陳 歡　滕建文　韋保耀　夏 寧　黃 麗　尹世磊

六堡茶中具有膽汁酸結(jié)合能力的化學(xué)成分研究

陳 歡滕建文韋保耀夏 寧黃 麗尹世磊

（廣西大學(xué)輕工與食品工程學(xué)院，廣西 南寧 530001）

以六堡成品茶為原料，采用溶劑提取法提取不同極性部分進(jìn)行膽汁酸結(jié)合能力測(cè)試，并利用高效液相色譜法進(jìn)行主要化學(xué)成分測(cè)定。最后用相關(guān)性分析找出具有膽汁酸結(jié)合能力的主要化學(xué)成分。通過(guò)對(duì)膽汁酸結(jié)合能力與特征物質(zhì)、多酚與多糖含量的相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)六堡茶中具有結(jié)合膽汁酸能力的主要為酚類(lèi)成分，除酯型兒茶素外，沒(méi)食子酸（GA）與總酚含量也與膽汁酸結(jié)合能力有較強(qiáng)相關(guān)關(guān)系，多糖也有一定的結(jié)合膽汁酸能力。

六堡茶；膽汁酸結(jié)合能力；降脂；酚類(lèi)化合物

引言

茶葉中的化合物如茶多酚，能夠通過(guò)自身抗氧化能力或者改善機(jī)體內(nèi)部的抗氧化系統(tǒng)來(lái)抵御脂質(zhì)過(guò)氧化，從而預(yù)防心血管疾病。膽汁酸的生物合成為膽固醇的分解提供了一條重要的代謝途徑[1]。膽汁酸的肝腸循環(huán)中，在肝臟中由膽固醇合成的膽汁酸流入膽管進(jìn)入腸道，95%的膽汁酸在回腸末端被重吸收經(jīng)過(guò)門(mén)靜脈回流到肝臟，大部分膽汁酸可被肝臟一次性吸收，這些在肝臟中被重新吸收的膽汁酸對(duì)膽汁酸自身的合成起負(fù)反饋調(diào)節(jié)作用，同樣也對(duì)膽固醇的分解代謝起負(fù)反饋調(diào)節(jié)作用[2,3]。因此，茶葉中相關(guān)物質(zhì)與膽汁酸結(jié)合，從而阻礙膽汁酸的重吸收，有利于降低機(jī)體膽固醇水平。

六堡茶是廣西梧州特有名茶。六堡茶是典型的黑茶之一，為國(guó)家地理標(biāo)志保護(hù)產(chǎn)品，六堡茶因其獨(dú)特的風(fēng)味和良好的保健功能受到消費(fèi)者的喜愛(ài)。有研究報(bào)道，黑茶中的功能性成分在腸道內(nèi)影響脂類(lèi)的消化和吸收，有效地降低大鼠總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）以及低密度脂蛋白膽固醇含量（LDL-C），同時(shí)能顯著提高高密度脂蛋白膽固醇含量，達(dá)到降血脂的目的，其中六堡茶的效果特別明顯[4,5]。然而現(xiàn)在關(guān)于六堡茶降脂作用的成分并不明確，因此，研究根據(jù)六堡茶的膽汁酸結(jié)合能力來(lái)討論其降脂的功能成分值得探究，這對(duì)于六堡茶保健功能方面的發(fā)展與理論支撐具有重要意義。

綠茶屬于無(wú)發(fā)酵茶，而黑茶屬于后發(fā)酵茶。綠茶是現(xiàn)在被廣泛證明具有較強(qiáng)膽汁酸結(jié)合能力的物質(zhì)[6]。與綠茶相比，黑茶茶多酚總量下降，但在體內(nèi)仍表現(xiàn)出較高的膽汁酸結(jié)合能力[7]。發(fā)酵過(guò)程使黑茶各指標(biāo)均產(chǎn)生了變化，黑茶中的茶多酚、兒茶素、茶黃素、茶紅素、氨基酸和可溶性糖的含量較發(fā)酵前的毛茶水平均大大降低；相反，茶褐素、多糖、不溶性多酚等含量明顯增加[8,9]。后發(fā)酵過(guò)程還增加了黑茶中的咖啡因含量[10]。這些物質(zhì)的含量的變化也導(dǎo)致了其膽汁酸結(jié)合能力的變化。

