殷云龍, 王芝權(quán), 楊 穎, 劉向東, 於朝廣

〔江蘇省中國科學(xué)院植物研究所(南京中山植物園), 江蘇 南京 210014〕

木蘭科(Magnoliaceae)含笑屬(MicheliaLinn.)植物有80余種，主要分布于亞洲熱帶、亞熱帶，中國約有70種，主要產(chǎn)于中國西南部至東部[1]，其主要分類特征為花腋生、花藥側(cè)向開裂和具柄雄蕊明顯[2,3]。含笑屬種類均為常綠喬木或灌木，花色有白色、黃色、紫色和紅色等，形態(tài)多樣性豐富，是中國南方地區(qū)極具開發(fā)潛力的觀賞植物，也是北亞熱帶區(qū)域普遍引種的常綠園林綠化樹種[4,5]，因此，含笑屬植物的引種和利用一直備受關(guān)注，已經(jīng)成為植物育種創(chuàng)新的熱點(diǎn)樹種之一[2,6,7]。例如：龔洵等[3,8]以云南含笑(M.yunnanensisFranch. ex Finet et Gagnep.)和灰?guī)r含笑(M.calcicolaC. Y. Wu)為親本，從雜交群體中選育出‘雛菊含笑’(‘Chujuhanxiao’)等9個新品種；邵文豪等[9]以樂昌含笑(M.chapensisDandy)和紫花含笑(M.crassipesY. W. Law)為親本，從雜交群體中選育出新品種‘夢緣’(‘Mengyuan’)；毛常麗等[10]從球花含笑(M.sphaeranthaC. Y. Wu ex Z. S. Yue)與云南含笑的雜交群體中選育出新品種‘晚春含笑’(‘Wanchunhanxiao’)。近年來，雖然含笑屬植物的雜交育種研究取得了一定進(jìn)展，但是能推廣應(yīng)用的品種仍然十分缺乏。

臺灣含笑〔M.compressa(Maxim.) Sarg.〕又名臺灣白蘭花、烏心石和黃心樹，為木蘭科含笑屬常綠喬木，原產(chǎn)于臺灣地區(qū)，為該地區(qū)主要用材樹種之一，株高可達(dá)20 m、胸徑達(dá)1 m[11]。早在20世紀(jì)80年代初，江蘇省中國科學(xué)院植物研究所就成功地對臺灣含笑進(jìn)行了引種馴化[11]。與同一地點(diǎn)栽培的含笑屬其他樹種相比，臺灣含笑的抗寒性優(yōu)于深山含笑(M.maudiaeDunn)和樂昌含笑等種類[12,13]；且與同一地點(diǎn)栽培的其他常綠闊葉樹種相比，臺灣含笑的耐寒性優(yōu)于香樟〔Cinnamomumcamphora(Linn.) Presl〕、石楠(PhotiniaserrulataLindl.)、乳源木蓮(ManglietiayuyuanensisLaw)、山杜英〔Elaeocarpussylvestris(Lour.) Poir.〕、白楠〔Phoebeneurantha(Hemsl.) Gamble〕和石櫟〔Lithocarpusglaber(Thunb.) Nakai〕等常綠闊葉樹種[11]，是在江蘇南北過渡地帶(北緯31°～35°)具有應(yīng)用潛力的耐寒常綠闊葉樹種。然而，與花朵碩大、色彩艷麗的常見木蘭科觀賞樹種相比，臺灣含笑花型較小、花被片淡黃色、觀花特性不明顯，限制了其推廣應(yīng)用。

