蔡沖，閆洪林，唐曉倩，張奇,2,3,4,5，張文,2,3,4,5*，李培武,2,3,4,5*

（1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所，湖北 武漢， 430062；2.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部油料作物生物學(xué)與遺傳育種重點實驗室，湖北 武漢， 430062；3.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部生物毒素檢測重點實驗室，湖北 武漢， 430062；4.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部油料產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險評估實驗室（武漢），湖北 武漢， 430062；5.國家農(nóng)業(yè)檢測基準(zhǔn)實驗室（生物毒素），湖北 武漢， 430062）

抗體（antibody）作為免疫系統(tǒng)的核心材料一直備受關(guān)注，傳統(tǒng)的單克隆抗體（monoclonal antibody，mAb）、多克隆抗體（polyclonal antibody，pAb），以及近年來興起的基因工程抗體在農(nóng)業(yè)和生命科學(xué)等領(lǐng)域占據(jù)舉足輕重的位置。納米抗體（variable domain of heavy chain of the heavy chain antibody,VHH）作為基因工程抗體的一種，由于具有特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性高、產(chǎn)量高、耐受有機(jī)溶劑等優(yōu)點得到突飛猛進(jìn)的發(fā)展[1，2]。駱駝科動物（單峰駱駝、雙峰駱駝、羊駝等）體內(nèi)既存在傳統(tǒng)的單克隆抗體，又含有一種結(jié)構(gòu)和功能都比較特殊的重鏈抗體（heavy chain antibodies, HCAbs）。HCAb 由抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域和恒定結(jié)構(gòu)域組成。而駝源納米抗體就是由駱駝科動物血清中提取的HCAb，其中的抗原結(jié)構(gòu)域，不含有輕鏈和第一常數(shù)結(jié)構(gòu)域（the first constant domain,CH1），僅含有重鏈可變區(qū)的自然結(jié)構(gòu)域的一種工程抗體[3～5]。

本文總結(jié)了納米抗體國內(nèi)外研究進(jìn)展，旨在介紹其結(jié)構(gòu)、生化特性以及其在農(nóng)產(chǎn)品真菌毒素檢測中的應(yīng)用，以期為納米抗體的充分開發(fā)和利用，特別是為其在農(nóng)產(chǎn)品真菌毒素檢測方面的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 納米抗體的結(jié)構(gòu)

納米抗體為目前發(fā)現(xiàn)的尺寸最小的天然抗原結(jié)合片段，分子量僅為15 kDa，是傳統(tǒng)單克隆抗體分子量（150 kDa）的十分之一，小于同為基因工程抗體的單鏈抗體（single-chain fragment variable, scFv,分子量為27 kDa）和抗原結(jié)合片段（fragment antigen binding, Fab, 分子量約為57 kDa），其結(jié)構(gòu)如圖1 所示。納米抗體直徑為2.5 nm，高度為4 nm。折疊的VHH 由9 條β 鏈組成，這些β 鏈組成一個四鏈β 折疊和五鏈β 折疊，由互補(bǔ)決定區(qū)（complementary determining region, CDR）和骨架區(qū)（fragment region,FR）內(nèi)存在的二硫鍵連接[6]。VHH 結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)緊湊的扁長型，類似于橄欖球，形成一個凸?fàn)罨パa(bǔ)表位，VHH 具有強(qiáng)大的抗原結(jié)合能力，可以輕松地接觸到蛋白表面的空洞或裂隙[7,8]，而這些空洞或者裂隙是傳統(tǒng)單克隆抗體無法接觸到的。

大體上VHH 的結(jié)構(gòu)與抗體重鏈可變區(qū)（variable region of heavy chain, VH）相似，但也存在些許差異：

（1）VH 上FR2 區(qū)的高度保守的疏水氨基酸（Val37，Gly44，Leu45和Trp47）分別被親水和（或）更小的氨基酸取代，一般為Phe37、Glu44、Arg45 和Gly47，分別對應(yīng)于圖1 納米抗體結(jié)構(gòu)FR2 區(qū)域紅色標(biāo)注的四個特征氨基酸。這些疏水氨基酸通常參與傳統(tǒng)抗體輕鏈和重鏈的組裝過程中，因此重塑此段結(jié)構(gòu)可以提高納米抗體的溶解度并減少聚集[6,9,10]。

圖1 單克隆抗體、單鏈抗體、抗原結(jié)合片段、重鏈抗體和納米抗體結(jié)構(gòu)示意圖Fig.1 Schematic diagram of the structure of monoclonal antibody,scFv,Fab,heavy chain antibody and nanobody