黃麗[11]通過(guò)小鼠體內(nèi)模型證明了六堡茶提取物能顯著降低血脂三項(xiàng)，其乙酸乙酯相和水萃余相活性進(jìn)一步增強(qiáng)，都具有降低TC和TG，增加高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）的作用。吳正梅[12]通過(guò)模擬腸部消化，發(fā)現(xiàn)了在茶提取物中，綠茶、紅茶、六堡毛茶和六堡成品茶的膽汁酸結(jié)合量為17.92%～43.55%，六堡成品茶在結(jié)合膽汁酸能力、抗氧化能力及酶活性上強(qiáng)于毛茶。由于六堡茶是典型的黑茶之一，經(jīng)過(guò)發(fā)酵后其成分發(fā)生了顯著的化學(xué)變化，六堡茶主要具有降低脂活性作用的物質(zhì)是哪些值得進(jìn)一步研究。但目前的研究沒(méi)有從六堡茶整體上，獲得不同極性部分，研究其膽汁酸結(jié)合能力大小，這對(duì)于六堡茶具有降脂產(chǎn)品的進(jìn)一步提純與開(kāi)發(fā)是不利的。

本研究以六堡成品茶為研究對(duì)象，采用溶劑提取法獲得有效活性部分，根據(jù)課題組前期對(duì)六堡茶中茶葉水提物的指紋圖研究中確定的沒(méi)食子酸（Gallic acid，GA）、沒(méi)食子兒茶素（Gallocatechin，GC）、原兒茶素、原花青素、咖啡堿、EGCG、沒(méi)食子基兒茶素沒(méi)食子酸酯（Gallocatechin gallate，GCG）和ECG 8個(gè)共有峰的基礎(chǔ)上[13]，確定六堡茶具有膽汁酸結(jié)合能力的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。以期為六堡茶后期活性物質(zhì)的提取與功能性食品的開(kāi)發(fā)提供進(jìn)一步參考。

1 材料與方法

1.1 主要材料與試劑

六堡成品茶：由梧州中茶茶業(yè)有限公司提供。

標(biāo)準(zhǔn)品：GA，Gallic acid：沒(méi)食子酸；GC，(-)-gallocatechin：沒(méi)食子兒茶素； EGCG，(-)-epigallocatechin gallate：表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯； GCG，(-)-Gallocatechin gallate：沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯；ECG，(-)-Epicatechin gallate：表兒茶素沒(méi)食子酸酯；Caffeine：咖啡堿；Protocatechuic acid：原兒茶素；Procyanidin：原花青素；葡萄糖。以上標(biāo)準(zhǔn)品均購(gòu)于北京北京盈澤納新化工技術(shù)研究院。

其他試劑：乙二胺四乙酸（EDTA）；乙酸乙酯；氯仿；無(wú)水乙醇；福林酚；碳酸鈉；濃硫酸；苯酚；甘氨鵝膽酸；甘氨膽酸；甘氨脫氧膽酸；?；敲撗跄懰?；?；蛆Z膽酸；磷酸緩沖液；考來(lái)烯胺；鹽酸；氫氧化鈉；胰酶，以上試劑均為分析純，購(gòu)于中國(guó)國(guó)藥公司。超純水（美國(guó)Millipore 超純水機(jī)制備）。甲醇；乙腈；乙酸，以上試劑均為色譜純級(jí)別，采購(gòu)自美國(guó)Thremo fisher公司。

主要儀器與設(shè)備：5694高效液相色譜儀-2998二極管陣列檢測(cè)器：配有Empower Pro數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，美國(guó)Waters公司。電熱恒溫水浴鍋 HHS：上海博訊實(shí)業(yè)有限公司。分析天平AL204：梅特勒托利多儀器（上海）有限公司。

