蘇來(lái)曼·哈力克 蔣晨昊

【摘 要】 目的：研究提高維吾爾藥西帕依固齦液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：對(duì)10批次西帕依固齦液樣品采用薄層色譜進(jìn)行鑒別，采用HPLC法測(cè)定沒食子酸含量，檢測(cè)波長(zhǎng)：273 nm;色譜柱：Agilent TC-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），以甲醇為流動(dòng)相A，以0.1%磷酸為流動(dòng)相B，進(jìn)行梯度洗脫;流速：1.0 mL/min。結(jié)果：薄層色譜鑒別清晰專屬;HPLC法測(cè)定沒食子酸得回歸方程為：Y=4×106X-7865.5，r=0.9991，沒食子酸對(duì)照品在0.04～100 μg·mL-1范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，平均回收率為99.28%，RSD為1.21%，含量范圍為1.02～1.36 mg·mL-1，平均值為（1.17±0.134）mg·mL-1（n=11）。結(jié)論：新建立的方法顯著提升了西帕依固齦液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，可用于其質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】 西帕依固齦液;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);沒食子酸;薄層色譜鑒別;高效液相色譜含量測(cè)定

【中圖分類號(hào)】R284.1?? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A??? 【文章編號(hào)】1007-8517（2022）16-0041-04

Studies on the Quality Standard of Xipayi Guyinye Liquid（Xipayi mouth rinse）

Suleyman Halik JIANG? Chenhao

Xinjiang Uyghur Autonomous Region Institute for Drug Control，? NMPA Key Laboratory for Quality Control

of Traditional Chinese，Uighur medicine，Urumqi 830054，China

Abstract：Objective To improve the quality standard of Xipayi Guyinye Liquid. Methods Eleven batches of Xipayi Guyinye Liquid samples were collected，and qualitative identification was carried out by TLC，HPLC method for the determination of chlorogenic acid was developed and validated，The chromatographic separation was preformed on a AgilentTC-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）column with acetonitrile-0.1% phosphoric acid as mobile phase with gradient elution. The flow rate was 1.0 mL min-1 and the detection wavelength was set at 273 nm.Results TLC method is simple and accurate. The calibration curve was liner in range of 13.45-53.8 μg/mL，Y=4×106X-7865.5，r=0.9998，The content of gallic acid was determined by HPLC， with good liner of 0.04～100 μg·mL-1. The average recovery of gallic acid was 99.28% and RSD was 1.21%. and the content of gallic acid in 11 batches of samples was 1.02-1.36 mg·mL-1，the average was（1.17±0.134）mg·mL-1（n=11）.Conclusion The method improves the quality standard of Xipayi mouth rinse and can be used for its quality control.

Key words：Xipayi Guyinye Liquid（Xipayi Mouth Rinse）; Quality Standards; Gallic Acid;TLC;HPLC

西帕依固齦液合劑是由單味藥材沒食子經(jīng)提取制成的口腔抗感染國(guó)藥準(zhǔn)字號(hào)制劑，臨床上廣泛用于牙周炎、牙齦炎的治療，效果顯著[1-4]。本品具健齒固齦、清血止痛功效，可用于牙周疾病引起的牙齒酸軟、咀嚼無(wú)力、松動(dòng)移位、牙齦出血、口舌生瘡、咽喉腫痛、口臭煙臭等癥。標(biāo)準(zhǔn)收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)-維吾爾藥分冊(cè)》（1998）[5]，標(biāo)準(zhǔn)號(hào)為WS3-BW-0122-98。原標(biāo)準(zhǔn)只有試管鑒別、薄層色譜鑒別和pH值測(cè)定項(xiàng)，未見質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究文獻(xiàn)報(bào)道。為了更好地控制產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量，修訂了性狀、沒食子酸的TLC鑒別，刪去了化學(xué)鑒別，增加了其主成分沒食子酸的HPLC含量測(cè)定，使質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可控性得到全面提高。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters 1525 Binary HPLC Pump，2487 Daul Absorbence Detector， Waters 717 Autosampler，Empower色譜工作站，島津LC-20AT液相色譜儀及工作站，Agilent TC-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），定量毛細(xì)管（美國(guó)Drummond Scientific Company），CAMMAG REPROSTAR3薄層色譜成像系統(tǒng)（瑞士CAMMAG）。Waters高效液相色譜儀（美國(guó)Waters公司）。

