白東義 拉?，?圖格琴 趙若陽 陶娜拉 韓海格 丁文淇 賈紫潔 劉慧瑩 王文興 黃博光 芒 來*

(1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 動物科學(xué)學(xué)院/內(nèi)蒙古自治區(qū)馬屬動物遺傳育種與繁殖重點實驗室/農(nóng)業(yè)農(nóng)村部馬屬動物遺傳育種與繁殖科學(xué)觀測實驗站/內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)馬屬動物研究中心，呼和浩特 010018；2.內(nèi)蒙古中蘊馬產(chǎn)業(yè)集團，錫林浩特 026000；3.錫盟鑲黃旗農(nóng)牧和科技局,013250)

內(nèi)蒙古自治區(qū)具有深厚的蒙古族馬文化底蘊，其傳統(tǒng)馬業(yè)在全國占有重要地位，被世人譽為馬的故鄉(xiāng)。目前內(nèi)蒙古擁有蒙古馬、阿巴嘎黑馬、錫尼河馬、鄂倫春馬、三河馬、錫林郭勒馬和科爾沁馬等多個優(yōu)良品種[1-2]。蒙古馬起源于西伯利亞東部草原，是世界上最古老的馬品種之一。蒙古馬經(jīng)過漫長的自然選擇和人工選育，形成了抗病力強、耐嚴寒、耐粗飼、合群性好等特征，毛色種類復(fù)雜，大多數(shù)以黑、騮、青色為主，還有很多稀有毛色，如海騮、鼠灰、兔褐、沙毛、花毛、斑點毛等。

毛色是研究生物遺傳形成性狀的重要因素之一，色原體和氧化酶是馬匹毛色的相關(guān)物質(zhì)，色原體可以分為黑色素和含鐵色素，二者普遍存在于毛的皮質(zhì)內(nèi)或皮膚表皮的色素細胞中，黑色素在氧化酶的作用下形成黑色，黑色素的分布和比例決定動物毛色。斑點毛色的表型豐富多樣，有均勻分布于全身的斑點，也有遍布全身的毯狀分布的斑點，而且斑點的大小、形狀各不相同[3-4]。毛色不僅是品種和個體識別的重要依據(jù), 而且還可以作為某些疾病篩查的有力工具和手段。

馬對人類具有巨大的經(jīng)濟價值，馬的毛色一直是被忽視的重要領(lǐng)域?？茖W(xué)技術(shù)和馬產(chǎn)業(yè)主導(dǎo)了家馬進化過程中產(chǎn)生多樣化的毛色，馬的毛色和質(zhì)地與其健康狀況息息相關(guān)。目前國外馬產(chǎn)業(yè)非常發(fā)達，進而科學(xué)研究也迅速發(fā)展，近些年我國馬產(chǎn)業(yè)也不斷壯大，但科學(xué)研究相對滯后。目前研究表明，小眼畸形關(guān)聯(lián)轉(zhuǎn)錄因子(Microphthalmia associate transcription factor，MITF)、原癌(Proto-oncogenec-kit，KIT)和酪氨酸酶家族成員(TYR、TYRP1和TYRP2)等基因均參與動物毛色形成與調(diào)控[5]。馬的斑點是一個稀有毛色，在距今25 000年左右的馬DNA樣品中檢測到豹斑點表型是由LP(Leopard complex spotting)基因座所決定[6]。相關(guān)研究表明，一個等位基因Lp決定馬匹是否會產(chǎn)生豹點毛表型，修飾基因決定斑點分布于馬體的哪些部位或區(qū)域。至于馬體上斑點的大小、形狀以及顏色等也受另一些修飾基因的控制。Lp純合子與雜合子具有不同表型，當?shù)任换蛐蜑長pLp的純合子時馬體上的斑點會變少，白色區(qū)域大。而等位基因型為Lplp的雜合子時馬體上的斑點較多，白色區(qū)域小。豹斑點毛馬多樣的表型形成與主效基因和修飾基因的相互作用有關(guān)[7-8]。阿帕盧薩馬TRPM1基因的基因型為LP/LP或LP/lp時，豹斑點毛色表型便會表現(xiàn)出來[9]。Pattern1型(或稱PATN1型)是決定豹斑點毛色表型的重要修飾位點，PATN1稱顯性遺傳，決定馬匹出生時白色區(qū)域超過60%時起重要作用[10]。

