夏天吉，閆明珠，王智，靳蘇維，劉新民，潘瑞樂，常琪

(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥用植物研究所，北京 100193)

睡眠是維持機體正常功能的重要生理活動，充足、良好的睡眠可以使人恢復(fù)精力和體力。 隨著人們生活節(jié)奏的加快以及人口老齡化的加劇，失眠已成為當(dāng)今社會普遍存在的健康問題。

失眠是指患者對睡眠時間和(或)質(zhì)量不滿足并影響日間社會活動的一種主觀體驗，主要表現(xiàn)為入睡困難、睡眠難以維持、過早蘇醒、醒后伴有煩躁、意識不清或疲勞等[1]，長期失眠可能會引起記憶減退、免疫功能降低、情緒障礙，甚至引發(fā)抑郁癥、焦慮癥、糖尿病、高血壓、肥胖癥、心腦血管疾病等。 我國2017 年大于10 萬樣本量的流行病學(xué)統(tǒng)計[2-3]，失眠患病率為15%，其中老年人患病率為35.9%。 失眠問題日益顯著，因此研發(fā)能夠改善睡眠的藥物或保健品已成為當(dāng)今熱點，而相關(guān)研究需涉及動物實驗，主要包括失眠動物模型的建立和評價方法。 目前文獻中使用較多的動物模型為大鼠和小鼠。 針對大小鼠失眠模型，構(gòu)建方法甚多，各具特點，可應(yīng)用不同角度的評價方法判斷造模是否成功，同時可采用這些評價方法進行鎮(zhèn)靜催眠藥物藥效學(xué)的評價。 本文將對常用的大小鼠失眠模型和評價方法進行綜述，以期為失眠的研究提供參考。

1 失眠模型的文獻分析

利用中國知網(wǎng)和 PubMed 數(shù)據(jù)庫對近10 年(2010.01 ～2021.06)發(fā)表的文獻進行檢索，關(guān)鍵詞為“失眠動物模型(insomnia animal model)”、“失眠(insomnia)”、“睡眠障礙(sleep disorders)”、“睡眠剝奪 (sleep deprivation)” 和 “睡眠干擾 (sleep disturbance)”合并“大鼠(rats)”或“小鼠(mice)”，搜索后得到中文文獻1145 篇、英文文獻3470 篇。在共計4615 篇的文獻中，大部分是利用失眠動物模型進行認知、焦慮、抑郁、血壓、血糖等方面的研究，而與睡眠直接相關(guān)的文獻僅506 篇，約占11%。 在506 篇研究睡眠相關(guān)的文章中，應(yīng)用物理因素造模共213 篇，主要通過輕柔刺激法(83 篇)和平臺水環(huán)境法(69 篇)；化學(xué)因素造模有227 篇，其中采用最多的是對氯苯丙氨酸(190 篇)，也可利用咖啡因(20篇)干擾睡眠；病理因素造模的文章較少，僅20 篇；亦有采用上述多個因素相結(jié)合的造模方法，即復(fù)合因素法，有38 篇。 下面對用于睡眠相關(guān)研究的大小鼠失眠模型進行總結(jié)介紹。

