陳 云,徐璐娜,王翰華,李兆慧,周漫佳,程汝濱*
基于HPLC指紋圖譜的不同產(chǎn)地金錢草及其地方習(xí)用品與混用品的鑒定研究
陳 云1,徐璐娜1,王翰華1,李兆慧1,周漫佳2,程汝濱2*
1. 浙江藥科職業(yè)大學(xué),浙江 寧波 315100 2. 浙江中醫(yī)藥大學(xué),浙江 杭州 310053
對不同產(chǎn)地的金錢草及其常見的地方習(xí)用品與混用品的HPLC指紋圖譜進(jìn)行研究,比較分析不同產(chǎn)地金錢草及其習(xí)用品與混用品的差異,為其鑒定技術(shù)的開發(fā)應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。利用80%甲醇制備金錢草及其習(xí)用品與混用品樣品的提取溶液,采用HPLC法建立不同產(chǎn)地的金錢草及其習(xí)用品與混用品提取液的指紋圖譜,明確金錢草及其地方習(xí)用品與混用品的特征鑒別峰,分析比較不同產(chǎn)地金錢草樣品間指紋圖譜的差異,利用SPSS軟件對不同樣品的指紋圖譜進(jìn)行聚類分析和主成分分析,明確HPLC指紋圖譜在不同產(chǎn)地金錢草樣品的質(zhì)量評價和習(xí)用品與混用品的正偽鑒別中的作用。HPLC指紋圖譜共獲得了區(qū)分度較好的8個特征峰數(shù)據(jù),可用于后續(xù)的鑒別和質(zhì)量評價,其中金錢草和其地方習(xí)用品浙金錢草與幾種混用品的指紋圖譜存在顯著差異,SPSS聚類分析結(jié)果表明HPLC指紋圖譜可將金錢草及其地方習(xí)用品與混用品進(jìn)行準(zhǔn)確高效區(qū)分;不同產(chǎn)地金錢草的指紋圖譜存在一定差異,其中四川產(chǎn)地和貴州、云南產(chǎn)地的可以進(jìn)行有效區(qū)分。HPLC指紋圖譜能有效區(qū)分不同產(chǎn)地金錢草及其地方習(xí)用品與混用品,鑒定結(jié)果具有快速、準(zhǔn)確和操作簡單的特點,為控制金錢草藥材商品的質(zhì)量提供了技術(shù)保障。
金錢草;混用品;指紋圖譜;相似度;聚類分析
金錢草為報春花科植物過路黃Hance.的干燥全草[1],又名大金錢草、四川大金錢草等,主要含有黃酮、揮發(fā)油、三萜等化學(xué)成分,具有利尿通淋、除濕退黃等功效,因其對治療肝膽結(jié)石效果顯著,被譽為治結(jié)石之要藥[2]。由于歷史原因和資源限制,金錢草地方習(xí)用品和混用品眾多,至少有7個科14種植物被作為金錢草在各地使用,點腺過路黃、天胡荽、活血丹、廣金錢草、馬蹄金、積雪草等均在特定地區(qū)被作為金錢草使用[3]。隨著藥材野生資源的不斷衰竭,市場存在著藥材品種混亂、摻偽、染色、重金屬超標(biāo)、農(nóng)藥殘留等問題,這些都嚴(yán)重影響著藥材的質(zhì)量[4]。近年來發(fā)現(xiàn),金錢草同屬植物聚花過路黃、巴東過路黃等也作為金錢草偽品流通于市場[5]。金錢草“同名異物”“以假亂真”現(xiàn)象嚴(yán)重,地方習(xí)用品和混用品與正品金錢草在化學(xué)成分、藥理作用和臨床功效等方面存在一定差異,為金錢草的臨床用藥帶來了一定的安全隱患。
隨著中醫(yī)藥大健康產(chǎn)業(yè)的發(fā)展,對中藥材的質(zhì)量提出了更高的要求。道地藥材是經(jīng)過中醫(yī)臨床長期應(yīng)用優(yōu)選出來,產(chǎn)在特定地域的藥材,與其他產(chǎn)區(qū)藥材相比,品質(zhì)和療效更好,且質(zhì)量更穩(wěn)定。楊正久等[6]對貴州省不同來源地的21份金錢草樣品進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)其在槲皮素和山柰素含量上有顯著差異,具有豐富的多樣性與一定地域性。金錢草主產(chǎn)于云貴川地區(qū),雖被收入《四川道地中藥材志》,成為49味川產(chǎn)道地藥材之一[7],但不同產(chǎn)區(qū)的金錢草藥材質(zhì)量仍缺乏可靠的評價方法,難以體現(xiàn)其優(yōu)質(zhì)性,易導(dǎo)致低質(zhì)量金錢草藥材的市場沖擊,不利于健康有序的優(yōu)質(zhì)優(yōu)價金錢草中藥市場環(huán)境的建立。因此,迫切需要建立開發(fā)一種金錢草質(zhì)量分析方法,對不同產(chǎn)區(qū)的金錢草進(jìn)行質(zhì)量評價和區(qū)分,為金錢草道地產(chǎn)區(qū)的確認(rèn)奠定夯實的基礎(chǔ)。