（2）納米抗體CDR 區(qū)較長，特別是CDR3 區(qū)，在駱駝科動物中平均長度為16 個氨基酸，而人和鼠VH 的CDR3 區(qū)分別為14 和12 個氨基酸，這通常被認(rèn)為是彌補(bǔ)缺少的輕鏈部分，以提供足夠大的區(qū)域結(jié)合抗原[11]。對VHH 和抗原結(jié)合物進(jìn)行X 衍射分析，結(jié)果表明CDR3 區(qū)為抗原抗體結(jié)合的主要貢獻(xiàn)部分[12]，并且CDR3 區(qū)有助于納米抗體和抗原形成穩(wěn)定的絡(luò)合物，類似于常規(guī)抗體與抗原的結(jié)合。而且納米抗體更易于識別抗原某些隱蔽表位，例如酶的活性位點，較長的CDR3 區(qū)可以形成一個突出的環(huán)狀結(jié)構(gòu)，從而使納米抗體可以結(jié)合特殊的構(gòu)象表位[8,13,14]。例如，有人認(rèn)為這些突出的環(huán)可能對靶向活性位點裂隙和隱秘的病毒表位具有特殊識別效果[15]。

（3）在許多的駝源納米抗體中，往往在CDR1 區(qū)和CDR3 區(qū)之間有二硫鍵的存在，有少數(shù)情況也位于CDR3 區(qū)和FR2 區(qū)之間[16]。此二硫鍵可能會限制CDR 區(qū)的柔韌性，可以實現(xiàn)更強(qiáng)的相互作用；也有報道稱，此二硫鍵可以使納米抗體識別更多的表位[10]。

2 納米抗體的生化特性

2.1 高親和力

VHH 與scFv有所區(qū)別，scFv是通過PCR技術(shù)擴(kuò)增在B細(xì)胞中成熟的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的外顯子隨機(jī)組裝而成，而VHH 則是通過存在于外周B淋巴細(xì)胞的外顯子直接通過PCR 技術(shù)擴(kuò)增即可獲得一個緊密的、較高親和力的抗體。VHH 獲得的動力學(xué)kon和koff速率常數(shù)范圍分別為105～106M-1·s-1和10-2～10-4s-1，因此納米抗體可以在納摩爾甚至是皮摩爾范圍內(nèi)表現(xiàn)出親和力表位，這意味著納米抗體較傳統(tǒng)抗體或者其它基因工程抗體有相當(dāng)或更高的親和力[12,17,18]；另一種解釋方法為，納米抗體結(jié)構(gòu)中的CDR1 區(qū)和CDR3 區(qū)相連接的二硫鍵會明顯降低結(jié)合物的熵值，從而使得納米抗體具有較高親和力[8]。

2.2 高穩(wěn)定性

VHH 與多克隆抗體相比，各個生產(chǎn)批次之間相對穩(wěn)定，沒有較大的波動。另外，一般情況下VHH具有較高的穩(wěn)定性，在4℃可以保存幾個月，在-20℃的溫度下可以保存更長的時間，與抗原的結(jié)合能力不受影響[9]。Zhang[19]等將納米抗體與單克隆抗體進(jìn)行熱穩(wěn)定性的比較，研究結(jié)果表明，納米抗體在80℃加熱60 min 后仍保留有30%的活性，而單克隆抗體在80℃加熱10 min 后與抗原的結(jié)合能力全部喪失。并且有研究表明，納米抗體較單克隆抗體和單鏈抗體的優(yōu)勢在于當(dāng)溫度下降時，納米抗體可以恢復(fù)天然構(gòu)象，而其它抗體構(gòu)象改變是不可逆的[1,20]。同時，He等[21]探究在不同有機(jī)溶劑處理下納米抗體和單克隆抗體的活性變化，結(jié)果表明納米抗體對甲醇、丙酮、乙腈和二甲基亞砜的耐受性強(qiáng)于單克隆抗體。

2.3 易表達(dá)