‘中山含笑’(Michelia‘Zhongshanhanxiao’)是在臺灣含笑嫁接苗自然授粉子代的育苗過程中發(fā)現(xiàn)的表型顯著變異子代，其觀賞價值明顯優(yōu)于臺灣含笑母樹及其表型無變異子代，但是目前對‘中山含笑’的遺傳背景并不清楚。SSR分子標(biāo)記具有多態(tài)性高、種屬間通用性良好等優(yōu)點(diǎn)，目前已廣泛用于雜種鑒定、遺傳圖譜構(gòu)建、指紋圖譜分析等相關(guān)領(lǐng)域[14-16]，例如：王紫陽等[17]篩選出7對SSR引物對‘中山杉’品種具有較高的鑒別率，段豪等[18]采用SSR分子標(biāo)記構(gòu)建了落羽杉種質(zhì)資源的指紋圖譜，袁金玲等[19]基于SSR分子標(biāo)記對叢生竹雜交種進(jìn)行準(zhǔn)確鑒定，分析雜種與親本間的遺傳關(guān)系，并構(gòu)建指紋圖譜。作者在對‘中山含笑’與臺灣含笑母樹及其表型無變異子代進(jìn)行表型特征觀察的基礎(chǔ)上，采用SSR分子標(biāo)記技術(shù)對他們的遺傳變異和遺傳多樣性以及親緣關(guān)系進(jìn)行了分析，以期為含笑屬觀賞樹種的新品種培育奠定基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 材料

江蘇省中國科學(xué)院植物研究所于1982年從福建省引進(jìn)了臺灣含笑實(shí)生苗1株，通過嫁接擴(kuò)繁成無性系(共7株)后定植于南京中山植物園內(nèi)，并培育成單一基因型的臺灣含笑母樹，平均株高15 m，平均胸徑30 cm，目前均已開花結(jié)實(shí)，具有較好的生態(tài)適應(yīng)性和觀賞價值。

于2015年秋季采集母樹的成熟種子，脫去外種皮后用濕沙層積儲藏，翌年春季播種育苗。2016年9月，從當(dāng)年育成的2萬余株臺灣含笑實(shí)生苗群體中發(fā)現(xiàn)18株表型明顯變異的單株，占實(shí)生苗總數(shù)的0.09%；2017年春季對全部實(shí)生苗進(jìn)行移栽，株距和行距均為50 cm。2018年，少數(shù)表型變異子代單株開始開花，初步觀察發(fā)現(xiàn)這些單株具有生長快、枝葉茂密、葉片大而厚實(shí)、花大量多、花香濃郁、耐熱、耐寒等特點(diǎn)，觀賞價值明顯高于表型無變異子代，為此，參照鵝掌楸屬(LiriodendronLinn.)種質(zhì)‘優(yōu)酉’(‘Youyou’)的命名[20]將表型變異子代株群命名為‘中山含笑’，18株單株依次編號為Z601至Z618，并據(jù)此擴(kuò)繁成無性系。

1.2 方法

1.2.1 形態(tài)觀察和表型性狀測定 分別于2019年與2020年的2月底至3月初，對‘中山含笑’與臺灣含笑母樹及其表型無變異子代的物候期進(jìn)行記錄，并對樹干、枝、葉和花等器官的形態(tài)指標(biāo)進(jìn)行觀測。對開花早、生長量大和性狀優(yōu)良的3株‘中山含笑’(Z602、Z608、Z615)以及7株母樹和36株表型無變異子代進(jìn)行形態(tài)特征變異統(tǒng)計(jì)分析。

用鋼圍尺(精度1 mm)在樹干距地面0.1和1.3 m處分別測量地徑和胸徑；用布魯萊斯測高器(德國卡爾萊斯公司，精度0.1 m)和量桿(精度1 cm)測量樹高；用量桿分別測量樹冠東西向和南北向的投影直徑，二者平均值即冠幅。在各單株高1.5～2.0 m處的朝南方向選取大小基本一致的枝條，利用直尺(精度1 mm)測量枝條上所有葉片的葉長(葉梗至葉尖的長度)和葉寬(葉最寬處的寬度)，從而獲得葉長和葉寬的測量值范圍。于盛花期，在各單株高1.5～2.0 m處的朝南方向統(tǒng)計(jì)單枝著花數(shù)；采用目測法對花色進(jìn)行判定；隨機(jī)采集5朵盛開的花朵，統(tǒng)計(jì)花被片數(shù)量，并利用直尺測量花被片長度(花被片基部至頂端的長度)和花被片寬度(花被片最寬處的寬度)，從而獲得花被片長度和寬度的測量值范圍。

