喬 婷，祁 鵬，趙瑞華，3，賀曉龍，3*，高小朋，3*

（1. 延安大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，陜西延安 716000；2. 陜西省微生物研究所，陜西西安 710043；3. 陜西省區(qū)域生物資源保育與利用工程技術(shù)研究中心，陜西延安 716000）

羊肚菌（Morchella spp.）隸屬子囊菌門、盤菌綱、盤菌目、羊肚菌科，是一種世界性分布、食藥兼用的珍稀菌類［1-2］。近年來，我國羊肚菌人工栽培技術(shù)發(fā)展迅速，多數(shù)生產(chǎn)者發(fā)現(xiàn)土壤類型會對羊肚菌子實體形成產(chǎn)生影響。有文獻(xiàn)記載［3-6］，羊肚菌在石灰或白堊質(zhì)土壤、腐殖質(zhì)土、黑黃色壤土、沙泥混合土、櫟壤土中均有生長，尤喜在火燒跡地及舊蘋果園土壤生長。趙永昌等［7］研究表明磷、鉀、鋅是羊肚菌子實體形成的必要因素。TAN等［8］通過分析播種后未出菇的土壤的理化性質(zhì)，表明其并不是主要影響因素。唐杰等［9］指出羊肚菌由于從土壤中吸收自身生長喜好的礦質(zhì)元素而不斷積累次級代謝產(chǎn)物，導(dǎo)致土壤微生物結(jié)構(gòu)的變化，從而影響產(chǎn)量。魏晶晶等［10］研究表明，栽培羊肚菌可以通過提高淺層土壤pH 值，有效增加土壤表層的有機(jī)質(zhì)、土壤速效氮和全磷含量、土壤蔗糖酶和W 酶活力，從而改良土壤。關(guān)于不同栽培基質(zhì)影響羊肚菌子實體發(fā)生的主要因素和機(jī)理，仍有待進(jìn)一步深入研究［11］。

本研究分析3 種不同土壤對羊肚菌產(chǎn)量、營養(yǎng)成分以及出菇前后土壤理化特征的影響，有利于指導(dǎo)羊肚菌人工栽培以及商業(yè)化模式中針對性地補充營養(yǎng)元素，為促進(jìn)羊肚菌生長發(fā)育和增產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)提供了理論支撐。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器設(shè)備

供試菌種由陜西省微生物研究所真菌研究中心提供，菌株為六妹羊肚菌（M.sextelata）。

50 mL Titrette 數(shù)字滴定器，普蘭德（上海）貿(mào)易有限公司；721G 可見分光光度計，上海棱光儀器有限公司；FP6410 火焰光度計，上海精密科學(xué)儀器有限公司；pHS-3C pH 計，上海雷磁儀器有限公司；DDSJ-308F 電導(dǎo)率儀，上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司；AA3 流動分析儀，水爾分析儀器（上海）有限公司。

1.2 方法

1.2.1 土壤采集方法

分別在播種前和出菇后，在G 土、N 土、Q 土中采用隨機(jī)取樣的方法取15 個重復(fù)土樣，篩去石塊、可見植物殘體和土壤動物等后裝入大離心管［12］，分別標(biāo)記為G原土（播種前德國腐殖質(zhì)土）、G土（出菇后德國腐殖質(zhì)土）、N 原土（播種前陜西省微生物研究所院內(nèi)花壇中自然土）、N 土（出菇后陜西省微生物研究所院內(nèi)花壇中自然土）、Q 原土（播種前秦嶺山中林下腐殖沙壤土）、Q 土（出菇后秦嶺山中林下腐殖沙壤土），將樣品放入液氮中保藏備用。

1.2.2 羊肚菌栽培方法

羊肚菌菌種及營養(yǎng)袋的制作：分別按照栽培種和營養(yǎng)袋培養(yǎng)基配方提前測量所需原材料含水量，按照配比稱取4.2 kg（21×200 g）干小麥，提前24 h用熱水浸泡小麥至無白芯，瀝干水分，按比例加入提前稱好的干土、谷殼、細(xì)木屑、蛭石，攪拌均勻，然后將KH2PO4、MgSO4溶于水中攪拌均勻，調(diào)整水分為63%，pH為8，裝袋，121 ℃滅菌2 h，無菌條件下冷卻至20 ℃，待用。

菌種接種、培養(yǎng)：將生長良好的母種接入冷卻好的菌種袋中，置于23 ℃條件下，黑暗培養(yǎng)30 d，待菌袋表面產(chǎn)生菌核時，取出備用。

播種：選用46 cm×35 cm×16 cm 的塑料筐，將3 種不同栽培基質(zhì)均勻鋪放在塑料框中，鋪滿塑料筐高度的2/3，然后將羊肚菌顆粒菌種掰碎后播撒在培養(yǎng)料基質(zhì)上，并覆蓋一層同種栽培基質(zhì)［13-14］。

菌絲生長階段管理：將播種完成的塑料筐置于室內(nèi)15 ℃~20 ℃，環(huán)境濕度為50%~60%，黑暗培養(yǎng)50~60 d，氣溫升至13 ℃左右，隨即搬運至試驗棚進(jìn)行出菇管理。

231 彈簧圈聯(lián)合 Onyx-34 膠治療冠狀動脈穿孔 1例報告 陸 陽，戴 煌，沈 健，趙文元，馬麗萍

出菇管理：氣溫升至10 ℃~15 ℃、土壤濕度控制在30%~35%、空氣濕度控制在85%~90%，CO2濃度控制在600~1 000 ppm、保持150~300 Lux 的光照強度，整個過程溫度和通風(fēng)的調(diào)整至關(guān)重要。利用遮陽網(wǎng)和通風(fēng)盡量增加溫度至18 ℃左右，促進(jìn)原基形成，之后利用遮陽網(wǎng)和通風(fēng)使溫度控制在15 ℃左右，延長出菇時間。

