錢成林 吳思 鄭旭濤 董成虎 陳權(quán)翠

摘 要：本文主要闡述了乳及乳制品中三聚氰胺前處理的方法，在《原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方法》（GB/T 22388—2008）的基礎(chǔ)之上進(jìn)行優(yōu)化改進(jìn)，優(yōu)化前處理步驟，將先過濾再定容改變?yōu)橄榷ㄈ菰龠^濾，加標(biāo)回收率得到提高，準(zhǔn)確性更強(qiáng)。

關(guān)鍵詞：乳及乳制品;優(yōu)化;回收率

An Optimized Detection Method for Melamine Pretreatment

QIAN Chenglin1， WU Si2， ZHENG Xutao2， DONG Chenghu1， CHEN Quancui2*

（1.New Hope Dairy Co.， Ltd.， Food Safety Supervision Department， Chengdu 610000， China; 2.Centre Testing International Group Co.， Ltd.， Yunnan Hua Ce Testing International Co.， Ltd.， Kunming 650000， China）

Abstract： The pretreatment method of melamine in milk and dairy products was introduced. Based on the method of detection of melamine in raw milk and dairy products of GB/T 22388—2008， the pretreatment steps were optimized. The rate of recovery is improved and the accuracy is stronger by changing the first filtration and then the fixed volume into the first fixed volume and then filtering.

Keywords： milk and dairy products; optimize; percent recovery

三聚氰胺（C3H6N6），俗稱密胺、蛋白精，IUPAC命名為1，3，5-三嗪-2，4，6-三氨基，是一種三嗪類含氮雜環(huán)有機(jī)化合物，被用作化工原料。它是白色單斜晶體，幾乎無味，微溶于水（3.1 g/L常溫），可溶于甲醇、甲醛、乙酸、熱乙二醇、甘油及吡啶等，不溶于丙酮、醚類，對身體有害，不可用于食品加工或食品添加物。臨床研究發(fā)現(xiàn)，三聚氰胺可能會在人體泌尿系統(tǒng)如膀胱和腎臟形成泥沙樣結(jié)晶或結(jié)石[1]。

中國國家食品質(zhì)量監(jiān)督檢測中心在2008年9月13日指出，三聚氰胺屬于化工原料，不允許添加到食品中，故暫未設(shè)定像農(nóng)藥般的殘留標(biāo)準(zhǔn)限制。除了人為添加外，三聚氰胺類物質(zhì)還可能從環(huán)境、食品包裝材料等途徑進(jìn)入到食品，且其含量極低。由于動物源食品基質(zhì)背景復(fù)雜、所需前處理過程煩瑣費(fèi)時，因此開發(fā)復(fù)雜食品基質(zhì)中痕量三聚氰胺類物質(zhì)快速、高靈敏分析檢測方法對保障我國食品安全具有重要的意義[2]。2008年10月8日，原衛(wèi)生部、工業(yè)和信息化部、農(nóng)業(yè)部、國家工商行政管理總局和國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局聯(lián)合發(fā)布公告，制定三聚氰胺在乳與乳制品中的臨時管理值。

嬰幼兒配方乳粉中三聚氰胺的限量值為1 mg/kg，高于1 mg/kg的產(chǎn)品一律不得銷售。液態(tài)奶（包括原料乳）、奶粉、其他配方乳粉中三聚氰胺的限量值為2.5 mg/kg，高于2.5 mg/kg的產(chǎn)品一律不得銷售。目前使用的檢測方法有GB/T 22388—2008原料乳及乳制品中三聚氰胺檢測第一法高效液相色譜法[3]和GB/T 22400—2008原料乳中三聚氰胺檢測方法[4]，按照檢測方法檢測結(jié)果有所偏低，方法檢出限為2.0 mg/kg，加標(biāo)濃度為2～10 mg/kg，回收率在80%～110%，不能滿足《合格評定 化學(xué)分析方法確認(rèn)和認(rèn)證指南》（GB/T 27417—2017）關(guān)于加標(biāo)回收率的要求，在目前的方法上進(jìn)行改進(jìn)，檢測結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠。加標(biāo)回收率都在90%～110%，滿足要求[5]。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

牛奶樣品，工廠奶罐檢測合格牛奶;乙腈（色譜純，生產(chǎn)批號：148405，德國默克）;檸檬酸（分析純，生產(chǎn)批號：20140201，重慶川東化工有限公司）;辛烷磺酸鈉（分析純，生產(chǎn)批號：20160602，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）;三氯乙酸（分析純，生產(chǎn)批號：20130124，廣東光華科技股份有限公司）;甲醇（色譜純，生產(chǎn)批號：1847607，德國默克）;超純水，實(shí)驗(yàn)室自制。

離子對緩沖試劑：使用ME204E電子天平準(zhǔn)確稱取2.10 g檸檬酸和2.16 g辛烷磺酸鈉，加入約980 mL超純水，調(diào)節(jié)pH值至3.0，用水定容至1 000 mL。使用0.45 μm水相濾膜過濾后進(jìn)行使用。

