崔建枝 王均琪 和志華 和學(xué)承 和成鳳 彭識(shí) 趙元孫 劉建勤 李志勇

【摘 要】

目的：梳理納西傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中的“穢”及“除穢”的方法，采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法探討納西族通過(guò)除穢預(yù)防疾病的可能的作用機(jī)制。方法：借助旨在促進(jìn)對(duì)環(huán)境暴露如何影響人類(lèi)健康的理解的CTD數(shù)據(jù)庫(kù)，獲取納西族除穢主要植物的揮發(fā)性成分相應(yīng)的靶點(diǎn)，通過(guò)STRING數(shù)據(jù)庫(kù)、Cytoscape軟件、DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)分別構(gòu)建靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)、提取核心PPI網(wǎng)絡(luò)及關(guān)鍵靶點(diǎn)、對(duì)關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行富集分析。結(jié)果：獲得揮發(fā)性成分關(guān)鍵靶點(diǎn)164個(gè)，通路涉及乙型肝炎、病毒致癌、甲型流感、HTLV-I感染、FoxO信號(hào)通路、HIF-1信號(hào)通路、TNF信號(hào)通路等。結(jié)論：除穢實(shí)質(zhì)上是消除細(xì)菌病毒、保持環(huán)境衛(wèi)生的活動(dòng)。除穢植物可能通過(guò)多種揮發(fā)性成分作用于多靶點(diǎn)抑制病毒、調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)，發(fā)揮消毒殺菌、預(yù)防疫病的作用。

【關(guān)鍵詞】

納西族;除穢;疫病;網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)

【中圖分類(lèi)號(hào)】R285?? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A??? 【文章編號(hào)】1007-8517（2022）17-0001-06

Data Collation and Research on the Theory of Disease Caused by “filth” and the? Disease

Prevention Mechanism of “Dispel Filth” in Naxi Dongba Medicine

CUI Jianzhi1，2 WANG Junqi3 HE Zhihua2 HE Xuecheng2

HE Chengfeng2 PENG Shi4 ZHAO Yuansun5 LIU Jianqin2* LI Zhiyong1，3，6，7*

1.BasicMedical College，Shanxi University of Chinese Medicine，Jinzhong 030619， China;

2.Lijiang Medical Association of Minorities，Yunnan Province，Lijiang 674100， China;

3.School of Pharmacy， Minzu University of China，Beijing 100081， China;

4.Lijiang Agricultural Science Institute，Yunnan Province，Lijiang 674100， China;

5.Intangible center，Yulong county，Yunnan Province，Yulong 674100， China;

6.Yunnan Synergistic Innovation Center for the Exploitation and Research of New

Resources of Traditional Chinese Medicine，Kunming 650051， China;

7.Institute of Chinese Materia Medica，China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100700，China

Abstract：

Objective The purpose of this paper is to sort out the filth and the methods of dispeling filth in traditional Naxi medicine， and to explore the possible mechanism of Naxi people s prevention of diseases by dispeling filth by means of network pharmacology.Methods With the help of CTD database， which aims to promote the understanding of how environmental exposure affects human health， the corresponding targets of volatile components of the main plants of Naxi nationality were obtained.The target PPI network is constructed by STRING database， the core PPI network and key targets are extracted by Cytoscape software， and the key targets are enriched and analyzed by DAVID database.Results 164 key targets of volatile components were obtained， and pathways mainly included hepatitis B， viral carcinogenesis， influenza A， HTLV-I infection， FoxO signal pathway， HIF-1 signal pathway， TNF signal pathway， etc.Conclusion Dispeling filth is essentially an activity to eliminate bacteria and viruses and maintain environmental hygiene.The various volatile components of decontaminating plants may play an important role in disinfection and sterilization and preventing epidemic disease by acting on multiple targets to inhibit virus and regulate inflammatory response.

