錢璽丞， 楊 超， 綦世金， 梁 浩， 郁建生*

(1.銅仁職業(yè)技術(shù)學(xué)院民族中獸藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州 銅仁 554300；2.貴州健康職業(yè)學(xué)院，貴州 銅仁 554300)

青陽參又名千年生，是夾竹桃科鵝絨藤屬植物，廣泛分布于我國西南部，根部藥用，生長于海拔1 500～2 800 m的山地、溪谷疏林中或山坡路邊，枝、葉有毒質(zhì)，制成粉劑可防治農(nóng)業(yè)害蟲，其根毒性猛烈，據(jù)記載可毒殺虎及其他野獸[1]。《彝藥志》中記載青陽參“益腎強(qiáng)筋，健脾和胃，祛風(fēng)除濕，解毒，鎮(zhèn)靜，驅(qū)蟲”?！兜崮媳静荨酚涊d：“民間用作壯腰健腎，強(qiáng)筋壯骨”。青陽參在民間以補(bǔ)虛著稱，性微溫，味甘微苦，有補(bǔ)氣益腎、活血散瘀、祛痰止咳的功效，用于治療子宮肌瘤、腰骨痛、結(jié)核、癲癇等癥。云南民間用其根作滋補(bǔ)強(qiáng)壯藥，治療小兒驚風(fēng)癥和風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛，云南納西族和白族用其治療癲癇[2]。早在上個世紀(jì)，中國科學(xué)院和云南白藥集團(tuán)股份有限公司共同研制了青陽參片，是我國首個擁有完備自主產(chǎn)權(quán)的癲癇用藥，其有效成分為青陽參總苷，青陽參片標(biāo)準(zhǔn)收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)——中藥成方制劑(第十二冊)》中。研究發(fā)現(xiàn)，青陽參含有C21甾體皂苷等生物活性物質(zhì)，并含有苯類衍生物、有機(jī)酸類、單糖和寡糖等成分[3-6]。本文對其化學(xué)成分和藥理活性進(jìn)行綜述，以期為該植物進(jìn)一步開發(fā)利用提供參考。

1 化學(xué)成分

1.1 C21甾體皂苷 青陽參中C21甾體類主要存在青陽參苷元、告達(dá)庭、羅素他命、蘿藦苷元、去乙酰蘿藦苷元、加加明、本波苷元、開德苷元、肉珊瑚苷元、12-β-O-乙?；?20-O-(2-甲基丁酰基)-肉珊瑚苷元等十余種苷元，都是以四元的孕甾烷為基本骨架，4個環(huán)按A/B反式、B/C反式、C/D為順式組合，其中C10、C13位分別被角甲基C19、C18位取代，大多為β構(gòu)型，C5、C6位都是雙鍵，C3、C8、C12、C14、C17位都有β-OH，C20位可能是酮基或β-OH，C12、C20位上的羥基可能和對羥基甲苯酸、桂皮酸、煙酸、醋酸、異戊酸等結(jié)合成酯。在目前從青陽參中分離得到的C21甾體皂苷中，所有的糖都鏈接在C3位的-OH上，且最多連接7個糖，多為2,6-二去氧糖，如洋地黃毒吡喃糖(digit)、夾竹桃吡喃糖(ole)、加拿大麻吡喃糖(cym)、地支吡喃糖(dig)、6去氧糖如黃夾竹吡喃糖(the)等，一般都與苷元相連接，而糖鏈中的非去氧糖均是葡萄糖，并且大多數(shù)都鏈接在糖鏈的末端位置，糖鏈中多為β-D構(gòu)型，且連接順序均為1→4直鏈連接。20世紀(jì)80年代以來，國內(nèi)學(xué)者已經(jīng)從青陽參的根部分離得到162個C21甾體皂苷化合物，可分為青陽參苷元型(1～25)、告達(dá)亭型(26～68)、其他苷元型(69～136)，其中C3位連接的糖鏈有58個，見圖1～3、表1～3。