2 大小鼠失眠模型的構(gòu)建方法

2.1 物理因素

2.1.1 觸碰法

觸碰法指通過輕柔觸碰動物、晃動或拍打鼠籠以干擾動物的睡眠造成動物失眠的方法。 觸碰的方式可為人工手動觸碰，也可利用儀器，選取毛刷、杠桿或木棒進行自動觸碰[4]。 晃動籠具既可手動搖晃，也可將其放在搖床或可移動的平面上以達到使動物保持清醒的目的。 該方法具有刺激強度小、對動物干擾小的優(yōu)點，且無持續(xù)性壓力。 人工干預(yù)的方法較易實施，但對實驗者的專注力、體力要求較高，只適合短時間造模。 若采用儀器進行自動干擾，短期或長期造模均可。 Wallace 等[5]利用此方法研究睡眠碎片化對小鼠的影響。 動物放入含杠桿的鼠籠中，杠桿每2 min 自動轉(zhuǎn)動10 s，當(dāng)觸碰到動物時，動物被喚醒。 腦電監(jiān)測結(jié)果顯示，這一過程中動物的非快動眼睡眠(nonrapid eye movements sleep，NRMES)和快動眼睡眠(rapid eye movement sleep，REMS)時間顯著減少，覺醒次數(shù)明顯增加。研究多利用此方法觀察不同處理的小鼠在短時睡眠剝奪后，睡眠恢復(fù)的差異性。 現(xiàn)已成為最常用的睡眠剝奪方法。

2.1.2 平臺水環(huán)境法

平臺水環(huán)境法的原理是動物進入REM 睡眠后肌肉張力消失，從平臺掉落水中驚醒，造成REM 睡眠剝奪。 造模方法為將動物放在實驗箱內(nèi)直徑較小的平臺上，平臺對于小鼠多設(shè)定為直徑約2 cm、高約5 cm；對于大鼠直徑約6.5 cm，高約8 cm。 實驗箱內(nèi)注入自來水，水面高度距離平臺面約0.5 ～1 cm。 此方法包括:(1)單平臺法即實驗籠內(nèi)僅設(shè)置一個平臺，可避免動物相互干擾，但會造成單籠飼養(yǎng)的隔離應(yīng)激，甚至出現(xiàn)社交障礙；(2)多平臺法可同時進行多只動物的REM 睡眠剝奪[6]，并且動物可在各平臺上自由活動。 故多平臺法應(yīng)用較廣泛。 該方法可針對性剝奪REM 睡眠，缺點是若造模時間過長或強度過大，可能出現(xiàn)動物掉落水中因體力不支無法返回平臺而死亡的現(xiàn)象。 故不適合長期且高強度造模[7]。 Machado 等[8]應(yīng)用直徑為6.5 cm 的平臺，對大鼠進行單平臺法和多平臺法的睡眠剝奪，發(fā)現(xiàn)在造模期間，兩種方法不僅能基本完全剝奪動物的REM 睡眠，更顯著減少慢波睡眠。

2.1.3 滾筒法

滾筒法(轉(zhuǎn)輪法)的原理是將動物放入滾筒等裝置中，裝置自動旋轉(zhuǎn)，動物被迫隨裝置轉(zhuǎn)動而運動，導(dǎo)致無法入睡或短暫睡眠后覺醒。 實驗除設(shè)有對照組和睡眠剝奪組外，常增加強迫運動組，目的在于排除運動對動物睡眠相關(guān)指標(biāo)的影響。 強迫運動組的裝置轉(zhuǎn)速多設(shè)置為睡眠剝奪組的兩倍，時間減少一半，保證充足的睡眠[9]。 此方法的特點為造模強度大，可實現(xiàn)完全睡眠剝奪，重復(fù)性和可靠性高，但對動物的體力消耗大，對儀器的穩(wěn)定性要求較高。 Dispersyn 等[10]將小鼠放入滾筒(外徑35.6 cm，內(nèi)徑 20.9 cm)中，滾筒以 3 m/min 轉(zhuǎn) 3 s，停12 s 的方式自動旋轉(zhuǎn)，以探究睡眠剝奪24 h 和恢復(fù)期48 h 內(nèi)小鼠睡眠的變化。 結(jié)果表明小鼠24 h 內(nèi)覺醒時間達97%，恢復(fù)期第1 天7:00 ～19:00，小鼠NREM 和REM 睡眠明顯反彈。

除觸碰法、平臺水環(huán)境法和滾筒法外，水上網(wǎng)格法、水上轉(zhuǎn)盤法等也可應(yīng)用于失眠動物的造模，但據(jù)近十年文獻統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)已較少應(yīng)用。