HPLC指紋圖譜是從中藥多組分角度為研究基礎(chǔ)的現(xiàn)代分析技術(shù),是中藥品種鑒定及質(zhì)量評控的一種常用方法[8]。杜歡等[9]證實HPLC特征圖譜可以有效區(qū)分金錢草及其混用品銹毛過路黃、顯苞過路黃等,提示該技術(shù)在金錢草的質(zhì)量評價和品種鑒別方面具有廣闊的應(yīng)用前景。本研究以蘆丁、槲皮素為主要參比成分,采用HPLC法對不同地區(qū)金錢草及其習(xí)用品與混用品藥材進(jìn)行指紋特征圖譜測定及其特征峰的歸屬確認(rèn)分析,并結(jié)合相似度分析、聚類分析和主成分分析比較其差異,來考察HPLC指紋圖譜對不同產(chǎn)地金錢草原藥材及其常見的幾種市場銷售的地方習(xí)用品與混用品的鑒定能力,用以提高金錢草用藥的準(zhǔn)確性,為臨床安全合理用藥提供技術(shù)保障。
LC-20A型高效液相色譜儀(日本島津公司);SB-5200DT型超聲波清洗機(寧波新芝生物科技有限公司);ME204型十萬分之一電了天平(瑞士梅特勒公司);QE-200型高速粉碎機(浙江屹立工貿(mào)有限公司)。
蘆?。ㄅ朇20J6Y1722,質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%),槲皮素(批號C20J6Y1722,質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%),對照品均購自上海源葉生物科技有限公司;甲醇,乙腈均為色譜純,水為娃哈哈純凈水,購自寧波奧博科技有限公司。
30批金錢草及其習(xí)用品與混用品藥材樣品來源信息見表1,浙江臺州、寧波產(chǎn)地的連錢草和馬蹄金為筆者自行采集,其他產(chǎn)地金錢草及其混用品藥材分別購于全國各地的藥材市場。經(jīng)浙江醫(yī)藥高等專科學(xué)校中藥學(xué)院李兆慧副教授鑒定分別為過路黃Hance(金錢草)、點腺過路黃Maxim.(浙金錢草)、連錢草(Nakai) Kupr.、廣金錢草(Osbeck) Merr.、馬蹄金Urban.和積雪草(L.) Urb.,將樣品做好標(biāo)記后保存于該單位奉化校區(qū)中藥實驗室。
取樣品3 g,加50 mL 80%甲醇至150 mL具塞錐形瓶中,密塞,稱定質(zhì)量,60 ℃超聲40 min,放冷,80%甲醇補足質(zhì)量,濾過,精密量取續(xù)濾液25 mL,微孔濾膜(0.45 μm)濾過,取續(xù)濾即得。
表1 樣品來源
Table 1 Sample source
樣品品種來源地 S1金錢草(對照藥材)四川秦巴 S2金錢草四川秦巴 S3金錢草四川維康大藥房 S4金錢草四川維康大藥房 S5金錢草四川遂寧 S6金錢草四川遂寧 S7金錢草四川沐川 S8金錢草四川沐川 S9金錢草貴州遵義 S10金錢草貴州遵義 S11金錢草云南 S12金錢草云南 S13浙金錢草浙江臺州 S14浙金錢草浙江臺州 S15廣金錢草廣東肇慶 S16廣金錢草廣東梅州 S17廣金錢草廣東汕頭 S18廣金錢草廣西南寧 S19連錢草浙江臺州 S20連錢草浙江寧波 S21連錢草江蘇揚州 S22連錢草湖北 S23馬蹄金廣東梅州 S24馬蹄金浙江臺州 S25馬蹄金浙江寧波 S26馬蹄金貴州黔東南 S27積雪草廣西桂林 S28積雪草廣西玉林 S29積雪草湖北 S30積雪草貴州
取蘆丁、槲皮素對照品,加甲醇制成含蘆丁11 μg/mL、槲皮素2 μg/mL的混合溶液,即得。
Inertsil C18色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流動相0.3%醋酸溶液(A)-乙睛(B),梯度洗脫(0~15 min,92%~85% A;15~45 min,85%~79% A;45~50 min,79%~75% A;50~60 min,75%~55% A;60~75min,55%~45% A;75~80 min,45%~92% A),柱溫30 ℃,體積流量0.9 mL/min,檢測波長360nm,進(jìn)樣量10 μL。色譜圖見圖1。