1.2 三萜 目前，從青陽參中分離得到2個三萜，分別為β-谷甾醇(137)、阿江欖仁酸(138)，見圖4。

1.3 糖 目前，從青陽參中分離得到了1個單糖和8個寡糖(139～147)，見圖5、表4。

1.4 苯乙酮 目前，從青陽參中共分離得到8個苯乙酮類化合物(148～155)，見圖6、表5。

1.5 有機(jī)酸 目前，從青陽參中分離得到6個有機(jī)酸類化合物(156～161)，見圖7、表6。

1.6 有機(jī)胺 迄今為止，只從青陽參中分離得到1個有機(jī)胺——N,N-二甲基乙胺[5](162)，見圖8。

圖1 青陽參中青陽參苷元型C21甾體皂苷化合物結(jié)構(gòu)式

圖2 青陽參中告達(dá)亭型C21甾體皂苷化合物結(jié)構(gòu)式

表1 青陽參中青陽參苷元型C21甾體皂苷化合物

圖3 青陽參中其他苷元型C21甾體皂苷化合物結(jié)構(gòu)式

表2 青陽參中告達(dá)亭型C21甾體皂苷化合物

表3 青陽參中其他苷元型C21甾體皂苷化合物

圖4 青陽參中三萜類化合物結(jié)構(gòu)式

圖5 青陽參中糖類化合物結(jié)構(gòu)式

表4 青陽參中糖類化合物

圖6 青陽參中苯乙酮類化合物結(jié)構(gòu)式

圖7 青陽參中有機(jī)酸類化合物結(jié)構(gòu)式

表5 青陽參中苯乙酮類化合物

表6 青陽參中有機(jī)酸類化合物

圖8 青陽參中有機(jī)胺類化合物結(jié)構(gòu)式

2 藥理作用

2.1 抗癲癇 青陽參具有抗癲癇的作用，其發(fā)揮作用的主要成分為甾體皂苷。研究發(fā)現(xiàn)，青陽參根部總苷對大鼠聽源性癲癇和點(diǎn)燃效應(yīng)癲癇有抑制作用，可以延緩聽源性癲癇的潛伏期、降低其嚴(yán)重程度，可用于治療癲癇大發(fā)作[27-28]。大鼠長期服用青陽參不會影響生長激素抑制素和神經(jīng)傳遞介質(zhì)濃度，表明其抗癲癇機(jī)制可能與苯妥英鈉和卡馬西平不同，其對中樞神經(jīng)肽通路可能沒有影響[29]。青陽參對幼齡大鼠腦發(fā)育的影響遠(yuǎn)小于苯妥英鈉，被動回避條件反射的建立可能與其對記憶行為的影響有關(guān)，而條件回避反應(yīng)百分比的降低與運(yùn)動活動的減少無關(guān)[30]。青陽參對小鼠超強(qiáng)電休克驚厥無對抗作用，但能加強(qiáng)苯妥英鈉或苯巴比妥的抗超強(qiáng)電休克驚厥效應(yīng)，并表現(xiàn)出協(xié)同作用[31]。木全章等[32]發(fā)明了以青陽參總苷和苯妥英鈉、青陽參總苷和苯巴比妥為原料配制成的復(fù)方制劑用于治療癲癇，該制劑能夠克服已有藥物單獨(dú)使用時毒性作用大、有選擇性以及藥效低的缺點(diǎn)。陳陽美等[33]研究發(fā)現(xiàn)，杏仁核點(diǎn)燃癲癇大鼠腦內(nèi)c-fos、c-Jun基因表達(dá)升高，青陽參能阻斷其表達(dá)并減少陽性細(xì)胞數(shù)量。李先春[34]對青陽參抗癲癇作用的分子生物學(xué)機(jī)制進(jìn)行初步探討，結(jié)果表明，青陽參能抑制強(qiáng)噪音誘導(dǎo)的聽源性癲癇，其機(jī)制可能為抑制Na通道基因(如Scn1b)，升高GABAA受體單位(如Gabra2、Gabra4)、5-HT受體(Htr3a)、谷氨酰胺合成酶(Glns)基因表達(dá)，調(diào)節(jié)其他重要代謝酶基因(如Mtap6、Bace2、ERK-1)以及影響細(xì)胞因子(EGR1、Zfp179)等途徑。青陽參能促進(jìn)PTZ誘導(dǎo)的癲癇發(fā)作可能與其升高海馬部位Kcnal、Camk2b、Pcx基因表達(dá)，降低Scn1b基因表達(dá)有關(guān)。