1.2 試藥 西帕依固齦液（批號(hào)：20130108，20130109，20130112，20130114，20130116，20130117，20130118，20130143，20130144， 20130203，20130205）;沒食子藥材陰性對(duì)照液，均由新疆新奇康藥業(yè)股份有限公司提供。沒食子藥材（批號(hào)：20110501，201108，20120925，20130612，分別購(gòu)于新疆麥迪森藥業(yè)有限公司、新疆熱益罕維吾爾藥材公司、新疆新奇康藥業(yè)有限公司、和田安薩爾維吾爾藥材公司）。對(duì)照品：沒食子酸（批號(hào)：110831-200302供含量測(cè)定用，110831-200803含量為 90.3%），購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院。沒食子對(duì)照藥材（批號(hào)：XJYJS-YC-201008，本院自制）。硅膠薄層板試劑（預(yù)制板）（中國(guó)青島海洋化工集團(tuán)公司出品），水為超純水，其它化學(xué)試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀描述 本品為淡黃色至淡棕色液體;氣微香，味澀、微甜。

2.2 薄層色譜鑒別 取本品直接作為供試品溶液。取沒食子酸對(duì)照品加甲醇制成每1 mL含2 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。另取沒食子對(duì)照藥材0.1g加甲醇20 mL，超聲處理20 min， 濾過(guò)，濾液濃縮至2 mL作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法《中國(guó)藥典》四部0502試驗(yàn)，吸取供試品和對(duì)照藥材溶液各4μL，對(duì)照品溶液2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以二氯甲烷-甲酸乙酯-甲酸（5∶5∶1）為展開劑，展開，取出，揮干，置紫外光燈（254 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品和對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。噴以1%三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對(duì)照品和對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。如圖1所示。

2.3 HPLC含量測(cè)定 西帕依固齦液由沒食子單味藥材經(jīng)提取制成。沒食子（Turkish galls）化學(xué)成分中含鞣質(zhì)（tannins）50%～70%、沒食子酸（gallic acid）2%～4%、間-雙沒食子酸（m-digallic acid）、沒食子酸甲酯（methyl gallate）、1，2，3，6-四-0-沒食子?；?β-D-葡萄糖（1，2，3，6-tetra-O-galloyl-β-D-glucose、1，2，3，4，6-五-O-沒食子?；?β-D-葡萄糖（1，2，3，4，6-penta-O-galloyl-β-D-glucose）、樹脂等成分[6]。沒食子酸含量測(cè)定方法報(bào)道中，彭燕等[7]用差示分光光度法測(cè)定西帕依固齦液中沒食子酸的含量，結(jié)果樣品含量為6.85～9.79 mg·mL-1，測(cè)得值偏高。司馬義江等[8]報(bào)道，HPLC法測(cè)定西帕依固齦液中沒食子酸含量為0.03489 mg·mL-1，含量明顯偏低。吳雪釵等[9]研究報(bào)道沒食子酸為弱極性物質(zhì)，在強(qiáng)氧化條件下降解迅速，不穩(wěn)定;當(dāng)pH值為7.0～10.0時(shí)，3h已降解完全，極不穩(wěn)定;而對(duì)強(qiáng)酸、強(qiáng)光、高溫較穩(wěn)定;當(dāng)pH值為2.0～6.0的條件下，即酸性環(huán)境中穩(wěn)定。本研究參考文獻(xiàn)方法，經(jīng)多次預(yù)試驗(yàn)，采用梯度洗脫建立了西帕依固齦液中沒食子酸的HPLC含量測(cè)定方法。