Key words：

Naxi People;Dispel Filth; Epidemic Disease; Network Pharmacology

納西族起源于我國(guó)西北河（黃河）湟（湟河）地帶的古羌人，是云南特有的少數(shù)民族之一，主要聚居在云南麗江[1]。納西族使用著世界上僅存的象形文字，人們稱(chēng)之為“東巴象形文字”?！皷|巴”是納西族東巴文化的主要傳承人，掌握一些醫(yī)藥知識(shí)和常見(jiàn)疾病的診治。千百年來(lái)，納西族先民用古老的象形文字書(shū)寫(xiě)了大量的東巴經(jīng)，這些經(jīng)卷記錄了哲學(xué)、歷史、醫(yī)學(xué)等方面的內(nèi)容，被譽(yù)為納西族的“百科全書(shū)”。其中，有大量東巴經(jīng)反映了遠(yuǎn)古時(shí)期與醫(yī)藥文化相關(guān)的內(nèi)容，是納西族先民對(duì)生命、健康、醫(yī)藥的樸素認(rèn)識(shí)，對(duì)于研究納西醫(yī)藥具有重要意義[2-3]。

納西先民在與疾病斗爭(zhēng)的過(guò)程中形成了豐富的醫(yī)藥理論、治病經(jīng)驗(yàn)和防病知識(shí)。在納西先民的病因理論中，“穢”在生命活動(dòng)中是一個(gè)產(chǎn)生和傳播疾病的根源，是對(duì)不吉利、不干凈等東西的泛指[4]。他們認(rèn)為“穢”的產(chǎn)生原因不僅是自然氣候的反常變化和環(huán)境衛(wèi)生不良，也有動(dòng)物異常死亡等。根據(jù)納西族東巴經(jīng)古籍文獻(xiàn)有關(guān)除穢的記載，納西族先民將小葉杜鵑、大葉杜鵑、云杉、松、蒿草等5種植物作為除穢的主要材料，點(diǎn)燃這些植物熏消居住環(huán)境，通過(guò)除穢以祛除外邪，減少疾病的發(fā)生，這種理念和實(shí)踐一直延續(xù)至今。

CTD數(shù)據(jù)庫(kù)（Comparative Toxicogenomics Database，http：//ctdbase.org）是由外部化學(xué)物質(zhì)、基因、疾病和通路等資源組成的多功能數(shù)據(jù)庫(kù)，收錄了許多化學(xué)物質(zhì)與蛋白質(zhì)或基因的相互作用關(guān)系、化學(xué)物質(zhì)與疾病關(guān)系以及基因與疾病關(guān)系的數(shù)據(jù)，其旨在促進(jìn)環(huán)境化學(xué)品對(duì)人類(lèi)健康影響的理解[5]。通過(guò)該數(shù)據(jù)庫(kù)可以獲得環(huán)境中化學(xué)物質(zhì)的潛在作用靶點(diǎn)，所以文章在梳理納西東巴古籍有關(guān)“穢”及“除穢”方法的原始記載的基礎(chǔ)上，借助該數(shù)據(jù)庫(kù)并結(jié)合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的分析方法探討納西族除穢所使用的主要植物發(fā)揮作用的分子機(jī)制。

