劉 曉，孫戡平，秦昆明，金俊杰，楊 超，蔡寶昌, *

基于UHPLC-Q-TOF-MS技術(shù)研究炮制對(duì)白術(shù)芍藥散中化學(xué)成分的影響

劉 曉1，孫戡平1，秦昆明2, 3，金俊杰2, 3，楊 超1，蔡寶昌1, 2, 3*

1. 南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，江蘇 南京 210023 2. 南京海昌中藥集團(tuán)有限公司，江蘇 南京 210061 3. 南京海源中藥飲片有限公司，江蘇 南京 210061

采用UHPLC-Q-TOF-MS技術(shù)結(jié)合多元數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析方法，針對(duì)白術(shù)芍藥散水煎液中的化學(xué)組成進(jìn)行分析，同時(shí)與藥材未經(jīng)炮制即配伍入藥的情況進(jìn)行比較，探討中藥炮制過(guò)程對(duì)白術(shù)芍藥散中化學(xué)成分的影響。采用正、負(fù)離子掃描模式檢測(cè)，利用Peakview 1.2軟件鑒別樣品中化學(xué)成分，結(jié)合MarkerView 1.2.1軟件對(duì)炮制前后樣品進(jìn)行主成分分析并尋找兩者的特征差異性成分。正、負(fù)離子檢測(cè)模式下共匹配出化學(xué)成分183種，通過(guò)檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)差異性化學(xué)成分34種，差異性成分的主要來(lái)源為陳皮和防風(fēng)。藥材經(jīng)過(guò)炮制配伍入藥對(duì)于白術(shù)芍藥散的化學(xué)組成具有顯著性影響，古籍中所載白術(shù)芍藥散應(yīng)采用炮制品進(jìn)行組方用藥具有實(shí)際的客觀原因與深刻的科學(xué)內(nèi)涵。

白術(shù)芍藥散；炮制；UHPLC-Q-TOF-MS；主成分分析；水煎液；陳皮；防風(fēng)

白術(shù)芍藥散（又名痛瀉要方），始載于古籍《丹溪心法》，由白術(shù)（麩炒）、白芍（麩炒）、陳皮（清炒）、防風(fēng)共4味中藥組成，為中醫(yī)治療肝郁脾虛、腹痛泄瀉的代表方劑，具有健脾舒肝、止痛止瀉之功，現(xiàn)代臨床多用于治療結(jié)腸炎、腸易激綜合征等[1]。白術(shù)自古被奉為“健食消谷第一要藥”“安脾胃之神品”[2]，為方中君藥，具有健脾益氣、燥濕利水之功效；白芍為臣藥，可滋脾柔肝、益陰養(yǎng)血、緩急止痛，與白術(shù)相配后瀉肝補(bǔ)脾；陳皮為使藥，可理氣而燥濕、健脾和胃以助運(yùn)化；防風(fēng)為使藥，其味辛能散肝風(fēng)、能勝濕，其性升浮，可升陽(yáng)而止瀉。此4味藥相輔相成，為醫(yī)家從古至今臨床治療腸道病征之要藥[3]。

目前，白術(shù)芍藥散在臨床使用過(guò)程中存在飲片品類濫用的現(xiàn)象，尤其以生飲片代替炮制品進(jìn)行組方的現(xiàn)象最為常見(jiàn)[4-5]。眾多研究表明，中藥炮制過(guò)程會(huì)使飲片的物理狀態(tài)與其中的化學(xué)成分發(fā)生變化[6-7]，進(jìn)一步影響飲片配伍后所得復(fù)方的化學(xué)成分構(gòu)成。飲片品類的濫用，將會(huì)在一定程度上改變方劑的化學(xué)成分，從而影響其藥效，不利于臨床規(guī)范用藥。

