常楠

乙型肝炎是一種常見的臨床病癥，發(fā)病后可引發(fā)全身性反應(yīng)，常見如黃疸、消化道反應(yīng)、肝區(qū)明顯疼痛、肝脾腫大以及肝外纖維化等，少數(shù)患者會伴隨發(fā)熱，此種疾病的病程通常都比較長，且遷延難愈，如果得不到及時、有效的治療，將逐步進展為慢性肝硬化，嚴(yán)重者甚至轉(zhuǎn)為重型肝炎、肝細胞癌等嚴(yán)重疾病，嚴(yán)重危害到患者的身體健康及生命安全[1]。目前，臨床尚未研發(fā)出可以根治此疾病的特效藥物，疾病死亡率較高，且疾病確診時間越晚，臨床預(yù)后越差，因此，早診斷、早治療是改善患者臨床預(yù)后的關(guān)鍵，但是乙肝病毒的變異性比較強，早期難以發(fā)現(xiàn)，加上早期發(fā)病時無典型臨床癥狀，極容易被忽視，導(dǎo)致治療延誤，對疾病預(yù)后造成不良影響，因此，尋找一種科學(xué)、準(zhǔn)確的早期疾病診斷方法，及時檢出病毒感染，確診疾病，對患者疾病預(yù)后改善有積極作用[2]。血清學(xué)檢驗是當(dāng)前臨床用于乙肝炎病毒檢測的常用方法，常見如用電化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)（electrical chemiluminescent immunoassay，ECLIA）、酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）等，且多數(shù)研究認(rèn)為ECLIA檢驗的臨床應(yīng)用效果更優(yōu)于ELISA[3]。基于此，文章對比了乙肝病毒血清學(xué)檢驗中ECLIA和ELISA的應(yīng)用效果，現(xiàn)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

摘選110例2020年3月—2021年3月于醫(yī)院就診疑似為乙肝病毒感染的患者，現(xiàn)以隨機抽取的方式進行對等分組，A組（n=55）男30例，女25例；年齡33～74歲，平均年齡（48.35±3.42）歲；B組（n=55）男28例，女27例；年齡32～75歲，平均年齡（48.29±3.38）歲；此研究在取得醫(yī)院倫理委員會授權(quán)后開展，組間基線數(shù)據(jù)比較后差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

入組標(biāo)準(zhǔn)：入組患者均存在肝臟腫大、腹水、惡心及肝區(qū)疼痛等臨床表現(xiàn)；無其他肝??；所有患者均表示自愿加入研究，并簽署知情協(xié)議。

排除標(biāo)準(zhǔn)：并發(fā)心、肺、腎等重要器官嚴(yán)重病變者；精神或者認(rèn)知異常，溝通交流有明顯障礙者；處于妊娠或是哺乳期女性。

1.2 方法

A組采用ELISA，具體方法為：于晨起空腹?fàn)顟B(tài)下，采集受檢者肘靜脈血液樣本，劑量為5 mL，采集完成后，以3 000 r/min的速度進行離心處理，離心時間為10 min，然后提取出分離血清開展血清學(xué)檢驗；取酶聯(lián)免疫吸附試驗試劑，將其置于室溫環(huán)境當(dāng)中，30 min后，提取血液樣本，將其加入到微孔反應(yīng)條當(dāng)中進行封鎖處理，之后置入到恒溫水浴箱當(dāng)中，置放1 h，取出反應(yīng)條，去除條上存留液體之后，重復(fù)進行沖洗5次，再次置入到水浴箱當(dāng)中，保存30 min后，將其取出，滴入終止液，進行陽性結(jié)果檢測。

B組采用ECLIA，具體方法為：于晨起空腹?fàn)顟B(tài)下，采集受檢者肘靜脈血液樣本，劑量為5 mL，采集完成后，以3 000 r/min的速度進行離心處理，離心時間為10 min，之后提取出分離血清進行血清學(xué)檢驗，將分離血清置入到聚苯乙烯試管當(dāng)中，以100μL的辣根過氧化酶實施抗體標(biāo)記，再將其置入到恒溫環(huán)境內(nèi)，保存2 h之后，采用磷酸鹽緩沖鹽水（phosphate buffer saline，PBS）作為緩沖液（廠家：北京生物制品研究磷酸鹽平衡生理鹽水所，國藥準(zhǔn)字：S10850002，規(guī)格：250 mL）實施重復(fù)沖洗3次，然后提取0.1 mol/L的氫氧化鈉（廠家：深圳市博林達科技有限公司，生產(chǎn)批次：20130425A，規(guī)格：0.1 mol/L）與30 mol/L的魯米諾（供應(yīng)商：上海源葉生物科技有限公司，貨號：S19197-100g，規(guī)格：30 mol/L）加入，放置10 min左右，采用發(fā)光儀對血清學(xué)相關(guān)指標(biāo)的陽性結(jié)果進行測定。