1.2 高效液相色譜檢測(cè)條件

高效液相色譜條件：液相柱為安捷倫 ZORBAX Eclipse Plus C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），柱溫設(shè)定為35℃。流動(dòng)相A：分別將90 mL乙腈，20 mL乙酸，2 mL EDTA-2Na溶液（20 mg/mL）加入1000 mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，過(guò)0.45 μm膜。流動(dòng)相B：分別將800 mL乙腈，20 mL乙酸，2 mL EDTA-2Na溶液（20 mg/mL）加入1000 mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，過(guò)0.45 μm膜。流動(dòng)相的流動(dòng)速率為1 mL/min。流動(dòng)相的梯度為：0 min～10 min，A：100%；10 min～20 min，A：100%～68%，B：0%～32%，保持10 min。30 min～50 min，A：100%，用于沖洗。二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)條件：檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)定為278 nm。

1.3　樣品的制備

參考張名娥等[14]的方法進(jìn)行制備。茶葉水提液：茶葉樣品粉碎至40目顆粒大小。用天平稱(chēng)量20.00 g樣品，加入200 mL蒸餾水，于沸水水浴浸提20 min，過(guò)濾，收集濾液。重復(fù)3次，合并濾液得到茶葉水提液。氯仿相：將茶葉水提液濃縮至200 mL左右并加入等體積氯仿進(jìn)行萃取，重復(fù)操作至氯仿萃取相無(wú)色，收集合并氯仿萃取相并減壓濃縮干燥得到氯仿相樣品。乙酸乙酯相：將氯仿萃余相加入等體積的乙酸乙酯萃取，重復(fù)操作至乙酸乙酯萃取相恢復(fù)原來(lái)的色澤，收集合并乙酸乙酯萃取相并減壓濃縮得到乙酸乙酯相樣品。醇沉相：將乙酸乙酯萃余相繼續(xù)加入三倍體積的無(wú)水乙醇醇沉，過(guò)濾，收集沉淀物，真空冷凍干燥得到醇沉相樣品。水余相：將剩余醇沉相上清液濃縮冷凍干燥得水余相樣品。各相回收率與提取率計(jì)算方式為：回收率=溶劑提取干物質(zhì)重量/茶葉水提液干物質(zhì)總量×100%；提取率=溶劑提取干物質(zhì)重量/提取茶樣質(zhì)量×100%。

1.4　多酚含量測(cè)定

用不同濃度的沒(méi)食子酸（10 μg/mL、20 μg/mL、30 μg/mL、40 μg/mL、50 μg/mL）所對(duì)應(yīng)的吸光度構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)（y= 0.0092x+0.0216，R2= 0.9983）。準(zhǔn)確稱(chēng)取0.10 g茶多酚樣品于燒杯中，加入不超過(guò)60℃的蒸餾水25 mL左右，充分溶解后冷卻定容至100 mL容量瓶中，即為1 mg/mL的母液，后續(xù)使用時(shí)稀釋成不同濃度（10 μg/mL、20 μg/mL、30 μg/mL、40 μg/mL、50 μg/mL、60 μg/mL）。1 mL樣品或標(biāo)準(zhǔn)品加入5 mL的10%福林酚試劑后，于3 min～8 min內(nèi)加入4 mL 7.5%的碳酸鈉溶液混勻，反應(yīng)60 min后，于765 nm處測(cè)定吸光值。所有樣品重復(fù)做三次平行試驗(yàn)。

并按下式求出茶多酚含量：

式中，X：多酚含量（%）；E：根據(jù)試樣測(cè)得的吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上查得的沒(méi)食子酸相應(yīng)含量（μg/mL）；V：樣品溶液的體積（mL，本實(shí)驗(yàn)中為100 mL）；D：測(cè)得吸光度前的稀釋因子（本實(shí)驗(yàn)中稀釋因子為20）；M：樣品質(zhì)量（g）；G：試樣水分（%）。