1 東巴經(jīng)中對(duì)“穢”及“除穢”的記載

穢邪是納西醫(yī)藥病因認(rèn)識(shí)的一個(gè)重要特征，是一種具有致病性和傳染性的邪氣。在東巴經(jīng)中，“穢”的象形文字寫(xiě)作“”或“”，是不干凈、不吉利的泛指[6]。根據(jù)東巴經(jīng)《大解穢經(jīng)·穢氣的出處來(lái)歷》（未出版）的記載，穢的產(chǎn)生是一個(gè)多因素的結(jié)果，包括了天時(shí)、地理等因素，即天時(shí)異常、地氣異常、尸氣毒氣、社會(huì)因素等。其封面圖如圖1所示。穢的產(chǎn)生可因天時(shí)之乖違（“天上的白云和黑云相交合產(chǎn)生了穢，白風(fēng)和黑風(fēng)相交合產(chǎn)生了穢，白雨和黑雨相交合產(chǎn)生了穢”），可因地之濕濁蒸動(dòng)[“‘敬私毒魯每的霧氣（寒濕很重的霧氣）和獨(dú)石相交合產(chǎn)生了穢”]，可因尸氣、濁氣等纏染（“村中突然死了牛和人也會(huì)產(chǎn)生穢”），可因戰(zhàn)爭(zhēng)災(zāi)禍[“‘美利董主（古籍中第一代酋主名字）殺了‘美利術(shù)主（古籍中美利董主的敵國(guó)酋主）產(chǎn)生了穢，‘高嘞高趣（崇仁利恩后第六代酋主）殺死了‘毒若妙虛（高嘞高趣的敵國(guó)酋主）產(chǎn)生了穢”]，可因近親結(jié)婚[“利恩五兄弟（遠(yuǎn)古大洪水時(shí)代人類(lèi)祖先崇仁利恩家的五個(gè)兄弟）和居命六姐妹（崇仁利恩家的六個(gè)姐妹）交合而產(chǎn)生了穢”]，同時(shí)“穢”或可經(jīng)蚊蟲(chóng)叮咬（“母豬身上飛蟲(chóng)棲，下了蟲(chóng)卵在皮上，產(chǎn)生了穢”）、性接觸等途徑傳播。

總之，納西東巴認(rèn)為“穢”的產(chǎn)生歸因于自然氣候的反常變化（干凈的霧氣和不干凈的霧氣相交產(chǎn)生）、環(huán)境衛(wèi)生不良（干凈的雨水、空氣和污穢的雨水、空氣相交產(chǎn)生，人畜死亡導(dǎo)致的致病微生物）、社會(huì)因素（如戰(zhàn)亂）等。習(xí)煜華[7]將其歸納為四個(gè)方面：一是污染環(huán)境的臟物，如垃圾、死尸、污濁的空氣等;二是危害人體健康的感染性疾病，如爛瘡等;三是生活中出現(xiàn)的反?，F(xiàn)象，如動(dòng)物感染病毒死亡等;四是違反倫理道德和風(fēng)俗習(xí)慣的行為而引起的后果，如近親結(jié)婚的害處。

除穢是納西族古老的傳統(tǒng)，在東巴經(jīng)中占據(jù)很大份量，東巴在所有的祭祀儀式開(kāi)始之前要先進(jìn)行除穢活動(dòng)[8]?！都{西東巴古籍譯注全集第22卷·禳剁鬼大儀式·給盧神沈神除穢經(jīng)》較為詳細(xì)地講述了納西先民用小葉杜鵑、大葉杜鵑、云杉、松、蒿草等5種植物（或添加其他除穢植物）制成除穢火把熏除祭祀物件、人類(lèi)的居住環(huán)境和人身上的穢氣，使穢氣消散，環(huán)境得以?xún)艋痆9]?！俺x”不僅僅存在于東巴的儀式中，也滲透在人們的日常生活中，納西族人平時(shí)也會(huì)焚燒一些除穢植物，保持環(huán)境衛(wèi)生的清潔，以預(yù)防疾病的發(fā)生。

2 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)除穢植物預(yù)防疾病的潛在靶點(diǎn)及作用機(jī)制

2.1 材料與方法

2.1.1 植物成分的獲取和靶點(diǎn)的預(yù)測(cè) 經(jīng)第四次全國(guó)中藥資源普查納西普查隊(duì)相關(guān)專(zhuān)業(yè)人員的鑒定，確定了東巴經(jīng)中5種除穢植物的基源。根據(jù)除穢植物的使用特點(diǎn)，在中國(guó)知網(wǎng)（CNKI，https：//www.cnki.net/）檢索小葉杜鵑（Rhododendron fastigiatum Franch.）、大葉杜鵑（Rhododendron wardii W.W.Smith）、云杉（Picea likiangensis（Franch） Pritz.）、松（Pinus massoniana Lams.）、蒿草（Artemisia annua Linn.）5種植物的揮發(fā)性成分;將CNKI檢索獲得的揮發(fā)性成分依次輸入CTD數(shù)據(jù)庫(kù)獲得上述揮發(fā)性成分作用的靶點(diǎn)。