2.1.4 慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激

慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激模型( chronic unpredictable mild stress，CUMS)，早期又名慢性溫和應(yīng)激模型(CMS)，由 Katz 等[11]于 1981 年首先建立。 造模期間動物歷經(jīng)潮濕墊料、空瓶、禁食、冰水游泳、熱水游泳、夾尾、晝夜顛倒、電擊等操作，最終造成快感缺失、焦慮、抑郁和學(xué)習(xí)記憶障礙等[12]。此模型大多用于焦慮、抑郁、認知等方面的研究，也有研究顯示其會對睡眠造成影響。 Mou 等[13]對SD大鼠進行28 d 的慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激后，向大鼠腹腔注射50 mg/kg 戊巴比妥鈉，觀察到模型大鼠的睡眠時間顯著縮短。 Nollet 等[14]對小鼠進行9 周的CUMS 造模，并間隔進行腦電監(jiān)測。 結(jié)果顯示，造模僅3 d 即可使小鼠的REMS 時間顯著增加，并持續(xù)至造模結(jié)束；NREMS 在整個周期內(nèi)時長無顯著變化，但呈碎片化。

2.1.5 慢性束縛

束縛是將動物放入狹小的束縛裝置中，限制動物的運動空間和范圍，造成心理和生理的雙重壓力，具有簡單易操作、無痛且持久的特點[15]。 慢性束縛不僅使動物情緒、學(xué)習(xí)記憶等行為學(xué)指標(biāo)、炎癥指標(biāo)發(fā)生變化[16-17]，也可造成睡眠障礙。 陸婷婷[18]將ICR 小鼠放入50 mL 離心管制成的束縛器中，進行 3、5 或 7 d 的束縛造模，每天 9 h 或 12 h，并于束縛結(jié)束后腹腔注射戊巴比妥鈉誘導(dǎo)動物入睡，觀察睡眠潛伏期和睡眠時間。 束縛后的各組小鼠睡眠潛伏期均延長、睡眠時間均縮短，以每天束縛9 h，持續(xù) 7 d 最為顯著。 Yasugaki 等[19]對 C57BL/6J小鼠進行3 周的浸水和束縛實驗，將小鼠放入束縛管內(nèi)，垂直放入水中。 每天2 h，每周6 d，并于各周第7 天進行腦電監(jiān)測。 小鼠在給予1、2 和3 周的壓力刺激后24 h 內(nèi)均顯示出覺醒時間減少，NREMS和REMS 時間增加，其中第1 周結(jié)果最顯著，同時伴隨REMS 次數(shù)明顯增加。

2.1.6 慢性社會挫敗

2.4.4產(chǎn)業(yè)鏈短，產(chǎn)品附加值不高中藥材深加工對技術(shù)和資金實力要求較高，由于技術(shù)落后和資金缺乏，鎮(zhèn)內(nèi)中藥材加工較少，產(chǎn)業(yè)鏈短，使得產(chǎn)品的經(jīng)濟附加值不高，難以產(chǎn)生較高的經(jīng)濟效益。以覆盆子加工為例，加工場地狹小，設(shè)備落后，手段較為原始，只是簡單的烘干或是人工曬干。