1.5　多糖含量測(cè)定

參考王黎明等[15]的方法。稱(chēng)取20 mg、經(jīng)105℃干燥至恒重的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品, 定容至500 mL。配制成0.040 mg/mL 標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液。稱(chēng)取6 g苯酚溶于100 mL容量瓶中配成0.06 g/mL的苯酚溶液。準(zhǔn)備24只20 mL試管分成3組，分別加入蒸餾水和葡萄糖溶液配置成為不同濃度的葡萄糖溶液（10 μg/mL、20 μg/mL、30 μg/mL、40 μg/mL、50 μg/mL、60 μg/mL），然后在每只試管中加入0.06 g/mL的苯酚溶液1 mL，將各試管搖勻后, 每試管中加入5 mL 98%濃硫酸，靜置20 min后搖勻，40℃恒溫水浴15 min。490 nm處測(cè)定OD值，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)（如表3所示）。所有樣品重復(fù)做三次平行試驗(yàn)。

1.6　結(jié)合膽汁酸能力實(shí)驗(yàn)

參考Kahlon等[16]的方法。膽汁酸混合液（36 mmol/L）由甘氨鵝膽酸（9 mmol/L）、甘氨膽酸（9 mmol/L）、甘氨脫氧膽酸（9 mmol/L）、?；敲撗跄懰幔?.5 mmol/L）和牛磺鵝膽酸（4.5 mmol/L）組成，均用pH 6.8 的磷酸鹽緩沖溶液進(jìn)行配制，并于-20℃下儲(chǔ)備，使用時(shí)稀釋到0.72 mmol/L。

取5 mg樣品或5 mg考來(lái)烯胺，加入1 mL 0.01 mol/L的鹽酸溶液，在37℃下恒溫振蕩消化2 h。然后用0.02 mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值到7～7.5，隨后加入4 mL稀釋過(guò)的膽汁酸混合工作液和5 mL 10 mg/mL胰酶（用pH6.8的磷酸緩沖液進(jìn)行配制），繼續(xù)在37℃下恒溫振蕩消化2小時(shí)后，在6000 r/min 轉(zhuǎn)速下離心20 min。最后測(cè)定上清液中的膽酸鹽的含量，即為未結(jié)合的膽汁酸含量。所有樣品重復(fù)做三次平行試驗(yàn)。

1.7　數(shù)據(jù)分析

采用EXCEL2010、SPSS17.0、ORIGIN8.5軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和繪制；采用Empower pro軟件進(jìn)行高效液相檢測(cè)結(jié)果的分析和標(biāo)曲的構(gòu)建。

2　結(jié)果與分析

2.1　六堡成品茶各組分的提取與組成分析

表1可知，乙酸乙酯相以多酚為主、醇沉相以多糖為主。乙酸乙酯相中的酚類(lèi)含量高達(dá)55.69%，醇沉相的多糖類(lèi)含量高達(dá)47.07%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其六堡成品茶本身（六堡成品茶水提液的多酚多糖含量分別為17.87%和3.32%），本次溶劑萃取法相對(duì)于原提取液的總回收率約為85%，說(shuō)明本研究采用的提取方法有較好的提取效果，可以用于后續(xù)分析與進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。

表1　六堡成品茶各組分提取與含量情況

注：a～d：表示同一列數(shù)據(jù)中的顯著性差異（＜0.05）

2.2　六堡成品茶各提取物的體外膽汁酸結(jié)合能力

表2中可以看出茶葉水提液的膽汁酸結(jié)合能力為27.15%，而表中除了作為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照的考來(lái)烯胺外，具有最高膽汁酸結(jié)合能力是六堡茶乙酸乙酯相，它的膽汁酸結(jié)合能力為68.77%，說(shuō)明所采用的溶劑提取法能夠?qū)⒂行Р糠州^好的提取出來(lái)。就膽汁酸結(jié)合能力的強(qiáng)弱比較：乙酸乙酯相＞茶葉水提液＞水余相＞醇沉相＞氯仿相。

表2　六堡成品茶各提取物的體外的膽汁酸結(jié)合能力

注：膽汁酸結(jié)合率（%）=5 mg樣品的結(jié)合量/空白對(duì)照中膽汁酸含量

2.3　標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的構(gòu)建與不同樣品中特征物質(zhì)含量的分析