毛囊是皮膚重要的附屬器官，是可再生的，具 有復(fù)雜的形態(tài)和結(jié)構(gòu)，由上皮組織和真皮組織組成，是毛發(fā)的加工廠。而毛發(fā)的大小和形狀是由位于毛囊底部的特殊成纖維細胞組成的毛乳頭決定的，而毛發(fā)的顏色則是由散布在基質(zhì)細胞之間的黑色素細胞產(chǎn)生的色素所決定的。目前研究者們對豬、牛、羊、鼠等動物毛囊研究較多，而對于馬的毛囊結(jié)構(gòu)研究相對較少。內(nèi)蒙古自治區(qū)馬遺傳資源豐富，并且蒙古馬具有豐富的毛色類型，是研究馬毛色形成機理的最佳模型。尤其近些年，馬的觀賞旅游業(yè)不斷興起，外觀表型成為選育的一個焦點。因此，了解馬的毛發(fā)生長、周期和色素合成，進一步解析蒙古斑點馬毛色類型是如何被調(diào)控并能夠維持各自相互獨立的毛囊周期和形態(tài)發(fā)生，對進一步選育斑點馬具有重要的科學(xué)意義。本研究以蒙古斑點馬胎兒為研究對象，基于以往對馬屬動物毛色的研究基礎(chǔ)上，將毛色表型與轉(zhuǎn)錄組表達譜進行關(guān)聯(lián)分析，目的是明確候選基因在毛色形成過程中產(chǎn)生的差異機理，以及相互之間的關(guān)系。對多個與毛色可能相關(guān)的候選基因進行分子生物學(xué)和轉(zhuǎn)錄組學(xué)鑒定，為今后選育蒙古馬(斑點)環(huán)節(jié)中對毛色的篩選具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

本研究選取3匹5～6月齡具有典型斑點表型的蒙古馬胎兒，實驗馬匹來源于內(nèi)蒙古自治區(qū)包頭市達茂旗，分別采集蒙古馬(斑點)胎兒體軀黑、白斑點區(qū)域皮膚組織樣品。共采集兩部分樣品，一部分樣品儲存在-80 ℃冰箱，另一部分樣品使用4%的多聚甲醛固定后經(jīng)過乙醇梯度脫水，最后儲存在100%無水乙醇中，在4 ℃冰箱中保存。

1.2 試驗方法

1.2.1石蠟切片及HE染色

為觀察蒙古馬(斑點)胎兒黑毛色區(qū)域和白毛色區(qū)域皮膚組織的表型信息，將黑色和白色毛區(qū)域皮膚組織樣品放入二甲苯使其透明，經(jīng)石蠟過渡和包埋后，進行修整和冷卻。使用切片機對皮膚毛囊組織進行縱切得到7 μm厚度的石蠟切片，經(jīng)過烘干后得到黑色毛區(qū)域和白色毛區(qū)域的皮膚組織切片。接下來進行HE染色，將烘干后的組織切片放入二甲苯中進行脫蠟，經(jīng)過乙醇梯度水化后，使用蘇木素和伊紅對皮膚組織切片進行染色，再經(jīng)過乙醇梯度脫水、二甲苯清洗后，使用中性樹膠封片，晾干后放在顯微鏡下進行觀察。

1.2.2RNA提取及文庫構(gòu)建

使用Trizol提取法(Invitrogen, CA, USA)利用動物組織RNA純化試劑盒TRK1002(LC Science, Houston, TX)對蒙古馬(斑點)18個胎兒皮膚組織樣品提取總RNA，使用Gen 5 CHS軟件對RNA質(zhì)量進行分析。從各樣品中取3 μg總RNA用于構(gòu)建cDNA文庫。然后使用mRNA-Seq樣品制備試劑盒(Illumina, San Diego, USA)生成測序文庫，將構(gòu)建好的文庫使用Illumina NextSeq500進行測序。