單克隆抗體是大型多聚體蛋白質(zhì)，需要進(jìn)行翻譯后修飾。因此，單克隆抗體生產(chǎn)需要在動物體內(nèi)完成，通常需要大量的哺乳動物以及繁瑣的純化步驟，從而導(dǎo)致昂貴的生產(chǎn)成本并限制其發(fā)展。相反，納米抗體可以在微生物系統(tǒng)（如大腸桿菌、釀酒酵母和畢赤酵母）、哺乳動物細(xì)胞體系或植物中高水平表達(dá)[22]。例如大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)，細(xì)菌每20 min 可復(fù)制一次，一般的培養(yǎng)時間為15 h，每升的培養(yǎng)基中可以獲得幾毫克的產(chǎn)量[23]，He 等[21]使用E.coliTOP 10F′表達(dá)系統(tǒng)純化后的納米抗體產(chǎn)量為4.2 mg/L；在酵母表達(dá)系統(tǒng)中可以獲得更高的產(chǎn)量，Chen 等[24]使用P. pastoris表達(dá)系統(tǒng)純化后的納米體產(chǎn)量為51.71 mg/L。

2.4 其它性質(zhì)

納米抗體具有簡單的基因序列，適宜于改造與修飾，從而實現(xiàn)某些特定的需求。由于納米抗體的FR2 區(qū)域被四個親水氨基酸所取代，因此納米抗體具有高親水性，較VL 更易形成雙價或多價的偶聯(lián)形式[25]。例如，F(xiàn)an[26]等將納米抗體以24聚體的方式在磷酸鐵蛋白上展示，形成一個新型的平臺，并命名為fenobody。透射電鏡分析結(jié)果顯示，納米抗體以6×4 束的排列方式圍繞在鐵蛋白的表面，此種結(jié)合方式較常規(guī)的納米抗體不僅在空間結(jié)構(gòu)上更加靈活，而且有更高的親和力，且親和力提高約180倍。

根據(jù)晶體學(xué)研究表明，抗原的結(jié)合表面是平坦或者凹入的，納米抗體的表面有一個凸起的抗原結(jié)合位點，使得它們能夠結(jié)合凹入的或者以其它方式結(jié)合受到嚴(yán)重阻礙的抗原的表面，這種能力使得納米抗體可以充當(dāng)酶抑制劑，可以識別更加隱蔽的表位，這是其它種類抗體所達(dá)不到的[8]。

駱駝科VHH 與人VH 具有高度的同源性，駝源納米抗體在動物實驗和臨床試驗中均未引起動物或者人類的免疫反應(yīng)，這意味著納米抗體較單克隆抗體更加適合作為治療藥物[5]。另外，納米抗體表現(xiàn)出更強(qiáng)的藥物代謝能力、更好的透過血腦屏障的能力，再次驗證了納米抗體的巨大潛力[11,27]。

3 納米抗體在農(nóng)產(chǎn)品檢測中的應(yīng)用

3.1 酶聯(lián)免疫吸附測定法

酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA）是指以酶作為標(biāo)記物，利用抗原和抗體之間免疫結(jié)合反應(yīng)為基礎(chǔ)的固相吸附測定方法。根據(jù)抗原和抗體性質(zhì)的不同，常見的ELISA方法包括直接法、間接法、雙抗體夾心法、競爭抑制法等。ELISA 是一種操作方便，可以用于大規(guī)模篩選、省時省力的研究方法，根據(jù)納米抗體的體積小特性，對其進(jìn)行加工修飾，可以建立方便、快捷且高靈敏的ELISA檢測技術(shù)。Houwelingen[28]等通過使用赭曲霉毒素A（ochratoxin A, OTA）完全抗原（OTABSA）免疫羊駝，篩選到與OTA特異性相結(jié)合的納米抗體，通過建立競爭ELISA測定其靈敏度（half-maximum inhibition concentration, IC50）為12 ng/mL。除了傳統(tǒng)形式上的ELISA 檢測方法外，目前有許多學(xué)者聚焦在納米抗體的修飾上，通過將納米抗體與其它信號標(biāo)簽融合實現(xiàn)高靈敏的ELISA 檢測（表1）。Sun[29]等描述了納米抗體與AviTag 標(biāo)簽融合并使用生物素-鏈霉親和素擴(kuò)增（biotin-streptavidin-amplified, BA）ELISA 法，高靈敏、高精準(zhǔn)地檢測谷物中OTA。此方法較基于納米抗體ELISA 方法的靈敏度提高了4 倍，與液相色譜質(zhì)譜法（high performance liquid chromatography-mass spectrometry,HPLC-MS）相比顯示出良好的一致性，可以應(yīng)用于實際樣品的檢測。Sun[30]等將抗OTA 特異性納米抗體與堿性磷酸酶（alkaline phosphatase,AP）融合表達(dá)，融合蛋白既保留了納米抗體與抗原之間特異性結(jié)合能力又具有酶促活力。為監(jiān)測水稻中的OTA 含量，建立一步競爭ELISA 法檢測，所建立方法的IC50為0.57 ng/mL，檢出限（limit of detection,LOD）為0.059 ng/mL，分別較基于納米抗體ELISA 分別提高了1.1 和2.7倍。

