王安琪 田莉娟 陳曉鵬 張靜 鄒立偉 楊凌

摘要 目的：以自主研發(fā)的二肽基肽酶-Ⅳ（DPP-Ⅳ）特異性雙光子熒光探針甘氨酰-脯氨酰-N-丁基-4-氨基-1，8-萘二甲酰亞胺（GP-BAN）為底物，人血漿為DPP-Ⅳ酶原，評(píng)價(jià)方劑清肺排毒湯及處方中中藥材對(duì)DPP-Ⅳ的抑制作用，并進(jìn)一步評(píng)價(jià)具有DPP-Ⅳ抑制活性中藥材的成分單體化合物。方法：以建立的DPP-Ⅳ抑制劑篩選體系，分別將清肺排毒湯湯劑的噴干粉水溶液、中藥顆粒水溶液、中藥單體化合物與DPP-Ⅳ特異性探針GP-BAN在37 ℃條件下共同孵育，通過(guò)測(cè)定探針底物代謝產(chǎn)物BAN的熒光值來(lái)判斷上述物質(zhì)對(duì)DPP-Ⅳ的抑制程度。結(jié)果：清肺排毒湯具有較弱的DPP-Ⅳ活性的抑制作用，而其組分中藥水溶液濃度為1 000 μg/mL時(shí)，麻黃、枳實(shí)、廣藿香顆粒水溶液對(duì)DPP-Ⅳ的活性明顯的抑制作用，酶殘余活性分別為40.00%、61.05%、62.04%。橙皮素、蘆丁、芹菜素、槲皮素、山柰酚、去甲基麻黃堿、川陳皮素對(duì)DPP-Ⅳ有一定的抑制作用，其中最強(qiáng)的3種單體成分槲皮素、山柰酚及芹菜素對(duì)DPP-Ⅳ的IC50值分別為（75.39±6.17）μmol/L、（9.16±0.69）μmol/L和（7.91±1.09）μmol/L。結(jié)論：清肺排毒湯對(duì)DPP-Ⅳ的有一定的抑制作用，存在抑制DPP-Ⅳ的成分群和單體化合物，這些發(fā)現(xiàn)為“清肺排毒湯”對(duì)感染新型冠狀病毒肺炎（COVID-19）患者，尤其是COVID-19合并T2DM的患者的治療提供了參考。

關(guān)鍵詞 二肽基肽酶-Ⅳ;抑制劑;2型糖尿病;清肺排毒湯;新型冠狀病毒肺炎;芹菜素;槲皮素;山柰酚

Inhibitory Effect of Qingfei Paidu Decoction on DPP-Ⅳ

WANG Anqi1，TIAN Lijuan1，CHEN Xiaopeng2，ZHANG Jing1，ZOU Liwei1，YANG Ling1

（1 Institute of Interdisciplinary Integrative Medicine Research，Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai 201203，China; 2 Department of General Surgery，Shangrao Municipal Hospital，Shangrao 334000，China）

