郁蕉竹，張宏宏，周長(zhǎng)民，崔明雪，張?zhí)鞂?shí)

高效液相色譜法測(cè)定瓜子中糖精鈉譜峰判定研究

郁蕉竹，張宏宏，周長(zhǎng)民，崔明雪，張?zhí)鞂?shí)

（沈陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，遼寧 沈陽(yáng) 110000）

針對(duì)在瓜子中糖精鈉的液相色譜法測(cè)試過程中，容易出現(xiàn)的糖精鈉假陽(yáng)性問題，通過調(diào)整流動(dòng)相比例，使樣品中糖精鈉譜峰和干擾譜峰分離，從而對(duì)樣品中糖精鈉進(jìn)行準(zhǔn)確的定性和定量。測(cè)試結(jié)果表明，采用GB 5009.28—2016 第一法，（乙酸銨）∶（甲醇）=95∶5時(shí)，瓜子樣品的譜圖中出現(xiàn)糖精鈉干擾峰；調(diào)整流動(dòng)相比例為（乙酸銨）∶（甲醇）=89∶11后，糖精鈉譜峰與干擾峰分離完全。對(duì)樣品進(jìn)行回收率和精密度實(shí)驗(yàn)，糖精鈉的回收率分別為99%，102.3%和102.2%，RSD分別為3.1%，2.3%和2.5%，能夠滿足檢驗(yàn)要求。

液相色譜法；糖精鈉；假陽(yáng)性；流動(dòng)相比例

瓜子是日常生活中常見的休閑炒貨食品。糖精鈉以其價(jià)格低廉、甜度高的特點(diǎn)被廣泛地添加到食品中，用來增加食品的甜味，提高口感度，提高人們的食欲。并且糖精鈉滲透力強(qiáng)，能完全進(jìn)入瓜子殼內(nèi)，不易吸潮，因此被廣泛地用作加工瓜子的甜味劑。糖精鈉的甜度是蔗糖的200～500倍，不參與人體代謝，對(duì)人體無(wú)營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，過量添加食用有害人體健康[1-3]。我國(guó)在GB 2760—2014《食品添加劑衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》中，規(guī)定了糖精鈉的適用范圍和使用量，其中帶殼熟制堅(jiān)果與籽類限量≤1.2 g·kg-1。

目前檢測(cè)糖精鈉的方法有液相色譜法[4-6]、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法[7]、非水滴定法[8]、分光光度計(jì)法[9]、拉曼光譜法[10]等。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的糖精鈉的檢測(cè)方法為 GB 5009.28—2016第一法液相色譜法。由于食品中成分較復(fù)雜，有些樣品采用國(guó)標(biāo)的前處理往往并不能除去所有的干擾因素。筆者在食品檢驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，采用GB 5009.28第一法[11]對(duì)瓜子中糖精鈉進(jìn)行測(cè)定時(shí)，很容易出現(xiàn)干擾峰，導(dǎo)致糖精鈉假陽(yáng)性或定量偏差的情況發(fā)生，影響最終結(jié)果的判定，在平時(shí)工作中需要引起重視。因此，瓜子中糖精鈉的測(cè)試需進(jìn)一步調(diào)整測(cè)試條件重新測(cè)定，避免造成誤判。

一般解決液相色譜干擾峰的方法有調(diào)整流動(dòng)相體系，包括改變緩沖鹽、調(diào)整流動(dòng)相比例、改變體系pH、等度調(diào)整為梯度洗脫、調(diào)整流速等；更換色譜柱，采用不同碳裁量、不同色譜柱填料粒度或者不同長(zhǎng)度的色譜柱，來提高譜峰的分離度[12]；對(duì)于一些特殊樣品，則需要在樣品前處理階段將雜質(zhì)去除。本文提供一種解決高效液相色譜法測(cè)定瓜子中糖精鈉過程中干擾峰問題的簡(jiǎn)單有效的手段。通過調(diào)整流動(dòng)相比例優(yōu)化色譜條件，筆者嘗試了多個(gè)流動(dòng)相比例，調(diào)整范圍從（乙酸銨）∶（甲醇）=95∶5 調(diào)至87∶13，每次調(diào)整2份，經(jīng)測(cè)試發(fā)現(xiàn)，在流動(dòng)相比例為89∶11時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)樣品中各個(gè)譜峰能夠得到有效的分離。且在該比例下，瓜子中待測(cè)物質(zhì)糖精鈉譜峰與干擾峰分離，采用該種色譜條件，可以對(duì)瓜子中的糖精鈉進(jìn)行準(zhǔn)確定量，得到滿意的結(jié)果。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 實(shí)驗(yàn)原理

糖精鈉是一種水溶性食品添加劑。用水充分提取后，用配有紫外檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器的高效液相色譜對(duì)其含量進(jìn)行測(cè)定。

1.2 試劑試藥

安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉混合標(biāo)準(zhǔn)液，1 000 mg·L-1；脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)品1 g，99.90%，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；乙酸銨色譜純。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