白術(shù)芍藥散中化學(xué)成分的種類復(fù)雜，包括白術(shù)揮發(fā)油類成分、芍藥黃酮類成分、陳皮揮發(fā)油類成分、防風(fēng)揮發(fā)油類及香豆素類成分等，因此選擇合適的分析技術(shù)成為實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵。UHPLC-Q-TOF-MS技術(shù)是目前中藥成分分析最為前沿的技術(shù)之一，具有靈敏度高、選擇性好、分辨率高的特點(diǎn)[8]。不同于一般分析技術(shù)對(duì)于對(duì)照品的依賴性較大，Q-TOF技術(shù)提供的高分辨精確質(zhì)核比準(zhǔn)確度高，經(jīng)校準(zhǔn)后配合以子離子碎片信息，可有效提供化合物的結(jié)構(gòu)信息，在中藥化學(xué)多成分分析及藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究方面運(yùn)用廣泛[9-11]。前期，已有研究通過(guò)此技術(shù)對(duì)白術(shù)芍藥散醇提液中化學(xué)成分進(jìn)行分析[12]，但考慮到臨床使用白術(shù)芍藥散的實(shí)際劑型為湯劑，故本實(shí)驗(yàn)以復(fù)方水提液為研究對(duì)象，最大程度模擬藥物的臨床使用情況，通過(guò)多元數(shù)據(jù)分析方法對(duì)比生品組及制品組樣品中化學(xué)成分的差異，從物質(zhì)基礎(chǔ)角度客觀闡明古籍采用炮制品飲片組方的現(xiàn)代科學(xué)內(nèi)涵。

1 儀器與材料

1.1 儀器與設(shè)備

超高效液相色譜儀（Shimadzu 30AD，日本）；Sciex Triple TOF 5600+系統(tǒng)（AB Sciex，美國(guó)）；數(shù)據(jù)采集軟件：Analyst TF 1.6 software（AB Sciex，美國(guó)）；數(shù)據(jù)處理軟件系統(tǒng)：Peakview 1.2軟件（AB Sciex，美國(guó)）和Markerview 1.2.1軟件（AB Sciex，美國(guó)）；KQ5200DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；SPE固相萃取小柱（WATO43395 Waters Sep-pak C18）；BP121S分度值電子分析天平（梅特勒托雷多公司）；十萬(wàn)分之一電子天平（濟(jì)南愛(ài)來(lái)寶醫(yī)療科技有限公司）。

1.2 材料與試劑

白術(shù)、白芍、陳皮、防風(fēng)飲片各6批經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)陳建偉教授鑒定，符合《中國(guó)藥典》要求，白術(shù)為菊科植物白術(shù)Koidz. 的干燥根莖炮制得到的合格飲片；白芍為毛茛科植物芍藥Pall.的干燥根炮制得到的合格飲片；陳皮為蕓香科植物橘Blanco的干燥成熟果皮炮制得到的合格飲片；防風(fēng)為傘形科植物防風(fēng)(Turcz.) Schischk.的干燥根炮制得到的合格飲片。來(lái)源信息見(jiàn)表1。甲醇為質(zhì)譜純（德國(guó)E. Merck）；水為Milliporeill-Q自行制備。對(duì)照品芍藥苷（批號(hào)X12A8C33672）、芍藥內(nèi)酯苷（批號(hào)Y21A9H59553）、白術(shù)內(nèi)酯I（批號(hào)P29N8F49265）、白術(shù)內(nèi)酯II（批號(hào)ZM0311BC13）、白術(shù)內(nèi)酯III（批號(hào)R29M9F57437）、川陳皮素（批號(hào)P05M8535478）、橙皮苷（批號(hào)M02J9S64781）、升麻素（批號(hào)YH09H72162）、5--甲基阿米醇苷（批號(hào)H25A8K42328）、沒(méi)食子酸（批號(hào)Y19M8C36143）、蕓香柚皮苷（批號(hào)P11N8C48150）、1,2,3,4,6--五沒(méi)食子?；咸烟牵ㄅ?hào)P28M9F54631），均購(gòu)于上海源葉生物有限公司，質(zhì)量分?jǐn)?shù)均＞98%。