Abstract Objective：With the self-developed two-photon fluorescent probe glycyl-prolyl-N-butyl-4-amino-1，8-naphthalimide（GP-BAN） for dipeptidyl peptidase-Ⅳ（DPP-Ⅳ） detection with high specificity and sensitivity as the substrate and human plasma as the source of DPP-Ⅳ，this study aims to evaluate the inhibitory effect of Qingfei Paidu Decoction and the medicinals in the prescription on DPP-Ⅳ，and to further explore the effective compounds in the medicinals.Methods：With the established DPP-Ⅳ inhibitor screening system，the solution of Qingfei Paidu Decoction powder，the aqueous solution of the Chinese medicinal granules，and the effective compounds in the medicinals were respectively incubated with GP-BAN at 37 ℃.The inhibition on DPP-Ⅳ was evaluated based on the fluorescence value of the probe metabolite BAN.Results：Qingfei Paidu Decoction showed mild inhibitory effect on DPP-Ⅳ.The aqueous solution of Herba Ephedrae，F(xiàn)ructus Aurantii Immaturus，and Herba Pogostemonis granules at 1 000 μg/mL had obvious inhibitory effect on DPP-Ⅳ，and the residual activity of the enzyme was 40.00%，61.05%，and 62.04%，separately.Hesperetin，rutin，apigenin，quercetin，kaempferol，norephedrine，and nobiletin significantly suppressed DPP-Ⅳ，particularly quercetin，kaempferol，and apigenin whose half maximal inhibitory concentration（IC50） on DPP-Ⅳ was（75.39±6.17） μmol/L，（9.16±0.69） μmol/L，and（8.29±0.93） μmol/L，respectively.Conclusion：Qingfei Paidu Decoction inhibits DPP-Ⅳ，and the medicinals in the prescription and the compounds in the medicinals also show inhibitory effect on DPP-Ⅳ.These findings can serve as a reference for the treatment of coronavirus disease 2019（COVID-19） with Qingfei Paidu Decoction，especially COVID-19 complicated with type 2 diabetes mellitus（T2DM）.C8E55514-531D-42F5-A73B-86BE2AFDB859

Keywords DPP-Ⅳ; Inhibitor; Type 2 diabetes mellitus; Qingfei Paidu Decoction; COVID-19; Apigenin; Quercetin; Kaempferol

中圖分類(lèi)號(hào)：R289.5;R284文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2022.08.003

二肽基肽酶-Ⅳ（Dipeptidyl Peptidase-Ⅳ，DPP-Ⅳ）是哺乳動(dòng)物體內(nèi)分布的一種重要的絲氨酸水解酶[1]，其參與體內(nèi)多種生物活性多肽如生長(zhǎng)因子、趨化因子、神經(jīng)肽等的水解進(jìn)而導(dǎo)致其部分或完全失活。此外，DPP-Ⅳ還參與了機(jī)體的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、免疫調(diào)節(jié)、細(xì)胞移行、細(xì)胞黏附和細(xì)胞凋亡等過(guò)程，其表達(dá)或功能的異常與腫瘤等多種疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[2]。DPP-Ⅳ可快速水解胰高血糖素樣肽-1（Glucagon-like Peptide，GLP-1）進(jìn)而影響胰高血糖素的合成與分泌，在糖代謝過(guò)程中扮演重要角色，被認(rèn)為是2型糖尿病（Type 2 Diabetes Mellitus，T2DM）治療的關(guān)鍵靶點(diǎn)[3]。DPP-Ⅳ遍布全身，在免疫炎癥反應(yīng)中起著重要作用，但其具體作用僅部分被了解。

