周鑫濤，王 瑩，蘭 衛(wèi)

(1.新疆醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830017；2.新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院，新疆 烏魯木齊 830002)

維藥小枝玫瑰花為薔薇科植物玫瑰(RosarugosaThunb.)中小枝玫瑰(branchlet rose)的干燥花蕾，屬?lài)?guó)家藥典收載品種[1]。其制劑玫瑰花口服液、玫瑰花糖膏已作為單方制劑收載于《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)(維吾爾藥分冊(cè))》[2]。小枝玫瑰花在新疆和田已有約2 000年的栽培歷史，現(xiàn)有栽培面積約5.5萬(wàn)畝，產(chǎn)量大、質(zhì)量?jī)?yōu)。經(jīng)中科院檢測(cè)，玫瑰精油中最主要的成分是香茅醇、香葉醇，而新疆小枝玫瑰精油中香茅醇含量是保加利亞攻瑰的8.3倍、法國(guó)玫瑰的5.6倍；香葉醇含量則更高，是保加利亞玫瑰的249.8倍、法國(guó)玫瑰的124.9倍[3]。研究表明，小枝玫瑰花具有芳香開(kāi)竅、安神止痛、軟腸通便、滋補(bǔ)腸胃、改善消化、驅(qū)風(fēng)消炎、潤(rùn)膚生輝[4]等功效。木犀草素是小枝玫瑰花的主要活性成分。王清岑等[5]研究發(fā)現(xiàn)，木犀草素具有抗動(dòng)脈粥樣硬化、保護(hù)心肌缺血再灌注損傷、緩解心力衰竭、降低血壓等作用；徐秋紅等[6]研究發(fā)現(xiàn)，木犀草素具有抗腫瘤、抗炎、抗氧化、抗菌、抗病毒等作用。測(cè)定木犀草素含量對(duì)小枝玫瑰花進(jìn)行質(zhì)量控制具有重要意義。鑒于此，作者采用HPLC法測(cè)定新疆小枝玫瑰花中木犀草素含量。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 材料、試劑與儀器

小枝玫瑰花(批號(hào)20181216)，新疆鴻德堂永盛藥業(yè)有限公司。經(jīng)新疆醫(yī)科大學(xué)盛萍教授鑒定為薔薇科植物玫瑰(RosarugosaThunb.)中小枝玫瑰(branchlet rose)的干燥花蕾。

木犀草素標(biāo)準(zhǔn)品(批號(hào)20180224)，北京譜析科技有限公司；磷酸(批號(hào)20180516)，鄭州中天泓達(dá)化工科技有限公司；甲醇(批號(hào)20171215，分析純)，山東千貝化工有限公司；甲醇、乙腈，色譜級(jí)，F(xiàn)isher公司；甲酸(批號(hào)L1807102，色譜級(jí))，賽默飛公司；實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

高效液相色譜儀(LC-20AT泵，SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器，CBM-20A 控制器，SPD-M20A 檢測(cè)器，CTO-20AC柱溫箱，LC-solution色譜工作站)、AUW120D型電子分析天平，日本島津；KQ-500DE型數(shù)控超聲清洗器(40 kHz)，昆山超聲儀器有限公司；AL204電子分析天平，METTLER TOLEDO；ZY-1004型超聲波清洗機(jī)，上海早盈精密清洗機(jī)械有限公司；Millipore Elix 5型超純水系統(tǒng)，Millipore公司。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

精密稱(chēng)取木犀草素標(biāo)準(zhǔn)品 2.04 mg，置于 25 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，即得0.081 6 mg·mL-1木犀草素標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3 供試溶液的制備[7]

稱(chēng)取小枝玫瑰花藥材 5 g，粉碎，置于50 mL帶塞錐形瓶中，加入50 mL甲醇，稱(chēng)重，100 Hz下超聲提取30 min，放冷，用甲醇補(bǔ)足質(zhì)量，過(guò)濾，即得供試溶液。

1.4 色譜條件

XB C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，柱溫25 ℃，流動(dòng)相為甲醇-0.2%磷酸(50∶50，體積比，下同)，流速1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)350 nm，進(jìn)樣量 10 μL[8]。

在該色譜條件下木犀草素保留時(shí)間約為18 min，理論塔板數(shù)大于3 000(以木犀草素峰計(jì))，木犀草素峰與相鄰峰分離度大于1.5。木犀草素標(biāo)準(zhǔn)溶液、供試溶液的HPLC圖譜見(jiàn)圖 1。