蘆丁和槲皮素等黃酮類化合物為金錢草的主要有效成分之一,且在HPLC指紋圖譜中的出峰時間適中,因此本實驗選蘆丁、槲皮素的色譜峰作為金錢草的參照色譜峰,對不同產(chǎn)地金錢草及其地方習(xí)用品與混用品的HPLC指紋圖譜進(jìn)行比較分析。
5-蘆丁 7-槲皮素,下同
2.4.1 重復(fù)性試驗 取金錢草S1樣品藥材同一批次6份,精密稱定,按“2.1”項下的制備方法制備,按2.3項下的色譜條件測定,以5號峰(蘆?。┳鳛閰⒄辗?,計算出各共有峰的相對保留時間的RSD在0.03%~0.47%、相對峰面積的RSD在0.23%~1.50%。
2.4.2 精密度試驗 取金錢草S1樣品藥材1份,精密稱定,按“2.1”項下的制備方法制備,按“2.3”項下的色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次,測定各特征色譜圖,以5號峰(蘆?。┳鳛閰⒄辗?,計算出各共有峰的相對保留時間的RSD在0.02%~0.34%、相對峰面積的RSD在0.16%~0.47%。
2.4.3 穩(wěn)定性試驗 取金錢草S1樣品藥材末1份,精密稱定,按“2.1”項下的制備方法制備,按“2.3”項下的色譜條件,分別于0、2、4、8、12 h檢測,測定各特征色譜圖,以5號峰(蘆?。┳鳛閰⒄辗?,計算出各共有峰的相對保留時間的RSD在0.04%~0.43%,相對峰面積的RSD在0.26%~1.04%。
將30批金錢草及其地方習(xí)用品與混用品藥材樣品,按“2.1”項下的方法制備,按“2.3”項下的色譜條件檢測,得到的圖譜導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)”(2012A)軟件進(jìn)行分析處理,以S1號金錢草樣品(四川秦巴地區(qū))的指紋圖譜為參照圖譜,多點校正,采用平均數(shù)法,時間窗寬度為0.1,計算各樣品與參照圖譜相似度,識別共有峰。通過SPSS 24軟件對這30批樣品HPLC指紋圖譜的8個共有特征峰峰面積進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,采用組間聯(lián)接法,以平方Euclidean距離為度量標(biāo)準(zhǔn),進(jìn)行聚類分析,并采用降維、因子分析,以回歸方法,計算主成分特征值和方差貢獻(xiàn)率,將得到的成分矩陣進(jìn)行正交旋轉(zhuǎn),得到一個旋轉(zhuǎn)矩陣,進(jìn)行主成分分析。
對來自全國8個地區(qū)的30批金錢草及其地方習(xí)用品與混用品藥材樣品進(jìn)行HPLC指紋圖譜的測定,結(jié)果如圖2所示,金錢草含有分離度較好且峰面積占比較大的8個特征峰,可作為區(qū)分鑒別金錢草及其習(xí)用品與混偽品的主要依據(jù)。與對照品比對分析后,明確5號峰為蘆丁,7號峰為槲皮素,金錢草及其習(xí)用品與混偽品之間的指紋圖譜存在著顯著差異,HPLC指紋圖譜可作為一種鑒別金錢草正偽品種的有效手段。1~4號峰和6號峰在部分混偽品樣品中均有缺失,其中1號峰在浙金錢草(S13)中的占比最高;5號峰在廣金錢草(S15)中的占比最低,在馬蹄金中最高(S23);6號峰在廣金錢草(S15)、連錢草(S19)中缺失,在馬蹄金(S23)與積雪草(S27)中的占比都較高;而8號峰占比最低的是馬蹄金(S23),最高的是積雪草(S27)。該結(jié)果提示金錢草指紋圖譜中的1~8號峰,可作為金錢草HPLC指紋圖譜特征鑒定的指標(biāo),是金錢草及其習(xí)用品與混用品區(qū)分的重要依據(jù)。
如圖3所示,不同產(chǎn)地金錢草之間的指紋圖譜也存在著一定的差異,金錢草含有分離度較好且峰面積占比較大的8個特征峰,可作為區(qū)分鑒別不同產(chǎn)地金錢草之間的主要依據(jù)。與對照品比對后,明確5號峰為蘆丁,7號峰為槲皮素,其中1、6和8號峰在貴州遵義(S9)、云南(S11)產(chǎn)地樣品中的占比均低于其他產(chǎn)地;3、7號峰在貴州遵義(S9)產(chǎn)地中的占比最低;4、5號峰占比較高的是四川秦巴(S1)、維康(S3)、沐川(S7)產(chǎn)地。該結(jié)果顯示金錢草指紋圖譜中這1~8號峰,可作為金錢草HPLC指紋圖譜特征鑒定的指標(biāo),是區(qū)分不同產(chǎn)地金錢草之間的重要依據(jù)。