1.2.2 SSR分子標(biāo)記分析 2020年5月，以‘中山含笑’18株單株(Z601至Z618)和1株臺灣含笑母樹(M)及其表型無變異子代的3株單株(N1至N3)為樣株，每株采集3～5枚幼嫩葉片，于-80 ℃冰箱中保存，用于SSR分子標(biāo)記分析。

1.2.2.1 DNA提取 使用新型快速植物基因組DNA提取試劑盒(北京百泰克生物技術(shù)有限公司)提取嫩葉基因組DNA，并用Colibri超微量分光光度計(jì)(德國Berthold公司)檢測提取的基因組DNA的濃度和純度，用EB緩沖液將基因組DNA稀釋至10 ng·μL-1，置于-20 ℃冰箱保存、備用。

1.2.2.2 SSR引物篩選 依據(jù)目前已公布的木蘭科植物北美鵝掌楸〔Liriodendronchinense(Hemsl.) Sarg.〕[21]、深山含笑[22,23]、阿希氏木蘭(MagnoliaasheiWeath.)[24]、西疇含笑(MicheliacoriaceaHung T. Chang et B. L. Chen)[25]、火力楠(MicheliamacclureiDandy)[26]和灰木蓮(ManglietiaconiferaDandy)[27]的SSR標(biāo)記分析結(jié)果，挑選出62對通用性較高的引物，以‘中山含笑’Z601、Z605、Z609、Z613和Z617的基因組DNA為模板進(jìn)行引物初篩。

PCR反應(yīng)體系總體積15.0 μL，包括2×TaqPCR Master Mix 7.5 μL、10.0 μmol·L-1正向和反向引物各0.9 μL、模板DNA 1.0 μL及雙蒸水4.7 μL。PCR擴(kuò)增程序?yàn)椋?5 ℃預(yù)變性3 min；94 ℃變性30 s、62 ℃退火30 s、72 ℃延伸45 s，共10個循環(huán)，每個循環(huán)降低0.5 ℃；94 ℃變性30 s、54 ℃退火30 s、72 ℃延伸45 s，共20個循環(huán)；72 ℃延伸7 min。每個樣本重復(fù)擴(kuò)增3次，擴(kuò)增產(chǎn)物于4 ℃保存。

在擴(kuò)增產(chǎn)物中加入1.5 μL溴酚藍(lán)染液，混合均勻后，用質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)8%SDS-PAGE進(jìn)行電泳分離及銀染。篩選出5對擴(kuò)增條帶清晰、多態(tài)性豐富及重復(fù)性高的引物，用于遺傳多樣性分析。5對引物序列如下：MMA72-F為5′-TTTTCCACCCCTCTCGAATA-3′，MMA72-R為5′-CCATTATGCTGGGGTGTCTT-3′；M02-F為5′-CAGCTCCCATTTTCTGTCGC-3′，M02-R為5′-TCTGCAGATCAAGGCCTTGG-3′；M23-F為5′-GTTCTCCACAAAGCTTGGCG-3′，M23-R為5′-CGTCCCCATCTTTCCTGTCC-3′；MA3-7-F為5′-CATGCTAACCCATCTAGTCACG-3′，MA3-7-R為5′-TCCCAATACCCATCCCAGTA-3′；MA3-12-F為5′-AGCCCAAGGAGACAACAGAA-3′，MA3-12-R為5′-GGGTTTCTTCGCATGTTGTT-3′。