慢性社會挫敗動物模型模擬人在社會環(huán)境中因社會地位等問題產(chǎn)生的心理壓力，最終導(dǎo)致社交恐懼和興趣缺失[20]。 動物模型常采用C57BL/6J 小鼠，將其放入CD1 小鼠的籠中，因CD1 小鼠的領(lǐng)地中突然出現(xiàn)其他動物，會攻擊C57BL/6J 小鼠。 造模一般采用每天攻擊10 min，其余時間用透明隔板隔開的方式。 該方法不僅會引起動物的社交障礙，同時會改變其睡眠節(jié)律。 Henderson 等[21]對C57BL/6J 小鼠進行10 d 慢性社會挫敗造模，在第1、3、10 天進行腦電監(jiān)測。 結(jié)果顯示 1、3、10 d 社會挫敗后3 h 內(nèi)覺醒時間顯著增加，REMS 時間顯著減少，NREM 睡眠減少；造模后10 ～22 h 出現(xiàn)睡眠反彈，覺醒時間極顯著減少，NREM 睡眠極顯著增加，REM 睡眠增加。 Wells 等[22]同樣用 C57BL/6J小鼠造成社會挫敗模型，并每日監(jiān)測腦電變化。 發(fā)現(xiàn)造模期間，模型組REMS 平均時間顯著增加，在第4、5、6、7、9 天與對照組有顯著性差異，REMS 次數(shù)對應(yīng)增加。 慢波睡眠時間也呈上升趨勢，同時伴隨覺醒時間減少。

2.1.7 空瓶刺激

空瓶刺激模型由林文娟等[23]建立，指動物經(jīng)過定時喂水訓(xùn)練后，形成條件反射，隨后進行不定時空瓶刺激，1 d 內(nèi)1 ～ 2 次，以誘發(fā)其情緒應(yīng)激。 于鑫[24]應(yīng)用慢性情緒應(yīng)激造大鼠失眠模型。 大鼠經(jīng)歷10 d 定時喂水訓(xùn)練后，進行14 d 空瓶刺激，應(yīng)激后大鼠睡眠總時間、慢波睡眠、REM 睡眠均縮短。

2.1.8 電擊

電擊是可使動物產(chǎn)生恐懼的壓力源，大量研究表明其會對動物的睡眠產(chǎn)生影響。 王芳等[25]通過電刺激造大鼠失眠模型，參數(shù)為電流0.5 mA，頻率1 Hz，刺激 30 s 間隔 30 min，觀察到 8 h 電刺激后SD 大鼠睡眠總時間、慢波睡眠、REM 睡眠均減少，覺醒時間增加。 Yan 等[26]也應(yīng)用相同參數(shù)電擊造模，觀察大鼠經(jīng)受刺激前后睡眠的變化，結(jié)果與上述研究一致。

觸碰法、平臺水環(huán)境法和滾筒法模擬因為外界環(huán)境干擾所致的睡眠不足，根據(jù)造模時間可造成完全睡眠剝奪或部分睡眠剝奪，使動物表現(xiàn)出以睡眠時間減少為特征的失眠癥狀。 慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激、慢性束縛、慢性社會挫敗、空瓶刺激和電擊是通過心理和生理的雙重應(yīng)激，造成動物睡眠障礙，普遍表現(xiàn)為覺醒時間增加，睡眠時間減少。 然而，經(jīng)歷慢性社會挫敗應(yīng)激的動物多表現(xiàn)為睡眠時間增加。 此外，創(chuàng)傷后應(yīng)激、沖突性心理應(yīng)激也可造成動物睡眠障礙，出現(xiàn)失眠癥狀[27-28]。

2.2 化學(xué)因素

對氯苯丙氨酸(4-chloro-DL-phenylalanine，PCPA)是色氨酸羥化酶的選擇性和不可逆性抑制劑，色氨酸羥化酶是合成5-HT 的起始酶和限速酶。 5-HT 已被證實在睡眠-覺醒的調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用，而 PCPA 可有效阻斷95%以上5-HT 合成[29]。 腹腔注射PCPA 造成失眠模型，常用的劑量為300 ～ 500 mg/(kg·d)，連續(xù)注射 1 ～ 3 d。注射PCPA 后，動物體內(nèi)5-HT 在至少7 d 內(nèi)維持較低水平，9 d 后可基本恢復(fù)正常[30]。 該方法造模成功率高，穩(wěn)定性好，動物出現(xiàn)的失眠癥狀與人類相似，目前已廣泛用于失眠動物實驗的研究。 本文從動物品系、周齡或體重、給藥劑量和方式等方面總結(jié)近幾年P(guān)CPA 造成大小鼠失眠模型的方法，見表1。