Li等[21]對青陽參根部提取得到的青陽參苷乙(26)、caudatin-3-O-β-D- oleandropyranosyl-(1→4)-β-D-oleandropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranoside(36)、caudatin-3-O-β-D-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranosyl- (1→4)-β-D-cymaropyranoside(53)進(jìn)行抗癲癇活性研究，通過PTZ誘導(dǎo)斑馬魚模型，觀察斑馬魚幼魚運(yùn)動行為，結(jié)果表明，30 min內(nèi)質(zhì)量濃度為10 μg/mL的這3種化合物均有抗癲癇作用。Li等[10]從青陽參中分離得到22個甾體化合物，用斑馬魚模型進(jìn)行活性篩選，研究發(fā)現(xiàn)，青陽參苷乙(26)、青陽參苷己(67)、kidjoranin-3-O-β-D-oleandropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranoside(71)有抗癲癇作用，且無非特異性神經(jīng)毒性或鎮(zhèn)靜作用，它們對自主活動也沒有影響。

2.2 免疫調(diào)節(jié)和抗肝炎、抗美尼爾綜合征 木全章等[35-36]研究以青陽參為原料制備治療遷延性肝炎和慢性肝炎藥物，最終確定運(yùn)用青陽參苷甲(1)、青陽參苷乙(26)、青陽參苷丙(25)、青陽參苷丁(68)、青陽參苷戊(31)、青陽參苷己(67)、青陽參苷庚(136)這7個化合物來制備抗肝炎藥物和抗美尼爾綜合征藥物，其研發(fā)出的藥物具有藥源廣、藥效高、毒性低、穩(wěn)定性好、生物吸收利用度高的優(yōu)點(diǎn)。孫樹凱等[37-38]探討青陽參總苷對CCl4所致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用機(jī)制，研究發(fā)現(xiàn)，青陽參總苷可以通過提高CCl4肝損傷小鼠外周血中CD4+T細(xì)胞百分率，降低外周血中CD8+T細(xì)胞百分率，調(diào)節(jié)T細(xì)胞亞群的平衡狀況，從而調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能，達(dá)到治療肝損傷的目的，這可能是青陽參總苷治療肝損傷的免疫機(jī)制之一。青陽參總苷還可以降低肝損傷小鼠血清中TNF-α、IL-6水平，這提示青陽參總苷可通過減少對肝細(xì)胞有毒作用的細(xì)胞因子TNF-α和IL-6的釋放而發(fā)揮作用間接保護(hù)肝細(xì)胞。

Zhan等[24]發(fā)現(xiàn)，cynotophyllosides P(106)、sarcostin 3-O-β-D-cymaropyranosyl-(1→4)-α-L-digitoxopyranoside(113)有提高免疫的作用，cynotophyllosides Q(107)有免疫抑制作用，cynotophyllosides R(110)在低濃度時可以促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖，在質(zhì)量濃度大于1.0 μg/mL時則抑制免疫細(xì)胞。陳詩蕓等[39]發(fā)現(xiàn)青陽參總苷對ANAE陽性淋巴細(xì)胞及淋巴細(xì)胞DNA均有保護(hù)效果，并能夠防止環(huán)磷酰胺所致淋巴細(xì)胞DNA著色區(qū)出現(xiàn)大量空泡。

