李 倩，王朝杰

(1 浙江銳翱檢測技術(shù)服務(wù)有限公司，浙江 杭州 311300；2 臨安區(qū)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測中心，浙江 杭州 311300)

我國蔬菜生產(chǎn)中廣泛使用多種農(nóng)藥，過量的農(nóng)藥殘留在蔬菜和水果中，隨著我們的飲食進(jìn)入到人體中，導(dǎo)致人體腹瀉性疾病等，對人體健康極為不利[1-2]。由于使用的農(nóng)藥種類繁多，單獨(dú)檢測耗費(fèi)大量的人力物力，效率低。因此，建立一種適用于多種基質(zhì)，能夠同時(shí)檢測多種農(nóng)藥殘留的方法非常必要。傳統(tǒng)的氣相色譜法(GC)、液相色譜法(HPLC)、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法 (GC-MS)等檢測方法，檢測的精準(zhǔn)性和全面性有限、覆蓋的農(nóng)藥數(shù)量較少，且操作過程繁瑣、有機(jī)溶劑使用量較大，成本較高[3-6]，且很多農(nóng)藥不適合用氣相色譜分析。本試驗(yàn)參考國家標(biāo)準(zhǔn)《水果和蔬菜中450種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》(GB/T20769-2008)上的檢測方法并進(jìn)行了優(yōu)化，根據(jù)國內(nèi)外殘留限量的要求，建立了蔬菜中28種農(nóng)藥的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜 (LC-MS)同時(shí)檢測的高通量方法，實(shí)現(xiàn)了短時(shí)間內(nèi)批量樣品的多種類農(nóng)殘準(zhǔn)確定性定量檢測。

1 實(shí) 驗(yàn)

1.1 儀器與試劑

1.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

LA-259安捷倫三重串聯(lián)四級桿液質(zhì)聯(lián)用儀；Heating Bath B-100旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；KQ5200DE超聲波清洗機(jī)；HR2168制樣攪拌機(jī)；HC-3108離心機(jī)；布奇勻漿機(jī)；?？迫詣?dòng)氮吹儀；水浴鍋。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

甲醇(色譜純)、乙腈(色譜純)、氯化鈉(分析純)、超純水、甲苯(優(yōu)級純)、無水硫酸鈉(分析純)、農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品有證標(biāo)準(zhǔn)溶液：100 μg/mL，1 mL；基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液是用空白樣品基質(zhì)溶液配成不同濃度的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，用于做標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.1.3 耗材

微孔過濾膜(尼龍)、安譜氨基固相萃取柱。

1.2 樣品預(yù)處理

1.2.1 試樣提取

稱取20 g試樣于80 mL離心管中，加入40 mL乙腈，用勻漿機(jī)15000 r/min勻漿提取1 min，加入5 g氯化鈉，再勻漿提取1 min，在3800 r/min 離心5 min，取上清液20 mL (相當(dāng)于10 g試樣量)，在40 ℃水浴中旋轉(zhuǎn)濃縮至約1 mL，待凈化。

1.2.2 凈化

在氨基柱中加入約 2 cm 高無水硫酸鈉，并放入下接雞心瓶的固定架上。加樣前先用4 mL乙腈+甲苯(3+1)預(yù)洗柱，當(dāng)液面到達(dá)硫酸鈉的頂部時(shí)，迅速將樣品濃縮液轉(zhuǎn)移至凈化柱上，并更換新接收瓶接收。再每次用2 mL乙腈+甲苯(3+1) 洗滌三次，并將洗滌液移入柱中。在柱上加上50 mL貯液器，用25 mL乙腈+甲苯(3+1)洗脫農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品，合并于雞心瓶中，并在 40 ℃水浴中旋轉(zhuǎn)濃縮至約0.5 mL。將濃縮液置于氮?dú)獯蹈蓛x上吹干，迅速加入1 mL的乙腈+水(3+2)，混勻，經(jīng)0. 2 μm濾膜過濾后進(jìn)行液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定。