當(dāng)前新型冠狀病毒肺炎（Corona Virus Disease 2019，COVID-19）危機(jī)中，T2DM患者被感染風(fēng)險(xiǎn)加大。此次疫情相關(guān)研究數(shù)據(jù)表明，T2DM患者的病死率、重癥監(jiān)護(hù)病房的住院率更高[2]。并且COVID-19、嚴(yán)重急性呼吸綜合征（Severe Acute Respiratory Syndrome，SARS）和中東呼吸綜合征（Middle East Respiratory Syndrome，MERS）3種冠狀病毒感染在流行病學(xué)、生物學(xué)特征方面具有較高的相似性，臨床表現(xiàn)主要以發(fā)熱和呼吸系統(tǒng)癥狀為主。中醫(yī)認(rèn)為COVID-19、SARS和MERS均屬于“疫”病范疇，其中醫(yī)名可為“肺疫”。2002年SARS爆發(fā)時(shí)，中醫(yī)曾經(jīng)發(fā)揮了重要的作用。據(jù)研究表明，COVID-19基因序列與SARS相似性約為79%，與MERS相似性約為50%[4]。SARS和MERS的研究表明，阻斷DPP-Ⅳ活性，可以減輕炎癥反應(yīng)，進(jìn)而可以改善對(duì)病毒的免疫炎癥反應(yīng)[2，5]。研究人員利用結(jié)合基于晶體結(jié)構(gòu)的人類(lèi)-病毒相互作用預(yù)測(cè)和蛋白對(duì)接（Protein Docking）的生物信息學(xué)方法揭示了人DPP-Ⅳ與SARS-CoV-2 S蛋白（以下簡(jiǎn)稱SARS-CoV-2-S）的受體結(jié)合域（Receptor Binding Domain，RBD）有較高的親和力。近期T2DM與COVID-19相互作用的研究表明，人體對(duì)SARS-CoV-2的炎癥過(guò)度反應(yīng)，可能是由DPP-Ⅳ介導(dǎo)的[5-6]。DPP-Ⅳ的激活導(dǎo)致了炎癥介質(zhì)的過(guò)表達(dá)，從而加劇了患者的炎癥反應(yīng)。這種潛在利用DPP-Ⅳ作為SARS-CoV-2的結(jié)合靶點(diǎn)[6]，以及DPP-Ⅳ活性在炎癥過(guò)度反應(yīng)中的作用，可能會(huì)對(duì)SARS-CoV-2病毒的發(fā)病機(jī)制提供新的見(jiàn)解，并有助于制定應(yīng)對(duì)COVID-19的治療新策略。根據(jù)現(xiàn)有研究，嚴(yán)格控制T2DM患者的血糖可能有助于降低COVID-19疾病的嚴(yán)重程度（如果他們感染了病毒感染）[7]。

2020年2月7日國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)和國(guó)家中醫(yī)藥管理局推薦在中西醫(yī)結(jié)合救治COVID-19中使用通用處方——“清肺排毒湯”。清肺排毒湯來(lái)源于《傷寒雜病論》，是張仲景相關(guān)經(jīng)方的融合創(chuàng)新運(yùn)用，組方嚴(yán)謹(jǐn)，效力顯著，可看成麻杏石甘湯、五苓散、射干麻黃湯、小柴胡湯4個(gè)經(jīng)方組成，還隱有麻黃湯、小青龍加石膏湯、苓桂術(shù)甘湯、越婢加半夏湯、枳術(shù)湯等經(jīng)方。其中麻杏石甘湯、五苓散、小柴胡湯、麻黃湯、苓桂術(shù)甘湯、越婢加半夏湯等經(jīng)方[8]。其中麻杏石甘湯、五苓散、小柴胡湯、麻黃湯、苓桂術(shù)甘湯出自《傷寒論》，余方出自《金匱要略》，成為一個(gè)新的方劑。由于臨床療效顯著，該方成為第6版、第7版COVID-19國(guó)家診療方案的通用處方。本研究旨在探討清肺排毒湯對(duì)DPP-Ⅳ的抑制作用，發(fā)現(xiàn)其抑制DPP-Ⅳ的成分群或單體化合物，為“清肺排毒湯”對(duì)感染COVID-19患者，尤其是COVID-19合并T2DM的患者的治療提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥物

中藥材：麻黃（Herba Ephedrae）、炙甘草（Radix Glycyrrhizae Preparata）、杏仁（Semen Armeniacae Amarum）、生石膏（Gypsum Fibrosum）、桂枝（Ramulus Cinnamomi）、澤瀉（Rhizoma Alismatis）、豬苓（Polyporus）、白術(shù)（Rhizoma Atractylodis Macrocephalae）、茯苓（Poria）、柴胡（Radix Bupleuri）、黃芩（Radix Scutellariae）、姜半夏（Rhizoma Pinelliae）、生姜（Rhizoma Zingiberis Recens）、紫菀（Radix Asteris）、款冬花（Flos Farfarae）、射干（Rhizoma Belamcandae）、細(xì)辛（Herba Asari）、山藥（Rhizoma Dioscoreae）、枳實(shí)（Fructus Aurantti Immaturus）、陳皮（Peericarpium Citri Reticulatae）、藿香（Herba Pogostemonis）購(gòu)自于江陰天江藥業(yè)有限公司，清肺排毒湯噴干粉（JZT-QFPDT-0318-PG-0321）購(gòu)自于九州通醫(yī)藥集團(tuán)股份有限公司。