圖2 金錢草及其習(xí)用品與混用品代表藥材HPLC特征圖譜
圖3 不同產(chǎn)地金錢草代表藥材HPLC特征圖譜
為進(jìn)一步深入分析HPLC指紋圖譜中特征峰的鑒定效果,對不同樣品中的特征峰含量和比例進(jìn)行量化分析,以5號峰作為參照峰,分別計算各樣品各共有峰的相對峰面積,習(xí)用品和混用品均已取其平均值,結(jié)果如表2所示。金錢草及其習(xí)用品與混用品共有峰的相對峰面積的RSD值在25.07%~83.03%,其中2號峰的RSD值最大,7號峰的RSD值最??;2號峰在馬蹄金和積雪草中缺失,其相對峰面積在廣金錢草中占比最高;8號峰的相對峰面積在金錢草中占比最高,在馬蹄金中最低;3號峰在積雪草中缺失,在金錢草中占比最高;6號峰在廣金錢草、連錢草中均缺失,其相對峰面積占比最高的是積雪草;浙金錢草在4、5號峰占比較大的同時,1號峰在其他習(xí)用品及混偽品中占比最高,說明浙金錢草可能在這些習(xí)用品及混偽品中與正品金錢草的差異性最??;廣金錢缺失2個特征峰,且5號峰在其他習(xí)用品及混偽品中占比最低,積雪草缺失3個特征峰,1號峰在其他樣品中占比最低,說明廣金錢草和積雪草可能與正品金錢草差異性更大。該結(jié)果也提示金錢草指紋圖譜中的1~8號峰,可作為金錢草HPLC指紋圖譜特征鑒定的指標(biāo),是金錢草及其習(xí)用品與混用品區(qū)分的重要依據(jù)。
不同產(chǎn)地金錢草的共有峰的相對保留時間的RSD<1.79%,說明在成分組成上大致一樣,相對峰面積的RSD值在5.88%~23.93%,說明在含量上有所差異,其中8號峰的RSD值最大,7號峰的RSD值最小;4號峰、5號峰在四川維康中的相對峰面積占比最高;3號峰、7號峰在貴州遵義產(chǎn)地中最低;2號峰在貴州遵義、云南產(chǎn)地中的相對峰面積占比最高,在四川遂寧中最低;1號峰、6號峰和8號峰的相對峰面積在貴州遵義、云南產(chǎn)地中最低,說明貴州遵義、云南產(chǎn)地的金錢草在特征峰含量上可能與四川產(chǎn)地相比具有更大的差異,其原因可能與生長環(huán)境有關(guān),有待深入研究。
表2 金錢草及其習(xí)用品與混用品HPLC指紋圖譜特征峰相對峰面積
Table 2 Fingerprint characteristic peak relative peak area of L. christinae and its articles and mixes
樣品特征峰相對峰面積 12345678 S11.090.760.771.211.000.580.170.68 S21.090.760.771.211.000.580.170.68 S31.050.760.831.231.030.570.180.68 S41.040.760.821.221.030.570.180.68 S51.030.710.920.870.820.500.180.67 S61.040.710.920.880.830.500.180.67 S71.080.780.901.161.000.560.170.69 S81.080.780.901.160.990.560.170.69 S90.760.880.540.850.970.440.150.38 S100.760.890.540.850.960.440.150.38 S110.780.810.880.890.890.420.170.39 S120.780.810.860.890.890.420.170.39 S131.170.200.360.450.420.380.080.15 S141.160.200.370.460.420.370.080.16 S150.001.160.430.640.090.000.140.12 S160.001.150.430.630.090.000.130.11 S170.001.160.430.640.090.000.140.12 S180.001.160.430.640.090.000.140.12 