抗體表面主要有三種決定簇：同種型決定簇（isotypic determinant）、同種異型決定簇（allotypic determinant）和獨特型決定簇（idiotypic determinant）。根據(jù)丹麥科學(xué)家Jerne提出的免疫網(wǎng)絡(luò)學(xué)說，抗體的獨特型決定簇可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗獨特型抗體，此抗體和靶分析物競爭一抗的相同結(jié)合區(qū)域，這樣的抗體稱之為抗獨特型抗體[31]。通過文庫篩選到的抗獨特型納米抗體可以用于替代高毒抗原以及標(biāo)準(zhǔn)品的使用，減少對操作人員的危害同時也避免了對環(huán)境造成的二次污染，便于建立安全、無毒的實驗環(huán)境，具有廣闊的應(yīng)用前景。Wang[23]等使用黃曲霉毒素B1（aflatoxin B1,AFB1）單克隆抗體免疫羊駝，建立免疫噬菌體展示文庫，通過生物淘選策略從文庫中篩選到可以與AFB1單克隆抗體特異性結(jié)合的納米抗體。使用篩選到的納米抗體作為包被抗原，建立農(nóng)產(chǎn)品中AFB1的競爭ELISA 檢測方法，所建立方法對AFB1的IC50為0.16 ng/mL，對黃曲霉毒素B2（aflatoxin B2,AFB2）、黃曲霉毒素G1（aflatoxin G1,AFG1）和黃曲霉毒素G2（aflatoxin G2, AFG2）的交叉反應(yīng)分別為90.4%、54.4%和37.7%。因此所建立的方法可以用于花生或飼料中總黃曲霉毒素進(jìn)行鑒定。Zhao[32]等利用淘選出的AFB1的特異型納米抗體（Nb28）作為“抗原”，從商品化的12肽庫中篩選到與Nb28 相結(jié)合的納米抗體作為Nb28 的模擬表位，即AFB1的抗獨特型納米抗體（命名為ME17）。利用ME17 和Nb28 開發(fā)了一種快速磁珠定向競爭ELISA（magnetic beads-based directed competitive ELISA,MB-dcELISA）。同時抗獨特型納米抗體還可以替代小分子真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)品，Wang[33]等使用AFB1抗獨特型納米抗體（VHH 2-5）替代AFB1標(biāo)準(zhǔn)品，通過建立VHH 2-5 與AFB1之間的定量轉(zhuǎn)換方程，定量測定農(nóng)產(chǎn)品中AFB1含量。

3.2 免疫聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction,PCR）是一項利用DNA 復(fù)制原理，在生物體外復(fù)制特定DNA 片段的核酸合成技術(shù)。這項技術(shù)可以不依賴大腸桿菌或者酵母菌等生物體，在短時間內(nèi)實現(xiàn)目的基因大量擴(kuò)增。免疫聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（immuno-PCR,IPCR）則是將免疫學(xué)技術(shù)與PCR 技術(shù)相結(jié)合形成的一種全新的免疫檢測方法，其原理與ELISA 方法相似。ELISA 方法是利用顯色深淺來定量，而IPCR 技術(shù)則是利用擴(kuò)增DNA 分子為分析目標(biāo)物，根據(jù)擴(kuò)增目的片段的量進(jìn)行痕量分析，往往靈敏度更高，檢測限更低[34,35]。

Ji[36]等通過從天然噬菌體展示文庫中篩選到與OTA 單克隆抗體相特異性結(jié)合的納米抗體，即OTA抗獨特型納米抗體。采用此納米抗體噬菌體形式建立了非毒素IPCR 的定量檢測方法應(yīng)用于農(nóng)產(chǎn)品中OTA 的檢測。該檢測方法的LOD 為4.17 pg/mL（表1）。此方法較于噬菌體ELISA 的檢出限提高了9 倍。同樣，Liu[37]建立OTA 的IPCR 檢測方法，LOD值為3.7 pg/mL，線性范圍為0.01～1000 pg/mL。此方法與常規(guī)ELISA 相比具有良好的一致性，可以實現(xiàn)谷物中OTA的定量檢測。