中藥活性單體：共計(jì)16種中藥單體，其中左旋去甲基麻黃堿（L-Norephedrine）、右旋去甲基偽麻黃堿（D-Norpseudoephedrine）、蘆?。≧utin）由中國(guó)科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所提供;芹菜素（Apigenin，批號(hào)：P1482656）、阿魏酸（Ferulic Acid，批號(hào)：P1539679）、百秋李醇（Patchouli alcohol，批號(hào)：P1768119）、廣藿香酮（Pogostone，批號(hào)：P1768118）、甜葉懸鉤子苷（Rubusoside，批號(hào)：P1768040）、毛蕊花糖苷（Verbascoside，批號(hào)：P1768327）、桂皮醛（trans-Cinnamaldehyde，批號(hào)：P1586089）、購(gòu)自于上海泰坦科技股份有限公司，純度>98%，新橙皮苷（Neohesperidin，批號(hào)：140305）、橙皮素（Hesperetin，批號(hào)：130816）、川陳皮素（Nobiletin，批號(hào)：16060703）、肉桂酸（Cinnamic Acid，批號(hào)：130924）、槲皮素（Quercetin，批號(hào)：16111201）、購(gòu)自于成都普菲德生物技術(shù)有限公司，山柰酚（Kaempferol，批號(hào)：M0503AS）購(gòu)自于大連美侖生物技術(shù)有限公司。C8E55514-531D-42F5-A73B-86BE2AFDB859

1.1.2 試劑與儀器 色譜級(jí)二甲基亞砜（Dimethyl Sulfoxide，DMSO）（TEDIA公司，美國(guó)）用于溶解所有化合物的儲(chǔ)備溶液，DPP-Ⅳ探針底物GP-BAN由本實(shí)驗(yàn)室合成[9]，使用時(shí)用DMSO稀釋?zhuān)瑑?chǔ)存于4 ℃冰箱。緩沖鹽溶液為pH值為7.4的100 mmol/L磷酸鹽緩沖溶液（Phosphate Buffered Solution，PBS，實(shí)驗(yàn)室配置），用Millipore超純水（Millipore公司，美國(guó)，批號(hào)：Milli-Q Direct 8）制備貯存于4 ℃直至使用;DPP-Ⅳ（10 ng/mL，Sigma-Aldrich，美國(guó)，批號(hào)：D3446）;人血漿[RILD，肝病研究所（上海）有限公司，批號(hào)：HMPLEDTA];西他列?。ò凫`威科技有限公司，批號(hào)：DRE-C16970820）。

電子分析天平（賽多利斯有限公司，德國(guó)，型號(hào)：SQP）、酶標(biāo)儀（上海達(dá)邁生物科技有限公司，型號(hào)：Molecular Devices ID3）、數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲波儀器有限公司，型號(hào)：KQ-800DE）、默克水純化系統(tǒng)（美國(guó)Millipore公司，美國(guó)，型號(hào)：Milli-Q Direct 8）、Thermo-shaker金屬孵育器（杭州奧盛儀器有限公司，型號(hào)：MS-100）及渦旋振蕩儀[大龍興創(chuàng)實(shí)驗(yàn)儀器（北京）股份公司，型號(hào)：MX-S]。

1.2 方法

1.2.1 供試樣品溶液的制備

將藥材顆粒配制成1 mg/mL、10 mg/mL、100 mg/mL的藥材顆粒溶液（超純水配制），貯存于-20 ℃冰箱。16種中藥單體化合物用色譜級(jí)DMSO配置成濃度為100 mmol/L的樣品母液，貯存于-20 ℃冰箱，使用時(shí)稀釋成0.5 mmol/L、5 mmol/L、50 mmol/L。DPP-Ⅳ陽(yáng)性抑制劑西他列汀濃度為50 μmol/L。反應(yīng)體系：2 μL中藥單體化合物溶液/DMSO/西他列?。―MSO溶液配制），194 μL pH值為7.4的PBS溶液，2 μL人血漿，2 μL濃度為10 mmol/L底物GP-BAN（DMSO溶液配制）。