脫氫乙酸儲(chǔ)備液（1 000 mg·L-1）：準(zhǔn)確稱取脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)品0.050 g于50 mL 容量瓶中，用5 mL 氫氧化鈉溶液（20 g·L-1）溶解，用水定容。

安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液:準(zhǔn)確吸取安賽蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精鈉混合標(biāo)準(zhǔn)溶液及脫氫乙酸儲(chǔ)備液各0.01、0.05、0.10、0.20、0.50和0.80 mL, 用水定容至10 mL, 配制成質(zhì)量濃度為1.00、5.00、10.0、20.0、50.0、80 mg·L-1混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，臨用現(xiàn)配。

1.4 樣品中糖精鈉的提取

準(zhǔn)確稱取約2 g (精確到0.001 g)試樣于50 mL具塞離心管中, 加水約30 mL, 渦旋混勻, 于50 ℃水浴超聲20 min, 于8 000 r·min-1離心2 min, 將水相轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中, 于殘?jiān)屑铀?0 mL, 渦旋混勻后超聲5 min, 于8 000 r·min-1離心2 min, 將水相轉(zhuǎn)移到同一50 mL容量瓶中, 并用水定容至刻度, 混勻。取適量上清液過0.22 μm濾膜, 待液相色譜測(cè)定。

1.5 儀器條件

儀器：美國(guó)Waters2695高效液相色譜儀、配有PDA2998檢測(cè)器及Empower化學(xué)工作站。

色譜柱:賽默飛syncronis C18反相色譜柱(150 mm×4.6 mm, 5 μm)。

流動(dòng)相: 乙酸銨緩沖液(20 mmol·L-1)+甲醇。

儀器條件：柱溫35 ℃ 檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm 流速1 mL·min-1進(jìn)樣量10 μL。

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

以乙酸銨緩沖液(20 mmol·L-1)+甲醇=89+11的流動(dòng)相對(duì)系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行液相色譜測(cè)定。以樣品峰面積為縱坐標(biāo)、標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖1所示。計(jì)算線性回歸方程=2.52+004-9.41+002，2為0.999 858。說明在該色譜條件下，糖精鈉呈現(xiàn)出良好的線性，滿足GB/T 27404 F.2的要求。

圖1 糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 流動(dòng)相V（乙酸銨）∶V（甲醇）=95∶5標(biāo)樣及樣品譜峰

采用GB 5009.28—2016第一法對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)試，流動(dòng)相比例為（乙酸銨）∶（甲醇）=95∶5，糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量濃度為10 mg·L-1的液相色譜譜圖及對(duì)應(yīng)的光譜圖如圖2，圖3所示。

圖2 糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

（乙酸銨）∶（甲醇）=95∶5

圖3 糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)品光譜圖

（乙酸銨）∶（甲醇）=95∶5

待測(cè)瓜子樣品的色譜圖及對(duì)應(yīng)光譜圖如圖4所示。

圖4 瓜子中糖精鈉液相色譜圖及光譜圖

（乙酸銨）∶（甲醇）=95∶5

從圖4可以看出，在糖精鈉標(biāo)樣出峰時(shí)間處，樣品譜圖中有譜峰出現(xiàn)，對(duì)照光譜圖，與標(biāo)樣的光譜圖不一致。說明樣品中可能存在干擾峰與糖精鈉譜峰重疊，進(jìn)一步說明在該色譜條件下不能對(duì)樣品中是否含有糖精鈉以及樣品中糖精鈉的含量進(jìn)行正確判斷。

2.3 流動(dòng)相V（乙酸銨）∶ V（甲醇）=89∶11標(biāo)樣及樣品譜峰

圖5和圖6分別為調(diào)整流動(dòng)相比例為（乙酸銨）∶（甲醇）=89∶11后，糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量濃度為10 mg·L-1的液相色譜譜圖及對(duì)應(yīng)的光譜圖。

圖5 糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

（乙酸銨）∶（甲醇）=89∶11

圖6 糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)品光譜圖

（乙酸銨）∶（甲醇）=89∶11

圖7為該色譜條件下待測(cè)瓜子樣品的色譜圖及對(duì)應(yīng)光譜圖。

圖7 瓜子中糖精鈉液相色譜圖及光譜圖

（乙酸銨）∶（甲醇）=89∶11

對(duì)照?qǐng)D5，在糖精鈉標(biāo)樣出峰時(shí)間處，樣品譜圖中有譜峰出現(xiàn)。對(duì)照?qǐng)D6糖精鈉標(biāo)品光譜圖，樣品和標(biāo)品光譜圖一致。這說明在該流動(dòng)相比例的條件下，樣品中存在干擾峰與糖精鈉譜峰分離。說明調(diào)整流動(dòng)相比例是一種解決瓜子中糖精鈉假陽(yáng)性報(bào)告的有效手段，調(diào)整流動(dòng)相比例后，能夠?qū)献又械奶蔷c進(jìn)行正確定性和準(zhǔn)確定量。

2.4 回收率及精密度實(shí)驗(yàn)