1.3 觀察指標(biāo)

經(jīng)計兩組受檢者的乙型肝炎病毒核心抗體（hepatitis B virus core antibody，HBcAb）、乙型肝炎病毒表面抗體（hepatitis B virus surface antibody，HBsAb）、乙型肝炎病毒表面抗原（hepatitis B virus surface antigen，HBsAg）、乙型肝炎病毒e抗體（hepatitis B virus e antibody，HBeAb）以及乙型肝炎病毒e抗原（hepatitis B virus e antigen，HBeAg）等血清指標(biāo)陽性檢出率進行統(tǒng)計，各項指標(biāo)的陽性結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)[4]為：（1）ECLIA：將臨界值指數(shù)（cut off index，COI）比值作為檢測結(jié)果，檢驗后，如果HBsAg、HBeAg兩項指標(biāo)COI值≥1.0時，則將最終的結(jié)果判定為陽性；若乙型肝炎病毒e抗體（HBeAb）、乙型肝炎病毒核心抗體（HBcAb）兩項指標(biāo)的COI＜1.0，可將結(jié)果判定為陽性檢出，而抗-HBs指標(biāo)值≥10 IU/L時，即可將結(jié)果判定為陽性檢出。（2）ELISA：檢測結(jié)果采用S/CO代表，當(dāng)HBsAg、HBeAg及抗-HBs三項指標(biāo)的S/CO值≥1.0時，則最終結(jié)果判定為陽性檢出；當(dāng)抗-HBe、抗-HBc兩項指標(biāo)的S/CO值＜1.0時，則最終結(jié)果判定為陽性檢出。

以實時熒光定量PCR檢驗（real-time quantitative polymerase chain reaction，RQ-PCR）結(jié)果作為參照，對比兩組的乙型肝炎診斷準(zhǔn)確率 [（真陽性數(shù)+真陰性數(shù)）/總病例數(shù)×100%]、靈敏度 [真陽性數(shù)/（真陽性數(shù)+假陰性數(shù)）×100%] 及特異度 [特異度=真陰性數(shù)/（真陰性數(shù)+假陽性數(shù)）×100%]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

此研究所有數(shù)據(jù)均以SPSS 22.0進行分析與處理，計數(shù)資料以（n，%）表示，行χ2檢驗；計量資料均以（±s）表示，行t檢驗，當(dāng)P＜0.05時，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對比兩種方法的乙型肝炎診斷準(zhǔn)確率、靈敏度以及特異性

經(jīng)RQ-PCR檢驗，B組55例患者中，共檢出乙型肝炎47例，A組55例患者中檢出45例，由此結(jié)果得出，B組乙型肝炎檢出準(zhǔn)確率、靈敏度以及特異度與A組對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 對比兩種方法的乙型肝炎診斷準(zhǔn)確率、靈敏度以及特異性（%）

2.2 對比兩組乙肝病毒血清學(xué)檢驗結(jié)果

檢驗結(jié)果顯示，B組HBsAg、HBeAg以及HBeAb此三項的陽性檢驗結(jié)果與對比A組明顯更高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；但對HBsAb、HBcAb兩項的陽性結(jié)果，則B組與A組對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 對比兩組乙肝病毒血清學(xué)檢驗結(jié)果 [例（%）]

3 討論

乙型肝炎是一種以肝臟為病變位置的臨床疾病，主要由乙肝病毒感染引發(fā)，是一種具備較強傳染性的疾病類型，近年來，隨著我國國民經(jīng)濟水平的提升，人們的生活方式、飲食結(jié)構(gòu)等均發(fā)生了巨大的變化，乙型肝炎的發(fā)生率也呈現(xiàn)為逐年上升趨勢，給我國國民的健康帶了巨大危害[5]。乙型肝炎的發(fā)病主要是由于患者機體感染了乙肝病毒，而對于感染患者來說，對其血清標(biāo)志物進行全面檢驗，是判定其感染情況及病情嚴(yán)重程度的主要依據(jù)，比如其血清當(dāng)中的HBsAg指標(biāo)顯示為陽性時，則可以認(rèn)為此例患者已經(jīng)進入感染階段中，而發(fā)生HBsAg感染之后，其機體內(nèi)部會隨之產(chǎn)生一定量的抗-HBs抗體，這種抗-HBs可以發(fā)揮良好的保護作用，所以如果此項指標(biāo)檢測出陽性，則可以判定患者的機體已經(jīng)開始產(chǎn)生免疫力；另外患者受到乙型肝炎感染時，其肝細胞會產(chǎn)生一定量的HBeAg，因此，如果此項標(biāo)檢驗結(jié)果顯示為陽性，則表示患者已經(jīng)進入了病毒的活躍復(fù)制期，這個時間的病毒具備極強的傳染性，當(dāng)其受到HBeAg的刺激，則機體就會產(chǎn)生抗-HBe，所以，如查抗-HBe檢驗結(jié)果顯示為陽性，則表明乙型肝炎的傳染性開始逐步減弱，也說明患者的病情已經(jīng)有所緩解[6-7]。