2.1.2 PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及篩選核心PPI 將5種除穢植物的潛在作用靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING（https：//string-db.org/）數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建植物靶點(diǎn)PPI（protein-protein interaction）網(wǎng)絡(luò)，應(yīng)用Cytoscape 3.6.0軟件NetworkAnalyzer功能和CytoNCA插件分析拓?fù)涮卣鳎来我远戎担╠egree）大于2倍中位數(shù)，介度（betweenness）、緊密度（closeness）、度值（degree）均大于中位數(shù)為卡值提取核心PPI網(wǎng)絡(luò)及關(guān)鍵靶點(diǎn)[10]。

2.1.3 靶點(diǎn)富集分析 利用DAVID 6.8數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//david.ncifcrf.gov/）對(duì)關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行GO注釋分析、KEGG通路富集分析和蛋白相互作用富集分析。根據(jù)P值取前20的通路，利用Omicshare（https：//www.omicshare.com/）在線(xiàn)分析平臺(tái)繪制氣泡圖。

2.2 結(jié)果

2.2.1 除穢主要植物的揮發(fā)性成分及靶點(diǎn) 在CNKI僅獲得蒿（Artemisia annua Linn.）和松（Pinus massoniana Lams.）兩種植物的揮發(fā)性成分，其中蒿的揮發(fā)性成分15個(gè)[11]、松的揮發(fā)性成分13個(gè)[12]，祛除重復(fù)項(xiàng)得25個(gè)。在CTD數(shù)據(jù)庫(kù)依次檢索25個(gè)揮發(fā)性成分作用的靶點(diǎn)，僅獲得8個(gè)揮發(fā)性成分的1550個(gè)靶點(diǎn)，見(jiàn)表1所示。

2.2.2 網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析 將植物靶點(diǎn)導(dǎo)入String數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建植物靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)，應(yīng)用Cytoscape 軟件Network Analyzer功能和Cyto NCA插件分析拓?fù)涮卣鳎来我远戎担╠egree）大于38、介度（betweenness）大于160.44、緊密度（closeness）大于0.510、度值（degree）大于60為卡值提取核心網(wǎng)絡(luò)及關(guān)鍵靶點(diǎn)，獲得關(guān)鍵靶點(diǎn)164個(gè)。

2.2.3 關(guān)鍵靶點(diǎn)的富集分析結(jié)果 將164個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)導(dǎo)入DAVID進(jìn)行KEGG通路富集分析，其結(jié)果（P<0.05）涉及乙型肝炎（Hepatitis B）、FoxO信號(hào)通路（FoxO signaling pathway）、HIF-1信號(hào)通路（HIF-1 signaling pathway）、人T細(xì)胞白血病病毒1感染（HTLV-I infection）、美國(guó)錐蟲(chóng)病 （American trypanosomiasis）、TNF信號(hào)通路（TNF signaling pathway）、胰島素抵抗（Insulin resistance） 、甲型流感（Influenza A）、p53信號(hào)通路（p53 signaling pathway）、病毒致癌（Viral carcinogenesis）、弓形蟲(chóng)?。╰oxoplasmosis）、甲狀腺激素信號(hào)通路（thyroid hormone signaling pathway）等111條信號(hào)通路。

通過(guò) DAVID 中作蛋白相互作用富集分析，在protein interactions選項(xiàng)中選擇HIV_INTERACTION為背景數(shù)據(jù)，設(shè)定統(tǒng)計(jì)指標(biāo)為 P<0.05，發(fā)現(xiàn)有138個(gè)靶標(biāo)與12個(gè)HIV病毒蛋白之間具有顯著密集的相互作用。