1.2.2 藥材顆粒的初步篩選實(shí)驗(yàn)方法及其檢測(cè)條件

DPP-Ⅳ孵育體系及加入量：人血漿、甘氨酰-脯氨酰-N-丁基-4-氨基-1，8-萘二甲酰亞胺、待測(cè)樣品各2 μL，PBS 194 μL、乙腈200 μL。

DPP-Ⅳ探針底物GP-BAN及其代謝產(chǎn)物的檢測(cè)條件：探針底物GP-BAN熒光檢測(cè)條件為Ex360 nm/Em455 nm;產(chǎn)物BAN熒光檢測(cè)條件為Ex430 nm/Em535 nm。

抑制效應(yīng)通過(guò)不同抑制劑組與對(duì)照組的熒光強(qiáng)度的百分比來(lái)表示，用GraphPad Prism 7.0軟件作圖。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)過(guò)程

在PBS反應(yīng)體系中，基于血漿中的DPP-Ⅳ水解GP-BAN為BAN的機(jī)制，在給定的最大激發(fā)波長(zhǎng)條件下，測(cè)定產(chǎn)物BAN的熒光。具體方法是，在一個(gè)200 μL的反應(yīng)體系中，含有PBS以及適量的人血漿，經(jīng)輕微混合均勻后，先于37 ℃恒溫金屬浴共同孵育5 min。然后添加適量的探針GP-BAN起始反應(yīng)至黑色不透明標(biāo)準(zhǔn)96孔板，在全自動(dòng)熒光酶標(biāo)儀上檢測(cè)孵育BAN的熒光信號(hào)30 min后，設(shè)定激發(fā)波長(zhǎng)430 nm，發(fā)射波長(zhǎng)535 nm，gain為500。此外，同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照組（不加入酶液、用等體積PBS溶液代替），作為本底熒光;陰性對(duì)照組不加入供試樣品、用等體積1%（v/v）DMSO溶液代替，作為酶活性100%對(duì)照。每個(gè)樣品設(shè)置3個(gè)復(fù)孔。

2 結(jié)果

2.1 清肺排毒湯及其21種藥材的DPP-Ⅳ抑制活性評(píng)價(jià)

首先評(píng)價(jià)了清肺排毒湯湯劑的噴干粉水溶液對(duì)DPP-Ⅳ的抑制作用。當(dāng)清肺排毒湯的濃度<100 μg/mL時(shí)，對(duì)DPP-Ⅳ的活性無(wú)明顯抑制作用，當(dāng)濃度為1 000 μg/mL時(shí)，對(duì)DPP-Ⅳ的活性有一定的抑制作用，DPP-Ⅳ的殘余活性為81.64%，說(shuō)明清肺排毒湯中存在DPP-Ⅳ活性的抑制成分。進(jìn)一步評(píng)價(jià)清肺排毒湯的21種成分中藥時(shí)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)成分藥材顆粒水溶液濃度為1 000 μg/mL時(shí)，大部分中藥材顆粒的水溶液對(duì)DPP-Ⅳ沒(méi)有表現(xiàn)出明顯的抑制作用，而麻黃顆粒水溶液、枳實(shí)顆粒水溶液、藿香顆粒水溶液對(duì)DPP-Ⅳ有較好的抑制作用，DPP-Ⅳ的殘余活性分別為40.00%、61.05%、62.04%。見(jiàn)圖1。

2.2 麻黃、枳實(shí)、廣藿香單體化合物成分的DPP-Ⅳ抑制活性評(píng)價(jià)