2.3.1 對(duì)照品溶液的制備 取沒食子酸對(duì)照品適量，精密稱定，置于棕色量瓶中，加甲醇制成15 μg·mL-1的溶液，即得。

2.3.2 供試品溶液的制備 西帕依固齦液為水溶液，其主成分沒食子酸易溶于水。分別精密量取樣品1 mL，分別加水、50%甲醇和甲醇稀釋至100 mL，按上述方法考察其峰面積。結(jié)果用水和50%甲醇稀釋處理的樣品峰面積差異不大，甲醇稀釋液樣品峰面積略高，因水經(jīng)濟(jì)且環(huán)保，故選擇用水稀釋樣品。

2.3.3 陰性對(duì)照液的制備 按處方輔料比例及工藝制備缺沒食子的陰性對(duì)照液，并按上述“2.3.2”項(xiàng)下方法制備陰性對(duì)照液。

2.3.4 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱：Agilent TC-C18（4.6 mm×250 mm 5 μm），以甲醇為流動(dòng)相A，以0.1%磷酸為流動(dòng)相B，按表1中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫;檢測(cè)波長(zhǎng)273 nm。理論板數(shù)按沒食子酸峰計(jì)算應(yīng)不低于8000。西帕依固齦液樣品、陰性對(duì)照及沒食子酸對(duì)照品HPLC色譜圖如圖2～4所示。

2.3.5 線形關(guān)系考察 精密稱取沒食子酸對(duì)照品7.54 mg置10 mL量瓶中，加甲醇適量溶解并定容至刻度，搖勻，制成每1 mL含沒食子酸0.754 mg的儲(chǔ)備液。精密吸取此儲(chǔ)備液適量加甲醇制成每1 mL含沒食子酸0.4 μg、2 μg、15 μg、20 μg、40 μg、80 μg和100 μg的系列濃度對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣10 μL，以對(duì)照品峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，對(duì)照品質(zhì)量（X，μg）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸計(jì)算，得回歸方程為：Y=4×106X-7865.5，r=0.9991。結(jié)果表明，沒食子酸對(duì)照品在0.04～100 μg/mL范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系。

2.3.6 精密度試驗(yàn) 取沒食子酸對(duì)照品溶液（16.42μg/mL）， 重復(fù)進(jìn)樣6次，每次10 μL，記錄沒食子酸的峰面積值，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果RSD=0.2%，顯示儀器精密度良好。

2.3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，室溫下放置，每隔一定時(shí)間，進(jìn)樣10 μL， 連續(xù)進(jìn)樣6次依法測(cè)定沒食子酸峰面積值，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，24 h內(nèi)RSD為2.51%。結(jié)果表明，供試品溶液室溫放置24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一供試品溶液6份，分別進(jìn)樣10 μL，依法測(cè)定沒食子酸峰面積值，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果RSD為1.40%，方法的重復(fù)性良好。

2.3.9 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取同一供試品0.5 mL置100 mL量瓶中，同時(shí)制備6份。精密稱取沒食子酸對(duì)照品10.16 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，精密量取1 mL置25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，即得（0.4064 mg·mL-1）。分別置供試品中精密加入每1 mL含沒食子酸0.4064 mg的對(duì)照品溶液2.0 mL，加水稀釋至刻度，搖勻。按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果沒食子酸平均回收率（n=6）為99.28%， RSD為1.21%。