S190.520.190.190.230.380.000.260.11 S200.530.190.190.220.380.000.250.10 S210.520.180.190.230.380.000.260.11 S220.520.190.190.230.380.000.260.11 S230.640.000.170.390.790.960.150.09 S240.630.000.160.380.770.950.150.09 S250.640.000.170.390.790.960.150.09 S260.640.000.170.390.790.960.150.09 S270.480.000.000.000.200.980.180.30 S280.480.000.000.000.200.980.170.28 S290.470.000.000.000.210.960.180.30 S300.480.000.000.000.200.980.180.30
以S1號金錢草樣品(四川秦巴地區(qū))為參照圖譜,通過“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)”(2012A)軟件對這30批金錢草及其習(xí)用品與混用品圖譜進(jìn)行分析處理,生成對照指紋圖譜,見圖1,并進(jìn)行相似度計算。30批樣品的相似度差異較大,習(xí)用品和混用品相似度在0.023~0.486,其中浙金錢草(S13~S14)與金錢草(S1~S12)的相似度相對較高,廣金錢(S15~S18)、積雪草(S27~S30)的相似度略低,在0.023~0.045。不同產(chǎn)地的金錢草(S1~S12)相似度較高,在0.916~1.000,其中貴州遵義(S9~S10)、云南(S11~S12)產(chǎn)地的相似度稍低于四川產(chǎn)地(S1~S8),其原因可能與生長環(huán)境有關(guān),有待深入研究。
通過SPSS 24軟件對這30批樣品HPLC指紋圖譜的8個共有特征峰峰面積進(jìn)行聚類分析,結(jié)果如圖4所示。當(dāng)Euclidean距離大于5時,金錢草及其習(xí)用品與混用品樣品可聚為6類,積雪草(S27~S30)聚為第1類,馬蹄金(S23~S26)聚為第2類,連錢草(S19~S22)聚為第3類,浙金錢草(S13~S14)聚為第4類,金錢草(S1~S12)聚為第5類,廣金錢草(S15~S18)聚為第6類。不同產(chǎn)地的金錢草可聚為2類,其中貴州遵義(S9~S10)、云南(S11~S12)產(chǎn)地的金錢草可聚為一類,四川(S1~S8)產(chǎn)地的金錢草聚為第2類,說明不同產(chǎn)地金錢草及其地方習(xí)用品與混用品的HPLC指紋圖譜有很大差異,其聚類趨勢與相似度計算結(jié)果基本一致。這也體現(xiàn)了不同產(chǎn)地的金錢草具有一定的區(qū)域性,貴州產(chǎn)地和云南產(chǎn)地的金錢草之間有一定的親緣關(guān)系,而四川作為金錢草的主產(chǎn)區(qū)有一定的獨特優(yōu)勢,這為金錢草道地藥材的質(zhì)量評價和鑒定區(qū)分提供了一定的技術(shù)保障。
圖4 金錢草及其習(xí)用品與混用品的聚類分析樹狀圖
通過SPSS 24軟件對這30批樣品HPLC指紋圖譜的8個共有特征峰峰面積進(jìn)行主成分分析,結(jié)果見表3。主成分特征值和方差貢獻(xiàn)率是選擇主成分的依據(jù),載荷矩陣反映了各變量對主成分的重要程度。經(jīng)因子分析所得的前3個主成分,其特征值均>1,即4.122、1.972、1.114,方差的總累積達(dá)90.095%,說明各個成分之間具有較強的相關(guān)性,適合主成分分析。將得到的成分矩陣進(jìn)行正交旋轉(zhuǎn),得到8個指標(biāo)在3個主成分中的旋轉(zhuǎn)矩陣,據(jù)表4所示:第1主成分的信息主要來自于1、3、4、5(蘆?。?號色譜峰,第2主成分信息主要來自6號色譜峰,第3主成分信息主要自7(槲皮素)號色譜峰。以1、2、3主成分為自變量繪制得分圖如圖5所示,從圖中可以看出不同產(chǎn)地金錢草及其地方習(xí)用品與混用品樣品已經(jīng)進(jìn)行了很好地分類,共分為6大類,金錢草(S1~S12)聚為第一類,浙金錢草(S13~S14)聚為第2類,馬蹄金(S23~S26)聚為第3類,積雪草(S27~S30)聚為第4類,連錢草(S19~S22)聚為第5類,廣金錢草(S15~S17)聚為第6類,其結(jié)果與聚類分析基本一致。
