張顏增楊婷 王先友?

1.開封市中心醫(yī)院 藥劑科,河南 開封 475002;2.河南大學 藥學院,河南 開封475004

參芍膠囊為中國藥典收載品種[1],是由人參莖葉總皂甙和白芍提取物等制成的復方制劑,具有活血化瘀、益氣止痛的作用,常用于氣虛血瘀所致的胸悶、胸痛、心悸、氣短等癥狀[2]。質量標準中,以Rg1、Re和Rd 的總量為控制指標[1],未規(guī)定單獨Rg1的含量。再者,藥典中規(guī)定的流動相為乙腈-水系統(tǒng),價格稍貴。而以甲醇-水系統(tǒng)等度洗脫,則操作相對方便。查閱相關資料,參芍膠囊中Rg1含量測定的相關報道較少[3]。人參為貴重藥材,為有效控制該制劑的質量,參考其他藥物中Rg1含量測定的方法[4-8],本研究建立用HPLC 法測定人參皂甙Rg1的含量,并對測定方法進行了方法學考察。結果表明,使用該法測定時,其線性關系良好、精密度好、準確度較高、穩(wěn)定性好,可用于人參皂甙Rg1的含量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀(LC-10AT 型,日本島津);紫外檢測器(SPD-10A 型,日本島津);色譜工作站(N-2000雙通道,浙江大學智達信息有限公司);色譜柱(Hypersil-ODS,4.6 mm×150 mm,5μm,大連依利特科學儀器有限公司);電子分析天平(AG135型,瑞士梅特勒-托利多公司)。

1.2 試劑

參芍膠囊(市售,批號:070521、070608、070818);人參皂甙Rg1對照品(純度99.34%,供含量測定用。中國藥品生物制品檢定所,批號:0703-9914)。

2 方法與結果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品儲備溶液的制備

精密稱取人參皂甙Rg1對照品65 mg,置于25 m L容量瓶中,用適量流動相溶解;稀釋至刻度,搖勻。

2.1.2 供試品溶液的制備

準確稱量參芍膠囊6 粒內容物的質量?；靹蚝?精密稱取約1 g(相當于4粒),用適量流動相浸泡過夜;超聲提取30 min,冷卻至室溫后定量轉移至10 m L 容量瓶中,用流動相稀釋至刻度,靜置分層;取上清液微孔濾膜濾過,即得供試品溶液。

2.2 色譜條件

流動相為甲醇-水(體積比為50∶50),流速設置為1.0 m L/min,檢測波長為203 nm,柱溫設為室溫,進樣量設為10μL。在此色譜條件下得到人參皂甙Rg1對照品溶液及供試品溶液的HPLC圖(見圖1)。以人參皂苷Rg1峰計算,理論塔板數大于4 000,與其他峰的分離度大于8。

圖1 人參皂甙Rg1 對照品溶液(A)及供試品溶液(B)的HPLC圖

2.3 方法學考察

2.3.1 線性關系實驗

準確量取Rg1對照品儲備溶液1.00,2.00,4.00,6.00,8.00,10.00 m L,置于不同的容量瓶中(10 m L),用流動相定容;濾過后測定。以進樣量X和峰面積Y進行線性回歸,計算出的回歸方程為:Y=231 896X+44 038(r=0.999 4)。實驗結果表明,人參皂甙Rg1在2.6～26μg范圍內具有良好的線性關系。

2.3.2 精密度實驗

取1.0 mg/m L的對照品儲備溶液,在上述色譜條件下重復進樣6次,記錄各次的峰面積,計算出其RSD=0.86%。結果表明,該方法具有較好的精密度。

2.3.3 重復性實驗

取同一批樣品,按第2.1.2節(jié)方法平行制備6份溶液,在上述色譜條件下進行測定,計算得峰面積的RSD 為1.0%。結果表明,該法重復性較好。

2.3.4 加樣回收率實驗

準確量取(適量)Rg1含量已知的樣品6份,分別置于6個10 m L 容量瓶中。均精密加入人參皂甙Rg1對照品溶液適量,按第2.1.2節(jié)方法制備溶液,在上述色譜條件下進行測定,計算得平均回收率為99.84%,RSD=0.91% (n=6)。

2.3.5 穩(wěn)定性實驗

將第2.1.2節(jié)制備的供試品溶液分別于0,2,4,8,12,24 h 進樣測定,測得6 次峰面積的RSD=0.87%。實驗結果表明,供試品在24 h內穩(wěn)定性良好。

2.3.6 樣品的含量測定

取3批樣品,按第2.1.2節(jié)方法制備供試品溶液,每個批號均3份。在上述色譜條件和方法測定,由標準曲線法計算人參皂甙Rg1的含量。結果如下:批號為0705的樣品中人參皂甙Rg1的含量為(212.770±0.021)mg/粒,批號為0706的樣品中人參皂甙Rg1的含量為(082.903±0.010)mg/粒,批號為0708 的樣品中人參皂甙Rg1的含量為(182.883±0.013))mg/粒。

3 討論

郭石等[4-5]用HPLC 法測定人參北芪片、保心寧片中人參皂甙Rg1含量時,其紫外光區(qū)的最大吸收峰在203 nm 處,本實驗也選203 nm 為檢測波長。中藥復方制劑分析的關鍵之一是樣品的前處理,其目的是完全提取待測成分,盡量減少其他組分的干擾[9]。人參皂甙Rg1可溶于醇,多次實驗結果證實,采用流動相超聲提取效果較理想。