2.3.10 樣品測(cè)定 分別精密量取11批樣品溶液各1 mL， 按2.3.9項(xiàng)下方法測(cè)定，記錄HPLC圖譜，外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果沒食子酸含量在1.07～1.36 mg·mL-1之間，平均（1.17±0.134）mg·mL-1（n=11）。根據(jù)上述測(cè)定結(jié)果，以平均值1.17下浮20%其值為0.94，暫定西帕依固齦液含沒食子按沒食子酸（C27H30O16）計(jì)，應(yīng)不得少于0.90 mg/mL。測(cè)定結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 HPLC法流動(dòng)相的選擇 西帕依固齦液為水溶液，其主成分沒食子酸易溶于水，樣品液直接加水稀釋成一定量測(cè)定簡(jiǎn)便可行。流動(dòng)相曾用《中國(guó)藥典》一部五倍子項(xiàng)下沒食子酸含量測(cè)定用的甲醇-0.1%磷酸（15∶85），結(jié)果出峰時(shí)間較長(zhǎng)且沒食子酸峰得不到基線分離，有雜峰干擾。改用甲醇-0.1%磷酸（6∶94），流速：1.0 mL/min ，柱溫：30℃，沒食子酸峰得到基線分離，但雜峰出盡需80 min。后經(jīng)多次改變梯度洗脫條件，確定流動(dòng)相為：甲醇A-0.1%磷酸B，按文中梯度洗脫程序，時(shí)間縮短為30 min，分離效果滿意。

3.2 有害元素測(cè)定 照《中國(guó)藥典》2020年版四部通則2321鉛、鎘、砷、汞、銅測(cè)定法（電感耦合等離子質(zhì)譜法）測(cè)定了11批次供試品中的鉛、汞、銅、總砷、鎘含量，結(jié)果均未檢出或未超出相關(guān)規(guī)定。

3.3 農(nóng)藥殘留測(cè)定 照《中國(guó)藥典》2020年版四部通則2341農(nóng)藥殘留量測(cè)定法測(cè)定11批次樣品中的六六六、滴滴涕、林丹、七氯、艾氏劑含量及氯菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯、三氯殺螨醇含量，結(jié)果均未檢出。

3.4 原料沒食子中沒食子酸的含量測(cè)定 為了控制原料沒食子的質(zhì)量，采用前述制劑含量測(cè)定方法，對(duì)沒食子進(jìn)行了含量測(cè)定。精密稱取沒食子藥材粉末（過(guò)3號(hào)篩）0.1 g，至25 mL棕色容量瓶中，加入甲醇適量，超聲處理15 min，放置室溫，加甲醇至刻度，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，即得。其余同西帕依固齦液的測(cè)定。測(cè)定4批次沒食子藥材樣品，結(jié)果按干燥品計(jì)含沒食子酸（C7H6O5）為1.52%～4.60%，平均為2.86%。

本文新建立的方法，根據(jù)11批次樣品性狀實(shí)際觀察，將原標(biāo)準(zhǔn)性狀鑒別描述“本品為淡棕色液體”修改為“本品為淡黃色至淡棕色液體”;刪除專屬性差的試管鑒別項(xiàng);對(duì)原薄層色譜鑒別項(xiàng)因色譜斑點(diǎn)拖尾，將提取過(guò)程簡(jiǎn)化為直接點(diǎn)樣，采用新展開劑系統(tǒng)，結(jié)果色譜斑點(diǎn)清晰穩(wěn)定;為控制制劑內(nèi)在質(zhì)量，新增主成分沒食子酸HPLC法含量測(cè)定，

沒食子藥材中沒食子酸含量不低于1.50%，制劑中沒食子酸含量不低于0.90 mg/mL。整個(gè)質(zhì)控方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、可靠，使西帕依固齦液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)得到顯著提升。

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（收稿日期：2021-12-07 編輯：陶希睿）

基金項(xiàng)目： 國(guó)家藥典委員會(huì)2010年國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)（中藥）提高項(xiàng)目（794）。

作者簡(jiǎn)介：蘇來(lái)曼·哈力克（1960-），男，維吾爾族，本科，主任藥師，研究方向?yàn)榫S吾爾藥材及制劑質(zhì)量研究與評(píng)價(jià)。E-mail：suleyman@sian.cn