Dong等[13]通過TGF-β1誘導(dǎo)HSC-T6模型，對分離得到的20個化合物進(jìn)行細(xì)胞毒性試驗(yàn)，研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)濃度為10 μmol/L時，cynotophylloside C(6)、qingyangshengenin-3-O-β-D-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-digitoxopyranoside(8)、青陽參苷乙(26)、青陽參苷戊(31)、caudatin-3-O-β-D-oleandropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranoside(34)、caudatin-3-O-β-D- oleandropyranosyl-(1→4)-β-D-oleandropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranoside(36)、caudatin 3-O-β-D-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranoside(37)、cynanchin F(87)、cynanchin D(90)、cynanchin E(91)可穩(wěn)定或抑制HSCs增殖，表明它們具有一定的抗肝纖維活性。

2.3 神經(jīng)活性 Dong等[40]用PC12細(xì)胞模型對青陽參苷甲(1)、青陽參苷乙(26)、caudatin 3-O-β-D-cymaropyranoside(35)、caudatin 3-O-β-D-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranoside(37)進(jìn)行神經(jīng)營養(yǎng)活性篩選，結(jié)果表明caudatin 3-O-β-D-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranoside(37)效果最好。Sheng等[41]用PTZ誘導(dǎo)神經(jīng)元損傷，建立原代皮層神經(jīng)元細(xì)胞、小鼠、斑馬魚3種模型，結(jié)果表明，otophylloside N(18)可減輕原代皮層神經(jīng)元細(xì)胞損傷，降低細(xì)胞凋亡和神經(jīng)元活化，減少小鼠大腦皮層細(xì)胞凋亡和神經(jīng)元的激活以及斑馬魚神經(jīng)毒性。Zhao等[22]采用MTT法進(jìn)行谷氨酸、H2O2損傷HT22細(xì)胞模型實(shí)驗(yàn)，研究發(fā)現(xiàn)，cynanotoside B(57)、cynotophylloside H(118)、cynanotoside A(122)對同型半胱氨酸誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡有保護(hù)作用，并在1～30 μmol/L范圍內(nèi)呈劑量依賴性。

2.4 抗腫瘤 Dong等[20]從青陽參中分離得到23個C21甾體皂苷，并評價其對人體癌細(xì)胞HL-60、SMMC-7721、A-549、MCF-7、SW480的細(xì)胞毒性，其中青陽參苷乙(26)、青陽參苷戊(31)和cynanotin E(73)，IC50值為11.4～36.7 μmol/L，且對這5種癌細(xì)胞有抑制作用。caudatin-3-O-β-D-oleandropyranosyl-(1→4)-β-D-oleandropyranosyl-(1→4)-β-D- cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranoside(36)對HL-60、SMMC-7721、MCF-7、SW480細(xì)胞有抑制作用(IC50值為12.2～30.8 μmol/L)，與對照組比較，青陽參苷乙(26)、青陽參苷戊(31)、caudatin-3-O-β-D-oleandropyranosyl-(1→4)-β-D-oleandropyranosyl-(1→4)-β-D- cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranoside(36)、cynanotin E(73)對MCF-7細(xì)胞表現(xiàn)出更好的抑制作用(IC50值為16.1～25.6 μmol/L)。Dong等[40]用MTT法檢測caudatin 3-O-β-D- cymaropyranoside(35)、caudatin 3-O-β-D-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranoside(37)、青陽參苷乙(26)、青陽參苷甲(1)對人體癌細(xì)胞MDA-MB-231、EC-109、K562、HCT-116、A427的細(xì)胞毒性，其中caudatin 3-O-β-D-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranoside(37)對HCT-116細(xì)胞的IC50值為19.41 μmol/L，青陽參苷丙(25)對這5種癌細(xì)胞的IC50值為19～26 μmol/L，當(dāng)濃度提高至100 μmol/L時，caudatin 3-O-β-D-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D- cymaropyranoside(37)對正常Hs27細(xì)胞無細(xì)胞毒性，當(dāng)濃度為75.68 μmol/L時，青陽參苷乙(26)能使正常Hs27細(xì)胞凋亡，當(dāng)濃度為25 μmol/L時，caudatin 3-O-β-D-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranoside (37)使HCT-116細(xì)胞分裂停止在G1期，當(dāng)濃度為1.25～5 μmol/L時，caudatin 3-O-β-D-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranoside (37)可誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡。Zhang等[16]從中分離得到26個甾體皂苷，用HepG2、Hela、U251細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞毒性篩選，其中24個化合物的IC50值小于100 μmol/L，10個化合物的IC50值小于50 μmol/L。

