伍旖旎, 許 依, 傅童成, 易自力, 薛帥*
(1. 作物種質(zhì)創(chuàng)新與資源利用重點實驗室, 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)生物科學(xué)技術(shù)學(xué)院, 湖南 長沙 410128; 2. 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院,北京, 100193; 3. 芒屬植物生態(tài)應(yīng)用技術(shù)湖南省工程實驗室, 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué), 湖南 長沙 410128; 4. 國家能源非糧生物質(zhì)原料研發(fā)中心湖南分中心, 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué), 湖南 長沙 410128)
如今,我國人均耕地資源缺乏,承載力已達(dá)上限,糧食安全面臨威脅。在此背景下,國家頒布并實施了“藏糧于地、藏糧于技”戰(zhàn)略。其中,改良資源豐富的邊際土地可作為實施“藏糧于地”戰(zhàn)略的重要策略[1]。改良能使部分環(huán)境惡劣程度相對較輕的邊際土地具備中低等地產(chǎn)能水平,以保障國家糧食安全。貧瘠紅壤作為一種重要邊際土地類型,主要分布在我國南方地區(qū),面積約有1.6億畝。和西北荒漠地、北方鹽堿地等邊際土壤類型相比,貧瘠紅壤主要特點是高度風(fēng)化、水土流失嚴(yán)重、土壤有機(jī)質(zhì)匱乏,而其光溫水條件較為充足,是改良難度最小,潛力最大的邊際土地類型[2]。
植物改良與其他改良方法相比,具有成本低、易操作、無二次污染等優(yōu)點,可使邊際土地土壤有機(jī)質(zhì)大量積累,土壤肥力與生產(chǎn)潛力大幅提高。理論上,芒草(Miscanthusspp.)、柳枝稷(PanicumvirgatumL.)等高大禾草在較為貧瘠的條件下依然能產(chǎn)生較高的生物量[3]。然后通過地上莖稈、落葉及地下老化根莖的腐爛將光合固定的碳輸入土壤,從而增加土壤有機(jī)質(zhì)的含量[4-5]。另外,有研究表明,芒草根系統(tǒng)可以富集固氮微生物,進(jìn)而增加土壤中的氮含量;其根系中的解磷、解鉀微生物的富集可以增加土壤中的有效磷和速效鉀含量[6-8]。芒草產(chǎn)生的生物質(zhì)還可以轉(zhuǎn)化為生物能源(比如生物乙醇)、化工產(chǎn)品(比如低聚木糖、納米纖維等)等增加植物改良的經(jīng)濟(jì)效益[9-11]。筆者所在課題組已經(jīng)證明種植芒草可以改良鹽堿土,促使鹽堿土壤的pH值、電導(dǎo)率降低,土壤有機(jī)質(zhì)、總鉀含量增加,還可以改變土壤微生物群落的組成豐度,富集有益菌以促進(jìn)土壤脫鹽[12]。由此可見,芒草是一種改良邊際性土地的優(yōu)勢植物類型。
土壤有機(jī)碳是土壤質(zhì)量的核心,維系著糧食安全、氣候變化等關(guān)于人類生存發(fā)展的諸多要素[1]。土壤有機(jī)碳的含量主要取決于土壤中有機(jī)物料的投入與降解,即碳輸入與碳輸出。其中,大部分外來有機(jī)物料如生物殘體、有機(jī)肥料等被微生物降解生成CO2(即礦化),是微生物活動所利用碳源的主要來源,也是植物可利用養(yǎng)分的主要來源;而只有一部分不易被分解的成分以土壤有機(jī)質(zhì)的形式儲藏于土壤之中,形成了土壤中的碳固存量[13]。施氮是利用改良后邊際土壤不可或缺的農(nóng)藝措施,但人為添加氮后會迅速改變土壤中的C/N結(jié)構(gòu),從而影響土壤固定碳的重新釋放[14]。與此同時,在以往的實地研究中,施氮對陸地生態(tài)系統(tǒng)(森林、草原、荒漠、濕地以及受人工干預(yù)的農(nóng)田)的土壤有機(jī)碳礦化有著不同的影響,包括促進(jìn)[15]、抑制[14]和無影響[16]三種情況,主要取決于氮輸入后對土壤碳氮的存在形式與比值、植物根生長量與周轉(zhuǎn)、土壤微生物群落結(jié)構(gòu)、微生物生物量與活性的影響[17]?;诖耍驹囼灁M在人工施氮條件下,將經(jīng)長期種植芒屬植物改良后的貧瘠紅壤進(jìn)行室內(nèi)定溫礦化培養(yǎng),探究氮肥對芒屬植物修復(fù)后的邊際土地中固定的土壤礦化影響以及驅(qū)動機(jī)制,為南方貧瘠酸性紅壤的改良修復(fù)后的田間管理提供參考依據(jù)。