表1 實(shí)驗(yàn)用飲片來(lái)源信息

Table 1 Source information of herbal pieces

編號(hào)白術(shù)（批號(hào)）白芍（批號(hào)）陳皮（批號(hào)）防風(fēng)（批號(hào)） 1南京海源中藥飲片公司（180501）南京海源中藥飲片公司（180101）南京海源中藥飲片公司（180620）南京海源中藥飲片公司（180901） 2安徽美譽(yù)中藥飲片有限公司（111708201）南京海源中藥飲片公司（180903）安徽眾益堂中藥材銷售有限公司（20181013）南京海源飲片公司（180124） 3康美藥業(yè)股份有限公司（180150141）廣東匯群中藥飲片有限公司（20161202）康美藥業(yè)股份有限公司（180403751）康美藥業(yè)股份有限公司（180550771） 4四川御鼎堂中藥飲片有限公司（180301）普寧澤群中藥飲片有限公司（180801）安國(guó)市瑞琪中藥材有限公司（20180707）河北凱達(dá)藥業(yè)有限公司（20180307） 5安徽萬(wàn)生中藥飲片有限公司（170902）廣東天誠(chéng)中藥飲片有限公司（180101）安國(guó)市瑞琪中藥材有限公司（20171201）廣東天誠(chéng)中藥飲片有限公司（180601） 6安徽尚德中藥飲片有限公司（170901）廣州華惟堂藥業(yè)有限公司（180910）廣州華惟堂藥業(yè)有限公司（180910）康美藥業(yè)股份有限公司（180405411）

1.3 飲片炮制

蜜炙麩皮：煉蜜用少許開(kāi)水化開(kāi)，灑入麩皮中，拌勻后悶潤(rùn)約30 min，倒入鍋中用微火炒干至不粘手即可（每100千克麩皮，用煉蜜25 kg）。

麩炒白術(shù)、麩炒白芍：取蜜炙麩皮炒至微微冒煙，放入生飲片，中火均勻拌炒至飲片表面焦黃，有焦香氣逸出，取出篩去麥麩，放涼即可（每100千克生飲片加10 kg蜜炙麩皮）。

清炒陳皮：取生陳皮飲片用文火均勻至陳皮質(zhì)脆，色澤加深，略有焦斑，有香氣逸出，取出放涼即可。

1.4 方劑配伍

未炮制組：隨機(jī)選取“1.2”項(xiàng)中白術(shù)6 g、白芍4 g、陳皮3 g、防風(fēng)4 g，組成方劑8份，編號(hào)為生品組1～8。

炮制組：隨機(jī)選取“1.3”項(xiàng)中麩炒白術(shù)6 g、麩炒白芍4 g、清炒陳皮3 g、防風(fēng)4 g（與生品組相對(duì)應(yīng)，保持為同一批藥材來(lái)源），組成方劑8份，編號(hào)為制品組1～8。

2 方法與結(jié)果

2.1 液相及質(zhì)譜條件

液相條件：采用ZORBAX Extend-C18反相色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）；流動(dòng)相為水（A）-乙腈（B），梯度洗脫：0～4 min，5%～15% B；4～10 min，15%～25% B；10～15 min，25%～60% B；15～22 min，60～80% B；22～25 min，80%～100% B；25～27 min，100% B；27～30 min，100%～5%B；30～32 min，5% B；體積流量0.3 mL/min；柱溫35 ℃，進(jìn)樣體積3 μL。質(zhì)譜條件：ESI離子源，正、負(fù)離子模式掃描。霧化氣體為氮?dú)猓琓EM為550 ℃，DP為60 V/?60 V，CE為35 eV/?35 eV，ISVF為4500 V/?4500 V，Gas1為379.5 kPa，Gas2為379.5 kPa，Curtain Gas為241.5 kPa。一級(jí)質(zhì)譜母離子掃描范圍為/100～2000，二級(jí)質(zhì)譜子離子掃描范圍為/50～1000，并開(kāi)啟動(dòng)態(tài)背景扣除。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取芍藥苷，芍藥內(nèi)酯苷，白術(shù)內(nèi)酯I、II、III，川陳皮素，橙皮苷，升麻素，5--甲基阿米醇苷，沒(méi)食子酸，蕓香柚皮苷，1,2,3,4,6--五沒(méi)食子?；咸烟菍?duì)照品各5 mg于1 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容，得混合對(duì)照品儲(chǔ)備液，再稀釋至各成分質(zhì)量濃度為5 μg/mL備用。

2.3 供試品溶液的制備

按“1.4”項(xiàng)下所得樣品中加入12倍量水浸泡30 min，100 ℃回流提取1 h，濾出提取溶液，再加入12倍量水，回流提取1 h，合并提取液，定容至500 mL，混勻。定容溶液中取15 mL水浴蒸干，加入2 mL水復(fù)溶，轉(zhuǎn)移至2 mL離心管中。溶液12 000 r/min離心5 min，取上清液，過(guò)SPE小柱稀釋備用，洗脫梯度為1 mL 5%乙腈，2 mL 15%乙腈，2 mL 30%乙腈，2 mL 45%乙腈，1.5 mL 60%乙腈，0.5 mL 75%乙腈，0.5 mL 90%乙腈。