利用高效液相法對(duì)不同濃度的GA、GC、原兒茶素、原花青素、咖啡堿、EGCG、GCG與ECG的單標(biāo)進(jìn)行測(cè)定，構(gòu)建了峰面積與含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。利用吸光光度法對(duì)不同濃度的多酚與多糖進(jìn)行測(cè)定，構(gòu)建了吸光度值與含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。其標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)與R2值如表3所示?？梢钥闯鲞@10種成分的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)R2值均大于0.99，說(shuō)明具有良好的線(xiàn)性關(guān)系，可以用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)的含量分析。

表3　特征物質(zhì)、多酚與多糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的構(gòu)建

為了進(jìn)一步了解各相中的特征物質(zhì)含量，分別取六堡茶氯仿相、乙酸乙酯相、醇沉相和水余相樣品進(jìn)行高效液相色譜檢測(cè)。得到的結(jié)果如圖1與表4所示，圖1中可以看出各峰的分離度良好，基線(xiàn)較平穩(wěn)，符合分析要求。從表4中可以發(fā)現(xiàn)，各相化學(xué)物質(zhì)的組成與含量差別均較大。乙酸乙酯相與水余相的化學(xué)物質(zhì)比其余相更加豐富，且乙酸乙酯相的總體含量水平明顯高于水余相；六堡茶氯仿相中以咖啡堿和GA為主；醇沉相中幾乎沒(méi)有六堡茶特征化學(xué)物質(zhì)的存在。

圖注：a：氯仿相，b：乙酸乙酯相，c：醇沉相，d：水余相；1：GA，2：GC，3：原兒茶素，4：原花青素，5：咖啡堿，6：EGCG，7：GCG，8：ECG

表4　六堡成品茶氯仿相、乙酸乙酯相、醇沉相和水余相的特征物質(zhì)含量

注：-，表示在高效液相色譜檢測(cè)條件下沒(méi)有檢出或低于檢出限。

2.4　特征物質(zhì)含量與膽汁酸結(jié)合能力之間的相關(guān)關(guān)系

由表5可知，GA、EGCG、GCG、ECG為膽汁酸結(jié)合能力較強(qiáng)的共同物質(zhì)，相關(guān)系數(shù)均在0.90以上，特別是GCG（相關(guān)系數(shù)0.945）與EGCG（相關(guān)系數(shù)0.936）具有顯著相關(guān)性。在這當(dāng)中，僅有GA為非酯型兒茶素?？偠喾优c膽汁酸結(jié)合能力的相關(guān)性為0.917，證明總多酚含量與膽汁酸結(jié)合具有顯著相關(guān)性。此外，結(jié)合表2中的結(jié)果可以看出氯仿相、醇沉相和水余相也具有一定的膽汁酸結(jié)合能力。且乙醇相與水余相的膽汁酸結(jié)合能力比氯仿相更強(qiáng)，可能是因?yàn)橐掖枷嗪退嘞嘀泻休^強(qiáng)膽汁酸結(jié)合能力的EGCG、GCG與ECG。而氯仿相的膽汁酸結(jié)合能力可能主要依賴(lài)于GA的存在。

表5　六堡成品茶中特征物質(zhì)含量與膽汁酸結(jié)合能力之間的相關(guān)關(guān)系

注：*，在0.05 水平（雙側(cè)）上顯著相關(guān)。

3　討論

六堡茶具有獨(dú)特的渥堆發(fā)酵工藝，因其優(yōu)良的風(fēng)味和功效受到消費(fèi)者喜愛(ài)，降脂作用是六堡茶具有的重要功能之一。已有的報(bào)道中，kahlon[16]采用類(lèi)似的方法，研究了多種水果的膽汁酸結(jié)合能力，結(jié)果發(fā)現(xiàn)包括蘋(píng)果、菠蘿等多種水果在內(nèi)的膽汁酸結(jié)合率在1%～7%之間，而茶葉的膽汁酸結(jié)合率可達(dá)到20.55%～36.5%。說(shuō)明茶葉具有較高的降血脂開(kāi)發(fā)價(jià)值，是潛在的保健食品。為了研究茶葉具有結(jié)合膽汁酸能力的主要成分物質(zhì)，首先，采用溶劑提取法盡可能多的獲得有效活性成分。一般在茶葉提取物中，氯仿相主要含有咖啡堿等，乙酸乙酯相主要為多酚類(lèi)等物質(zhì)，醇沉相主要是多糖類(lèi)等物質(zhì)，水余相為極性類(lèi)酚類(lèi)等。通過(guò)各相提取的酚類(lèi)和多糖的數(shù)據(jù)，也可以看出六堡茶各個(gè)部分提取的效果良好，滿(mǎn)足后續(xù)實(shí)驗(yàn)的需要。