分別稱取4組瓜子樣品2.000 g（精確至3位小數(shù)），每組6份樣品，4組樣品中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品1 000 mg·L-10，0.1，0.2，1 mL，混勻。加標(biāo)樣品與試樣用1.4實(shí)驗(yàn)方法提取。采用流動(dòng)相（乙酸銨）∶（甲醇）=89∶11對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定。如表1所示，糖精鈉加標(biāo)回收率分別為99%，102.3%和102.2%，RSD分別為3.1%，2.3%和2.5%。糖精鈉回收率和精密度均能夠滿足GB/T 27404以及GB 5009.28的要求。

表1 糖精鈉回收率及精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=6）

3 結(jié) 論

本文分別采用乙酸銨+甲醇=95+5和乙酸銨+甲醇=89+11兩種流動(dòng)相，對(duì)瓜子中糖精鈉的含量進(jìn)行測(cè)定。研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)乙酸銨+甲醇=89+11時(shí)，樣品中糖精鈉與干擾峰重疊現(xiàn)象消失，糖精鈉與標(biāo)準(zhǔn)樣品的譜峰出峰時(shí)間及光譜圖一致，能夠?qū)μ蔷c進(jìn)行準(zhǔn)確定性定量。標(biāo)樣曲線的2為0.999 858，線性關(guān)系良好，滿足GB/T 27404要求，糖精鈉回收率和精密度均滿足檢驗(yàn)要求。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明調(diào)整流動(dòng)相比例是一種解決采用國(guó)標(biāo)方法進(jìn)行瓜子中糖精鈉的液相色譜法測(cè)定過程中，干擾峰導(dǎo)致的糖精鈉難以定性定量問題的簡(jiǎn)單有效的手段。

［1］高玉婷,張鵬,杜剛,等. 人造甜味劑對(duì)人體健康的影響研究進(jìn)展[J].食品科學(xué),2018(7)：285-290．

［2］廖敏, 侯嬌艷, 劉亞琴,等. HPLC法同時(shí)快速測(cè)定醬油中的苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜[J]. 中國(guó)調(diào)味品, 2019, 44：169-174.

［3］顧佳麗, 孟慶如, 殷志全,等. 辣條中甜味劑含量的測(cè)定及與蛋白質(zhì)的相互作用[J]. 遼寧化工, 2018, 47(11):1190-1192.

［4］張建洲, 張艷. 高效液相色譜法測(cè)定棗中糖精鈉含量[J]. 現(xiàn)代食品, 2019(8):169-172.

［5］竇明理,王明,何楠,等. 高效液相色譜法同時(shí)檢測(cè)食品中安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的影響因素分析[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào),2018,9(16):4258-4262．

［6］翟崇華.高效液相色譜法測(cè)定食品中安賽蜜,苯甲酸,山梨酸,糖精鈉和脫氫乙酸含量[J]. 食品安全導(dǎo)刊, 2019(12):35．

［7］陽(yáng)曦,劉瑋.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定糕點(diǎn)中6種甜味劑[J].食品工業(yè),2019(6):4．

［8］劉超,羅紅霞,黃廣學(xué),等.非水滴定法測(cè)定瓜子中糖精鈉[J].中國(guó)食品添加劑，2015(4):199-202．

［9］宗水珍,王禮風(fēng),王彬.紫外分光光度法測(cè)定飲料中糖精鈉的含量[J]. 常熟理工學(xué)院學(xué)報(bào), 2015, 29(4): 68-71．

［10］張愛榆,廖建萌,曾丹丹,等.拉曼光譜法快速測(cè)定甜味劑應(yīng)用研究[J].當(dāng)代化工研究,2020, 64(11):157-159．

［11］國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局.GB?5009.28—2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)?食品中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的測(cè)定[S]. 北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2017．

［12］顏慧,楊嘉,王帥,等.高效液相色譜/二極管陣列法快速測(cè)定炒瓜子中糖精鈉與安賽蜜[J].糧食流通技術(shù),2018 ( 8): 99-102．

Study on Determination of Saccharin Sodium in Melon Seeds by HPLC

Aiming at the false positive problem of saccharin sodium test in melon seeds by HPLC method, the spectrum peak of saccharin sodium and the interference spectrum peak were separated by adjusting the ratio of mobile phase, so that the saccharin sodium in the sample was accurately qualitatively and quantitatively determined. The results showed that using the first method of GB 5009.28—2016, saccharin sodium interference peak appeared in the spectrum of melon seed samplewhen the ratio of ammonium acetate to methanol was 95∶5. After adjusting the mobile phase ratio of ammonium acetate and methanol to 89∶11, the spectrum peak of saccharin sodium was completely separated from the interference peak. The recovery and precision experiments were carried out. The recoveries of saccharin sodium were 99%, 102.3% and 102.2%, RSD were 3.1%, 2.3% and 2.5% respectively, which met the test requirements.

HPLC; Saccharin sodium; False positive; Mobile phase ratio

TS207.3

A

1004-0935（2022）04-0573-04

2021-12-01

郁蕉竹（1989-），女，遼寧省沈陽(yáng)市人，工程師，碩士，2013年畢業(yè)于大連理工大學(xué)化學(xué)工程專業(yè)，研究方向：食品檢測(cè)與分析。