1.2.2.3 PCR擴(kuò)增和毛細(xì)管電泳 在每對引物正向引物的5′端添加熒光基團(tuán)合成熒光引物，其中引物MMA72和M02進(jìn)行FAM修飾，引物M23、MA3-7和MA3-12進(jìn)行HEX修飾，熒光引物由上海捷瑞生物工程有限公司合成。以上述22株樣株的基因組DNA為模板，在遮光條件下，按照前述反應(yīng)體系和程序進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物由上海捷瑞生物工程有限公司進(jìn)行毛細(xì)管電泳熒光檢測，步驟為：PCR擴(kuò)增產(chǎn)物先用雙蒸水稀釋10倍，再用HIDI(已混合ROX500)稀釋10倍，95 ℃變性3 min，立即冰水浴，最后用ABI 3730XL遺傳分析儀(美國ThermoFisher公司)進(jìn)行檢測。每個擴(kuò)增產(chǎn)物重復(fù)檢測4次。

1.3 數(shù)據(jù)處理和分析

2 結(jié)果和分析

2.1 ‘中山含笑’與臺灣含笑母樹及其表型無變異子代的形態(tài)特征比較

對‘中山含笑’與臺灣含笑母樹及其表型無變異子代的整株、葉片和花形態(tài)特征進(jìn)行觀測，結(jié)果見圖1和表1。

從形態(tài)(圖1)上看，與母樹相似，‘中山含笑’也為常綠喬木，分枝多，呈塔狀或圓錐狀；供試‘中山含笑’為4年生幼樹，最早在第3年始花，早于表型無變異子代(4年生表型無變異子代暫未始花)；花期2月至3月，果期10月至11月。其葉革質(zhì)，倒卵狀橢圓形或狹倒卵形，先端急短尖，葉正面深綠色且有光澤，葉背面淡綠色，葉面積明顯大于母樹和表型無變異子代。‘中山含笑’開花多且芳香，單花腋生，花明顯大于母樹；花被片8～14枚，呈螺旋狀排列，倒卵形；雌蕊群綠色，柱頭帶紫紅色；雄蕊群黃綠色，基部紫色，雄蕊數(shù)量45～48枚，長8.0～14.0 mm。

由表1可見：‘中山含笑’Z602、Z608和Z615的株高、地徑、胸徑和冠幅分別是表型無變異子代的1.41～1.55、2.49～2.97、2.79～3.16和2.38～2.74倍；葉長和葉寬分別是表型無變異子代的1.40～2.04和1.50～2.17倍。并且，‘中山含笑’的葉長和葉寬以及花被片的長度和寬度均大于母樹，花被片的長度和寬度分別是母樹的3.50～4.53和4.33～7.00倍。母樹和表型無變異子代的葉片大小無明顯差異?！猩胶Α膯沃χ〝?shù)和花被片數(shù)與母樹和表型無變異子代相似，但其花被片顏色與母樹有差異，為乳白色，近基部帶淡紫色或紫色，而母樹的花被片為淡黃白色，近基部帶深紫色。

綜上所述，‘中山含笑’的整株、葉片和花在形狀上與母樹和表型無變異子代相似，但其葉片和花大小卻發(fā)生了顯著變化。

Z602,Z608,Z615: ‘中山含笑’單株 Individuals of Michelia ‘Zhongshanhanxiao’; M： 臺灣含笑母樹Mother tree of M. compressa (Maxim.) Sarg.; N： 臺灣含笑表型無變異子代Progeny without phenotypic variation of M. compressa.

