★ 朱大誠 吳慧婷（江西中醫(yī)藥大學(xué) 南昌 330004）

白血病屬于造血系統(tǒng)惡性增殖性疾病，根據(jù)法、美、英協(xié)作組分型標(biāo)準(zhǔn)，可將其分成急性髓系白血?。ˋML）、急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL）、慢性粒細(xì)胞白血病（CML）、慢性淋巴細(xì)胞白血?。–LL）四大類。由于造血干細(xì)胞在不同階段出現(xiàn)失控性增殖、凋亡受阻等導(dǎo)致除骨髓外其他組織被大量克隆性白血病細(xì)胞累積、浸潤(rùn)，引起出血、貧血、感染和不同程度的肝、脾、淋巴結(jié)腫大等一系列臨床表現(xiàn)，嚴(yán)重者還可引發(fā)繼發(fā)性的敗血癥、高尿酸血癥等。自2010年起，在我國(guó)因癌癥死亡排序中白血病位于前十位，至2017年白血病次均總費(fèi)用持續(xù)增長(zhǎng)，年均增長(zhǎng)速度約4%［1］；放眼全球，2015年因癌癥導(dǎo)致死亡，白血病占據(jù)一半以上［2-3］。目前，臨床上治療白血病方法還是以造血干細(xì)胞移植、化療為主，使患者不僅處于被動(dòng)狀態(tài)，還要承受巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和治療帶來的副作用。以上一串串觸目驚心的數(shù)字無不提醒廣大醫(yī)務(wù)工作者，尋找高新、潛在的治療白血病手段迫在眉睫。

外泌體研究問鼎諾貝爾醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)，主要原因是其分布廣泛，并參與多種生物學(xué)功能，如代謝性疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、腫瘤生長(zhǎng)發(fā)展、血管新生等方面。最早發(fā)現(xiàn)外泌體是在免疫反應(yīng)和抵抗癌癥中起到了細(xì)胞間通訊的作用，根據(jù)外泌體種類、數(shù)目、大小和內(nèi)含物可對(duì)不同腫瘤做出初步診斷。國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究表明，外泌體可通過促進(jìn)白血病細(xì)胞增殖、輔助免疫逃逸、抑制白血病細(xì)胞自噬、促血管新生等促進(jìn)白血病的發(fā)生，在治療方面，外泌體能直接靶向造血干細(xì)胞、監(jiān)測(cè)白血病復(fù)發(fā)和耐藥狀態(tài)，還可作為藥物載體和疫苗免疫增強(qiáng)劑發(fā)揮治療白血病的作用［4-6］?；诖?，本文主要以外泌體介導(dǎo)白血病的發(fā)病機(jī)制及診斷治療為切入點(diǎn)，從上述幾個(gè)方面對(duì)外泌體介導(dǎo)白血病發(fā)展進(jìn)程展開討論。與同類綜述不同之處在于，本文搜集文獻(xiàn)較新、內(nèi)容上完整度更高、更全面，寫作初衷希望醫(yī)務(wù)工作者能通過閱讀本文從機(jī)制上規(guī)避白血病病人腫瘤細(xì)胞或體液中的外泌體給臨床治療過程中帶來的負(fù)面影響，并開拓外泌體在抗腫瘤研究中的新思路。

1 外泌體概述

1.1 外泌體的形成

1983年外泌體首次在綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞培養(yǎng)上清液中被發(fā)現(xiàn)，它是由活細(xì)胞分泌的直徑在40~100 nm且具有脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)的膜性囊泡。外泌體在人體中的分布十分廣泛，在血液、脊髓液、唾液、尿液等體液中都有其存在。外泌體膜上可以攜帶脂質(zhì)、核酸、蛋白質(zhì)等生物活性物質(zhì)，并將其傳遞給受體細(xì)胞，從而改變細(xì)胞的生理或病理功能，故外泌體又被稱為細(xì)胞間的信使［7］。外泌體的合成與分泌（見圖1）：首先由細(xì)胞膜內(nèi)陷形成內(nèi)體（A），并轉(zhuǎn)運(yùn)所需的跨膜蛋白、內(nèi)吞體分選轉(zhuǎn)運(yùn)復(fù)合體、凋亡相關(guān)基因-2受體蛋白等，將一些泛素化“貨物”以出芽形式形成一個(gè)個(gè)小囊泡，小囊泡再匯聚成大型多泡體（MVBs）（B），MVBs可直接與細(xì)胞膜融合，將小囊泡釋放到細(xì)胞外（C），這些被釋放的小囊泡即為外泌體。

