黃 巖，邊玉婷，王明麗，王 芳，劉元元

我國兒童齲病嚴(yán)重，若未得到及時(shí)診治，嚴(yán)重影響兒童口腔及全身健康[1]。目前已證實(shí)，口腔微生態(tài)pH偏酸性在兒童齲病發(fā)生進(jìn)展中起主要促進(jìn)作用。碳酸酐酶Ⅵ(CA-Ⅵ)在唾液中廣泛存在，系細(xì)胞分泌型碳酸酐酶，具有調(diào)控細(xì)胞凋亡、維持pH平衡等作用，對(duì)維持口腔生理功能起重要作用[2]。據(jù)既往研究，CA-Ⅵ基因多態(tài)性可影響口腔微生物群組成和齲齒風(fēng)險(xiǎn)[3]。基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)是降解變性膠原纖維的金屬蛋白酶，其含量升高是影響齲齒發(fā)生的重要因素[4]。CC趨化因子配體28(CCL28)對(duì)致齲菌白色念珠菌具有抗菌活性，通過調(diào)節(jié)細(xì)菌影響口腔微生態(tài)平衡[5]。而目前關(guān)于唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28與口腔微生態(tài)pH平衡的關(guān)系及臨床意義報(bào)道較少，本文對(duì)此展開研究。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年12月—2021年8月我院收治的287例兒童口腔健康檢查者，其中34例有齲病(齲病組)，253例無齲病(無齲病組)。納入標(biāo)準(zhǔn)：兒童齲病及齲源性牙髓炎診斷參考《齲病學(xué)》；配合本研究；入組前6個(gè)月無抗齲治療史；年齡3～15歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：其他原因引起的牙髓炎者；不能配合完成牙科檢查者；未能成功收集唾液標(biāo)本者；合并自身免疫性疾病者。

1.2研究方法

1.2.1齲病嚴(yán)重程度評(píng)估：齲壞程度[6]：淺齲：齲壞局限于釉質(zhì)，無自覺癥狀，探診也無反應(yīng)；中齲：齲壞達(dá)牙本質(zhì)淺層，有齲洞，可有探痛，對(duì)冷、食物嵌入、酸、熱等刺激出現(xiàn)疼痛反應(yīng)，刺激源去除后疼痛立即消失；深齲：表現(xiàn)為大而深的齲洞，或入口小而深層有較為廣泛的破壞，齲壞已達(dá)牙本質(zhì)深層，對(duì)外界刺激反應(yīng)較中齲重，刺激源去除后疼痛立即消失。齲失補(bǔ)指數(shù)(DMFT)[6]：<3為低齲，3～5為中齲，≥5為高齲。

1.2.2唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28、pH值檢測(cè)：于入院時(shí)清晨空腹?fàn)顟B(tài)下采集受檢者唾液標(biāo)本2 ml置入EP管中，離心10 min，取上清應(yīng)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28水平，采用pH計(jì)標(biāo)定的pH試紙檢測(cè)唾液pH值。

1.3觀察指標(biāo) 比較2組唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28、pH值；分析唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28與pH值的相關(guān)性；分析兒童齲病易感性的影響因素；分析唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28與齲病病情進(jìn)展的關(guān)系；分析唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28單一及聯(lián)合預(yù)測(cè)兒童齲病易感性的價(jià)值。

2 結(jié)果

2.1唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28、pH值比較 齲病組唾液CA-Ⅵ、pH值低于無齲病組，MMP-2、CCL28高于無齲病組(P<0.01)。見表1。

表1 2組行口腔健康檢查兒童唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28、pH值比較

2.2唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28與pH值的相關(guān)性 唾液CA-Ⅵ與pH值呈正相關(guān)(r=0.859，P<0.01)，MMP-2、CCL28與pH值呈負(fù)相關(guān)(r=-0.782、-0.707，P<0.01)。

2.3兒童齲病易感性影響因素分析 唾液CA-Ⅵ是兒童齲病易感性保護(hù)因素，MMP-2、CCL28是兒童齲病易感性危險(xiǎn)因素(P<0.01)。見表2。

表2 兒童齲病易感性多因素Logistic回歸分析

2.4唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28與齲病病情進(jìn)展的關(guān)系 齲病組淺齲0例，中齲8例，深齲26例；低齲0例，中齲15例，高齲19例。相關(guān)性分析顯示，唾液CA-Ⅵ與齲壞程度、DMFT情況呈負(fù)相關(guān)(r=-0.722、-0.763，P<0.01)；MMP-2、CCL28與齲壞程度呈正相關(guān)(r=0.700、0.766，P<0.01)，與DMFT情況呈正相關(guān)(r=0.723、0.720，P<0.01)。