1.2.3轉(zhuǎn)錄組表達譜數(shù)據(jù)分析

首先用Cutadapt軟件對測序的原始數(shù)據(jù)進行去除接頭污染、去除低質(zhì)量、去除與核糖體RNA匹配和含N比例大于5%的Reads，并得到高質(zhì)量的Reads。使用HiSAT2軟件將高質(zhì)量的Reads和馬參考基因組(EquCab3.0)進行比對分析。接下來使用StringTie軟件利用 RNA-Seq 比對結(jié)果組裝轉(zhuǎn)錄本并得到胎兒期蒙古馬皮膚組織表達譜[11]。利用DEseq2軟件進行基因差異表達分析[12]，差異顯著標準：P<0.01和log2|Fold change|>1，得出與毛色差異相關(guān)基因。利用R語言的GOseq包對差異表達基因進行分析。使用DAVID (https:∥david.ncifcrf.gov/)在線軟件對差異表達基因進行GO 和KEGG富集分析。

1.2.4實時熒光定量PCR驗證

根據(jù)轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)結(jié)果篩選了3個(TYR、TYRPI和DCT)與毛囊發(fā)育及色素合成相關(guān)的差異表達基因，通過NCBI中GenBank檢索馬的TYR、TYRPI和DCT基因序列，利用NCBI在線引物設(shè)計功能設(shè)計特異性引物(表1)并選擇GAPDH基因做為內(nèi)參基因，然后將設(shè)計好的引物送Invitrogen公司合成。使用HiScript?II qRT SuperMix for qPCR (Vazyme)從總RNA中生成cDNA。然后用4條引物和SYBR?Premix Ex TaqTMII (TaKaRa)在CFX96 Real-Time PCR檢測系統(tǒng)(Bio-Rad)上進行qPCR。

表1 馬毛色相關(guān)基因引物信息Table 1 Primers of genes related to horse hair color

2 結(jié)果與分析

2.1 蒙古馬(斑點)胎兒體軀皮膚黑白區(qū)域表型采集

蒙古馬(斑點)胎兒皮膚組織HE染色結(jié)果顯示：如圖1(a)所示，蒙古馬(斑點)胎兒皮膚毛囊結(jié)構(gòu)完整，可以清晰地觀察到毛囊的毛乳頭、毛母質(zhì)、毛干、內(nèi)根鞘和外根鞘等。其中黑色素在胎兒黑色皮膚組織表皮里沉積很明顯，毛乳頭、毛母質(zhì)部位均有黑色素沉積。相反如圖1(b)所示，白色被毛對應(yīng)的皮膚組織表皮處、毛囊毛乳頭和毛母質(zhì)部位均無黑色素沉積。另外，經(jīng)過統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)蒙古馬(斑點)胎兒黑色被毛皮膚組織和白色被毛皮膚組織的毛囊長度、毛囊密度以及毛乳頭寬度均無顯著差異。

黑色箭頭所指部位是表皮。The green arrow indicates the epidermis.圖1 蒙古馬(斑點)胎兒毛囊形態(tài)及色素分布Fig.1 The hair follicle morphology and pigment distribution in Mongolian spotted horse embryo

2.2 蒙古馬(斑點)胎兒體軀黑白區(qū)域皮膚轉(zhuǎn)錄組分析

蒙古馬(斑點)胎兒6個RNA測序文庫總共獲得約283 M(Million)原始讀段(Raw reads)。其中，6個 RNA測序文庫各獲得53 327 604、46 708 144、44 016 494、48 127 492、45 391 060和46 040 764條原始下機Reads，去除低質(zhì)量Reads 和接頭污染以及其他污染，最終獲得約275 M有效數(shù)據(jù)(Valid Data)，分別為51 799 584、45 302 790、42 752 334、46 746 492、44 071 174和44 589 520 條高質(zhì)量的Reads。從測序數(shù)據(jù)質(zhì)量結(jié)果來看，總Q20的比例均在99.97%，總Q30的比例在97.79%～98.179%，總GC含量在50%～52%(表2)，可以說明本研究中的測序數(shù)據(jù)堿基讀取的準確率較高。

表2 蒙古馬(斑點)胎兒RNA-seq數(shù)據(jù)質(zhì)控Table 2 Summary of RNA-seq data

利用DEseq2軟件對蒙古馬(斑點)胎兒黑色和白色皮膚組織文庫中所有 mRNA進行顯著性差異分析，并對2個部位之間進行差異表達分析。使用Benjamini-Hochberg法校正P<0.05，log2|Fold change|>1作為有效差異表達的閾值。如圖2所示，共鑒定出660個基因的表達量在黑白2個不同顏色皮膚組織中存在顯著差異(P<0.05)，其中197個基因在蒙古馬(斑點)胎兒黑色皮膚組織表達量較高，59個基因在蒙古馬(斑點)胎兒白色皮膚組織表達量較高。