圖1 木犀草素標(biāo)準(zhǔn)溶液(a)、供試溶液(b)的HPLC圖譜

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別精密吸取木犀草素標(biāo)準(zhǔn)溶液2 mL、4 mL、6 mL、8 mL、10 mL置于10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得濃度(μg·μL-1)分別為 0.016 32、0.032 64、0.048 96、0.065 28、0.081 60木犀草素溶液，按1.4色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，得木犀草素峰面積分別為1 137 441、2 269 943、3 403 971、4 599 967、5 758 670。以木犀草素進(jìn)樣質(zhì)量(x，μg)為橫坐標(biāo)、峰面積(y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖2)，擬合得線性回歸方程為：y=7090981.62x-37746.20，R2=0.9999，表明木犀草素質(zhì)量在 0.163 2～0.816 0 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

圖2 木犀草素的標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 精密度

精密吸取0.081 6 mg·mL-1木犀草素標(biāo)準(zhǔn)溶液，按1.4色譜條件連續(xù)進(jìn)樣 6 次。測(cè)得峰面積分別為5 758 670、5 771 706、5 781 687、5 767 742、5 786 160、5 764 239，RSD 值為 0.18%。表明儀器精密度良好。

2.3 重復(fù)性

稱(chēng)取小枝玫瑰花藥材 6 份，按1.3方法制備供試溶液，按1.4色譜條件進(jìn)樣 20 μL。測(cè)得峰面積分別為1 204 946、1 227 730、1 215 521、1 214 732、1 228 546、1 208 965，進(jìn)樣質(zhì)量分別為0.175 2 μg、0.178 5 μg、0.176 7 μg、0.176 6 μg、0.178 6 μg、0.175 8 μg，平均進(jìn)樣質(zhì)量為0.176 9 μg，計(jì)算得到木犀草素含量為 88.45 μg·g-1，RSD值為 0.78%。表明該方法重復(fù)性良好。

2.4 穩(wěn)定性

按1.3方法制備供試溶液，分別于 0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h 按1.4色譜條件進(jìn)樣 20 μL。測(cè)得峰面積分別為1 206 532、1 226 598、1 227 321、1 204 569、1 259 632、1 249 325，進(jìn)樣質(zhì)量分別為0.175 5 μg、0.178 3 μg、0.178 4 μg、0.175 2 μg、0.183 0 μg、0.181 5 μg，平均進(jìn)樣質(zhì)量為0.178 6 μg，計(jì)算得到木犀草素含量為 89.3 μg·g-1，RSD 值為 1.75%。表明供試溶液在10 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5 加標(biāo)回收率

稱(chēng)取小枝玫瑰花藥材 6 份，每份 2.5 g，分別加入木犀草素標(biāo)準(zhǔn)品0.225 mg，參照文獻(xiàn)[9]操作方法，按1.4色譜條件進(jìn)樣 20 μL，結(jié)果見(jiàn)表1。

由表1可知，木犀草素平均加標(biāo)回收率為101.45%，RSD 值為 1.71%。

表1 加標(biāo)回收率結(jié)果(n=6)

2.6 小枝玫瑰花中木犀草素含量的測(cè)定

按1.3方法制備供試溶液3份，按1.4色譜條件進(jìn)樣 20 μL，測(cè)得木犀草素峰面積分別為1 204 946、1 227 730、1 213 888，進(jìn)樣質(zhì)量分別為0.175 2 μg、0.178 5 μg、0.176 5 μg，平均進(jìn)樣質(zhì)量為0.176 7 μg，計(jì)算得到小枝玫瑰花中木犀草素含量為88.35 μg·g-1，RSD值為 0.92%。

2.7 討論

配制標(biāo)準(zhǔn)溶液和供試溶液時(shí)應(yīng)保持實(shí)驗(yàn)室和操作臺(tái)的潔凈，避免其它物質(zhì)污染，同時(shí)，應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用，避免放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。

李鵬等[10]采用HPLC法測(cè)定蘆丁和木犀草素的含量，選擇乙腈-磷酸為流動(dòng)相，梯度洗脫；許贊杉等[11]采用HPLC法同時(shí)測(cè)定鼠曲草中槲皮素與木犀草素的含量，以甲醇-4%磷酸(42∶58)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為360 nm；譚小明等[12]采用HPLC法測(cè)定廣西不同產(chǎn)地壯藥夜香牛中木犀草素的含量，以甲醇-乙腈(1∶1)為流動(dòng)相A，0.5%磷酸為流動(dòng)相B，檢測(cè)波長(zhǎng)為350 nm。作者以甲醇-0.2%磷酸為流動(dòng)相，根據(jù)色譜峰的分離程度，確定流動(dòng)相體積比為50∶50，所得HPLC圖譜出峰效果最好。

3 結(jié)論

建立了測(cè)定新疆小枝玫瑰花中木犀草素含量的HPLC法。結(jié)果表明，木犀草素質(zhì)量在0.163 2～0.816 0 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好；平均加標(biāo)回收率為101.45%，RSD值為1.71%；小枝玫瑰花中木犀草素含量為88.35 μg·g-1。該方法準(zhǔn)確可靠，可用于小枝玫瑰花中木犀草素含量的測(cè)定。