2.4 數(shù)據(jù)庫(kù)的建立

借助于知網(wǎng)、SciFinder和PubMed等文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)檢索白術(shù)、白芍、陳皮、防風(fēng)及其炮制品相關(guān)文獻(xiàn)，盡可能全面地建立包含白術(shù)芍藥散中所含化合物的化學(xué)名稱、相對(duì)分子質(zhì)量、分子式和分子結(jié)構(gòu)等信息數(shù)據(jù)庫(kù)，并借助ChemicalBook、ChemSpider等數(shù)據(jù)庫(kù)下載所得化合物的mol文件，計(jì)算化合物在正離子模式下[M＋H]+、[M＋NH4]+和負(fù)離子模式下[M－H]?、[M＋COOH]?等離子形態(tài)的精確質(zhì)荷比。

2.5 成分鑒定和分析

將所得數(shù)據(jù)導(dǎo)入PeakView 1.2軟件，通過(guò)對(duì)照品保留時(shí)間對(duì)比和一級(jí)質(zhì)量數(shù)匹配定位化學(xué)成分，所有化學(xué)成分的鑒別分析均是依據(jù)一級(jí)質(zhì)量數(shù)、同位素匹配和二級(jí)結(jié)構(gòu)式與質(zhì)量碎片匹配而進(jìn)行。將各化合物總離子流圖中提取到的一級(jí)質(zhì)量數(shù)、同位素進(jìn)行對(duì)比，誤差＜5×10?6為可接受標(biāo)準(zhǔn)，通過(guò)二級(jí)碎片與其化學(xué)結(jié)構(gòu)所對(duì)應(yīng)的碎片間的匹配程度以及相關(guān)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)對(duì)比進(jìn)行化學(xué)成分確認(rèn)，匹配度達(dá)到85%以上的化學(xué)成分被鑒別確認(rèn)，借助Markerview1.2軟件對(duì)多批制品及生品組樣品測(cè)試結(jié)果進(jìn)行主成分分析和組間檢驗(yàn)分析，得到得分圖及載荷圖。

生品組與制品組樣品在正、負(fù)離子模式下的總離子流圖如圖1所示，正、負(fù)離子2種模式下共鑒別出183種化合物（表2），以芍藥苷為例來(lái)說(shuō)明鑒別過(guò)程，峰50的[M＋H]+準(zhǔn)分子離子峰為480.163，對(duì)應(yīng)分子式為C23H28O11，主要二級(jí)碎片為/449.146、327.104、165.055、121.030，發(fā)現(xiàn)二級(jí)碎片質(zhì)量數(shù)所對(duì)應(yīng)的結(jié)構(gòu)碎片與芍藥苷相當(dāng)，推測(cè)該化合物為芍藥苷，將芍藥苷的mol文件所預(yù)測(cè)的碎片與二級(jí)碎片進(jìn)行匹配，與已有報(bào)道相同[13]，且裂解行為與芍藥苷對(duì)照品相同，最終確認(rèn)該化合物為芍藥苷。其他化合物均采用類似方法鑒定，當(dāng)出現(xiàn)同分異構(gòu)體時(shí)可通過(guò)對(duì)照品出峰時(shí)間及化合物極性差異進(jìn)行推測(cè)，共鑒定出的183種成分，主要為黃酮類、萜類和酚酸類成分。

圖1 正(＋TIC)、負(fù)(?TIC) 離子檢測(cè)模式下制品組(A) 和生品組(B)樣品典型質(zhì)量色譜圖

表2 UHPLC-Q-TOF-MS檢測(cè)出制品組、生品組樣品中共有化學(xué)成分信息

Table 2 Information of common components detected in processed and unprocessed samples by UHPLC-Q-TOF-MS

