孫思邈，梁雨彤，田 明，王 旭，王秀海，馮月男

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040）

引 言

梔子豉湯是中醫(yī)經(jīng)典名方，出自《傷寒論》，該方由梔子與淡豆豉組成，多用于更年期抑郁癥，失眠，神經(jīng)衰弱等疾病的治療[1～2]。方中梔子為茜草科植物的果實(shí)，其主要化學(xué)成分為環(huán)烯醚萜（苷）類、有機(jī)酸酯類、萜類化合物、黃酮類化合物、揮發(fā)油成分以及一些多糖和各種微量元素[3]，其中環(huán)烯醚萜（苷）類中包含梔子苷和京尼平，而京尼平是導(dǎo)致梔子引起不良反應(yīng)的成分之一[4]；淡豆豉為大豆成熟種子經(jīng)發(fā)酵而成的加工品，其主要化學(xué)成分有豐富的蛋白質(zhì)和脂類。淡豆豉中的大豆黃素和染料木素含量明顯要高于大豆[5]，因此對(duì)于梔子豉湯中有效成分梔子苷和染料木素的提取對(duì)擴(kuò)大梔子豉湯的臨床應(yīng)用具有重要意義。

梔子豉湯現(xiàn)代仍以湯劑形式用于臨床，該形式的缺點(diǎn)是不便于儲(chǔ)運(yùn)、質(zhì)量控制以及規(guī)?；a(chǎn)。中藥口服液是在湯劑基礎(chǔ)上對(duì)其改進(jìn)并得以發(fā)展的一種方便服用、藥效迅速、吸收快且質(zhì)量可控的新型制劑，市場(chǎng)上口服液形式的產(chǎn)品日漸增多，并在臨床上廣泛應(yīng)用[6～7]。本課題將現(xiàn)代中藥學(xué)與藥劑學(xué)交叉融合，運(yùn)用現(xiàn)代化科學(xué)理論及手段合理地設(shè)計(jì)了梔子豉湯口服液的制備工藝，以梔子中有效成分梔子苷和淡豆豉中有效成分染料木素為考察對(duì)象，以正交試驗(yàn)為方法篩選提取工藝，在保證有效成分最大程度保留的基礎(chǔ)上確立最佳制備工藝，使其更好地適合于臨床應(yīng)用。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥品與試劑

梔子，淡豆豉（由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院提供）。

梔子苷、染料木素（貴州迪大科技有限公司）；甲醇（色譜純）、乙腈（DikmaPure）；甲醇（分析純）、乙醇、磷酸（純度100%，天津富宇精細(xì)化工有限公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

電子分析天平（ME55，METTLER TOLEDO）；電熱恒溫水浴鍋（DZKW-A，北京京創(chuàng)泰寧偉業(yè)科技發(fā)展有限公司）；電熱恒溫減壓干燥箱（DHG-9140，上海一恒科技有限公司）；醫(yī)用數(shù)控超聲波清洗器（KQ-500D 上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）；高效液相色譜儀（Waters 2487UV 檢測(cè)器，美國Waters）。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取工藝的研究

2.1.1 吸水率和浸泡時(shí)間的考察

稱取5 份藥材，每份中梔子30g、淡豆豉20g，將藥材破碎，置于燒杯中，各加水400mL，封口，放置，按照表1 中每個(gè)時(shí)間點(diǎn)各取1 份樣品，濾除水分，稱重，計(jì)算吸水率，結(jié)果如表1 所示。

表1 吸水率和浸泡時(shí)間的考察Table 1 The investigation of water absorption and soaking time

結(jié)果顯示，60min 時(shí)吸水量呈飽和狀態(tài)，吸水率為135%，但為減少誤差和保證藥材的充分浸泡[8]，最終選擇浸泡時(shí)間為75min。

2.1.2 正交實(shí)驗(yàn)法考察提取工藝[9～10]

根據(jù)藥材吸水量對(duì)加水量、提取時(shí)間、提取次數(shù)三個(gè)水平進(jìn)行考察，采用L9（34）正交設(shè)計(jì)法優(yōu)化提取工藝，因素水平見表2，試驗(yàn)設(shè)計(jì)結(jié)果見表3。