1.2 儀器與設(shè)備

安捷倫高效液相色譜儀1260（美國Aligent，紫外檢測器VWD，檢測波長240 nm，檢測溫度40 ℃）;ME204E電子天平，精確度0.000 1 g，梅特勒托利多。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 操作步驟

使用1 000 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行加標(biāo)至1.25 mg/L、2.50 mg/L、10.00 mg/L。分別18次準(zhǔn)確稱?。?.000±0.010）g制備好的加標(biāo)樣品至50 mL離心管中，準(zhǔn)確移取18 mL濃度為2%的三氯乙酸溶液和5 mL乙腈溶液至每只離心管中，渦旋混勻1 min，超聲提取10 min，振蕩提10 min，6 000 r/min離心10 min。

用濾紙進(jìn)行過濾后作為凈化液，過濾溶液時間從30 min，縮短到5 min左右。再用3 mL甲醇和5 mL水先后過活化好的陽離子交換柱，將凈化液5 mL加5 mL水混勻后過柱，繼續(xù)用3 mL水和3 mL甲醇先后過柱，加入6 mL 5%氨化甲醇溶液洗脫，將洗脫液置于50 ℃氮吹至干，取出比色管加入1 mL流動相溶液用0.45 μm濾膜過濾到進(jìn)樣瓶中。沒有加標(biāo)的樣品依據(jù)上述方法進(jìn)行檢測。

1.3.2 進(jìn)樣條件

色譜柱C18（150 mm×4.6 mm×5 μm）;波長：紫外240 nm;柱溫：40 ℃;進(jìn)樣體積：20 μL;流速：1 mL/min;洗脫方式：等度洗脫。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度及峰面積結(jié)果，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性關(guān)系y=ax+b，其中a=82.355，b=-3.195 7，

線性相關(guān)系數(shù)R2=0.999 7，可以滿足≥0.999以上的要求，具體見圖1。

2.2 加標(biāo)回收率

依據(jù)回收率標(biāo)準(zhǔn)要求（表1），分別加標(biāo)至

1.25 mg/L、2.50 mg/L、10.00 mg/L，并進(jìn)行平行測定6次，加標(biāo)回收率在95.1%～108.4%，其中加標(biāo)至1.25 mg/L的樣品加標(biāo)回收率在98.5%～108.4%，加標(biāo)濃度至2.50 mg/L的樣品加標(biāo)回收率為98.8%～100.9%，加標(biāo)濃度至10.00 mg/L的樣品加標(biāo)回收率在95.1%～98.5%，都能滿足加標(biāo)回收率在90%～110%的要求。加標(biāo)回收率見表2。

2.3 精密度

計算1.25 mg/L、2.50 mg/L、10.00 mg/L的加標(biāo)檢測結(jié)果，RSD值都低于5%，滿足RSD的要求，見表3。

2.4 方法檢出限和定量限

按照標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行加標(biāo)實(shí)驗(yàn)，查看安捷倫1260高效液相色譜儀18次檢測結(jié)果的信噪比，3倍的信噪比作為方法檢出限，10倍的信噪比作為方法定量限。由于檢測18個檢測結(jié)果計算的方法檢出限和定量限都不一致，采用18次計算結(jié)果的平均值作為方法檢出限和定量限。方法檢出限為0.08 mg/L，方法定量限為0.28 mg/L，見表4。

2.5 優(yōu)化方法與國標(biāo)方法對比

優(yōu)化方法與國標(biāo)方法對比結(jié)果見表5，優(yōu)化方法檢出限更低，定容時間短，加標(biāo)回收率符合要求。

3 結(jié)論

結(jié)果表明，更改前處理方法后，過濾定容時間從原來30 min縮短至5 min，定容時間縮短至原來的1/6;加標(biāo)回收率有明顯改善，從80%～110%上升至95.1%～108.4%，改善比較明顯，檢測準(zhǔn)確性提高;精密度實(shí)驗(yàn)方面，加標(biāo)樣品檢測偏差RSD值在5%以內(nèi);方法檢出限為0.08 mg/kg，方法定量限為0.28 mg/kg，與原有標(biāo)準(zhǔn)的定量限2.0 mg/kg相比降低顯著，低濃度樣品更加容易檢出。所以更改定容方式后檢測結(jié)果更加高效、準(zhǔn)確、可靠。

參考文獻(xiàn)

[1]楊光，丁飛.三聚氰胺的檢測方法探討[J].河南科技，2010（11）：71-72.

[2]李雪剛.動物源食品中三聚氰胺類物質(zhì)高靈敏檢測方法研究[D].武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2012.

[3]中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方法：GB/T 22388—2008[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008.

[4]中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會.原料乳中三聚氰胺快速檢測 液相色譜法：GB/T 22400—2008[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008.

[5]中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會.合格評定 化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南：GB/T 27417—2017[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2017.

基金項(xiàng)目：乳制品及牛肉制品精深加工關(guān)鍵技術(shù)研究與產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用示范（2020YFN0153）。

通信作者：陳權(quán)翠（1992—），女，云南曲靖人，本科，助理工程師。研究方向：食品安全。E-mail：1249785957@qq.com。