圖1 外泌體的合成與分泌

1.2 外泌體的特征

在外泌體被發(fā)現(xiàn)后的十年間，其被科學(xué)家誤認(rèn)為是細(xì)胞排泄出的“垃圾”產(chǎn)物，直至1996年在抗原提呈細(xì)胞（APC）分泌的外泌體中發(fā)現(xiàn)，其可以刺激T細(xì)胞體外增殖和誘導(dǎo)體內(nèi)抗腫瘤免疫反應(yīng)。外泌體之所以能掀起科研的熱潮，和它攜帶的各種膜標(biāo)志物、活性蛋白、核酸等多種生物信息來完成細(xì)胞間通訊密不可分，在機(jī)體癌癥的發(fā)生和進(jìn)展中發(fā)揮著類似“順豐快遞”的作用，這也正是外泌體的特色所在。

外泌體中攜帶親本細(xì)胞來源的豐富的蛋白質(zhì)、DNA、mRNA、microRNA、磷脂等重要生物信息成分，主要通過三種方式參與細(xì)胞RNA轉(zhuǎn)運(yùn)、免疫應(yīng)答等生理及病理過程。一是在細(xì)胞基質(zhì)中，外泌體膜蛋白可以被具有特異性蛋白酶剪切，剪切下來的碎片作為配體與受體結(jié)合，使受體接收“新的”生物學(xué)信號(hào)。二是親本細(xì)胞蛋白可以直接與靶細(xì)胞膜蛋白結(jié)合，從而激活靶細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路。三是外泌體膜可以直接與靶細(xì)胞膜融合，釋放非特異性的蛋白質(zhì)、非編碼RNA、核酸等［8-9］。通過ExoCarta數(shù)據(jù)庫發(fā)現(xiàn)，目前構(gòu)成外泌體總共包括41 860種蛋白質(zhì)、3 408種mRNA、2 838種microRNA，其中蛋白質(zhì)的種類和含量決定了外泌體親本細(xì)胞的來源。主要常見的有組織相容性復(fù)合體（MHC）、熱休克蛋白(HSP70、HSP90等)、跨膜蛋白（CD63、CD9、CD81等）、合成MVBs的蛋白質(zhì)（ALIX、TSG101等）等［10-11］。根據(jù)外泌體所含蛋白質(zhì)種類的不同可以將外泌體進(jìn)行鑒定與分離，換句話說，以上蛋白或分子可作為外泌體的特殊標(biāo)志物，為外泌體發(fā)揮細(xì)胞間信號(hào)轉(zhuǎn)遞、抗原呈遞、免疫治療等作用帶來了可靠保障。

2 外泌體介導(dǎo)白血病發(fā)生機(jī)制

通過比較外泌體的分子成分時(shí)發(fā)現(xiàn)，來自腫瘤細(xì)胞的外泌體和正常細(xì)胞的外泌體的核酸與蛋白質(zhì)組分存在明顯區(qū)別［12］。是什么原因?qū)е逻@種差異？經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，這是因?yàn)橥饷隗w與促白血病細(xì)胞增殖、幫助其躲避免疫應(yīng)答、抑制白血病細(xì)胞自噬及促血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)等惡性生物學(xué)行為有關(guān)（見圖2）。為此，以下將圍繞外泌體是如何巧妙地通過這四個(gè)經(jīng)典途徑介導(dǎo)白血病的發(fā)生展開簡(jiǎn)要闡述。