根據(jù)P值選取排名前20的通路，利用Omicshare在線(xiàn)平臺(tái)繪制氣泡圖，如圖2所示。

3 討論

有研究[13-14]表明，煙熏消毒是非口服中藥預(yù)防控制傳染病通過(guò)空氣傳播的主要手段之一，是中國(guó)傳統(tǒng)的預(yù)防疫病的方法;中藥燃香可有效減少空氣中菌落數(shù)，達(dá)到空氣消毒的效果。由于地域和自然資源的差異，各個(gè)民族均有自己的使用經(jīng)驗(yàn)，只是焚燒的材料不同。如漢族使用蒼術(shù)、甘松、川芎、乳香、降香及北細(xì)辛等[13];彝族使用桉樹(shù)葉、側(cè)柏葉、艾葉、青蒿、野巴子、透骨草、野艾蒿等;蒙古族使用十一味云香散;壯族使用蒼術(shù)、艾葉、大葉桉等;傣族使用艾蒿、香茅草等;土家族使用艾條、大黃、茵陳、瓜蔞殼、檳榔殼等;羌族焚燒茹瑪?shù)萚15]。此外，多項(xiàng)臨床研究表明，用草藥燃燒的煙氣熏蒸皮膚病患病部位，具有祛風(fēng)除濕、殺蟲(chóng)止癢、軟堅(jiān)潤(rùn)膚、回陽(yáng)生肌、通經(jīng)活絡(luò)的功效，可用于紅斑鱗屑性皮膚病、變態(tài)反應(yīng)性皮膚病、神經(jīng)障礙性皮膚病、病毒性皮膚病等多種慢性、頑固性皮膚病的治療[16]。煙熏療法治療鼻炎、咽痛、喉炎、急慢性咳嗽、各型支氣管炎和各期慢阻肺等呼吸系統(tǒng)疾病，可有效緩解癥狀[17]。

“瘟癘”“疫癘”“瘟疫”“穢”“惡”等為古代疫病的范疇，包括了西醫(yī)學(xué)的傳染病以及一些西醫(yī)學(xué)未命名的具有傳染性和流行性的疾病[13，18]。納西醫(yī)藥中穢邪因自然氣候反常變化等氣候因素，環(huán)境衛(wèi)生不良等環(huán)境因素產(chǎn)生，且具有致病性和傳染性，可以歸屬于“疫病”范疇。與傳染病的斗爭(zhēng)經(jīng)驗(yàn)使得中醫(yī)形成了獨(dú)具特色和優(yōu)勢(shì)的疫病防治理論。疫邪與六淫共同構(gòu)成了中醫(yī)的外感病因。盡管疫邪也有風(fēng)、寒、熱、濕等性質(zhì)之不同，但疫邪顯著區(qū)別于六淫的地方在于其基本不受體質(zhì)強(qiáng)弱影響的傳染性和發(fā)病后的高度相似性[19]。林明欣等[13]基于文獻(xiàn)和數(shù)據(jù)挖掘的方法對(duì)古代非口服中藥防控經(jīng)空氣傳播的疫病方藥進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)現(xiàn)古代醫(yī)家認(rèn)為疫病的病機(jī)是感染風(fēng)邪、毒邪和蟲(chóng)邪，防控疫病主要使用辛溫藥、芳香藥、殺蟲(chóng)藥、苦寒藥。中國(guó)古代煙熏避疫方藥的功效配伍以祛風(fēng)、燥濕、殺蟲(chóng)、解毒為主[20]。