圖2 胎兒期蒙古馬差異基因火山圖Fig.2 Volcanic map of differential genes in Mongolian horse during fetus

利用R語言的GOseq包進行差異表達基因GO富集分析，選取P<0.05的GO條目。使用DAVID (https:∥david.ncifcrf.gov/)在線軟件對差異表達基因進行GO 和KEGG富集分析。結(jié)果顯示，差異表達的197個基因被注釋到28條GO通路上，其中被注釋到10條生物學(xué)途徑通路，8條細胞組成通路，10條分子功能通路(圖3)。差異表達基因及GO通路顯著富集到的GO term分別為膜的組成部分(Integral component of membrane)、角蛋白絲(Keratin filament)、細胞(Cell)、膠原三聚體(Collagen trimer)、蛋白質(zhì)細胞外基質(zhì)(Proteinaceous extracellular matrix)、衛(wèi)星細胞分化的負調(diào)控(Negative regulation of satellite cell differentiation)、肌管分化的調(diào)節(jié)(Regulation of myotube differentiation)、角質(zhì)形成細胞分化的調(diào)節(jié)(Regulation of keratinocyte differentiation)、黑色素生物合成過程(Melanin biosynthetic process)、膠原原纖維組織(Collagen fibril organization)，胎兒骨骼系統(tǒng)形態(tài)發(fā)生(Embryonic skeletal system morphogenesis)、蛋白聚糖代謝過程(Proteoglycan metabolic process)、前/后模式規(guī)范(Anterior/posterior pattern specification)、組織穩(wěn)態(tài)(Tissue homeostasis)、序列特異性DNA結(jié)合(Sequence-specific DNA binding)、表皮的結(jié)構(gòu)成分(Structural constituent of epidermis)、銅離子結(jié)合(Copper ion binding)、乙酰膽堿結(jié)合(Acetylcholine binding)、糖蛋白結(jié)合(Glycoprotein binding)、類固醇激素受體活性(Steroid hormone receptor activity)和細胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)成分(Extracellular matrix structural constituent)。

圖3 差異表達基因的GO功能富集分析Fig.3 GO enrichment analysis of differentially expressed gene

為進一步了解差異表達基因，本研究對蒙古馬(斑點)胎兒差異表達基因進行了KEGG分析。結(jié)果如圖4所示，蒙古馬(斑點)胎兒顯著富集的通路有12個(P<0.05)，這些通路分別為黑色素生成(Melanogenesis)、胃酸分泌(Gastric acid secretion)、酪氨酸代謝(TYRosine metabolism)、癌癥中蛋白聚糖(Proteoglycans in cancer)、Wnt信號通路(Wnt signaling pathway)、非小細胞肺癌(Non-small cell lung cancer)、調(diào)節(jié)干細胞多能性的信號通路(Signaling pathways regulating pluripotency of stem cells)、蛋白質(zhì)消化吸收(Protein digestion and absorption)、ECM-受體相互作用(ECM-receptor interaction)、阿米巴病(Amoebiasis)、血小板活化(Platelet activation)和粘著斑(Focal adhesion)。

圖4 蒙古馬(斑點)胎兒差異表達基因KEGG富集分析Fig.4 KEGG analysis of differentially expressed gene in Mongolian spoted horse embryo

通過差異表達分析篩選得到的蒙古馬(斑點)胎兒黑色、白色皮膚組織中的差異基因做出韋恩圖，如圖5所示，結(jié)果發(fā)現(xiàn)蒙古馬(斑點)胎兒黑色皮膚組織中197個基因表達，59個基因在白色皮膚中表達，兩者之間沒有共表達基因。

圖5 蒙古馬(斑點)胎兒黑白皮膚組織mRNA差異表達韋恩圖Fig.5 Differential expression of mRNA in black and white skin tissues of Mongolian spotted horse embryo by Venn diagram

2.3 實時熒光定量PCR驗證

酪氨酸酶是黑色素合成過程中的關(guān)鍵酶，TYR、TYRP1和DCT是黑色素合成下游的關(guān)鍵基因，本研究對胎兒期蒙古馬(斑點)黑色皮膚組織中顯著表達的3個基因TYR、TYRP1和DCT利用RT-qPCR技術(shù)進行了 mRNA 定量表達驗證，如圖6所示，RT-qPCR結(jié)果與轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果表達趨勢一致，表明轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)結(jié)果可信。