表1 ‘中山含笑’與臺灣含笑母樹及其表型無變異子代的形態(tài)特征差異1)

2.2 ‘中山含笑’與臺灣含笑母樹及其表型無變異子代的遺傳變異分析

2.2.1 基于SSR分子標(biāo)記的多態(tài)性分析 對‘中山含笑’與臺灣含笑母樹及其表型無變異子代進(jìn)行SSR標(biāo)記分析，5對引物擴(kuò)增條帶的多態(tài)性分析見表2。由表2可見：5對SSR引物從22株單株基因組DNA中共檢測出16個等位基因，其中，引物MMA72、M02和MA3-7的觀測等位基因數(shù)均為4，引物M23和MA3-12的觀測等位基因數(shù)均為2；有效等位基因數(shù)為1.4～2.4，平均值為1.9。觀測雜合度為0.364～0.818，5個引物的觀測雜合度由大到小依次為MMA72和MA3-7、M02、M23、MA3-12；期望雜合度為0.304～0.589，由大到小依次為MA3-7、MMA72、M02、M23、MA3-12。Shannon’s多樣性指數(shù)為0.474～1.031，平均值為0.777。Nei’s基因多樣性指數(shù)為0.298～0.575，平均值為0.446?？傮w上看，引物MA3-12的遺傳變異指標(biāo)均最小，而引物MA3-7的遺傳變異指標(biāo)均最大。

表2 5對SSR引物擴(kuò)增條帶的多態(tài)性分析

2.2.2 基因分型分析 對‘中山含笑’單株與臺灣含笑母樹及其表型無變異子代進(jìn)行SSR標(biāo)記分析，5對SSR引物在22株樣株中的擴(kuò)增條帶長度見表3。

母樹和表型無變異子代的3株單株的擴(kuò)增結(jié)果完全一致，但與‘中山含笑’18株單株的擴(kuò)增結(jié)果存在一定差異。其中，引物MMA72、M02、M23、MA3-7和MA3-12在表型無變異子代中檢測到的等位基因數(shù)分別為1、2、1、1和1，但在‘中山含笑’18株單株中檢測到的等位基因數(shù)分別為4、3、2、4和2，表明‘中山含笑’的等位基因數(shù)高于表型無變異子代。

MMA72和MA3-7引物對應(yīng)的位點(diǎn)在‘中山含笑’18株單株中為雜合位點(diǎn)；M02引物對應(yīng)的位點(diǎn)在‘中山含笑’8株單株中為雜合位點(diǎn)，M23引物對應(yīng)的位點(diǎn)在‘中山含笑’10株單株中為雜合位點(diǎn)，MA3-12引物對應(yīng)的位點(diǎn)在‘中山含笑’8株單株中為雜合位點(diǎn)。

引物MMA72、M23、MA3-7和MA3-12在母樹和表型無變異子代中的擴(kuò)增產(chǎn)物長度分別為212、181、187和182 bp，而在‘中山含笑’18株單株中除均可擴(kuò)增出長度一致的條帶外，還可擴(kuò)增出長度分別為214～228、174、211～226和158 bp的另一條帶。引物M02在母樹和表型無變異子代的擴(kuò)增產(chǎn)物長度均為140和150 bp，而在‘中山含笑’18株單株中除均可擴(kuò)增出長度140 bp的條帶外，其中8株單株還能擴(kuò)增出長度為142或159 bp的另一條帶。

表3 5對SSR引物在‘中山含笑’與臺灣含笑母樹及其表型無變異子代中的擴(kuò)增條帶長度

總之，除含有與母樹相同的等位基因外，‘中山含笑’18株單株還含有來源于母樹之外的等位基因。

2.2.3 遺傳多樣性分析 ‘中山含笑’與臺灣含笑表型無變異子代的遺傳多樣性分析見表4。結(jié)果表明：‘中山含笑’的觀測等位基因數(shù)、有效等位基因數(shù)、觀測雜合度和期望雜合度分別為表型無變異子代的2.50、1.67、3.44和4.06倍，Shannon’s多樣性指數(shù)是表型無變異子代的5.73倍，Nei’s基因多樣性指數(shù)是表型無變異子代的4.74倍?？傊?，‘中山含笑’的遺傳多樣性明顯高于表型無變異子代。