根據(jù)納西族東巴古籍的記載和第四次全國(guó)中藥資源普查納西醫(yī)藥普查隊(duì)對(duì)民間醫(yī)生的采訪(fǎng)，除穢主要植物中小葉杜鵑具有祛風(fēng)除濕、殺蟲(chóng)、止咳祛痰、暖胃止痛、消炎的功效，可以治療咳嗽、牛皮癬;大葉杜鵑具有祛風(fēng)除濕、殺蟲(chóng)、止血、止帶、消炎、殺菌的功效，可以用來(lái)治療胃痛、外傷出血、白帶異常;蒿具有清熱解毒、祛瘀止痛、殺蟲(chóng)、涼血退熱、退黃、清虛熱、除骨蒸、清熱解暑、截瘧等功效，可以治療中暑、痔瘡、感冒、瘧疾、皮膚瘙癢等;松具有祛風(fēng)除濕、殺蟲(chóng)、舒筋活絡(luò)、活血止痛、止癢、消炎生肌、醒腦安神的功效，可以用來(lái)治療支氣管炎、肺結(jié)核、眩暈、預(yù)防流行性腦脊髓膜炎等;云杉具有寧心安神的功效，可以治療癲癇、胸腹冷痛、發(fā)痧、高血壓、關(guān)節(jié)酸痛、頭痛、疝氣等。5種除穢植物基本兼具祛風(fēng)、除濕、殺蟲(chóng)、解毒的功效，契合疫病的病機(jī)，與煙熏避疫方用藥規(guī)律的研究結(jié)果一致，理論上可以用來(lái)預(yù)防疫病。

根據(jù)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析結(jié)果，KEGG通路主要包括乙型肝炎、FoxO信號(hào)通路、HIF-1信號(hào)通路、人T細(xì)胞白血病病毒1感染、美國(guó)錐蟲(chóng)病、TNF信號(hào)通路、胰島素抵抗、甲型流感、p53信號(hào)通路、病毒致癌、弓形蟲(chóng)病、甲狀腺激素信號(hào)通路等。其中一部分疾病類(lèi)通路與病毒感染相關(guān)，如乙型肝炎、病毒致癌、甲型流感、HTLV-I感染，有138個(gè)靶標(biāo)與HIV病毒的12個(gè)蛋白具有相互作用，說(shuō)明納西族除穢植物可能有一定的抗病毒作用;一部分通路和炎癥反應(yīng)相關(guān)，如FoxO信號(hào)通路[21]、HIF-1信號(hào)通路[22]、TNF信號(hào)通路，說(shuō)明納西族除穢植物可能對(duì)抗炎有一定作用。東巴經(jīng)文中記載的“穢”是對(duì)不吉利和不干凈的總稱(chēng)，自然包括細(xì)菌、病毒等不利于身體健康的有害物質(zhì)。古代納西族先民認(rèn)為，穢邪是生命活動(dòng)中疾病產(chǎn)生和傳播的源頭，因此“除穢”是東巴祭祀活動(dòng)的主要儀式，也是納西族人民的生活習(xí)俗[6]。除了進(jìn)行除穢儀式外，人們通常直接使用一些芳香類(lèi)植物制作成香燃燒，或?qū)⑵鋺覓煸诖斑吇蜷T(mén)口，或?qū)⑵渲瞥上隳译S身攜帶，通過(guò)這些植物散發(fā)出來(lái)的芳香氣味來(lái)消除細(xì)菌、病毒，避免蛇蟲(chóng)等咬傷，或愉悅心情。除穢雖然是原始宗教性質(zhì)的活動(dòng)，但實(shí)質(zhì)上是消除細(xì)菌病毒、保持環(huán)境衛(wèi)生的活動(dòng)。

綜上，納西族除穢植物可能通過(guò)多種揮發(fā)性成分作用于多靶點(diǎn)抑制病毒、調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)，發(fā)揮消毒殺菌、預(yù)防疫病的作用。文章僅基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)初步探討了納西族除穢預(yù)防疾病的合理性，但由于可納入分析的數(shù)據(jù)不充分以及研究方法的局限性，難以準(zhǔn)確評(píng)估其預(yù)防效果和作用機(jī)制，今后還需要利用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)和方法開(kāi)展深入的研究，以明確納西族除穢植物防病治病的效果和作用機(jī)理，以利于更廣泛地推廣和應(yīng)用。

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（收稿日期：2021-12-16 編輯：陶希睿）