表1 納米抗體在農(nóng)產(chǎn)品真菌毒素檢測中的應(yīng)用Table 1 Application of nanobodies for determination of mycotoxins in agriculture products

Lei[38]等基于AFB1抗獨特型納米抗體的M13 噬菌體及其編碼DNA 設(shè)計特異性引物，建立準(zhǔn)確定量檢測農(nóng)產(chǎn)品中AFB1的IPCR 方法，檢測靈敏度比傳統(tǒng)的噬菌體ELISA 提高了4 倍，且以玉米、大米、花生等黃曲霉毒素污染的主要農(nóng)作物為檢測樣本，驗證了該方法的有效性。為了解決農(nóng)產(chǎn)品多種真菌毒素混合污染同步檢測技術(shù)難題，Ren[39]等建立了一種抗獨特型納米抗體噬菌體展示介導(dǎo)IPCR方法，編碼抗獨特型納米抗體的特定DNA 序列用于設(shè)計PCR 擴(kuò)增引物，此方法用于同時測定谷物中總黃曲霉毒素和玉米赤霉烯酮（zearalenone,ZEN），其檢測結(jié)果與高效液相色譜法（high performance liquid chromatography,HPLC）具有較高的一致性。

3.3 免疫傳感器法

近幾年中，免疫傳感器（immunosensor）因其小巧、方便、易于使用并且能夠在現(xiàn)場即時檢測而受到了廣泛的關(guān)注與應(yīng)用。免疫傳感器是一種將生物信號轉(zhuǎn)換為可識別信號的分析設(shè)備。免疫傳感器通常由三個部分組成：嫁接到傳感器表面的配體，該配體可以通過特定的相互作用識別目標(biāo)；將轉(zhuǎn)換器表面的生物信號轉(zhuǎn)化為可識別的物理信號；放大并分析信號的檢測器[40,41]。

Pan[42]等基于納米抗體分子量較小的特點和納米材料的電化學(xué)特性，開發(fā)了一種針對AFB1小分子直接、高靈敏檢測的電化學(xué)免疫傳感器。與使用單克隆抗體制備的免疫傳感器相比，此免疫傳感器的線性范圍擴(kuò)大了兩個數(shù)量級，靈敏度提高了10 倍，具有可重復(fù)性和高穩(wěn)定性。Liu[43]等建立一種基于納米抗體的免疫傳感器，與辣根過氧化物酶串聯(lián)體修飾的雜交鏈反應(yīng)信號放大系統(tǒng)相結(jié)合，實現(xiàn)了對AFB1的快速、超靈敏的檢測。在最佳的條件下，免疫傳感器的LOD 為68 fg/mL，線性范圍為0.5～10 ng/mL。此傳感器與其它常見的小分子真菌毒素?zé)o交叉反應(yīng)，且具有良好的穩(wěn)定性。生物傳感器具有響應(yīng)快速、高度自動化、支持現(xiàn)場檢測等優(yōu)點，因此建立與不同新材料相結(jié)合的檢測手段，以期拓寬對農(nóng)產(chǎn)品中真菌毒素超靈敏檢測的研究。

3.4 側(cè)向流免疫分析法

側(cè)向流免疫分析（lateral flow immunoassay,LFIA）是現(xiàn)場檢測真菌毒素的一種重要手段，與其它檢測手段相比最顯著的一個優(yōu)點是不需要大型儀器的支撐，僅需要可攜帶的小型儀器或肉眼便可以實現(xiàn)結(jié)果的判定。側(cè)向流免疫分析適用于現(xiàn)場檢測、操作方便、靈敏度高、成本低、可以批量生產(chǎn)，因此得到了較為廣泛的應(yīng)用[44]。