圖6 mRNA-seq和qRT-PCR驗證Fig.6 mRNA-seq and qRT-PCR validation

3 討 論

由于胎兒皮膚組織與母體子宮直接接觸，毛發(fā)較難清理干凈，這會引起RNA污染并影響最終測序結(jié)果。為避免這種情況可在捕獲去除過程中添加一部分原核的核糖體探針來減輕污染。另外還需重新采集一次樣本，在取樣時將表皮用生理鹽水或使用PBS清洗之后再放入液氮凍存[13]。

毛囊是哺乳動物被毛皮膚附屬器官，具有周期性再生功能，其性狀和組織結(jié)構(gòu)決定了動物被毛的品質(zhì)和數(shù)量。毛囊形態(tài)發(fā)生產(chǎn)生的被毛可以抵御外界環(huán)境變化，被毛附著在皮膚最外層，具有防御、保護和信息交流功能[14]。蒙古馬(斑點)毛囊結(jié)構(gòu)與其他哺乳動物毛囊結(jié)構(gòu)基本一致，主要由毛干和毛根兩部分構(gòu)成。李歡樂等[15]對雙峰駝胎兒期皮膚毛囊及其附屬結(jié)構(gòu)發(fā)生發(fā)育的研究中提到雙峰駝3月胎齡時，全身皮膚已具有完整的顆粒層和生發(fā)層結(jié)構(gòu)，并且具有不同程度發(fā)育的毛囊原始體，從毛發(fā)生到毛遍布體表約需5個月。本研究中HE染色觀察發(fā)現(xiàn)蒙古斑點馬胚胎從5～6月胎齡，其毛囊結(jié)構(gòu)基本完整，但6月胎齡的胎兒除了尾巴和睫毛外其他部位的毛發(fā)均未有發(fā)生到體表外的現(xiàn)象。蒙古馬毛囊只有一個出口，其毛囊結(jié)構(gòu)與刺猬等動物相似，屬于非復(fù)合毛囊。

動物的被毛顏色由毛囊中的黑色素細胞決定。黑色素是在黑素小體發(fā)育過程中由各種蛋白質(zhì)產(chǎn)生。黑素體是黑色素細胞中的細胞器，可以合成和運輸黑色素[16]。人的黑白頭發(fā)是由毛球是否有正常的黑色素生物合成以及黑色素細胞向角質(zhì)形成層轉(zhuǎn)移所決定[17]。蒙古馬(斑點)胎兒體軀有大小分布不均的毯狀斑點，可能由于缺乏TRP-2的表達影響了銀位點的產(chǎn)物[18]。這可能是蒙古馬(斑點)胎兒黑色斑點部位毛囊有色素沉積的原因。

轉(zhuǎn)錄組技術(shù)可以從細胞或者組織中獲取所表達的全部轉(zhuǎn)錄本，這些轉(zhuǎn)錄本可以表現(xiàn)出機體各種細胞類型、生理狀態(tài)、組織類型或不同生長階段下所表達的全部基因。本研究通過轉(zhuǎn)錄組分析篩選得到109個基因在黑色皮膚組織中表達。包括TYR、TYRP1和DCT基因，蒙古馬(斑點)胎兒的斑點表型可能與這3個基因有直接聯(lián)系。在GO富集分析中TYR和TYRP1在生物途徑過程中主要注釋在黑色素生物合成過程(Melanin biosynthetic process)中，可能說明二者在蒙古馬胎兒階段就已經(jīng)開始發(fā)揮作用產(chǎn)生黑色素使胎兒階段的蒙古馬皮膚發(fā)生改變，另外二者在分子功能上注釋到銅離子結(jié)合(Copper ion binding)，銅離子微量元素和黑色素的合成密切相關(guān)。銅元素是刺激酪氨酸酶活性的重要物質(zhì)，能夠促進黑色素功能的恢復(fù)和再生。在KEGG功能注釋中發(fā)現(xiàn)TYR、TYRP1和DCT基因在酪氨酸新陳代謝(Tyrosine metabolism)過程中，調(diào)控黑色素生成的密切相關(guān)基因是酪氨酸酶基因家族(TYR，TYRP1,DCT)。TYR是調(diào)控黑色素生成的關(guān)鍵酶。TYR催化2個主要的反應(yīng)：酪氨酸羥基化生成3,4-l-二羥基苯丙氨酸，和 dopa 氧化生成多巴醌。TYR、TYRP1和TYRP2均直接參與了黑色素的合成。三者都在黑素小體發(fā)育的III期發(fā)揮作用，黑素小體蛋白基因PMEL是控制毛色的主要候選基因之一[19]。多巴醌是一種高活性的中間體，通過一系列復(fù)雜的氧化還原反應(yīng)最終形成黑色素[20]。當TYR活性高時，合成真黑色素。相反，活性不高時合成褐黑素[21]。

