灌注后的Peff值約是高濃度時(shí)的1.6和1.7倍，表明低中濃度的吸收效果較高濃度時(shí)更好。各組中美托洛爾的Peff值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

P

=0.31)。綜上研究表明，美托洛爾可以作為犬用藥物滲透性分類的邊界性藥物使用。

圖3 不同濃度下美托洛爾的滲透性Fig.3 Permeability of metoprolol at different concentrations

2.5 模型藥物的滲透性

使用SPIP方法檢測(cè)了7種犬用臨床常見(jiàn)藥物的腸道滲透性，以美托洛爾為邊界性藥物進(jìn)行了滲透性高低的分類，結(jié)果見(jiàn)表5。其中多西環(huán)素、地高辛與美托洛爾被分類為高滲透性，而阿莫西林、氨芐西林、林可霉素與鹽酸洛美沙星被分類為低滲透性。

2.6 模型藥物的生物藥劑學(xué)分類

根據(jù)藥物溶解度與腸道滲透性研究，對(duì)7種模型藥物進(jìn)行生物藥劑學(xué) (BCS)分類，如圖4所示。在所有藥物中，美托洛爾被分為Class 1類，多西環(huán)素和地高辛被分為Class 2類，氨芐西林、林可霉素、鹽酸洛美沙星被分為Class 3類，阿莫西林被分為Class 4類。

圖4 模型藥物的生物藥劑學(xué)分類Fig.4 Biopharmaceutics classification of model drugs

3 討 論

測(cè)定藥物溶解度并建立適用的溶解度條件對(duì)于犬用藥物生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng)(BCS)的開(kāi)發(fā)是至關(guān)重要的，也是檢測(cè)藥物在腸道內(nèi)滲透性高低的前提。目前藥物溶解度的測(cè)定條件是基于人胃腸道(GI)生理學(xué)而不是犬，因此，為獲取專屬溶解度檢測(cè)方法必須根據(jù)犬胃腸道生理參數(shù)對(duì)現(xiàn)有BCS溶解度標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行調(diào)整。

溫度是影響溶解度的重要因素，藥物溶解度往往會(huì)隨著溫度的變化而改變。與人類(37 ℃)、豬(39 ℃)和雞(41 ℃)顯著不同，本研究結(jié)果顯示犬體溫是38.5 ℃。在此條件下測(cè)得的7種模型藥物的溶解度均高于獸藥典(25±2 ℃)中的數(shù)據(jù)記錄，這與Liu等在研究吡喹酮等雞用藥物溶解度時(shí)的發(fā)現(xiàn)是一致的。此外，由于犬胃液中的基礎(chǔ)pH變化很大，為確定影響藥物溶解度的pH范圍，也為排除因小腸pH遠(yuǎn)高于胃而出現(xiàn)藥物在小腸析出等現(xiàn)象。本研究分別測(cè)定了犬進(jìn)食前后胃腸道(GI)的pH變化，得到GI的pH范圍是3.8～8.0，這與Dressman等研究的犬因基礎(chǔ)胃酸分泌量較低而導(dǎo)致胃腸道pH偏高的現(xiàn)象相吻合，同時(shí)也填補(bǔ)了Papich等在研究犬用藥物溶解度時(shí)缺少胃腸道pH范圍的空白。此外，研究顯示犬胃液擁有比人更高的pH，這可能是導(dǎo)致多西環(huán)素、地高辛和鹽酸洛美沙星的溶解度變化更大的原因?？紤]到影響藥物在犬體內(nèi)溶解度的pH范圍，使用與人用藥物溶解度定義相同的犬用藥物的pH溶解度條件似乎是合適的。

表6 模型藥物的滲透性分析
Table 6 Permeability analysis of model drugs

藥物Drug有效滲透率/(×10-4 cm/s)Effective permeability標(biāo)準(zhǔn)差Standarddeviation (SD)滲透性分類Permeabilityclassification阿莫西林 Amoxicillin0.480.05低氨芐西林 Ampicillin0.620.21低多西環(huán)素 Doxycycline2.760.53高地高辛 Digoxin1.430.26高林可霉素 Lincomycin0.220.08低鹽酸洛美沙星 Lomefloxacin hydrochloride0.720.15低美托洛爾 Metoprolol1.050.33高