表1 PCPA 造大/小鼠失眠模型的方法Table 1 Methods of insomnia models of rats and mice caused by PCPA

2.2.2 咖啡因誘導(dǎo)失眠模型

咖啡因是腺苷A1和A2A受體的拮抗劑，其對二者的親和力相似，無選擇性。 咖啡因在體內(nèi)進一步被代謝為黃嘌呤和茶堿，其代謝物可更有效地拮抗A1和 A2A受體[38]。 腺苷通過與 A1和 A2A受體結(jié)合發(fā)揮促進睡眠的作用，故攝入咖啡因后會對睡眠造成影響。 該方法非常經(jīng)典，具有安全性高、成本低、作用明確的優(yōu)點。 但腺苷A2A受體基因的功能多態(tài)性會導(dǎo)致咖啡因損害睡眠質(zhì)量的個體差異[39]，造成實驗數(shù)據(jù)波動較大。 咖啡因的造模劑量多選用5 ～15 mg/kg，也可使用 25、30 或 50 mg/kg 等較高劑量。 在睡眠實驗檢測前30 ～60 min 腹腔注射咖啡因，可成功影響動物的睡眠。 總結(jié)近幾年采用咖啡因造模的文獻，如表2 所示。

表2 咖啡因造大/小鼠失眠模型的方法Table 2 Methods of insomnia models of rats and mice caused by caffeine

PCPA 和咖啡因造模都會導(dǎo)致動物覺醒時間增加，入睡潛伏期延長和睡眠時間減少，其中REMS、NREMS 均減少。 除腹腔注射PCPA 和咖啡因外，給予動物乙醇，形成乙醇依賴，戒斷后可造成動物覺醒時間增加，REM、NREM 睡眠時間顯著減少[46]。中樞微量注射去甲腎上腺素、食欲素或促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素等，皮下注射阿樸嗎啡、氟西汀或育亨賓等同樣可導(dǎo)致動物失眠[47]。

2.3 病理因素

慢性疼痛常引發(fā)失眠，現(xiàn)常采用坐骨神經(jīng)部分結(jié)扎造神經(jīng)痛模型，研究動物睡眠的變化。 模型動物表現(xiàn)出覺醒時間、次數(shù)增加，NREM、REM 睡眠時間及次數(shù)減少[48-49]。

此外，精神類疾病如抑郁癥、焦慮癥、創(chuàng)傷后應(yīng)激綜合癥、癲癇、自閉癥等也會引發(fā)失眠，高血壓、缺血性中風(fēng)同樣會抑制睡眠。

2.4 復(fù)合因素

根據(jù)研究目的不同，常采用多種誘因的復(fù)合因素造成失眠模型。 應(yīng)用線栓法(MCAO)和PCPA 聯(lián)合造模研究腦缺血后睡眠障礙，雙側(cè)頸總動脈閉塞(BCCAO)和平臺水環(huán)境法造模研究慢性腦缺血伴發(fā)失眠，去勢或卵巢切除聯(lián)合電刺激或觸碰等方法研究激素水平降低導(dǎo)致的失眠。 負重游泳和PCPA模擬運動性失眠大鼠。