圖2 外泌體介導(dǎo)白血病機(jī)制

2.1 促進(jìn)白血病細(xì)胞增殖

腫瘤細(xì)胞的惡性增殖是癌癥的基本特征。腫瘤來源的外泌體對(duì)親本細(xì)胞有促增殖、抗凋亡的作用。通過miRNA陣列顯示，miR-3613-3p是癌相關(guān)成纖維細(xì)胞（CAFs）外泌體中的miRNA，通過下調(diào)CAFs外泌體中miR-3613-3p可靶向調(diào)控細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子2（SOCS2）表達(dá)，從而抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移，但miRNA在CAFs外泌體中的作用和分子機(jī)制仍不清楚［13］。CLL細(xì)胞來源的外泌體富含miR-202-3p，miR-202-3p的靶基因通過Gli-Hedgehog信號(hào)通路以增加Fused抑制蛋白表達(dá)，從而輔助腫瘤細(xì)胞的生存和增殖［14］。經(jīng)實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）和蛋白印跡(WB)實(shí)驗(yàn)分析顯示，LAMA84細(xì)胞來源的外泌體通過可激活受體細(xì)胞 ERK、NF-kB和 Akt 信號(hào)通路，使抗凋亡分子BCL-w、BCL-xl和survivin的mRNA和蛋白水平升高，及使促凋亡分子BAD、BAX和PUMA降低，以便刺激白血病細(xì)胞的增殖［15］。Circ_0009910是一種新型的白血病相關(guān)環(huán)狀RNA，在HL-60和MOLM-13細(xì)胞外泌體中circ_0009910呈現(xiàn)上調(diào)趨勢(shì)，若阻斷circ_0009910可抑制HL-60和MOLM-13細(xì)胞的增殖和細(xì)胞周期進(jìn)程，同時(shí)伴有較低的B細(xì)胞淋巴瘤Bax蛋白增加［16］。另外，外泌體對(duì)兒童急性淋巴細(xì)胞白血?。≒ALL）細(xì)胞的增殖也有一定影響，通過分離PALL患者血清中的外泌體，發(fā)現(xiàn)PALL-Exo中的miR-181a呈現(xiàn)過表達(dá)情況，并能通過調(diào)控增殖基因（PCNA、Ki-67）等誘導(dǎo)白血病B細(xì)胞系的細(xì)胞發(fā)生增殖，換句話說，外泌體miR-181a抑制劑可能是治療PALL的新靶點(diǎn)（見圖2）［17］。

2.2 實(shí)現(xiàn)免疫逃逸

腫瘤免疫逃逸是指腫瘤細(xì)胞通過各種機(jī)制逃避來自機(jī)體免疫系統(tǒng)識(shí)別及攻擊，從而達(dá)到在機(jī)體內(nèi)增殖和生存的目的。白血病來源的外泌體攜帶免疫抑制分子并將其傳遞給受體免疫細(xì)胞，主要通過抑制巨噬細(xì)胞、Treg細(xì)胞、NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞功能，實(shí)現(xiàn)免疫抑制和降低抗腫瘤免疫應(yīng)答，從而幫助白血病細(xì)胞逃避機(jī)體免疫細(xì)胞識(shí)別。Hong C S等［18］開發(fā)了小鼠AML PDX模型，發(fā)現(xiàn)完全移植的AML PDX小鼠產(chǎn)生的外泌體特征與捐贈(zèng)細(xì)胞用于移植的AML患者血漿中分離的外泌體相似，移植白血病細(xì)胞產(chǎn)生攜帶人類白血病相關(guān)抗原的外泌體，AML衍生的外泌體攜帶免疫抑制蛋白傳遞給受體免疫細(xì)胞，抑制其功能。研究證實(shí)，用K562來源的外泌體處理人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）和小鼠巨噬細(xì)胞，結(jié)果表明外泌體處理BMSCs導(dǎo)致NO產(chǎn)量增加和ROS產(chǎn)量減少，以及巨噬細(xì)胞中IL-10過表達(dá)和iNOS轉(zhuǎn)錄水平的下調(diào)，調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞的氧化還原電位，引導(dǎo)巨噬細(xì)胞向腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞極化，從而影響骨髓生態(tài)位，創(chuàng)造對(duì)腫瘤有利的微環(huán)境［19］。有研究發(fā)現(xiàn)，將CLL來源的外泌體或hY4單獨(dú)轉(zhuǎn)移到單核細(xì)胞可促進(jìn)IL-6、CCL2、PD-L1的表達(dá)（見圖2），從而驅(qū)動(dòng)TLR信號(hào)有助于腫瘤細(xì)胞躲避免疫攻擊，導(dǎo)致病情發(fā)展迅猛［20］。雖然BAG6的外泌體自身就存在缺陷，但在CLL晚期患者血漿中可溶性BAG6 水平明顯升高，這可能與其促進(jìn)白血病細(xì)胞參加免疫逃逸相關(guān)［21］。