綠茶是具有較強(qiáng)的膽汁酸結(jié)合能力并且現(xiàn)在被廣泛研究的茶葉種類(lèi)，六堡毛茶是未經(jīng)過(guò)渥堆發(fā)酵的茶葉，它們常與六堡成品茶一起進(jìn)行比較。在膽汁酸結(jié)合能力方面，Wu[7]的研究發(fā)現(xiàn)水提物的膽汁酸結(jié)合能力為綠茶（45.83%）＞六堡成品茶（26.03%）＞六堡毛茶（18.86%）；Qin[9]研究了六堡成品茶水提物體外結(jié)合膽汁酸的能力為26.05%，與本研究對(duì)成品茶水提液的膽汁酸結(jié)合的數(shù)據(jù)結(jié)果（27.15%）相近。在多酚與多糖的含量方面，六堡毛茶的多酚含量為28.41%[17]，多糖含量為0.88%[18]；綠茶的多酚含量為27.52%～29.62%[19]，多糖含量1.62%～4.34%[20]，且絕大多數(shù)被測(cè)樣品的多糖含量在3%以下。本研究所測(cè)得的六堡成品茶中多酚含量為17.87%，多糖含量為3.32%。綜上，多酚含量：綠茶≈六堡毛茶＞六堡成品茶；多糖含量：六堡成品茶≥綠茶＞六堡毛茶。相似的，分析本研究中不同提取相的膽汁酸結(jié)合能力與多酚多糖的含量可以發(fā)現(xiàn)：膽汁酸結(jié)合能力：乙酸乙酯相＞茶葉水提液＞水余相＞醇沉相＞氯仿相；多酚含量：乙酸乙酯相＞氯仿相＞水余相＞茶葉水提液＞醇沉相；多糖含量：醇沉相＞水余相＞乙酸乙酯相＞氯仿相＞茶葉水提液。結(jié)合綠茶、六堡毛茶、六堡成品茶與六堡成品茶各相的膽汁酸結(jié)合能力與多酚多糖的含量不同，可以推測(cè)，多糖含量與膽汁酸結(jié)合能力的相關(guān)性不高；多酚含量與膽汁酸結(jié)合能力更相關(guān)，多酚含量越高往往也有更高的膽汁酸結(jié)合能力，但這不是絕對(duì)的，還與多酚的具體組成有關(guān)。因此，本研究將六堡茶中的特征物質(zhì)作為活性成分研究的主要對(duì)象，并參考林小珊[13]針對(duì)六堡茶中的特征等物質(zhì)的研究確定了具體物質(zhì)。

通過(guò)對(duì)各相的主要特征物質(zhì)的含量檢測(cè)結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，六堡茶乙酸乙酯相與水余相的多酚含量、種類(lèi)豐富程度和膽汁酸結(jié)合率明顯高于其他相?？梢哉f(shuō)明豐富的多酚的確具有較強(qiáng)的膽汁酸結(jié)合能力，多名學(xué)者的研究也證明了這一點(diǎn)[21,22]。但是本次研究也發(fā)現(xiàn)，多酚含量較高的氯仿相膽汁酸結(jié)合能力卻最低，這與其含有的主要成分有關(guān)。氯仿相中含有的多酚類(lèi)物質(zhì)只有GA與GC，它們都屬于非酯型兒茶素類(lèi)物質(zhì)。而已有的研究表明，酯型兒茶素（EGCG、GCG、ECG）具有更強(qiáng)的膽汁酸結(jié)合能力[23,24]，本研究的最終相關(guān)性分析的結(jié)果也證明了酯型兒茶素（EGCG、GCG、ECG）具有較強(qiáng)的膽汁酸結(jié)合能力。此外，本次研究發(fā)現(xiàn)GA雖然屬于非酯型兒茶素類(lèi)物質(zhì)，但相關(guān)性分析表明與膽汁酸結(jié)合能力中具有顯著正相關(guān)性。Craig[25]認(rèn)為綠茶中的GA可能通過(guò)減少膽固醇吸收而起到降血脂的作用。Kirana[26]研究中發(fā)現(xiàn)，GA也能有效降低膽固醇的膠束溶解度，表明GA部分也是決定膽固醇吸收活性的關(guān)鍵。因此，在膽汁酸結(jié)合能力的大小還應(yīng)對(duì)非酯型兒茶素進(jìn)行進(jìn)一步研究。