當(dāng)試圖建立犬特異性BCS時(shí)面臨的另一個(gè)障礙是與腸道滲透性(Peff)分類相關(guān)的挑戰(zhàn)。盡管有如Caco-2細(xì)胞、平行人工膜通透性試驗(yàn)(PAMPA)和基于磷脂囊泡的通透性試驗(yàn)(PVPA)可用于預(yù)測(cè)Peff，但這些估算方法僅適用于人用藥物，因?yàn)闆](méi)有類似于人用BCS高滲透性或低滲透性分類的邊界性藥物(拉貝洛爾、美托洛爾、甘露醇等)的Peff來(lái)評(píng)估狗體內(nèi)的有效滲透性。雖然利用藥物的logP或絕對(duì)生物利用度(F)有時(shí)可預(yù)測(cè)到藥物的滲透性大小，但這往往是那些已知的通過(guò)被動(dòng)擴(kuò)散以外的機(jī)制而被吸收的化合物(如通過(guò)轉(zhuǎn)運(yùn)體或細(xì)胞旁路轉(zhuǎn)運(yùn))?；诖?，本研究以美托洛爾作為犬用藥物滲透性分類的邊界性藥物。研究結(jié)果表明，美托洛爾在空腸和回腸中的吸收率相似，在十二指腸中的滲透率約為空腸的1.4倍，且pH和其自身濃度變化對(duì)吸收沒(méi)有顯著影響，這表明美托洛爾在犬胃腸道中的吸收過(guò)程與人體內(nèi)相似。此外，美托洛爾在小腸不同部位的吸收分?jǐn)?shù)(Fa)均大于85%，這表明美托洛爾暫時(shí)作為犬用藥物滲透性分類的標(biāo)準(zhǔn)藥物是合理的。需要進(jìn)一步說(shuō)明的是，使用絕對(duì)生物利用度(F)作為滲透性標(biāo)準(zhǔn)是不合適的，因?yàn)槟c道壁和肝臟代謝的影響以及膜內(nèi)流入和流出轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白活性可能會(huì)引入偏差。而吸收分?jǐn)?shù)(Fa)作為滲透性標(biāo)準(zhǔn)已被廣泛承認(rèn)，其正確性優(yōu)于絕對(duì)生物利用度。為證明BCS滲透分類方法的適用性，本研究對(duì)7種犬臨床常用藥物為模型進(jìn)行了檢測(cè)，并分別以美托洛爾的Peff值和

Do

作為滲透性和溶解度指標(biāo)進(jìn)行初步的BCS分類。結(jié)果顯示，7種藥物均被正確分類。盡管本研究使用的方法存在局限性，但評(píng)估結(jié)果強(qiáng)烈表明，美托洛爾暫時(shí)作為犬用藥物滲透性分類的邊界性藥物是合適的。

誠(chéng)然，在初步建立的BCS分類系統(tǒng)的基礎(chǔ)上，為提高對(duì)犬用藥物分類的準(zhǔn)確性，還有很多工作要做。應(yīng)用BCS預(yù)測(cè)藥物吸收依賴于廣泛的變量，除配方因素和胃腸生理因素外，還需考慮腔內(nèi)和粘膜酶反應(yīng)、腸道運(yùn)動(dòng)、藥物首過(guò)作用和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白活性等影響。此外，比格犬作為標(biāo)準(zhǔn)的中型犬被用于本試驗(yàn)，根據(jù)其生理特性建立的BCS分類系統(tǒng)是否適用于小型犬和大型犬還有待于研究。正因?yàn)槿绱?，在后續(xù)BCS分類系統(tǒng)的開(kāi)發(fā)中，應(yīng)建立對(duì)應(yīng)的體外預(yù)測(cè)模型，并結(jié)合體內(nèi)數(shù)據(jù)進(jìn)行體內(nèi)外相關(guān)性分析，建立相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)。通過(guò)這些努力，將獲得更好的評(píng)價(jià)決定體內(nèi)藥物吸收的關(guān)鍵因素，并確定潛在的錯(cuò)誤來(lái)源，以支持BCS在藥物開(kāi)發(fā)及臨床應(yīng)用上的指導(dǎo)作用。

綜上所述，根據(jù)藥物溶解度條件和滲透性方法建立的犬用藥物BCS分類系統(tǒng)，不僅填補(bǔ)了該系統(tǒng)在犬用藥物領(lǐng)域的空白，也為其他物種BCS分類系統(tǒng)的開(kāi)發(fā)和建立提供了參考。將BCS應(yīng)用于獸藥研發(fā)，不僅可以預(yù)測(cè)和優(yōu)化藥物的臨床性能，而且有助于避免額外的體內(nèi)研究，顯著減少開(kāi)發(fā)藥物產(chǎn)品的成本和時(shí)間。