利用三點(diǎn)法（5 μmol/L，50 μmol/L，500 μmol/L）初步評(píng)價(jià)這16種化合物對(duì)DPP-Ⅳ的抑制能力發(fā)現(xiàn)，右旋去甲基麻黃堿、甜葉懸鉤子苷、百秋李醇、廣藿香酮、新橙皮苷、肉桂酸、毛蕊花糖苷、阿魏酸、桂皮醛單體化合物對(duì)DPP-Ⅳ抑制作用不明顯;而橙皮素、蘆丁、芹菜素、槲皮素、山柰酚、去甲基麻黃堿、川陳皮素對(duì)DPP-Ⅳ表現(xiàn)出一定的抑制作用，在500 μmol/L時(shí)，DPP-Ⅳ的殘余活性<65%;芹菜素、槲皮素、山柰酚對(duì)DPP-Ⅳ的抑制作用較好，在500 μmol/L時(shí)，DPP-Ⅳ的殘余活性<40%。見(jiàn)表1。對(duì)芹菜素、槲皮素、山柰酚進(jìn)一步進(jìn)行了IC50值的測(cè)試，測(cè)得的對(duì)DPP-Ⅳ抑制最強(qiáng)的為芹菜素（IC50=8.29 μmol/L），其次是山柰酚（IC50=9.16 μmol/L），對(duì)DPP-Ⅳ抑制最弱的為槲皮素（IC50=75.39 μmol/L），其中蘆丁、芹菜素、槲皮素、山柰酚及去甲基麻黃堿屬于麻黃的主要活性成分，橙皮素、川陳皮素屬于枳實(shí)的主要活性成分。見(jiàn)圖2和表2。

3 討論

麻黃是我國(guó)中醫(yī)方常用的解表藥，為麻黃科麻黃屬植物草質(zhì)莖，藥理活性廣泛，具有發(fā)汗、平喘、利尿、升高血壓、收縮血管解熱及抗病毒等作用，其主要活性成分是生物堿類(lèi)、黃酮類(lèi)、揮發(fā)油類(lèi)、有機(jī)酚酸類(lèi)、糖類(lèi)及鞣質(zhì)類(lèi)等藥理活性成分[10-12]。據(jù)研究，麻黃草本能使鏈脲佐菌素（Streptozotocin，STZ）所致的萎縮的胰島細(xì)胞恢復(fù)再生，促進(jìn)胰島細(xì)胞分泌胰島素，從而達(dá)到治療糖尿病高血糖的效果，也在COVID-19兒童患者的治療處方中使用[13]。枳實(shí)是一味理氣藥，為蕓香科植物酸橙或甜橙的干燥幼果，具有升壓強(qiáng)心、抗氧化、抗菌、鎮(zhèn)痛、降血糖、降血脂、護(hù)肝、調(diào)節(jié)腸胃運(yùn)動(dòng)、調(diào)節(jié)子宮功能及抗血栓等作用，其主要含有黃酮類(lèi)、生物堿類(lèi)、揮發(fā)油類(lèi)、香豆素類(lèi)等藥理成分[14-15]。中醫(yī)認(rèn)為痰濕證治療是T2DM胰島素抵抗的主要致病因素之一[16]。枳實(shí)從痰濕辨證治療T2DM，消痰祛濕，氣通血運(yùn)，機(jī)體升降出入正常，疾病自愈[16]。據(jù)研究發(fā)現(xiàn)，枳實(shí)提取物對(duì)于糖尿病模型動(dòng)物具有保護(hù)其胰島組織細(xì)胞，降低胰島細(xì)胞損傷等作用[17]。廣藿香是唇形科刺蕊草屬植物，為常用化濕藥，有和中止嘔、發(fā)表解暑的功效，具有較強(qiáng)的肝細(xì)胞保護(hù)活性、降糖活性、調(diào)節(jié)胃腸功能、抗炎、鎮(zhèn)痛、止咳、平喘等作用，其主要含有黃酮類(lèi)、萜類(lèi)、苯丙素類(lèi)、甾體含氮類(lèi)藥理成分[18]。但目前的降糖機(jī)制及起作用的單體成分研究尚不清楚，擬從DPP-Ⅳ的靶點(diǎn)入手看這3種中藥的單體成分是否通過(guò)抑制DPP-Ⅳ而達(dá)到降糖作用。C8E55514-531D-42F5-A73B-86BE2AFDB859