表3 金錢草及其習(xí)用品與混用品的主成分分析特征值和方差貢獻(xiàn)率
Table 3 Principal component analysis of eigenvalue and variance contribution rate of L. christinae and its articles and mixes
成分特征值方差貢獻(xiàn)率/%累積方差貢獻(xiàn)率/% 14.12251.52551.525 21.97224.64976.174 31.11413.92190.095
表4 金錢草及其習(xí)用品與混用品的主成分因子荷載矩陣
Table 4 Principal component factor load matrix of L. christinae and its articles and mixes
峰號成分1成分2成分3 1 0.707 0.560 0.082 2 0.578?0.772?0.174 3 0.949?0.244 0.028 4 0.955?0.224?0.061 5 0.826 0.393 0.116 6 0.019 0.876?0.286 7?0.158?0.010 0.976 8 0.877 0.174 0.157
圖5 金錢草及其習(xí)用品與混用品的指紋圖譜得分
本研究首先對樣品制備方法及色譜條件進(jìn)行了優(yōu)化,最終以出峰數(shù)量和分離效果確定以80%甲醇的溶劑超聲提取,以Inertsil C18色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)、流動相0.3%醋酸-乙腈、梯度洗脫、柱溫30 ℃、體積流量0.9 mL/min、檢測波長360 nm為最佳色譜參數(shù)。其次通過相似度分析、聚類分析和主成分分析對不同產(chǎn)地金錢草及其地方習(xí)用品與混用品的HPLC指紋圖譜進(jìn)行了研究。結(jié)果顯示HPLC指紋圖譜共獲得了區(qū)分度較好的8個特征峰,指認(rèn)了5號峰為蘆丁,7號峰為槲皮素,其中金錢草及其地方習(xí)用品與混用品的指紋圖譜存在顯著差異,浙金錢草與正品金錢草的相似度最高,廣金錢草、積雪草的相似度略低,SPSS聚類分析結(jié)果表明HPLC指紋圖譜可將金錢草及其地方習(xí)用品與混用品進(jìn)行準(zhǔn)確高效區(qū)分;不同產(chǎn)區(qū)金錢草的指紋圖譜存在一定差異,其中四川產(chǎn)區(qū)和貴州、云南產(chǎn)地的可以進(jìn)行有效區(qū)分。以上結(jié)果表明,本研究建立的HPLC指紋圖譜法可用于鑒別不同產(chǎn)地金錢草及其地方習(xí)用品與混用品,且浙金錢草長期作為浙江地區(qū)金錢草藥材的代替習(xí)用品,具有一定的科學(xué)依據(jù)。本研究的開展為浙金錢草資源的開發(fā)與利用提供了一定的技術(shù)保障,為后續(xù)浙金錢草的應(yīng)用研究奠定了基礎(chǔ),有助于對其進(jìn)一步深入研究和有關(guān)健康產(chǎn)品的開發(fā)。
道地性中藥材是近年的研究熱點之一,隨著中藥現(xiàn)代化基地建設(shè)的推進(jìn),中藥材跨區(qū)域引種現(xiàn)象日益增加,加之市場流通的便利性,道地藥材與非道地藥材在藥材市場共存,嚴(yán)重影響了道地性藥材價值和療效。我國作為道地藥材的產(chǎn)區(qū),原材料豐富,全國均有分布,且政府越來越重視中醫(yī)藥文化及技術(shù)的發(fā)展與傳承,這也為道地藥材擴大市場占有率提供了有利條件[10]。藥材性狀、藥效和化學(xué)成分通常是評價道地藥材的直接指標(biāo),其中化學(xué)成分分析被公認(rèn)為道地藥材的內(nèi)在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[11],這幾年來,很多學(xué)者用化學(xué)指紋圖譜對道地藥材進(jìn)行鑒定識別,效果顯著,指紋圖譜也已成為國際公認(rèn)的控制中藥質(zhì)量的最有效手段[12]。