2.5唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28單一及聯(lián)合預(yù)測(cè)兒童齲病易感性的ROC曲線分析 唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28預(yù)測(cè)兒童齲病易感性的曲線下面積(AUC)分別為0.763、0.738、0.794，三者聯(lián)合預(yù)測(cè)的AUC為0.894。

3 討論

CA-Ⅵ可催化生物體內(nèi)二氧化碳和碳酸氫根離子的相互轉(zhuǎn)化，維持口腔pH平衡。本研究發(fā)現(xiàn)，齲病組唾液CA-Ⅵ低于無齲病組，提示唾液CA-Ⅵ與兒童齲病易感性有關(guān)。唾液pH值與兒童齲病發(fā)生密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，唾液CA-Ⅵ與pH值呈正相關(guān)，唾液CA-Ⅵ越低，pH值越低。唾液CA-Ⅵ可調(diào)節(jié)酸堿平衡，維持牙齒礦物質(zhì)過飽和，降低釉質(zhì)溶解速度，保護(hù)牙齒，故唾液CA-Ⅵ降低會(huì)增加兒童齲病風(fēng)險(xiǎn)[7]。本研究還顯示，唾液CA-Ⅵ與齲壞程度、DMFT情況呈負(fù)相關(guān)，表明唾液CA-Ⅵ越低患兒齲病越嚴(yán)重。入院時(shí)唾液CA-Ⅵ預(yù)測(cè)齲病易感性的AUC為0.763，呈現(xiàn)出一定的預(yù)測(cè)價(jià)值。

MMP-2生理狀態(tài)下，以無活性酶原形式存在于牙本質(zhì)中，唾液中含量較少。本研究顯示，齲病患兒唾液MMP-2高于無齲病者，提示MMP-2與兒童齲病易感性有關(guān)，多因素Logistic回歸分析證實(shí)其是兒童齲病易感性的危險(xiǎn)因素。BARBOSA-RIBEIRO等[8]報(bào)道，MMP-2較高者具有更高水平的致病菌，從而影響牙周健康。牙齒齲壞脫礦后，牙本質(zhì)暴露在酸性環(huán)境中，刺激MMP-2合成與分泌，對(duì)有機(jī)膠原基質(zhì)起到降解作用，促進(jìn)齲病進(jìn)展[9]。本研究相關(guān)性分析顯示，兒童齲病齲壞程度與DMFT情況越嚴(yán)重，MMP-2越高。MMP-2升高時(shí)，口腔有害菌群處于生長優(yōu)勢(shì)，有益菌生長受抑制，口腔微生態(tài)環(huán)境破壞，pH值降低，可通過影響嬰幼兒口腔微生物菌群參與齲病的發(fā)生與進(jìn)展[10]。本研究唾液MMP-2預(yù)測(cè)兒童齲病易感性的AUC為0.738，提示單純依賴MMP-2預(yù)測(cè)價(jià)值有限。

CCL28是一種趨化因子，可誘導(dǎo)細(xì)胞膜通透性改變及穿孔的形成。本研究顯示，齲病組唾液CCL28高于無齲病組，還是兒童齲病易感性的危險(xiǎn)因素，且兒童齲病越嚴(yán)重CCL28水平越高。JIANG等[11]報(bào)道，CCL28能在體外強(qiáng)烈抑制生活在生物膜中的變形鏈球菌，將重組CCL28質(zhì)粒遞送至大鼠腮腺誘導(dǎo)唾液中CCL28水平升高，顯著減少大鼠牙菌斑中變形鏈球菌生長，提示CCL28具有預(yù)防齲齒作用。既往報(bào)道，CCL28具有雙向功能，除以上作用外，還可介導(dǎo)免疫球蛋白分泌嗜酸粒細(xì)胞等，并能趨化這些細(xì)胞至病變部位，使黏膜表面發(fā)生疏水性改變、牙體與黏膜表面聚集炎性介質(zhì)，誘導(dǎo)菌斑形成[12]。本研究CCL28預(yù)測(cè)兒童齲病易感性的AUC為0.794，在單一指標(biāo)中最高，但仍低于唾液CA-Ⅵ、MMP-2聯(lián)合CCL28預(yù)測(cè)的AUC。

綜上，唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28與口腔微生態(tài)pH平衡有關(guān)，CA-Ⅵ降低及MMP-2、CCL28升高引起的口腔酸性環(huán)境為兒童齲病易感性和病情進(jìn)展提供了病理基礎(chǔ)，能為防治兒童齲病提供新思路。