農(nóng)產(chǎn)品中真菌毒素多為混合污染，因此建立農(nóng)產(chǎn)品中多種真菌毒素的同步檢測技術(shù)是十分必要的。Yan[45]等建立了一種基于量子點/量子點微球（quantum dots/quantum dot microbread, QDs/QB）多重免疫層析法（multiplex immunochromatographic assay, mICA），用于對伏馬毒素B1（fumonisin, FB1）、ZEN 和OTA 高靈敏度、多組分同步檢測。選擇QD和QB 作為熒光基因指示劑，與抗真菌毒素的單克隆抗體偶聯(lián)。此外，將FB1、ZEN 和OTA 的抗獨特型納米抗體與麥芽糖結(jié)合蛋白（maltose binding protein,MBP）的可溶性單價融合體作為模擬包被抗原噴涂于檢測線。采用此種檢測方法可以在10 min內(nèi)得到結(jié)果，對于FB1、ZEN 和OTA 的視覺檢測限分別為0.25 ng/mL、3.0 ng/mL 和0.5 ng/mL。經(jīng)驗證，此方法具有良好的準(zhǔn)確性、可重復(fù)性和實用性，適用于現(xiàn)場快速檢測。Tang[46]等為同時檢測玉米或玉米制品中AFB1和ZEN，使用兩種毒素的抗獨特型納米抗體與新型的Eu/Tb(III)納米球相偶聯(lián)，并將納米球作為標(biāo)記物。建立了時間分辨熒光免疫紙層析（time-resolved fluorescence immunochromatographic assay, TRFICA）同步檢測方法，方法對于AFB1和ZEN 的IC50分別為0.46 ng/mL 和0.86 ng/mL，相比較使用兩種毒素對應(yīng)單克隆抗體所建立的TRFICA方法靈敏度分別提高了18.3和20.3倍。

3.5 其它方法

Tang[47]等認(rèn)為納米抗體中的色氨酸殘基可以用于激發(fā)檢測OTA 和赭曲霉毒素B（ochratoxin B,OTB）的受體熒光。因此，建立了一種非競爭性、均相熒光共振能量轉(zhuǎn)移（fluorescence resonance energy transfer, FRET）免疫分析方法，用于同時檢測OTA和OTB。在最佳條件下，基于納米抗體的FRET 方法對OTA 和OTB 的檢出限分別為：0.06 ng/mL 和0.12 ng/mL。且與其類似物交叉反應(yīng)率可以忽略不計，在加標(biāo)回收試驗中有良好的準(zhǔn)確度。Tang[48]等研制出一種快速現(xiàn)場檢測谷物中OTA 的免疫分析方法。此方法是將納米抗體與堿性磷酸酶融合后固定在聚偏氟乙烯（polyvinylidene fluoride, PVDF）膜上，對OTA 進(jìn)行一步定性的視覺檢測，檢測過程可在6 min 中內(nèi)完成，并證明此方法可以用于實際樣品檢測。

4 結(jié)論與展望

農(nóng)產(chǎn)品安全關(guān)系到人民生命健康以及產(chǎn)業(yè)高質(zhì)量發(fā)展。農(nóng)產(chǎn)品的種、收、貯、運的各個環(huán)節(jié)均容易受到真菌毒素的污染，不僅造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失還容易影響人畜健康。因此，迫切需要建立快速、靈敏的檢測手段以用于檢測農(nóng)產(chǎn)品真菌毒素的污染情況。免疫學(xué)檢測手段的快速發(fā)展使得這種需要成為可能，抗體作為免疫學(xué)檢測的核心材料更是得到了突飛猛進(jìn)的發(fā)展。在分子克隆和表面展示技術(shù)快速發(fā)展的推動下，已研制出多種納米抗體應(yīng)用于農(nóng)產(chǎn)品真菌毒素檢測。本文綜述了納米抗體的特性及在農(nóng)產(chǎn)品真菌毒素檢測中的應(yīng)用，具體分析了納米抗體的結(jié)構(gòu)和生化性質(zhì)，比較分析了酶聯(lián)免疫吸附測定法、免疫聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法、免疫傳感器法、側(cè)向流免疫檢測法等在農(nóng)產(chǎn)品真菌毒素檢測中的應(yīng)用，以期為農(nóng)產(chǎn)品真菌毒素檢測與監(jiān)測提供參考。在目前的實際工作中，納米抗體在小分子分析方面的性能與傳統(tǒng)抗體相當(dāng)，易于適應(yīng)開發(fā)快速、高靈敏性檢測痕量分析物的方法。但是，由于真菌毒素均為小分子物質(zhì)，從展示文庫中淘選到理想的納米抗體具有一定的難度與挑戰(zhàn)，阻礙了納米抗體的發(fā)展。因此，在免疫學(xué)與生物學(xué)的基礎(chǔ)上，需要進(jìn)一步探索和開發(fā)具有豐富多樣性、大容量的展示文庫構(gòu)建手段；快速、廉價、高效的納米抗體篩選技術(shù)；高靈敏、高特異性納米抗體的制備技術(shù)，以適應(yīng)于農(nóng)產(chǎn)品真菌毒素檢測與監(jiān)測的廣泛需求，并朝向自動化與智能化的方向發(fā)展。