2.3 抑制自噬

自噬幾乎存在于所有真核生物中，適度的自噬有利于清除損傷的細(xì)胞器和出現(xiàn)錯(cuò)誤折疊的蛋白質(zhì)。在細(xì)胞、分子水平上，不僅絲狀偽足可以作為外泌體內(nèi)化的部位，使這些細(xì)胞突起的動(dòng)態(tài)解構(gòu)過程中內(nèi)吞作用增強(qiáng)，而且自噬相關(guān)蛋白質(zhì)復(fù)合物也能參與外泌體的發(fā)生，二者在機(jī)制上交互通信，在功能上相輔相成，對(duì)維持細(xì)胞適應(yīng)性和穩(wěn)態(tài)起著重要的作用。同K562比較，K562R（IMT）細(xì)胞中的外泌體釋放PI3K/Akt/mTOR信號(hào)靶標(biāo)和自噬活性顯著增加，達(dá)沙替尼通過下調(diào)Akt/mTOR活性，下調(diào)beclin-1和Vps34的表達(dá)，從而防止外泌體釋放和抑制自噬（見圖2），促進(jìn)對(duì)伊馬替尼耐藥的CML細(xì)胞發(fā)生凋亡［22］。自噬對(duì)白血病細(xì)胞常表現(xiàn)出雙重性，但關(guān)于其與外泌體的相關(guān)研究還有待加強(qiáng)，未來就外泌體-自噬相互作用很有可能成為攻克白血病復(fù)發(fā)和耐藥的新型策略［23］。

2.4 促血管新生

血管的新生能為癌細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)，也是癌癥惡化的標(biāo)志之一。有研究顯示，AML細(xì)胞來源的外泌體含有血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）和VEGF受體的mRNA，可以誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）表達(dá)VEGFR及促進(jìn)HUVECs糖酵解，導(dǎo)致HUVECs增殖血管重構(gòu)和獲得化療耐藥性，這些發(fā)現(xiàn)可能有助于開發(fā)針對(duì)AML來源的外泌體新的治療策略［24］。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，內(nèi)皮細(xì)胞通過攝取CLL來源外泌體后，形成管腔樣結(jié)構(gòu)能力增強(qiáng)，其機(jī)制可能與外泌體富集miR-146a、miR-155、miR-150的調(diào)控相關(guān)［25］。CLL患者的細(xì)胞內(nèi)氯離子通道蛋白1（CLIC1）顯著增加，并在CLL細(xì)胞分泌的外泌體中顯著富集，外泌體通過轉(zhuǎn)移CLIC1來調(diào)控ITGβ1-MAPK /ERK信號(hào)，加速HUVECs轉(zhuǎn)移和血管生成，提示CLIC1可能是CLL外泌體在腫瘤微環(huán)境中的治療靶點(diǎn)（見圖2）［26］。還有研究表明，CML細(xì)胞來源的外泌體可直接與內(nèi)皮細(xì)胞相互作用，促進(jìn)血管新生［27］。

3 分子標(biāo)志物參與白血病靶向診斷

現(xiàn)有白血病診斷方法不利于其早期診斷，存在誤診率高、重復(fù)性低的現(xiàn)象。同健康人比較，白血病患者血清中含有大量外泌體，并攜帶親本細(xì)胞來源的特異性的致病信息分子，如microRNA受外泌體表面膜保護(hù)，具備較好的穩(wěn)定性，因此可作為理想的分子標(biāo)志物，用于白血病的靶向診斷和預(yù)后。田淼等［28］采用solexa法對(duì)7例 AML 患者和7 例健康對(duì)照者血漿外泌體中 miRNAs進(jìn)行測(cè)序，發(fā)現(xiàn)2個(gè)新miRNAs和211個(gè)已知的差異表達(dá)miRNAs， 其 中 miR-155-5p、miR-335-5p、xxxm0038-5p及miR-451a差異顯著，通過對(duì)上述4種miRNA進(jìn)行富集分析和靶基因預(yù)測(cè)，發(fā)現(xiàn)AML 患者血漿中外泌體 miRNA特異性明顯，這一發(fā)現(xiàn)對(duì)進(jìn)一步研發(fā)AML白血病標(biāo)記物診斷和無創(chuàng)診斷方法有深遠(yuǎn)的意義。劉靜茹等［29］對(duì)提取THP-1和HL-60細(xì)胞中外泌體，并對(duì)HL-60外泌體進(jìn)行鑒定，通過流式細(xì)胞術(shù)發(fā)現(xiàn)其中存在特異性抗原分子CD81及CD63，該方法能夠快速、簡(jiǎn)便地為白血病早期診斷提供依據(jù)。AML的生物標(biāo)記物FLT3、NPM1、MMP9、IGF-IR和 CXCR4及 涉 及 白 血病復(fù)發(fā)的mRNA同時(shí)出現(xiàn)在AML外泌體中［30］。Moloudizargari M［31］發(fā)現(xiàn)在白血病患者血清中分泌更多的外泌體，其中miR-155、miR-17-5p、miR-1246和Let-7b等作為非侵入性生物標(biāo)志物呈現(xiàn)高穩(wěn)定性和特異性表達(dá)。呂云飛［32］通過qRT-PCR檢測(cè)到AML患者外周血外泌體含量明顯增高，其中Let-7b、miR-660、miR-532高表達(dá)的患者總生存期和無事件生存期相對(duì)更長(zhǎng)。Xu Y C等［33］通過納米跟蹤、深度RNA測(cè)序等技術(shù)，找到BMSCs外泌體對(duì)AML細(xì)胞的影響及其潛在的miRNA介導(dǎo)機(jī)制，在KG-1a細(xì)胞中，BMSCs來源的外泌體可能通過hsa-miR-124-5p作用，促進(jìn)細(xì)胞凋亡及抑制周期進(jìn)程，這些發(fā)現(xiàn)突出了白血病來源的外泌體在細(xì)胞表達(dá)中的貢獻(xiàn)，及其作為生物標(biāo)志物和治療策略靶標(biāo)的潛在價(jià)值。