序號(hào)化合物tR/min化學(xué)式來(lái)源序號(hào)化合物tR/min化學(xué)式來(lái)源 14,15-環(huán)氧類固醇0.02C15H20O4白術(shù)23丁二酸0.86C4H6O4白術(shù) 28,9-環(huán)氧類固醇0.02C15H18O3白術(shù)24辛弗林0.92C9H13NO2防風(fēng) 3地奧司明0.02C28H32O15白芍25異亮氨酸1.01C6H13NO2白術(shù) 4牡丹皮苷J(rèn)0.03C23H28O11陳皮26葡糖膽素1.24C13H16O10陳皮 5兒茶素異構(gòu)體0.04C15H14O6陳皮272-(甲氨基)苯甲酸甲酯1.70C9H11NO2白芍 6阿魏酸0.05C10H10O4白術(shù)28芍藥酮1.88C10H14O4白芍 7紫花前胡苷0.05C20H24O9防風(fēng)295-羥甲基糠醛2.36C6H6O3白術(shù) 8(S)-柚皮素0.06C15H12O5陳皮30咖啡酸2.40C9H8O4白術(shù) 9辛弗林異構(gòu)體0.11C9H13NO2白芍31腺苷2.47C10H13O4N5防風(fēng) 10香葉木苷0.14C28H32O15白芍326-O-b-D-吡喃葡萄糖酰內(nèi)酯3.03C16H26O9陳皮 112-氨基-5-胍基-戊酸0.62C6H14N4O2白術(shù)33芍藥內(nèi)酯D3.07C10H16O4白芍 12檸檬酸0.63C6H8O7陳皮34牡丹皮苷F3.42C16H24O8陳皮 133,4′-二羥基-3′-甲氧基苯丙酮0.66C16H22O10白術(shù)35蒼術(shù)苷A3.64C21H36O10白術(shù) 14谷氨酸0.66C5H9NO4白術(shù)36對(duì)羥基苯甲酸4.39C7H6O3陳皮 15D-甘露糖0.67C6H12O6白芍37氧化芍藥苷4.60C23H28O12白芍 16奎尼酸0.67C7H12O6白芍38兒茶素4.96C15H14O6陳皮 17L-阿拉伯糖酸0.68C5H10O6白術(shù)39淫羊藿次苷F25.22C18H26O10白術(shù) 18D-甘露糖醇0.69C6H14O6白術(shù)40(6S,9S)-長(zhǎng)壽花糖苷5.35C19H30O8白芍 19蔗糖0.73C12H22O11防風(fēng)41芍藥苷B5.52C16H22O9白芍 20纈氨酸0.78C5H11NO2白術(shù)421′-O-苯甲酰蔗糖5.78C19H26O12陳皮 21異茴芹靈0.79C13H11O5防風(fēng)43木犀草素-7-O-蕓香苷5.80C27H30O15白芍 22D-脯氨酸0.80C5H9NO2白術(shù)44波狀苷A5.80C16H18O9防風(fēng)