此外，郜紅利等[50]采用母乳鼠分離、多種焦慮刺激和注射PCPA 造心腎不交大鼠失眠模型，動物表現(xiàn)為睡眠時間減少，血象水平降低，下丘腦-垂體-腎上腺軸紊亂。 何博賽[51]通過對Wistar 大鼠連續(xù)5 d 腹腔注射50 mg/(kg·d)氫化可的松，再連續(xù)4 d 腹腔注射300 mg/(kg·d)PCPA，動物出現(xiàn)弓腰無力、毛發(fā)少光澤、睡眠減少等現(xiàn)象，造成肝陰虛-失眠模型。 林臘梅[52]建立肝血虛失眠模型，切除SD 大鼠全肝的70%且恢復(fù)后，利用平臺水環(huán)境法進行72 h REM 睡眠剝奪，動物呈現(xiàn)口唇、爪甲淡粉色，爪甲欠光滑，目光呆滯、反應(yīng)遲鈍等狀態(tài)。 黃攀攀等[53]對動物連續(xù)28 d 皮下注射D-半乳糖60 mg/(kg·d)，疊加8 d 腹腔注射咖啡因30 mg/(kg·d)，再利用多平臺水環(huán)境法進行7 d 睡眠剝奪，造成大鼠的睡眠時間減少、心率加快、血壓升高、耳溫升高，成功建立老年陰虛失眠動物模型。 朱潔等[54]采用夾尾和注射PCPA 復(fù)合法造大鼠肝郁證失眠模型，連續(xù)20 d 每天夾尾45 min，疊加連續(xù)2 d 腹腔注射400 mg/(kg·d)PCPA。 何林熹等[55]采用慢性束縛法復(fù)合夾尾15 d造成肝郁化火證失眠大鼠模型。

3 評價方法

常用的評價方法為巴比妥類藥物協(xié)同睡眠實驗，空場實驗和腦電、肌電或眼動監(jiān)測。 這些方法既可用于評價失眠模型，也可用于藥效學(xué)評價。 巴比妥類藥物協(xié)同睡眠實驗可初步判斷動物的睡眠情況，實驗操作簡單、成本低，但結(jié)果指標(biāo)較少。 空場實驗是通過觀察動物一定時間內(nèi)的運動參數(shù)，判斷其生理狀態(tài)，多用于鎮(zhèn)靜催眠藥物的評價。 腦電和肌電監(jiān)測可直接將動物的睡眠狀態(tài)通過波形、波頻率等指標(biāo)呈現(xiàn)，但實驗操作復(fù)雜，對實驗環(huán)境要求高。

3.1 巴比妥類藥物協(xié)同睡眠實驗

巴比妥類藥物是常用的催眠藥物，可應(yīng)用其來誘導(dǎo)動物入睡，通過觀察動物的行為得到有效結(jié)果。 實驗分為3 類:戊巴比妥鈉閾下劑量協(xié)同睡眠實驗觀察動物的入睡率、戊巴比妥鈉閾上劑量協(xié)同睡眠實驗觀察睡眠時間、巴比妥鈉(或戊巴比妥鈉)實驗觀察入睡潛伏期。 閾下劑量指80% ～90%動物翻正反射不消失的戊巴比妥鈉最大劑量，閾上劑量指動物100%入睡的戊巴比妥鈉最小劑量。 此外，巴比妥類藥物硫噴妥鈉等也可用于該實驗。

動物入睡以翻正反射消失為判斷標(biāo)準。 給藥后待動物基本停止運動時，對其體位進行翻轉(zhuǎn)，即呈仰臥位，若動物30 min 內(nèi)仰臥位達60 s 以上，判斷其翻正反射消失進入睡眠狀態(tài)。 一段時間后，當(dāng)翻正反射首次恢復(fù)時，立即將其翻轉(zhuǎn)成仰臥位，30 s內(nèi)若再次恢復(fù)，判斷為動物覺醒，并記錄首次恢復(fù)翻正反射的時間為睡眠終止時間；若30 s 內(nèi)未恢復(fù)，則在動物翻正反射再次恢復(fù)后重復(fù)翻轉(zhuǎn)，直至判定為睡眠結(jié)束[56]。

3.2 空場實驗

空場實驗是將動物放入實驗箱的中心，適應(yīng)2～5 min 后，記錄并分析動物在一段時間內(nèi)(一般為5 ～15 min)的運動路程、運動時間、站立次數(shù)和運動軌跡等指標(biāo)，或?qū)游锎┰骄W(wǎng)格數(shù)或直立次數(shù)進行水平、垂直評分以反映動物的自主活動情況。 失眠動物常表現(xiàn)為自主活動增加，而給予動物鎮(zhèn)靜催眠藥物后，則表現(xiàn)為自主活動減少。