毛色主要由黑色素的合成和分布決定，黑色素是皮膚、毛球和眼睛顏色色素沉著的主要原因[22]。在細胞水平上，黑色素在黑色素細胞中合成，黑色素細胞有規(guī)律地散布在基底角質(zhì)。黑色素細胞的發(fā)育和黑色素形成受多種基因調(diào)控。本研究中KEGG功能富集在Wnt/β-catenin信號通路，Wnt通路不僅僅可調(diào)控毛囊的生長發(fā)育并且對毛囊黑色素的生成也起到了重要作用。例如Wnt3a基因過表達后,可以通過促進MITF、TYR、TYRP1和PMEL基因表達的方式,來調(diào)控黑色素的表達[23]。并且過表達Wnt3a能夠誘導(dǎo)神經(jīng)嵴干細胞增殖，通過依賴Sox10和內(nèi)皮素 3 (END3) 調(diào)控神經(jīng)嵴干細胞向黑色素母細胞分化，最后生成黑色素細胞[24]。有研究表明SFRP5基因能夠抑制PIG1細胞中酪氨酸酶活性和黑色素生成,并通過抑制Wnt/β-catenin信號通路下調(diào)小眼畸形相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子(Microphthalmia-associated transcription factor, MITF)及其靶蛋白的表達[25]。小眼畸形轉(zhuǎn)錄因子是黑色素細胞發(fā)育和黑色素形成的主要調(diào)控因子[26-27]。MITF促進了TYR、TYRP1和DCT的表達[28]。MITF的表達和功能對于動物生產(chǎn)多種顏色的毛纖維具有關(guān)鍵作用。楊姍姍等[29]研究表明microRNA-5110通過靶向結(jié)合Wnt1和MLPH調(diào)控毛色基因MITF、TYR、TYRP1和TYRP2以及轉(zhuǎn)運基因MyosinVa和Rab27a的表達而影響小鼠毛色表型變化。因此可以進一步表明在黑色素的合成中不僅僅是Wnt信號通路中的基因可以直接調(diào)控黑色素的合成，還有其他非Wnt信號的基因和非編碼RNA通過Wnt通路來影響黑色素的合成。

本研究中通過HE染色對胎兒期蒙古馬毛囊組織進行觀察，發(fā)現(xiàn)黑色素在胎兒期已經(jīng)發(fā)生沉積，經(jīng)過篩選和分析胚胎白色和黑色皮膚組織中的差異基因，發(fā)現(xiàn)TYR、TYRP1和DCT基因?qū)γ晒虐唿c馬表型形成相關(guān)，這對于蒙古斑點馬的育種環(huán)節(jié)和篩選毛色起到十分重要的作用。在后續(xù)的工作中，可對蒙古斑點馬一年中不同月份不同部位皮膚毛囊進行研究，確定蒙古斑點馬不同部位皮膚毛囊在各月份所處的毛囊周期，對參與蒙古斑點馬被毛色素沉積的microRNA和LncRNA深入挖掘。

4 結(jié) 論

胎兒期蒙古馬(斑點)黑色皮膚組織和白色皮膚組織中的色素分布有明顯的差異，黑色素細胞主要分布于黑色皮膚組織表皮和毛囊毛球部位。經(jīng)過轉(zhuǎn)錄組篩選出差異基因256個，其中197個基因在蒙古馬胎兒黑色皮膚組織表達量較高，59個基因在蒙古馬胎兒白色皮膚組織表達量較高。TYR、TYRP1和DCT等基因主要表達在胎兒期蒙古馬(斑點)黑色皮膚組織中，黑色素生成和Wnt信號通路等信號通路都與毛色生成有關(guān)。