續(xù)表2

序號(hào)化合物tR/min化學(xué)式來(lái)源序號(hào)化合物tR/min化學(xué)式來(lái)源 456′-O-b-D-吡喃葡萄糖基芍藥苷5.81C29H38O16白芍85柚皮素-7-O-b-D-吡喃葡萄糖苷9.14C21H22O10陳皮 46苯甲酸5.95C7H6O2陳皮86柚皮素9.15C15H12O5陳皮 47芍藥內(nèi)酯苷5.98C23H28O11白芍87柚皮苷9.15C27H32O14陳皮 483-O-乙?；ッ┓?.99C17H18O6防風(fēng)887-羥基-3,5,6,8,3′,4′-六甲氧基黃酮9.15C21H22O9白芍 49芍藥內(nèi)苷C5.99C17H18O6白芍89natsudaidain-3-O-b-D-glucoside9.15C27H32O14白芍 50芍藥苷5.99C23H28O11白芍90chysoeriol-6,8-di-C-glucoside9.21C28H32O16白芍 51白芍苷R15.99C23H28O11白芍91山柰苷9.21C27H30O14陳皮 52芍藥內(nèi)苷B5.99C10H12O4白芍921,2,3,4,6-O-五沒(méi)食子酰葡萄糖9.48C41H32O26陳皮 53芍藥苷元酮5.99C17H18O6白芍93橙皮苷9.83C28H34O15陳皮 54維采寧-26.05C28H32O16白芍94新橙皮苷9.83C28H34O15陳皮 55芍藥內(nèi)酯酮6.06C10H16O2白芍95橙皮素9.86C16H14O6陳皮 566′-O-b-D-吡喃葡糖苷6.13C29H38O16陳皮964-O-沒(méi)食子酰白芍苷9.87C30H32O15白芍 57異杞柳苷6.13C21H22O10陳皮97橙皮素-7-b-D-葡萄糖苷9.87C22H24O11陳皮 58香葉木素-6,8-di-C-葡萄糖苷6.33C28H32O16白芍98阿亞黃素9.88C18H16O7白芍 59升麻苷6.51C22H28O11防風(fēng)99牡丹皮苷D10.15C24H30O12陳皮 60芍藥新苷6.58C23H26O10白芍100鄰苯二甲酸二丙酯10.15C14H18O4陳皮 614-乙烯基-2-甲氧基苯酚6.58C9H10O2白芍1011-O-b-D-吡喃葡萄糖基-8-10.17C23H28O10白芍 6263反式-4-甲氧基肉桂酸松柏醛6.596.59C10H10O3C10H10O3白術(shù)白芍 102O-苯甲?；炙幭阃?-O-沒(méi)食子酰白花苷異構(gòu)體 10.33 C30H32O15 防風(fēng) 64珊瑚菜內(nèi)酯6.60C17H16O5防風(fēng)1036,7-二甲氧基香豆素10.52C11H10O4白術(shù) 65N-甲基-L-苯丙氨酸6.63C10H13NO2白芍1045-甲氧基-7-(3,3-二甲基烯丙氧基)香豆素10.78C15H16O4防風(fēng) 66水楊酸甲酯6.80C8H8O3陳皮105白術(shù)內(nèi)酯III10.79C15H16O4白術(shù) 67水楊苷芍藥苷7.07C23H28O12白芍106芍藥新苷10.88C23H26O10白芍 68雙歧桿菌酸7.10C16H16O7防風(fēng)107O-葡糖基苯胺異構(gòu)體10.93C21H26O10防風(fēng) 69丁香酸7.13C9H10O5陳皮108蕓香柚皮苷10.93C27H32O14陳皮 70紫云英苷7.17C21H20O11陳皮1093-O-甲基芍藥苷11.22C24H30O11白芍 71東莨菪內(nèi)酯7.76C10H8O4白術(shù)1104-O-甲基白花苷11.22C24H30O11陳皮 72圣草次苷7.82C27H32O15白芍111白芍苷11.22C24H30O11白芍 73蘆丁7.99C27H30O16白芍112枸橘苷11.24C28H34O14白芍 744′,5,7-三羥基黃酮醇-3,7-二- O-葡萄糖苷7.99C27H30O16白術(shù)1131145-O-甲維阿斯米醇諾達(dá)克寧11.4611.54C16H18O5C14H14O4防風(fēng)防風(fēng) 75槲皮素8.01C15H10O7白芍115苯甲酰氧芍藥苷11.69C30H32O13白芍 76異槲皮苷8.01C21H20O12白芍116牡丹皮苷C11.69C30H32O13陳皮 77嗪皮啶8.04C11H10O5陳皮117pinen-10-ylvicianoside11.71C21H34O10白芍 78升麻素8.15C16H18O6防風(fēng)118十四烷基檸檬酸11.99C20H36O7白術(shù) 79沒(méi)食子酰芍藥苷8.57C30H32O15白芍119亥茅酚苷12.04C21H26O10防風(fēng) 806′-O-沒(méi)食子酰芍藥苷8.57C30H32O15白芍120牡丹皮苷H12.24C30H32O14陳皮 81柯伊利素-7-O-葡萄糖苷8.59C22H22O11白芍121citusin III12.49C36H53N7O9白芍 82diosmetin-8-C-葡萄糖苷8.59C22H22O11白芍1225,7-二羥基-6,8,3′,4′-四甲氧基黃酮12.56C19H18O8白芍 835-O-甲基維斯阿米醇苷8.74C22H28O10防風(fēng)123黃花菜木脂素A12.71C20H18O8防風(fēng) 841-O-b-D-吡喃葡萄糖基-芍藥酮8.74C22H28O10白芍124姜黃烯12.73C15H22白術(shù)