2.2.4 遺傳一致度和遺傳距離分析 對‘中山含笑’與臺灣含笑母樹及其表型無變異子代進(jìn)行遺傳一致度和遺傳距離分析，結(jié)果見表5。

結(jié)果表明：母樹和3株表型無變異子代單株的遺傳一致度均為1.000、遺傳距離均為0.000，3株表型無變異子代間的遺傳一致度也均為1.000、遺傳距離也均為0.000，表明母樹與表型無變異子代間無遺傳差異。

‘中山含笑’18株單株間的遺傳距離變化范圍為0.000～0.539，平均值為0.241；其中，Z602與Z605、Z606與Z613和Z614間的遺傳一致度均為1.000，遺傳距離均為0.000，說明Z602與Z605、Z606與Z613和Z614間均無遺傳差異；Z607與Z608、Z608與Z617間的遺傳距離最大(0.539)，說明這2組單株間的遺傳差異最大。

‘中山含笑’18株單株與母樹的遺傳距離變化范圍為0.192～0.399，平均值為0.288；其中Z610與母樹間的遺傳距離最小，Z616與母樹間的遺傳距離最大。‘中山含笑’各單株與母樹間的遺傳距離總體上小于‘中山含笑’單株間的遺傳距離，說明‘中山含笑’與母樹具有部分相近的遺傳組成；其中，Z610與母樹的遺傳差異最小，Z616與母樹的遺傳差異最大。

表4 ‘中山含笑’和臺灣含笑表型無變異子代的遺傳多樣性分析

表5 ‘中山含笑’與臺灣含笑母樹及其表型無變異子代間的遺傳一致度和遺傳距離1)

2.3 ‘中山含笑’與臺灣含笑母樹及其表型無變異子代的遺傳關(guān)系分析

為進(jìn)一步探討‘中山含笑’與臺灣含笑母樹及其表型無變異子代的遺傳關(guān)系，根據(jù)上述22份樣本的遺傳一致度采用UPGMA法進(jìn)行聚類分析，結(jié)果見圖2。在遺傳一致度為0.50處，供試的22份樣本分為2組，其中，母樹和3個表型無變異子代單株聚為Ⅰ組，‘中山含笑’18個單株聚為Ⅱ組。在遺傳一致度為0.64處，Ⅱ組分為4個亞組，其中，‘中山含笑’Z608單獨(dú)聚為Ⅱ1亞組；Z602、Z605、Z603、Z606、Z613、Z614和Z610聚為Ⅱ2亞組；Z607、Z617、Z609、Z618、Z611和Z615聚為Ⅱ3亞組；Z601、Z612、Z604和Z616聚為Ⅱ4亞組。

由此可見，母樹和表型無變異子代具有極為緊密的遺傳關(guān)系，而‘中山含笑’18個單株與母樹和表型無變異子代的遺傳關(guān)系較遠(yuǎn)；在‘中山含笑’18個單株中，Z608與其他17株單株的遺傳關(guān)系較遠(yuǎn)。

Z601-Z618: ‘中山含笑’單株Individuals of Michelia ‘Zhongshanhanxiao’; M: 臺灣含笑母樹Mother tree of M. compressa (Maxim.) Sarg.; N1-N3: 臺灣含笑表型無變異子代單株Individuals of progeny without phenotypic variation of M. compressa.