就目前來說，臨床用于乙肝病毒血清學(xué)檢驗的方法比較，而這其中又以酶聯(lián)免疫吸附法、電化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)最為常用，在乙肝病毒學(xué)清學(xué)檢驗當(dāng)中均發(fā)揮出了良好的果，從而在臨床中得到廣泛應(yīng)用，但普遍研究顯示[8]，與酶聯(lián)免疫吸附試驗法對比，電化學(xué)發(fā)光免疫分技術(shù)在乙肝病毒學(xué)清學(xué)檢驗方面更有優(yōu)勢，不僅在檢驗的適用范圍更廣大，操作上也更加簡單，同時還具備了較好的重復(fù)性；另外，電化學(xué)發(fā)光分析技術(shù)需要的反應(yīng)時間更短，可以更加快速的獲取檢驗結(jié)果，因此，臨床認(rèn)可度相對來說更高。在乙肝病毒的早期感染時期，患者血液樣本中可檢出HBsAg，且這種異常能夠維持的有效時間比較長，可以直接采用電化學(xué)發(fā)光分析技術(shù)對此項標(biāo)志物的實際水平進行準(zhǔn)確檢測，從而提升病毒感染的早期檢出率[9-10]。酶聯(lián)免疫吸附法在乙肝病毒血清學(xué)檢驗中的應(yīng)用，主要是利用抗體與抗原所具備的特異性，其待檢測物能夠連接酶，并出現(xiàn)特異性的反應(yīng)，最后實現(xiàn)檢測目標(biāo)，就原理主而言包括兩方面：（1）酶與患者機體當(dāng)中存在的抗原或者是抗體可以發(fā)生連接，同時形成酶標(biāo)抗原與抗體，這種抗體有著良好的免疫活性，也保留了酶活性。（2）患者機體產(chǎn)生抗原或抗體后，能與某種固相載體表面發(fā)生結(jié)合，從而確保其活性得以維持，不易受到損傷，檢驗速度相對較快，且檢驗的成本較低，這也是此種檢驗方法得以在臨床檢驗得到廣泛應(yīng)用的主要原因，而且此方法不會對環(huán)境或者是人體造成危害，但是在檢驗的靈敏度方面略低于電化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)，檢驗中容易出現(xiàn)漏診或者假陽性現(xiàn)象[11]。

電化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)是一種比較新型的臨床檢驗方式，此種檢驗方法，對電化學(xué)發(fā)光和免疫檢驗兩種方式的優(yōu)點進行了有效結(jié)合，能夠借助于電化學(xué)發(fā)光劑對受檢者機體當(dāng)中的抗體進行標(biāo)記，再通過分離技術(shù)，對抗原、抗體進行準(zhǔn)確分離，用于乙肝病毒血清學(xué)檢測的敏感度非常高，從而大大提升了乙型肝炎的疾病檢出率。電化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)有著獨特的重復(fù)性，其對電磁鐵進行了有效利用，實現(xiàn)了檢驗操作的自動化，從而避免了人為操作可能出現(xiàn)的失誤，大大提升了檢驗操作的精確度，也避免了標(biāo)本處理不當(dāng)可能引發(fā)的溶血、污染等情況而導(dǎo)致的假陽性檢出，進一步提升了血清學(xué)相關(guān)指標(biāo)的檢出準(zhǔn)確率[12-13]。在本次研究中發(fā)現(xiàn)，B組乙型肝炎檢測準(zhǔn)確率、靈敏度以及特異度相較于A組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；B組的HBcAb、HBsAb陽性檢出率與A組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），但B組的HBsAg、HBeAb以及HBeAg陽性檢出率相較于A組則明顯更高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），表明ECLIA用于乙肝病毒血清標(biāo)志物檢驗準(zhǔn)確性相較于ELISA確實更高。

綜上所述，在乙型肝炎病毒血清學(xué)檢驗中，電化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)檢驗的準(zhǔn)確率、靈敏度以及特異度與酶聯(lián)免疫吸附試驗相當(dāng)，但前者的乙肝病毒血清學(xué)標(biāo)志物檢驗準(zhǔn)確率更高，值得推廣。