續(xù)表2

運(yùn)用Markerview 1.2軟件進(jìn)行檢驗(yàn)和主成分分析（principal component analysis，PCA），得到正、負(fù)離子模式下樣品分析的得分圖（圖2）。從圖2可以看出，制品組與生品組樣品在正離子檢測(cè)模式下明顯聚為2類，說(shuō)明在正離子模式下能夠檢測(cè)出炮制對(duì)于復(fù)方化學(xué)成分組成存在顯著影響；載荷圖（圖3）中每個(gè)點(diǎn)代表1個(gè)貢獻(xiàn)成分，且對(duì)組間分類影響越大的離子距離原點(diǎn)越遠(yuǎn)，靠近中心的點(diǎn)所代表的成分在組間無(wú)顯著性差異，成分結(jié)構(gòu)可以根據(jù)標(biāo)注出的質(zhì)核比信息與保留時(shí)間數(shù)據(jù)判斷。在差異性成分分析中，＜0.05的成分被認(rèn)為差異性成分，其中值＞0表示成分在制品組中有所減少；值＜0表示成分在制品組中有所增加。在鑒定出的183種成分中共發(fā)現(xiàn)34種差異性成分（表3），其中，柚皮素、蘆丁、3--乙?；ッ┓印⑾闳~木素-6,8-二- C-葡萄糖苷的變化趨勢(shì)與已有文獻(xiàn)報(bào)道一致[10]。

圖2 正、負(fù)離子模式下制品組與生品組樣品PCA分析

從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出差異性成分主要來(lái)源于陳皮和防風(fēng)，且多為正離子模式下匹配出的成分，從圖3中亦可看出，在負(fù)離子模式下制品組與生品組成分并沒(méi)有明顯分類，這一結(jié)論與差異性成分多在正離子檢測(cè)模式下被檢出的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象相一致。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)利用UHPLC-Q-TOF-MS技術(shù)及多元數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法，檢測(cè)并明確了制品組與生品組中的34種主要差異成分及其變化趨勢(shì)。對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析，推測(cè)炮制前后樣品化學(xué)成分組成發(fā)生變化的原因?yàn)椋号谥剖裹S酮類成分的溶出度增加，如蕓香柚皮素、柚皮苷等[14]；另一方面，高溫使其原型成分轉(zhuǎn)化、降解，使之含量增加，如柚皮素、橙皮素等苷類成分易受高溫影響降解，這可能是苷類成分含量降低的原因，如橙皮苷等。防風(fēng)未經(jīng)炮制進(jìn)行組方但成分明顯發(fā)生變化的原因可能是防風(fēng)中的部分成分與其他中藥中成分結(jié)合作用反應(yīng)生成新的物質(zhì)，如升麻苷，防風(fēng)中的酸性多糖在適合條件下發(fā)生Smith降解生成升麻素，使升麻素含量大幅增加[15]。

圖3 正離子檢測(cè)模式下制品組及生品組樣品間差異性成分分析結(jié)果載荷圖

據(jù)報(bào)道，升麻素相對(duì)于升麻苷有著更強(qiáng)的消炎作用[16]，陳皮中豐富的黃酮類成分有著抗炎鎮(zhèn)痛、抗菌抗癌、調(diào)節(jié)免疫、抗氧化等多種藥理作[17]。方中差異性成分升麻素、橙皮素、柚皮素、蕓香柚皮苷等成分含量的增加將會(huì)客觀上影響復(fù)方的臨床功效，極有可能是古籍中記載炮制品入藥的依據(jù)。

表3 t檢驗(yàn)分析得到組間差異性成分信息(n= 8)

Table 3 Information of distinctive components between groups obtained by ttest (n= 8)