本研究表明,不同產(chǎn)地的金錢草在HPLC指紋圖譜上有一定差異,其中四川秦巴、維康、遂寧、沐川產(chǎn)地的樣品和貴州遵義、云南昆明產(chǎn)地的有著顯著差異,主要體現(xiàn)在成分含量上有一定的差別,且不同產(chǎn)地的金錢草表現(xiàn)出了一定的區(qū)域性,四川產(chǎn)區(qū)的金錢草樣品與貴州、云南產(chǎn)地樣品能夠明顯區(qū)分,四川作為金錢草的主產(chǎn)區(qū)有一定的獨特優(yōu)勢[7],這為金錢草道地藥材的質(zhì)量評價和鑒定區(qū)分提供了一定的技術(shù)保障。
在廣東、廣西地區(qū),常把廣金錢草當(dāng)作金錢草使用,稱為“廣東金錢草”,含黃酮和生物堿成分,主治泌尿系結(jié)石等病癥[13];積雪草在湖北、廣西地區(qū)也被當(dāng)作金錢草使用,稱為“地錢草”[14],主要含有三萜類和揮發(fā)油類成分,有著抗抑郁、抗炎等作用[15];在江浙滬地區(qū),用于治療各種熱淋、尿路結(jié)石等病癥的“金錢草”其實大部分是連錢草[16],主要含揮發(fā)油和三萜酸類成分[17];在四川和貴州等地區(qū),還把馬蹄金當(dāng)作金錢草,稱為“小金錢草”[18],含黃酮和揮發(fā)油類成分,主要用于治療濕熱黃疽、尿路感染等病癥,具有鎮(zhèn)痛、抗炎作用[19];點腺過路黃在浙江地區(qū)的資源蘊藏量非常豐富,并收錄在《浙江省中藥炮制規(guī)范》中,因其與正品金錢草的主治功效相似,因此在浙江地區(qū)常用其作為金錢草的代替習(xí)用品長期使用,名為“浙金錢草”[20],主要成分為糖類和氯化鉀,具有清利濕熱、消腫的功效,主要用于治療炎癥,包括肝炎、膀胱炎等[21]。正品金錢草主要含有黃酮和揮發(fā)油類成分,以除濕退黃、利膽排石為主要功效,偏重于治結(jié)石,如此混用,必將給金錢草的臨床應(yīng)用帶來一定的安全隱患。
本研究發(fā)現(xiàn),HPLC指紋圖譜可以作為一種評判不同產(chǎn)地金錢草及其地方習(xí)用品與混用品質(zhì)量差異的方法,但因藥材取樣的局限性,本研究不能完全代表各產(chǎn)地金錢草及其地方習(xí)用品與混用品的質(zhì)量差異,應(yīng)進(jìn)一步在其他成分或其他方面進(jìn)行深入分析,以提高用藥的科學(xué)性。
利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突
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Study on identification technology ofand its local common articles and mixed articles based on HPLC fingerprint
CHEN Yun1, XU Lu-na1, WANG Han-hua1, LI Zhao-hui1, ZHOU Man-jia2, CHENG Ru-bin2
1. Zhejiang Pharmaceutical University, Ningbo 315100, China 2. Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 310053, China
To researchand its local common articles and mixed articles based on HPLC fingerprint, and compare and analyze the differences of the medicinal materials and mixed articles in different areas, so as to lay a foundation for the development and application of the identification technology.Using 