4 外泌體在白血病治療中的作用

4.1 藥物遞送

因外泌體具有脂質(zhì)雙分子結(jié)構(gòu)，其中的miRNA可受其保護(hù)，不易被RNase水解，具有靶向性強(qiáng)、生物兼容性、高穩(wěn)定性、以及能跨越血腦屏障等獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，因此外泌體能作為較理想的藥物遞送載體［34］。迄今為止，外泌體作為藥物載體所載運(yùn)的“貨物”主要包括基因類藥物（siRNA、mRNAs及非編碼RNA等）、抗癌類藥物（紫杉醇、阿霉素）和增強(qiáng)免疫等等。Bellavia D等［35］利用HEK293T 細(xì)胞來表達(dá)與IL-3片段融合的外泌體蛋白Lamp2b，搭載伊馬替尼的IL3-Lamp2b外泌體能夠靶向作用于CML細(xì)胞并抑制體內(nèi)、外癌細(xì)胞增殖。Altanerova U等［36］研究提出，將氧化鐵納米顆粒標(biāo)記MSC后，其可以釋放含有氧化鐵的外泌體,當(dāng)腫瘤細(xì)胞內(nèi)吞該外泌體時(shí)，外部交變磁場(chǎng)誘導(dǎo)熱療后, 能發(fā)揮消融腫瘤細(xì)胞的作用。另外，關(guān)于植物外泌體的研究也在不斷深入，特別是在中醫(yī)藥抗腫瘤方面，如在人類血液中能檢測(cè)到吃過植物食物的miRNA，古言藥食同源，也許就能達(dá)到異曲同工之妙；再有通過NCBI GEO數(shù)據(jù)庫證實(shí)健康人體組織RNAseq原始數(shù)據(jù)樣本和黃芩、半枝蓮、柴胡等中藥外泌體中miRNA確實(shí)可以進(jìn)行跨界轉(zhuǎn)運(yùn)，以此發(fā)揮抗炎、抗腫瘤等多種作用，這一發(fā)現(xiàn)對(duì)于利用攜帶miRNA 中藥外泌體治療腫瘤來說也是一個(gè)新的契機(jī)［37-39］。如，外泌體能作為姜黃素載體，通過外泌體將姜黃素遞送至腫瘤細(xì)胞中以促癌細(xì)胞毒性，抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，顯著增加姜黃素生物利用度，為開發(fā)新型抗癌藥物提供依據(jù)［40-41］。