2.5 抗艾滋病和抗菌 Tao等[42]將青陽參根水取提物用吡啶-氯磺酸處理后，得到葡聚糖硫酸酯化合物(PS20)作為殺菌劑，并對人類免疫缺陷病毒(HIV)和單純皰疹病毒(HSV)的抑制作用與安全性進(jìn)行評價，結(jié)果表明，PS20有抑制HIV和HSV的作用，但對上皮細(xì)胞和陰道乳酸菌有低毒性。陶劍等[43]研究葡聚糖硫酸酯體外抗艾滋病毒活性，結(jié)果顯示，青陽參葡聚糖硫酸酯抗HIV-1IIIB，HIV-1Ada-M、HIV-1Bal的IC50值分別為0.26、0.46、0.90 μmol/L，并作用于HIV感染細(xì)胞的早期階段，其可能是通過與病毒的囊膜蛋白的相互作用而發(fā)揮抗病毒活性。趙益斌[5]研究發(fā)現(xiàn)，1,1`-[過氧雙(4-甲氧基-3,1-亞苯基)]雙(乙-1-酮)(148)有抗真菌活性。

2.6 凝乳與水解活性 Luo等[44]從青陽參干燥葉片檸檬酸-磷酸鹽提取液中分離純化得到2種蛋白酶，分別為QA和QC，研究其pH值和溫度對凝乳活性和蛋白水解活性的影響，發(fā)現(xiàn)QA和QC能完全水解β-酪蛋白和κ-酪蛋白，部分水解α-酪蛋白，在pH值5.5～7.5之間表現(xiàn)出良好的pH穩(wěn)定性，在50～70 ℃有良好的熱穩(wěn)定性。

2.7 抗衰老 Yang等[45]以秀麗隱桿線蟲為模型，研究青陽參苷乙(26)對壽命的影響，結(jié)果表明，其可適當(dāng)延長秀麗隱桿線蟲的壽命，延緩與年齡增長相關(guān)的退行性變化，提升高溫抗壓能力，還通過5個藥物濃度(500、200、50、20、5 μmol/L)的復(fù)篩實(shí)驗(yàn)，確立了延長壽命活性的最佳藥物濃度為50 μmol/L，此藥物濃度可以延長秀麗隱桿線蟲壽命達(dá)11.3%。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，青陽參苷乙(26)通過IIS激活轉(zhuǎn)錄因子DAF-16/FOXO，而且這一過程與SKN-1無關(guān)，不能進(jìn)一步延長胰島素/IGF-1受體部分功能缺失突變體daf-2的壽命，此外，抗衰老作用還依賴于SIR-2.1和CLK-1。

2.8 抗阿爾茨海默病 Yang等[46]采用秀麗隱桿線蟲模型研究青陽參苷乙(26)對阿爾茨海默病的影響，研究發(fā)現(xiàn)，青陽參苷乙(26)可提高熱抗逆性，延遲身體麻痹，升高趨化反應(yīng)，并通過降低Aβ的mRNA表達(dá)減少Aβ沉積物。遺傳學(xué)分析顯示，青陽參苷乙(26)的作用機(jī)制是通過上調(diào)hsf-1和它的靶基因hsp-12.6、hsp-16.2、hsp-70表達(dá)而升高HSF活性，并通過部分激活DAF-16來升高SOD-3表達(dá)，而SKN-1在青陽參苷乙(26)介導(dǎo)的抗Aβ毒性保護(hù)中是非必需的。