2021年1月于試驗基地采集芒屬植物根際土壤樣品:以“S”型隨機(jī)選取5棵植株挖出,抖動其根系,對仍附著在根和根莖上的土壤進(jìn)行采集并充分混合,然后人工去除土壤內(nèi)的枯枝落葉和根系殘茬,過2 mm網(wǎng)篩后,使用四分法采集4個重復(fù)總共收集200 g根際土壤樣品。所采集的芒屬植物為湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)培育的‘湘雜芒1號’,于2011年在湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)芒屬植物實驗基地(27°51′ N,113°10′ E)種植,詳情參考侯維等人前期研究[2]。種植后,每年的11月底至12月初收獲地上部生物質(zhì)并將其移出。在2012年生長季節(jié)后,不進(jìn)行任何其他田間管理措施。
土壤有機(jī)碳礦化培養(yǎng)試驗采用室內(nèi)恒溫培養(yǎng),堿液吸收法測定。將經(jīng)上述處理后的新鮮土樣稱取30.0 g,置于250 mL廣口培養(yǎng)罐底部,用NH4Cl溶液和去離子水設(shè)置空白(Control,CK)、低氮(Low nitrogen,LN)、高氮(High nitrogen,HN)三個氮添加水平,分別對應(yīng)于0,52,208 mg N·kg-1soil,相當(dāng)于在全國各地水稻目標(biāo)產(chǎn)量4.5~10.5 t·hm-2的基礎(chǔ)上其大田施氮量為0 kg·hm-2,75 kg·hm-2,300 kg·hm-2[18],且調(diào)節(jié)全土含水量至田間飽和持水量的70%。每個處理重復(fù)4次,密封并置于25℃恒溫培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)5 d(遮光)以恢復(fù)微生物活性,之后將盛有5 mL 1 mol·L-1NaOH溶液的小玻璃杯放入培養(yǎng)罐中,繼續(xù)密封并置于25℃恒溫培養(yǎng)箱中遮光培養(yǎng)。在培養(yǎng)后的第1,3,5,7,14,21,30,40,50 d更換堿液玻璃杯,并對置換出來的杯內(nèi)堿液進(jìn)行滴定。取1 mL堿液于小燒杯中,加入1 mL 1 mol·L-1BaCl2溶液,再滴加適量的酚酞指示劑,后用0.2 mol·L-1標(biāo)準(zhǔn)HCl溶液滴定直至紅色消失。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)HCl溶液滴定量計算培養(yǎng)期內(nèi)全土有機(jī)碳礦化量(Cumulative mineralization,CM,單位:mg C·kg-1dry soil)。試驗培養(yǎng)周期為60 d。
將經(jīng)礦化培養(yǎng)試驗后的根際土壤樣品進(jìn)行理化性質(zhì)分析。采用FiveEasyTMplus臺式pH計-FE28(Mettler Toledo,瑞士)測定土壤pH值。采用重鉻酸鉀氧化法測定總有機(jī)碳(Total organic carbon,TOC,單位:g·kg-1)。采用自動凱氏定氮儀K9840(海能,深圳)測定全氮(Total nitrogen,TN,單位:g·kg-1);采用氯仿熏蒸浸提法(TOC總有機(jī)碳/總氮分析儀-multi N/C 3100,耶拿,德國)測定微生物生物量(Microbial biomass,MB,單位:mg·kg-1)和微生物生物量氮(Microbial biomass nitrogen,單位:mg·kg-1);在MB和MBN分析中測定未熏蒸樣品中的可溶性有機(jī)碳(Dissolved organic carbon,DOC,單位:mg·kg-1)和可溶性有機(jī)氮(Dissolved organic nitrogen,DON,單位:mg·kg-1);采用可見分光光度計UV-8000(元析,上海)測定銨態(tài)氮(Ammonium nitrogen,NH4+-N,單位:mg·kg-1)和硝態(tài)氮(Nitrate-nitrogen,NO3--N,單位:mg·kg-1)。
土壤有機(jī)碳礦化量、激發(fā)效應(yīng)、相對激發(fā)相應(yīng)、微生物代謝熵由公式1—4求得。
Cm=CHCl×(V0-V1)×30/m×1000
(1)
PE=Cn-Cc
(2)[14]
RPE=PE/Cc
(3)
qCO2=MR/MB
(4)