采收：羊肚菌長至適宜大小即可采收，并統(tǒng)計不同栽培基質(zhì)對應(yīng)的產(chǎn)量。

1.2.3 相關(guān)成分測定

將收獲的羊肚菌子實體干制后，送至陜西省科學(xué)院土壤資源與生物技術(shù)應(yīng)用重點實驗室進(jìn)行有機(jī)碳、全氮、全磷和全鉀測試［15］。將采集的土樣測試其pH 值、電導(dǎo)率、有機(jī)質(zhì)、硝銨態(tài)氮、有效磷和速效鉀［16］。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同培養(yǎng)基質(zhì)對羊肚菌出菇表現(xiàn)的影響

羊肚菌子實體形成以土壤為基質(zhì)，土壤基質(zhì)中營養(yǎng)成分直接關(guān)系著羊肚菌栽培成功與否。由表1可知，3 種不同土壤基質(zhì)中，菌絲都能夠正常生長，且都長滿了羊肚菌的分生孢子，但只有G 土和N 土成功出菇，出菇周期大約為90 d，其中N土產(chǎn)量達(dá)到445.4 g/㎡，G 土相比較低，為106.9 g/㎡，Q 土未成功出菇，可能因為土壤中砂石比例較高，保水性較差。

表1 羊肚菌的出菇表現(xiàn)

2.2 羊肚菌營養(yǎng)成分分析

羊肚菌生長所需的營養(yǎng)成分主要來源于土壤和外源營養(yǎng)袋，據(jù)報道羊肚菌可能對大多數(shù)礦物質(zhì)元素有富集作用［17］。通過分析羊肚菌中營養(yǎng)元素含量變化，有助于了解土壤和營養(yǎng)袋中營養(yǎng)元素的轉(zhuǎn)移路徑。由表2 可知，羊肚菌子實體中的3 種礦質(zhì)元素，鉀的含量最高，其次是磷。推測鉀、磷是羊肚菌易于吸收的偏好元素，因此，進(jìn)行羊肚菌栽培的基質(zhì)和外援營養(yǎng)袋配比中可以適當(dāng)增加鉀和磷的含量，或?qū)⒂欣谘蚨蔷訉嶓w的形成。

表2 子實體營養(yǎng)成分分析

2.3 羊肚菌出菇前后土壤理化性質(zhì)及營養(yǎng)成分變化

羊肚菌生長地通常與土壤的理化性質(zhì)與礦質(zhì)元素含量密切相關(guān)［18］，通過比較出菇前后土壤理化性質(zhì)和營養(yǎng)成分的變化，可進(jìn)一步推斷羊肚菌生長過程中營養(yǎng)成分的來源。由圖3可知，出菇前，土壤pH均為中性偏弱堿性，出菇后土壤pH均略有下降，但變化不顯著。出菇后G 土基質(zhì)中硝態(tài)氮、銨態(tài)氮均下降，但有效磷、速效鉀明顯增加；出菇后N 土基質(zhì)中速效鉀略有降低，但有機(jī)質(zhì)、硝態(tài)氮、銨態(tài)氮、有效磷均略有增加；出菇后Q 土中有機(jī)質(zhì)、硝態(tài)氮、速效鉀均略有降低，但銨態(tài)氮、有效磷略有增加。從結(jié)果分析，3種不同土壤基質(zhì)中礦質(zhì)元素的降低，可能與羊肚菌菌絲及子實體生長吸收消耗有關(guān)，但部分營養(yǎng)元素卻有不同程度的增加，這可能是菌絲將營養(yǎng)袋中的物質(zhì)轉(zhuǎn)化進(jìn)入到土壤菌絲中儲存，進(jìn)而為羊肚菌子實體出菇提供營養(yǎng)，但在子實體形成過程中未被完全消耗。該試驗結(jié)果為羊肚菌出菇階段提供外源營養(yǎng)提供了證據(jù)。

表3 出菇前后土壤理化性質(zhì)及營養(yǎng)成分分析

3 討論

有文獻(xiàn)表明，羊肚菌生長土壤pH 值大多為中性或弱堿性。伊平昌［19］和韓鵬遠(yuǎn)等［20］的研究均表明，羊肚菌生長區(qū)土壤為中性偏堿性。趙永昌等［13］研究表明，羊肚菌生長區(qū)土壤pH 值為中性偏弱酸性。這與本文的研究結(jié)果中羊肚菌出菇前后土壤pH值基本一致。

通過對羊肚菌子實體成分的測定，可知子實體中碳、氮、磷、鉀這4 種營養(yǎng)元素的含量高低順序依次為鉀>碳>磷>氮。同時土壤中成分測定也表明，鉀、磷、氮等元素不同程度的從營養(yǎng)袋富集到羊肚菌生長區(qū)域的土壤中，這與李瑩霞［21］、趙永昌［7］、李青［22］等研究結(jié)果一致。因此在配制羊肚菌栽培基質(zhì)和營養(yǎng)袋時，適當(dāng)增加鉀和磷元素的含量，可為羊肚菌的生長和出菇提供最適的營養(yǎng)成分，有可能促進(jìn)羊肚菌菌絲的營養(yǎng)生長，進(jìn)而促進(jìn)羊肚菌的增產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)。