編號(hào)化合物tR/mint值P值變化趨勢(shì) 8(S)-柚皮素**0.06?2.9980.008 51＋ 10香葉木苷*0.142.2810.036 56? 31腺苷*2.47?2.2250.040 74＋ 326-O-b-D-吡喃葡萄糖酰內(nèi)酯**3.033.11630.006 65? 36對(duì)羥基苯甲酸*4.39?2.1560.046 63＋ 44波狀苷A*5.80?2.2240.040 83＋ 483-O-乙酰基亥茅酚*5.992.5420.021 73? 58香葉木素-6,8-di-C-葡萄糖苷**6.333.0620.007 44? 59升麻苷*6.51?2.5270.022 40＋ 60芍藥新苷*6.582.8180.012 37? 64珊瑚菜內(nèi)酯***6.605.2820.000 07? 66水楊酸甲酯**6.803.6140.002 33? 68雙歧桿菌酸*7.102.2010.042 73? 70紫云英苷*7.172.3060.034 82? 73蘆丁*7.992.1230.049 68? 78升麻素*8.152.1380.048 26? 81柯伊利素-7-O-葡萄糖苷*8.59?2.1350.048 59＋ 841-O-b-D-吡喃葡萄糖基-芍藥酮*8.742.4300.027 21? 91山柰苷*9.212.1310.048 98? 95橙皮素*9.86?2.4870.024 32＋ 99牡丹皮苷D*10.152.3830.029 94? 100鄰苯二甲酸二丙酯*10.15?2.3860.029 74＋ 1011-O-b-D-吡喃葡萄糖基-8-O-苯甲?；炙幭阃?*10.174.0110.001 01? 106芍藥新苷***10.884.5290.000 34? 108蕓香柚皮苷**10.93?2.9980.008 51＋ 1104-O-甲基白花苷*11.222.4450.030 77? 1135-O-甲維阿斯米醇*11.462.5240.026 43? 118十四烷基檸檬酸*11.992.8850.010 78? 1284-O-甲基-苯甲?；炙庈?*13.103.1510.006 18? 1455,6,7,3′,4′-五甲氧基黃酮*14.242.5340.022 11? 1633,5,6,7,8,3′,4′-七甲氧基黃酮*15.292.3840.029 87? 166別歐前胡素***15.615.6260.000 04? 170櫟精-3,7,3′,4′-四甲醚*15.712.5410.021 78? 181鄰苯二甲酸二丁酯**20.193.0620.007 44?

*＜0.05，**＜0.01，***＜0.001；“?”代表制品組與生品組比較含量減少，“＋”代表制品組與生品組比較含量增加

*<0.05，**<0.01，***<0.001；“?” indicated a decreasing trend compared with unprocessed samples, “＋”indicated a increasing trend compared with unprocessed samples

本實(shí)驗(yàn)以水煎液為研究對(duì)象，直觀、準(zhǔn)確地模擬藥物臨床使用情況，探究炮制對(duì)經(jīng)典名方白術(shù)芍藥散化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)的影響，用現(xiàn)代科學(xué)詮釋古籍中運(yùn)用炮制品的合理性。然而，由于從事人員的忽視及專業(yè)知識(shí)不足，飲片品種濫用、亂用情況仍然存在，糾正此亂象對(duì)于保證中藥臨床使用的安全、有效具有現(xiàn)實(shí)意義。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Influence evaluation of processing on chemical composition of Baizhu Shaoyao Powder based on UHPLC-Q-TOF-MS technique

LIU Xiao1, SUN Kan-ping1, QIN Kun-ming2, 3, JIN Jun-jie2, 3, YANG Chao1, CAI Bao-chang1, 2, 3

1. School of Pharmacy, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210023, China 2. Nanjing Haichang Chinese Medicine Corporation, Nanjing 210061, China 3. Nanjing Haiyuan Prepared Slices of Chinese Crude Drugs Co. Ltd.,Nanjing 210061, China

UHPLC-Q-TOF-MS technology coupled with multivariate statistical analysis strategies was used to analyze the chemical composition of water decoction of Baizhu Shaoyao Powder (白術(shù)芍藥散, BZSYP). Simultaneously, water decoction of this prescription composed with unprosessed herbal drugs was also tested for a purpose of comparison.Both positive and negative ion scanning modes were applied for qualitative analysis with applications of Peakview 1.2 software to identify chemical components and MarkerView 1.2.1 software to search principal components for differences.A total of 183 chemical constituents were matched. A total of 34 differential chemical constituents were found by-test, which contributed most of the differences and came fromand.The processing of herbal drugs indeed showed a significant influence on the chemical composition of BZSYP, and it is of realistic and objective reasons that BZSYP should be composed with processed herbal drugs just as recorded in the ancient literature.

Baizhu Saoyao Powder; processing; UHPLC-Q-TOF-MS; principal components analysis; water decoction;;

R284.1

A

0253 - 2670(2022)13 - 3920 - 09

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.13.005

2021-10-21

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81873004）；南京市科技計(jì)劃項(xiàng)目（201812021）

劉 曉（1981—）女，遼寧撫順人，博士，副研究員，主要從事中藥炮制機(jī)制與功效物質(zhì)基礎(chǔ)研究。Tel: 15261873181

蔡寶昌（1952—），男，江蘇南京人，博士，教授，主要從事中藥飲片炮制工藝規(guī)范化研究。E-mail: bccai@126.com

[責(zé)任編輯 王文倩]