1.3 色譜條件的選擇

(1)色譜柱：ZORBAX SB-C18，3.5 μm，100 mm×2.1 mm(內(nèi)徑)；

(2)流動(dòng)相及梯度洗脫條件見表1 和表2。

表1 正離子掃描色譜條件流動(dòng)相及梯度洗脫條件

表2 負(fù)離子掃描色譜條件流動(dòng)相及梯度洗脫條件

柱溫：40 ℃；流速：200 μL/min；進(jìn)樣量：10 μL；離子源：AJS ESI；掃描方式：正離子掃描；檢測方式：MRM；電噴霧電壓：4000 V；流速：10 L/min；干燥氣溫度：250 ℃；鞘氣溫度：250 ℃；鞘氣流速：11 L/min。

2 結(jié)果與討論

2.1 待測農(nóng)藥的質(zhì)譜圖及相關(guān)參數(shù)

經(jīng)過反復(fù)試驗(yàn)并參考有關(guān)文獻(xiàn)，得到28種農(nóng)藥的最佳質(zhì)譜條件，結(jié)果詳見圖1～圖3，表3～表5。

圖1 A組19種農(nóng)藥混標(biāo)的總離子流圖

表3 A組19種農(nóng)藥混標(biāo)的質(zhì)譜參數(shù)

圖2 B組7種農(nóng)藥混標(biāo)的總離子流圖

圖3 C組2種農(nóng)藥混標(biāo)的總離子流圖

表5 C組2種農(nóng)藥混標(biāo)的質(zhì)譜參數(shù)

2.2 各農(nóng)殘組分的線性方程與檢出限

在進(jìn)行液相色譜-質(zhì)譜檢測農(nóng)藥殘留量方法的線性關(guān)系、檢出限實(shí)驗(yàn)中，由于存在基質(zhì)效應(yīng)，會(huì)影響化合物定量分析的準(zhǔn)確度及重現(xiàn)性，故采用空白基質(zhì)，配置不同濃度的混合標(biāo)液進(jìn)行測定，以各農(nóng)藥的峰面積對質(zhì)量濃度繪制工作曲線，得到線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)。以3倍的信噪比(S/N)對應(yīng)的空白樣品添加的質(zhì)量濃度作為方法的檢出限(LOD)，結(jié)果見表6。

表6 各農(nóng)殘組分的線性方程與檢出限結(jié)果表

2.3 方法的精密度與回收率

本實(shí)驗(yàn)室對未檢出的陰性樣品橙子進(jìn)行三個(gè)濃度的加標(biāo)實(shí)驗(yàn)，每個(gè)濃度6次平行，模擬加標(biāo)回收試驗(yàn)，測定結(jié)果見表7。

表7 各農(nóng)殘組分的精密度和回收率結(jié)果

續(xù)表4

如表7所示，在橙子陰性樣品中添加三個(gè)濃度的農(nóng)藥進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，測得加標(biāo)回收率在60%～120%之間，實(shí)測數(shù)據(jù)的最大相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD<15%。結(jié)果表明此方法具有良好的精密度和準(zhǔn)確度，能夠滿足農(nóng)藥殘留檢測的要求[7]。

3 結(jié) 論

農(nóng)藥具有除草、防治病蟲害、提高作物產(chǎn)量等作用，但是農(nóng)藥的不規(guī)范使用，會(huì)使農(nóng)產(chǎn)品存在農(nóng)藥殘留超標(biāo)的風(fēng)險(xiǎn)，對人體和環(huán)境造成危害[8]。本文參考國家標(biāo)準(zhǔn)《水果和蔬菜中450種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》[9](GB/T20769-2008)上的檢測方法并進(jìn)行了優(yōu)化，根據(jù)國內(nèi)外殘留限量的要求，建立了蔬菜中28種農(nóng)藥的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜 (LC-MS)同時(shí)檢測的方法，能夠完成短時(shí)間內(nèi)批量樣品的多種類農(nóng)殘準(zhǔn)確定性定量檢測。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明該方法分離度強(qiáng)、靈敏度高且選擇性好，可以對復(fù)雜基質(zhì)中的痕量物質(zhì)進(jìn)行檢測分析，對未來農(nóng)藥殘留檢測分析中具有重要的作用。