3.3 腦電圖、肌電圖、眼點圖

腦電圖(EEG)和肌電圖(EMG)監(jiān)測是將動物麻醉，插入電極，恢復(fù)7 ～ 14 d 后，通過 EEG、EMG觀察并統(tǒng)計動物覺醒、REM 睡眠、NREM 睡眠時長，時相出現(xiàn)次數(shù)、持續(xù)時間、轉(zhuǎn)換次數(shù)等指標(biāo)。 失眠動物常表現(xiàn)為睡眠總時間縮短，覺醒增加，各相睡眠時間不同程度縮短；睡眠呈碎片化，即時相出現(xiàn)次數(shù)、轉(zhuǎn)換次數(shù)增多，持續(xù)時間縮短；波形與正常動物存在差異。 腦電圖(EEG)和肌電圖(EMG)可準確反映睡眠過程，為最直接、可靠的評價方法，同時也可應(yīng)用眼點圖(EOG)進行輔助研究。

4 小結(jié)和展望

理想的動物模型需遵循以下原則，動物疾病模型與人類疾病具有相似的發(fā)生、發(fā)展過程，具備該疾病的主要癥狀和體征，針對藥物治療，與人類疾病具有相似的反應(yīng)，模型可重復(fù)。 常用的大鼠、小鼠失眠模型從不同角度模擬人類失眠特征。 物理因素造模模擬外界環(huán)境刺激，例如觸碰、滾筒、束縛和社會挫敗等模擬心理生理壓力造成的失眠；化學(xué)因素造模針對特異性靶點，使動物出現(xiàn)失眠癥狀；病理、復(fù)合因素模擬各種原因伴發(fā)的失眠。 然而，人類的失眠原因復(fù)雜，失眠動物模型仍存在一定局限性，需進一步研發(fā)和摸索。 僅應(yīng)用物理因素或化學(xué)因素造模，無法全面模擬人類失眠的特征，可依據(jù)不同的實驗要求選擇復(fù)合因素造模。 復(fù)合因素造模應(yīng)明確各個因素的意義，避免盲目選擇。 針對方法學(xué)研究，應(yīng)進一步詳細和清晰造模方法的時間和強度以及影響睡眠的程度，為今后的科學(xué)研究提供有力的理論依據(jù)。

常用的評價方法為巴比妥類藥物協(xié)同睡眠實驗、空場實驗和腦電、肌電監(jiān)測。 目前的評價手段較單一，且存在諸多問題。 巴比妥類藥物協(xié)同睡眠實驗中，關(guān)鍵的判斷指標(biāo)為翻轉(zhuǎn)反射消失，但手動翻轉(zhuǎn)動物這一操作對實驗數(shù)據(jù)有一定主觀影響?？請鰧嶒炛校舨捎贸Ｒ?guī)實驗時長5 ～15 min，無法全面反映動物在整個睡眠周期中的行為學(xué)改變，無法真實反映動物的睡眠情況。 腦電、肌電監(jiān)測需在動物腦內(nèi)插入電極，會造成創(chuàng)傷而影響實驗結(jié)果。故針對現(xiàn)存的問題，需研發(fā)新型儀器設(shè)備或改進實驗方法。 例如通過儀器對動物進行翻轉(zhuǎn)以判斷是否入睡，進行長時間睡眠監(jiān)測；研究新的實驗方法，通過動物的行為學(xué)指標(biāo)判斷睡眠情況，避免造成創(chuàng)傷，更加科學(xué)地進行評價，為失眠動物模型、新型鎮(zhèn)靜催眠藥物的研發(fā)和睡眠的相關(guān)研究奠定基礎(chǔ)。