表2 梔子豉湯提取工藝的正交因素水平Table 2 The orthogonal factor level of Zhizichi decoction extraction technology

梔子30g，淡豆豉20g 按照表2 添加相應(yīng)倍數(shù)的水，浸泡75min 后，回流提取，合并藥液過濾，濃縮定容至200mL，備用。

2.1.3 梔子苷含量測(cè)定[11]

2.1.3.1 色譜條件

色譜柱SinoChrom（150mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相:甲醇（30）∶水（70）∶H3PO4（0.25）；波長:238nm；流速1.0mL/min；進(jìn)樣量10μL。

2.1.3.2 對(duì)照品溶液的制備

精密量取6.35mg 梔子苷對(duì)照品，甲醇溶解并定容至10mL，即為對(duì)照品儲(chǔ)備液，待用。

2.1.3.3 供試品溶液的制備

精密吸取0.5mL 2.1.2 項(xiàng)下的提取液，先水浴蒸干，后甲醇再使結(jié)晶溶解并定容至25mL，經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過，待用。

2.1.3.4 含量測(cè)定

精密量取10μL 梔子苷對(duì)照品溶液和10μL 梔子苷供試品溶液，利用高效液相色譜儀對(duì)梔子苷含量進(jìn)行測(cè)定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。

2.1.4 染料木素含量測(cè)定[12]

2.1.4.1 色譜條件

色譜柱SinoChrom（150mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈∶水∶冰乙酸（35∶63∶2）；檢測(cè)波長：260nm；流速1.0mL/min；進(jìn)樣量10μL。

2.1.4.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱定2.28mg 染料木素對(duì)照品，甲醇定容至10mL，經(jīng)0.45μm 微孔濾膜濾過，即為供試品溶液，待用。

2.1.4.3 供試品溶液的制備

同2.1.3.3。

2.1.4.4 含量測(cè)定及結(jié)果

分別取10μL 2.1.4.2 項(xiàng)下的對(duì)照品溶液和10μL 2.1.4.3 項(xiàng)下供試品溶液，用于測(cè)定染料木素含量，結(jié)果見表3。

表3 正交試驗(yàn)結(jié)果Table 3 The orthogonal test results

2.2 結(jié)果處理分析

正交試驗(yàn)結(jié)果表明，B 因素和C 因素對(duì)有效成分的溶出有顯著性影響，B 因素為主要因素，A 因素對(duì)提取效果的影響最小，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，故以6倍量水最佳。根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)與實(shí)際情況，確定A2B1C3為最佳提取組合，即6 倍量水浸泡75min 后加熱回流提取1h，共提取三次，合并提取液，供下一步使用。

2.3 濃縮程度的考察

300g 梔子，200g 淡豆豉，取6 倍量水浸泡75min，提取3 次，每次1h，過濾，合并3 次濾液后濃縮至2500mL（相當(dāng)于1mL 藥液含0.2g 生藥），取750mL 儲(chǔ)備液（相當(dāng)于150g 生藥），分別濃縮至50mL、60mL、75mL、150mL，即1mL 含生藥材分別為3.0g、2.5g、2g、1.0g。觀察各濃度溶液的濃縮狀態(tài)，于80℃時(shí)測(cè)相對(duì)密度，結(jié)果見表4。

表4 濃縮狀態(tài)及相對(duì)密度Table 4 The concentration state and relative density

結(jié)果：當(dāng)提取液濃縮至50mL（1mL 含生藥材3g）時(shí)，濃縮液流動(dòng)性差，掛壁嚴(yán)重，相對(duì)密度無法測(cè)定，因此選擇60mL 為濃縮體積，每1mL 濃縮液含生藥2.5g 為限度。

2.4 醇濃度的考察[13～14]