Mao[27]采用高脂血癥大鼠的動(dòng)物模型發(fā)現(xiàn)六堡茶多糖具有明顯的輔助降血脂作用，發(fā)現(xiàn)六堡茶多糖可以明顯降低高脂飲食大鼠的TC、TG和LDL-C，但對(duì)高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）無(wú)顯著影響；而且可以不通過(guò)改變動(dòng)物的攝食量、糞便排泄量來(lái)影響大鼠體重水平。Qin[9]比較了發(fā)酵前后六堡毛茶和成品茶多糖與它們精制后的多糖組分的組成、結(jié)構(gòu)、功能的差異性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)經(jīng)過(guò)發(fā)酵后，六堡毛茶多糖的抗凝血能力活性顯著優(yōu)于成品茶多糖，但膽汁酸結(jié)合能力二者相當(dāng)。本實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)醇沉相多糖含量最高（47.07%），多酚含量最低（6.90%）且不含有測(cè)定的特征物質(zhì)，但仍舊具有與水提液體相當(dāng)?shù)哪懼峤Y(jié)合能力，說(shuō)明多糖的確具有一定的輔助降血脂作用。

在本研究中，初步找出了在六堡茶中具有膽汁酸結(jié)合能力的主要物質(zhì)，但是研究?jī)H對(duì)六堡茶中的特征化學(xué)成分進(jìn)行了測(cè)定；六堡茶中還有大量其他的特征成分，還需要進(jìn)一步的探究。本研究得出的結(jié)論對(duì)于六堡茶產(chǎn)品保健功能的證明與六堡茶產(chǎn)業(yè)的健康積極發(fā)展具有一定的促進(jìn)意義。

4　結(jié)論

以課題組利用指紋圖譜技術(shù)確定的六堡茶中的特征物質(zhì)作為基礎(chǔ)，研究了不同溶劑部分膽汁酸結(jié)合能力。證明所采用的溶劑提取法能夠富集活性成分，并通過(guò)分析膽汁酸結(jié)合能力與特征物質(zhì)及多糖、多酚的相關(guān)性關(guān)系，發(fā)現(xiàn)除酯型兒茶素外，GA、總酚含量也具有較好的膽汁酸結(jié)合能力，多糖也有一定的結(jié)合膽汁酸能力?？梢酝茢?，六堡茶中具有結(jié)合膽汁酸能力的主要為酚類(lèi)成分，多糖等其它物質(zhì)具有一定協(xié)同作用。

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Study on Chemical Constituents with Bile Acid Binding Ability in Liupao Tea

Liupao finished tea was used as raw material, the different polar parts were extracted by solvent extraction, the bile acid binding ability was tested, and the main chemical components were determined by high performance liquid chromatography. Finally, the main chemical components with bile acid binding ability were found by correlation analysis. Through the correlation analysis between bile acid binding ability and characteristic substances, polyphenols and polysaccharide content, it was found that phenols had the ability to bind bile acids in Liupao tea. In addition to ester catechins, the content of gallic acid(GA) and total phenols also has a strong correlation relationship with the binding ability of bile acids, and polysaccharides also had a certain ability to bind bile acids.

Liupao tea; bile acid binding capacity; lipid-lowering; phenolic compounds

TS27; TS201

A

1008-1151(2022)02-0040-05

2021-12-19

國(guó)家自然基金項(xiàng)目（32160571）。

陳歡（1997－），女，廣西大學(xué)在讀碩士研究生，從事六堡茶微生物安全與功能成分的研究。