2.9 抗抑郁和抗應(yīng)激障礙 楊慶雄等[47]發(fā)現(xiàn)了青陽參的抗抑郁作用，C21甾體皂苷可用于制備治療或改善具有抑郁狀態(tài)的精神障礙性疾病藥物，特別是治療或預(yù)防抑郁癥藥物，結(jié)果表明，其毒副作用小，療效獨(dú)特，具有良好的抗抑郁作用。張萌等[48]對青陽參總苷的抗抑郁活性進(jìn)行評價，研究發(fā)現(xiàn)，青陽參具有逆轉(zhuǎn)快感缺失、抑制驚跳反射升高的作用，對社會挫敗應(yīng)激大鼠抑郁行為有調(diào)節(jié)作用。于彩媛等[49]研究青陽參總苷對大鼠腦內(nèi)單胺神經(jīng)遞質(zhì)濃度的影響，結(jié)果顯示，青陽參能夠增加慢性不可預(yù)知輕度應(yīng)激(CUMS)大鼠腦內(nèi)額葉皮層NE、5-HT水平，這可能是其發(fā)揮抗抑郁活性的作用機(jī)制之一。楊慶雄[50]、高博[51]等發(fā)現(xiàn)青陽參總苷在預(yù)防和治療慢性應(yīng)激障礙和創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙(PTSD)方面的作用，采用急性應(yīng)激和慢性應(yīng)激2大類動物模型，初步評價青陽參抗應(yīng)激效應(yīng)，結(jié)果表明，其對急性應(yīng)激、社會挫敗強(qiáng)烈慢性應(yīng)激和慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激誘發(fā)的精神障礙都有較好的調(diào)節(jié)作用。張萌[52]建立條件化強(qiáng)電擊模型，探索青陽參干預(yù)PTSD行為的作用機(jī)制，研究發(fā)現(xiàn)，青陽參總苷主要通過介導(dǎo)CeA腦區(qū)GABAAR γ2亞型表達(dá)，提高GABA系統(tǒng)抑制功能，從而治療強(qiáng)應(yīng)激誘發(fā)的驚反射升高和恐懼行為。

2.10 其他 臨床上，青陽參還用于治療子宮肌瘤，補(bǔ)氣扶正，益氣攝血，化痰祛瘀。與其他藥材配伍運(yùn)用，可治療腰肌勞損、跌打損傷腰痛、濕熱帶下腰痛、淋癥腰痛，以及肺結(jié)核、子宮內(nèi)膜結(jié)核[2]。

3 結(jié)語

青陽參是我國特有的藥材，具有悠久的民族藥用歷史。青陽參化學(xué)成分多樣，C21甾體皂苷是其特征性成分也是主要活性成分，苷元部分結(jié)構(gòu)變化集中于C12或C20位上取代基的差別，基本分子骨架相同。組成糖鏈的去氧糖、葡萄糖等單糖種類和數(shù)量多樣，導(dǎo)致糖鏈結(jié)構(gòu)變化復(fù)雜。近年來，在青陽參中已有大量C21甾體皂苷類單體化合物被分離得到，但各組分之間差異很小，很難發(fā)現(xiàn)含量較高的主成分。在生物活性方面依然停留在細(xì)胞層面，大多單體化合物藥理作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究確認(rèn)。本文對青陽參的化學(xué)成分及其藥理作用進(jìn)行綜述，以期為青陽參中的C21甾體皂苷類化合物結(jié)構(gòu)修飾及其構(gòu)效關(guān)系進(jìn)行深入的研究提供依據(jù)，并為其在抗衰老、抗阿爾茨海默病、抗抑郁等方面的研究提供參考。隨著分離技術(shù)不斷提高及藥理研究的繼續(xù)深入，無論從經(jīng)典化合物的活性再評價，還是新化合物的發(fā)現(xiàn)及活性探討等方面，青陽參都值得進(jìn)一步的開發(fā)和研究。