將2.1.2 項(xiàng)下儲(chǔ)備液平均分成4 份，每份濃縮至1mL 含生藥材2.5g,濃縮完成后再加入乙醇使?jié)舛确謩e達(dá)到50%、60%、70%、80%，記錄溶液狀態(tài)，沉淀24h，過濾，回收濾液中的乙醇，濃縮后加水定容至60mL，靜置24h 后記錄每份樣品的溶液狀態(tài)，結(jié)果表明：乙醇濃度的變化對(duì)濃縮藥液的醇沉效果的影響較大，藥液中乙醇濃度為50%或60%時(shí)，醇沉效果不理想，表現(xiàn)為沉淀物與溶液中的沉淀物黏附松散；當(dāng)藥液中乙醇濃度調(diào)整到70%時(shí)，醇沉效果好，表現(xiàn)為沉淀粘結(jié)成團(tuán)，且溶液澄清；而當(dāng)乙醇濃度達(dá)到80%時(shí)，有漂浮物析出。綜合以上結(jié)果，最終選擇相對(duì)密度1.05～1.15（80℃）；醇沉濃度70%為最佳條件。

2.5 矯味劑蔗糖的用量

本品從口服液口感特點(diǎn)以及成品的成本角度出發(fā)，以蔗糖為矯味劑，將2.4 醇沉工藝制備的口服溶液按蔗糖量0%、5%、10%、15%、20%加入藥液，攪拌使其溶化，靜置后品嘗口感。結(jié)果表明，蔗糖的用量不同對(duì)口服液的澄清度及pH 值無顯著影響，當(dāng)口服液中含15%蔗糖時(shí)味道較好，且符合中國藥典的規(guī)定，因此蔗糖的用量定為15%（g/mL）。

2.6 制劑處方和工藝確定

梔子豉湯原方中15g 梔子加10g 淡豆豉為一日劑量，按照要求以1000mL 計(jì)算確定處方為梔子300g，淡豆豉200g，制成1000 個(gè)制劑單位（1000mL）。梔子豉湯口服液的規(guī)格為每支20mL，每次1 支，一日2 次。具體制備工藝如下：梔子300g，淡豆豉200g，6 倍量水浸泡75min，回流提取1h，共3 次，提取的藥液濃縮至1.05～1.15（80℃）的相對(duì)密度，加乙醇使?jié)饪s液中乙醇含量達(dá)到70%，攪勻，適宜環(huán)境放置24h，收集上清液，剩余藥液過濾，將二者合并，回收乙醇，蒸餾水稀釋，加150g 蔗糖后蒸餾水定容至1000mL，靜置，過濾，灌裝，滅菌，得成品。

3 結(jié) 論

本課題在優(yōu)化梔子豉湯口服液中梔子苷和染料木素提取工藝時(shí)，為了保證藥材有效成分的最大程度提取，對(duì)浸泡時(shí)間采取單因素試驗(yàn)進(jìn)行考察，確定了浸泡時(shí)間為75min；以梔子苷和染料木素含量作為綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)采取正交實(shí)驗(yàn)法進(jìn)行考察，確定了最優(yōu)提取工藝為6 倍水量回流提取1h、共3次；濃縮液的程度對(duì)口服液的存儲(chǔ)及患者的使用口感有較大影響，因此，根據(jù)濃縮狀態(tài)和相對(duì)密度對(duì)濃縮程度進(jìn)行了考察，最終確定了提取液濃縮至60mL，限度1mL 含生藥材2.5g，相對(duì)密度為1.05～1.15；根據(jù)口服液的用藥特點(diǎn)，結(jié)合中藥水提液中含有淀粉，多糖等易沉淀成分存在的影響，故對(duì)提取液進(jìn)行了醇沉條件的篩選，選擇濃縮液經(jīng)乙醇醇沉，濃度為濃縮液的70%；對(duì)矯味劑蔗糖進(jìn)行了用量考察，確定蔗糖含量為15%。實(shí)驗(yàn)確定了梔子豉湯的最優(yōu)制備工藝，該工藝最大程度地提高有效成分梔子苷和染料木素的溶出率，且符合現(xiàn)代提取工藝的要求，建議后續(xù)進(jìn)一步進(jìn)行梔子豉湯口服液的穩(wěn)定性研究與工業(yè)生產(chǎn)測(cè)試相關(guān)實(shí)驗(yàn)，為梔子豉湯口服液的量化生產(chǎn)以及高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化制備流程的建立提供堅(jiān)實(shí)的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。