3 討論和結(jié)論

SSR標(biāo)記分析結(jié)果表明：臺灣含笑3個表型無變異子代在5個位點(diǎn)上與臺灣含笑母樹的基因分型完全一致，表明母樹與表型無變異子代擁有高度相似的遺傳基礎(chǔ)。由于供試的母樹是由同一株臺灣含笑實(shí)生苗經(jīng)采穗嫁接繁殖的無性系，攜帶完全相同的遺傳信息，其不同單株之間花粉傳播并授粉產(chǎn)生的子代屬于同一基因型的自交子代；而表型無變異子代的葉片形態(tài)與母樹高度相似，因而，推測表型無變異子代為母樹通過自由授粉產(chǎn)生的自交后代。在母樹的SSR標(biāo)記分析中，5個位點(diǎn)中有4個為純合位點(diǎn)，其自交子代在這4個位點(diǎn)上不會產(chǎn)生遺傳分化，因此，表型無變異子代單株也具有這4個純合位點(diǎn)；但M02引物對應(yīng)的位點(diǎn)在母樹和表型無變異子代單株中均為雜合位點(diǎn)，由于取樣單株數(shù)量較少，并不能確定該位點(diǎn)是否存在遺傳分化，因此，后續(xù)將通過擴(kuò)大表型無變異子代樣本的數(shù)量，進(jìn)一步確定該位點(diǎn)的遺傳分化程度。

從2萬余株臺灣含笑自由授粉子代中僅發(fā)現(xiàn)少數(shù)表型明顯變異的單株(即‘中山含笑’)，產(chǎn)生這種變異的概率較低，僅0.09%，推測由臺灣含笑母樹自交產(chǎn)生這種變異的可能性不大。通過SSR標(biāo)記分析，5個SSR引物在‘中山含笑’不同單株中的擴(kuò)增產(chǎn)物呈現(xiàn)等位基因的雜合性，即‘中山含笑’18株單株除攜帶母樹的遺傳信息外，還各自含有來源于母樹之外的遺傳信息；加之在表型特征上‘中山含笑’供試單株的葉片和花明顯大于母樹，且長勢也明顯高于同齡的表型無變異子代，開花的株齡早于表型無變異子代，因此，推測‘中山含笑’為臺灣含笑與木蘭科其他植物的種間雜交后代。

聚類分析結(jié)果顯示：‘中山含笑’18株單株可以分成4個亞組，其中Z608獨(dú)立成為1個亞組，另外17株單株聚為另3個亞組；其中，在Ⅱ2亞組的7株單株中，Z602與Z605、Z606與Z613和Z614單株間的遺傳一致度均為1.000，說明Z602與Z605、Z606與Z613和Z614間除具有相同的母本臺灣含笑的遺傳信息外，也各自具有相同父本的遺傳信息?！猩胶Α?8株單株與母樹和表型無變異子代可以明顯聚為2組，說明‘中山含笑’與臺灣含笑有較遠(yuǎn)的遺傳關(guān)系，且‘中山含笑’18株單株聚為不同的亞組，說明有些單株的父本可能屬于木蘭科不同種類，特別是Z608的父本可能更為特殊。有關(guān)‘中山含笑’不同單株父本的研究將通過雜交實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證。

在本研究中，從62對來自木蘭科其他植物的SSR標(biāo)記中篩選出5對SSR引物，分別來自深山含笑、灰木蓮和阿希氏木蘭，應(yīng)用于本研究中均具有優(yōu)良的通用性，加之本研究選用高分辨率的熒光毛細(xì)管電泳基因分型技術(shù)，使用5對SSR引物共擴(kuò)增出16個等位基因，表現(xiàn)出較高的多態(tài)性。因此，使用這5對SSR引物基本能反映‘中山含笑’與母樹和表型無變異子代的遺傳差異。

臺灣含笑在江蘇地區(qū)具有良好的耐寒性和生態(tài)適應(yīng)性，是值得大力推廣應(yīng)用的園林綠化樹種[11-13,28-30]?！猩胶Α桥_灣含笑在遷地保育條件下產(chǎn)生的變異子代，不僅其生態(tài)適應(yīng)性得到進(jìn)一步加強(qiáng)，而且在生長和觀賞特征上表現(xiàn)出明顯的超親優(yōu)勢，具有廣闊的應(yīng)用前景，因此，從品種創(chuàng)新的目的出發(fā)，應(yīng)進(jìn)一步弄清其遺傳背景，全面了解其生物學(xué)特征，并開展繁育和栽培技術(shù)等方面的研究。