4.2 免疫療法

外泌體好似一把雙刃劍，在白血病發(fā)病機(jī)制中起著負(fù)面作用，但在治療白血病中又蘊(yùn)含巨大潛能，如外泌體已應(yīng)用于白血病的疫苗接種和作為白血病有效免疫治療劑。Yao Y等［42］基于樹突狀細(xì)胞（DC）攝取白血病細(xì)胞來源的外泌體（LEX）攜帶有親本的抗原，將L1210 白血病細(xì)胞植入DBA/2小鼠中，并分別給予L1210 白血病細(xì)胞分泌的外泌體（LEXL1210）、組成DC/LEXL1210復(fù)合體，通過分離免疫小鼠T細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)來自經(jīng)LEXL1210與DC/LEXL1210免疫小鼠的T細(xì)胞對(duì) L1210 細(xì)胞具有殺傷活性且后者更強(qiáng)。Huang F等［43］發(fā)現(xiàn)慢病毒shRNA能沉默親本白血病細(xì)胞中TGF-β1的表達(dá)，與未修飾LEX相比，LEXTGF-β1si免疫能更有效地促進(jìn)CD4+T細(xì)胞增殖和Th1型細(xì)胞因子的分泌，刺激更強(qiáng)的特異性細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞(CTL)應(yīng)答和NK細(xì)胞毒作用，對(duì)小鼠免疫接種LEXTGF-β1si后，能抑制腫瘤生長(zhǎng)和延長(zhǎng)其生存期，提示外泌體免疫疫苗在免疫治療白血病方面具有很大的潛力。Hus I等［44］在2008年證實(shí)了針對(duì)CLL的自體DC疫苗接種的潛在效果，結(jié)果顯示外周血中白血病細(xì)胞和Tregs的數(shù)量降低，且對(duì)其他惡性血液病的研究也表現(xiàn)出類似的作用。還有，外泌體在MSC中也發(fā)揮免疫抑制作用，注射MSC來源外泌體是有效的移植物宿主反應(yīng)（GvHD）治療方法，能夠減少外周血單個(gè)核細(xì)胞分泌細(xì)胞因子TNF-α、IFN-γ 和 IL-1β［45］。

5 小結(jié)與展望

綜上，本文以外泌體為主線，扼要闡明了其參與白血病的發(fā)生與發(fā)展，從機(jī)制引入，到作為生物標(biāo)志物參與到白血病靶向診斷，最后落足于藥物遞送和疫苗免疫療法。如前文所述，外泌體血管內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)外泌體攝取能力過強(qiáng)、白血病來源的外泌體通過“蒙騙”和“偽裝”手法助力腫瘤細(xì)胞躲避免疫應(yīng)答，為癌細(xì)胞創(chuàng)造更安全的增殖環(huán)境等，這些也能作為科研學(xué)者找到新的抗癌研究的切入點(diǎn)。

伴隨外泌體在科研圈嶄露頭角，對(duì)其諸多研究還有待繼續(xù)深入，就像Thery所說，現(xiàn)在對(duì)于外泌體的認(rèn)識(shí)，就好比20世紀(jì)中后期對(duì)于免疫的認(rèn)識(shí)，只知道B細(xì)胞能產(chǎn)生抗體，但無法識(shí)別與捕獲［46］。的確，現(xiàn)階段關(guān)于外泌體與血液腫瘤的研究腳步逐漸放緩，其原因主要有三。一是外泌體“表型”界定問題：盡管外泌體分離、純化方法多樣，但蛋白質(zhì)種類繁多，某些生物黏液效率低、聚合物無法上下兼容等問題給外泌體分離帶來了阻礙，外加鑒定手段及條件受限，更是難上加難；二是外泌體機(jī)制問題：如外泌體攜帶各的種蛋白質(zhì)和核酸是如何釋放和攝取的等微觀機(jī)制給人以猶抱琵琶半遮面之感，同時(shí)關(guān)于外泌體-自噬交互通信，MVBs運(yùn)輸中多種媒介物的異質(zhì)性和同一性等問題也不甚明了，另外如何大量生產(chǎn)外泌體作為藥物載體，并提高裝載效率也值得思考和研究；三對(duì)于外泌體應(yīng)用問題：白血病細(xì)胞中攜帶大量外泌體，不同種類的外泌體作為口服或瘤內(nèi)注射尚沒有使用次數(shù)和劑量標(biāo)準(zhǔn)［47］，量-時(shí)-效關(guān)系十分模糊，以及充當(dāng)生物標(biāo)志物還形成詳盡的分析以及鮮明的規(guī)律。

外泌體的研究領(lǐng)域涉及了中醫(yī)藥學(xué)、腫瘤學(xué)、微生物學(xué)、再生醫(yī)學(xué)等主要學(xué)科，諸多學(xué)科與外泌體的交叉探索，呈現(xiàn)出百花齊放的外泌體研究領(lǐng)域?！坝F千里目，更上一層樓”，借此機(jī)會(huì)筆者寄希望于學(xué)術(shù)界同仁對(duì)于外泌體的研究，如致力于提高外泌體作為納米級(jí)藥物載體裝載率、利用轉(zhuǎn)基因小鼠實(shí)驗(yàn)補(bǔ)充熒光示蹤捕捉外泌體路徑、外泌體對(duì)受體細(xì)胞的靶向調(diào)控和開發(fā)疫苗等方面的研究，為外泌體未來能廣泛應(yīng)用于臨床實(shí)踐提供科學(xué)依據(jù)和借鑒。