COVID-19屬中醫(yī)概念中“溫疫”范疇，濕氣侵入人體，或從肌膚腠理進(jìn)入，或從眼口鼻進(jìn)入，繼而發(fā)病。該病起病隱匿，病情發(fā)展迅速，具有較強(qiáng)的傳染性[19]。糖尿病與COVID-19是互相加劇的關(guān)系，感染新型冠狀病毒的糖尿病患者或本身沒(méi)有糖尿病病史因感染SARS-CoV-2入院之后接受激素治療致激素性糖尿病的COVID-19患者死亡率更高[20]。經(jīng)過(guò)對(duì)一系列清肺排毒湯方劑中中藥顆粒水溶液的篩選，在500 μmol/L時(shí)，發(fā)現(xiàn)麻黃、枳實(shí)和廣藿香顆粒水溶液對(duì)DPP-Ⅳ有一定的抑制作用。后期擴(kuò)大中藥活性成分篩選范圍，針對(duì)麻黃、枳實(shí)和藿香的單體成分進(jìn)行篩選，發(fā)現(xiàn)橙皮素、蘆丁、芹菜素、槲皮素、山柰酚、去甲基麻黃堿、川陳皮素對(duì)DPP-Ⅳ有一定的抑制作用。槲皮素、山柰酚及芹菜素的IC50值分別為（75.39±6.17）μmol/L、（9.16±0.69）μmol/L和（8.29±0.93）μmol/L?？蛇M(jìn)一步從國(guó)家推行的《新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案》中的三藥三方中開(kāi)發(fā)天然DPP-Ⅳ抑制劑，從而應(yīng)用于COVID-19合并T2DM的患者的治療。

參考文獻(xiàn)

[1]Chen SJ，Jiaang WT.Current advances and therapeutic potential of agents targeting dipeptidyl peptidases-Ⅳ，-Ⅱ，8/9 and fibroblast activation protein[J].Curr Top Med Chem，2011，11（12）：1447-63.

[2]Drucker DJ.Coronavirus Infections and Type 2 Diabetes-Shared Pathways with Therapeutic Implications[J].Endocr Rev，2020，41（3）：bnaa011.

[3]Holst JJ.Implementation of GLP-1 based therapy of type 2 diabetes mellitus using DPP-Ⅳ inhibitors[J].Adv Exp Med Biol，2003，524：263-279.

[4]Li Y，Zhang Z，Yang L，et al.The MERS-CoV Receptor DPP4 as a Candidate Binding Target of the SARS-CoV-2 Spike[J].iScience，2020，23（6）：101160.

[5]Fadini GP，Morieri ML，Longato E，et al.Exposure to dipeptidyl-peptidase-4 inhibitors and COVID-19 among people with type 2 diabetes：A case-control study[J].Diabetes Obes Metab，2020，22（10）：1946-1950.

[6]Boddu SK，Aurangabadkar G，Kuchay MS.New onset diabetes，type 1 diabetes and COVID-19[J].Diabetes Metab Syndr，2020，14（6）：2211-2217.

[7]Zhu L，She ZG，Cheng X，et al.Association of Blood Glucose Control and Outcomes in Patients with COVID-19 and Pre-existing Type 2 Diabetes[J].Cell Metab，2020，31（6）：1068-1077.e3.

[8]范逸品，王燕平，馬艷，等.從新型冠狀病毒肺炎的寒疫病機(jī)探析清肺排毒湯的組方機(jī)制[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2020，26（16）：1-5.