80% methanol to preparationand its local common articles and mixed articles extracts, HPLC method was used to establish the fingerprints of theand its local common articles and mixed articles, clarify the characteristic identification peak of theand its local common articles, analyze and compare the differences of the fingerprints of different thesamples. SPSS software was used for cluster analysis of fingerprints of different samples, to clarify the role of HPLC fingerprint in the quality evaluation of thesamples in different areas and the positive and false identification of common articles and mixed articles.The data of eight characteristic peaks were obtained by fingerprint. The composition and proportion of each characteristic peak in the fingerprint of differentspecies were significantly different, the results of SPSS cluster analysis showed that HPLC fingerprint could be used to accurately and efficiently distinguish theand its local common articles. There were also some differences in the fingerprint patterns of the samples from different regions, among which the samples from Sichuan, Guizhou and Yunnan could be effectively distinguished.HPLC fingerprint can effectively distinguish the sources of differentand its local common articles, and the identification results have the characteristics of rapid, accurate and simple operation, which provides a technical guarantee for the quality control of the.
Hance; adulterants; fingerprint; similarity; cluster analysis
R286.2
A
0253 - 2670(2022)14 - 4504 - 08
10.7501/j.issn.0253-2670.2022.14.029
2021-12-19
浙江醫(yī)藥高等??茖W(xué)校校級科研基金項目(XY2020005,ZPCSR2020006,ZPCSR2020007)
陳 云(1988—),女,實驗師,碩士,研究方向為中藥資源的化學(xué)成分和質(zhì)量控制研究。Tel: 13429355212 E-mail: 365553752@qq.com
程汝濱,副研究員,研究方向為中藥資源開發(fā)與利用。Tel: 15988839155 E-mail: biothcheng@hotmail.com
[責(zé)任編輯 時圣明]