[9]Zou LW，Wang P，Qian XK，et al.A highly specific ratiometric two-photon fluorescent probe to detect dipeptidyl peptidase Ⅳ in plasma and living systems[J].Biosens Bioelectron，2017，90：283-289.

[10]范建夏，于文霞，張麗蕊.麻黃細(xì)辛附子湯合圣愈湯化裁治療陰陽(yáng)兩虛夾瘀型糖尿病周?chē)窠?jīng)病變經(jīng)驗(yàn)[J].中國(guó)中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育，2020，18（9）：72-75.

[11]劉益兵.手法推拿聯(lián)合麻黃葛根湯對(duì)糖尿病合并椎動(dòng)脈型頸椎病患者疼痛程度及血液流變學(xué)的影響[J].中國(guó)民間療法，2019，27（7）：48-49.

[12]史麗穎，陳瑤，盧軒，等.麻黃中生物堿類(lèi)成分富集新方法及化學(xué)成分分析[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2018，24（21）：56-61.

[13]Ang L，Lee HW，Kim A，et al.Herbal medicine for treatment of children diagnosed with COVID-19：A review of guidelines[J].Complement Ther Clin Pract，2020，39：101174.

[14]趙權(quán)，張優(yōu)，陳影，等.HPLC-VWD-Q-TOF-MS/MS法定性與定量分析枳實(shí)梔子豉湯成分[J].中成藥，2021，43（11）：3067-3075.

[15]劉丹寧，潘夢(mèng)雪，楊璐嘉，等.枳實(shí)總黃酮對(duì)5-氟尿嘧啶誘導(dǎo)的腸黏膜炎小鼠腸道菌群失調(diào)的影響[J].中草藥，2021，52（23）：7204-7213.

[16]劉莉，楊躍光，鄒國(guó)良，等.加味黃連溫膽湯對(duì)代謝綜合征合并2型糖尿病痰熱互結(jié)證患者心血管危險(xiǎn)因素的影響[J].中國(guó)醫(yī)藥，2021，16（10）：1562-1566.

[17]鄭玉嬌，張莉莉，丁齊又，等.厚樸、枳實(shí)、生大黃治療2型糖尿病胃腸實(shí)熱證經(jīng)驗(yàn)——仝小林三味小方擷萃[J].吉林中醫(yī)藥，2020，40（7）：865-867.

[18]姚尹伊，何夢(mèng)玲，李瑩瑩，等.廣藿香萜類(lèi)化合物生物合成及代謝調(diào)控研究進(jìn)展[J].中國(guó)中藥雜志，2021，46（21）：5560-5567.

[19]陳春宇，董漢玉，紀(jì)瑞鋒，等.基于中醫(yī)藥理論的芳香類(lèi)中藥防治新型冠狀病毒肺炎（COVID-19）的作用探討[J].中草藥，2020，51（11）：3051-3061.

[20]Pal R，Bhadada SK.COVID-19 and diabetes mellitus：An unholy interaction of two pandemics[J].Diabetes Metab Syndr，2020，14（4）：513-517.

（2021-03-17收稿 本文編輯：楊覺(jué)雄）

基金項(xiàng)目：國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目“新冠肺炎應(yīng)急項(xiàng)目”（2020YFC0845400）;國(guó)家科技重大專(zhuān)項(xiàng)“重大新藥創(chuàng)制”（2018ZX09731016-004）;國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目“中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究”（2017YFC1702000）作者簡(jiǎn)介：王安琪（1998.07—），女，碩士研究生在讀，研究方向：中藥活性成分發(fā)現(xiàn)與優(yōu)化，E-mail：aqwangzy@163.com通信作者：鄒立偉（1982.11—），男，博士，副研究員，碩士研究生導(dǎo)師，研究方向：中藥活性成分發(fā)現(xiàn)與優(yōu)化，E-mail：chemzlw@163.comC8E55514-531D-42F5-A73B-86BE2AFDB859