式中,Cm為土壤有機(jī)碳礦化量,單位:mg C·kg-1dry soil;CHCl為標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液濃度,單位:mol·L-1;V0為滴定空白的鹽酸消耗量,單位:mL;V1為滴定堿液的鹽酸消耗量,單位:mL;m為根際土壤樣品的重量,單位:g;30為常數(shù);1000為單位轉(zhuǎn)換系數(shù);PE為激發(fā)效應(yīng),Priming effect,單位:mg C·kg-1dry soil,若為正值則是正激發(fā)效應(yīng)(即促進(jìn)土壤有機(jī)碳礦化),反之則是負(fù)激發(fā)效應(yīng)(即抑制土壤有機(jī)碳礦化);Cn為施氮處理礦化量,單位:mg C·kg-1dry soil;Cc為對照礦化量,單位:mg C·kg-1dry soil;RPE為相對激發(fā)效應(yīng),Relative PE,單位:%;qCO2為微生物代謝熵,The metabolic quotient,單位:mg C·mg-1biomass C·d-1;MR為礦化速率,Mineralization rate,單位:mg C·kg-1·d-1;MB為微生物生物量,Microbial biomass,單位:mg·kg-1。
采用公式5擬合土壤有機(jī)碳礦化量速率、激發(fā)效應(yīng)、相對激發(fā)效應(yīng),采用公式6擬合土壤累積礦化量。擬合值準(zhǔn)確性使用均方根誤差和擬合度進(jìn)行評價(公式7和公式8)。
y=a-bln(x+c)
(5)
y=a(1-e-kx)
(6)
(7)
(8)
式中,a,b,c均為模型擬合系數(shù);RMSE為均方根誤差,root mean square error;R2為擬合度,R-squared;Ct為模擬值,C0為實測值,Cavg為平均值。
試驗數(shù)據(jù)采用IBM SPSS Statistics 22.0進(jìn)行夏皮洛-威爾克檢驗(Shapiro-Wilk test)即正態(tài)性檢驗,正態(tài)性檢驗結(jié)果表明,各數(shù)據(jù)檢驗的P值均大于0.05,說明與正態(tài)性沒有顯著差異,成正態(tài)性分布(附表1)。在此基礎(chǔ)上,對試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行了單因素方差分析(one-way ANOVA)和Duncan差異顯著性檢驗(P<0.05)。用OriginLab Origin 2021作圖。
如圖1A所示,在試驗培養(yǎng)的第1~5 d,高氮處理下的土壤有機(jī)碳礦化速率大于低氮處理2.72%~28.59%,但在培養(yǎng)的第7 d開始,高氮處理下的土壤有機(jī)碳礦化速率小于低氮處理2.54%~24.76%。總體上,土壤有機(jī)碳礦化速率隨著培養(yǎng)時間增加而逐漸下降且下降趨勢趨于平緩,呈現(xiàn)對數(shù)曲線關(guān)系,施氮處理降低了土壤有機(jī)碳礦化速率,且施氮量越高,土壤有機(jī)碳礦化速率越低。礦化培養(yǎng)第7 d時,不同施氮量處理下的土壤有機(jī)碳礦化速率分別為21.60(CK),22.93(LN),22.35(HN) mg C·kg-1dry soil·d-1,且各處理間不存在顯著差異。從礦化培養(yǎng)的7 d后開始,各處理之間的土壤有機(jī)碳礦化速率開始逐漸產(chǎn)生顯著差異(P<0.01),且整體呈現(xiàn)對照>低氮>高氮趨勢。在第60 d時,礦化速率分別降至12.04(CK),7.77(LN),6.57(HN) mg C·kg-1dry soil·d-1,與第7 d相比,降低了44.26%,66.11%,71.95%。和對照相比,60 d后低氮與高氮處理下土壤有機(jī)碳礦化速率分別降低了35.47%和45.43%(圖1A)。
不同施氮量處理下的土壤累積礦化量也是以第7 d為分界點:在第7 d前,處理間無明顯差異;在第7 d后,處理間開始產(chǎn)生顯著差異,呈現(xiàn)對照>低氮>高氮(圖1-B)。第60 d與第7 d相比,不同施氮量處理下的土壤累積礦化量分別增加了84.26%(CK),80.01%(LN),75.52%(HN)(圖1-B)。60 d低氮與高氮處理下的土壤有機(jī)碳總礦化量較對照組分別降低了19.04%和27.85%,且高氮顯著低于低氮處理下土壤有機(jī)碳總礦化量的10.88%(圖2)。
圖1 不同施氮量對芒屬植物長期定植后的根際土壤有機(jī)碳礦化過程的影響
圖2 不同施氮量對芒草長期定植后的土壤礦化培養(yǎng)60 d后根際土壤有機(jī)碳總礦化量的影響
在試驗培養(yǎng)的前7 d,施氮處理下的土壤有機(jī)碳呈正激發(fā)效應(yīng),但在培養(yǎng)的第7 d開始,施氮處理下的土壤有機(jī)碳礦化呈顯著的負(fù)激發(fā)效應(yīng)。大體上施氮對土壤固碳呈正作用,隨著施氮量的增加,激發(fā)和相對激發(fā)相應(yīng)均會顯著降低(P<0.01)(圖3)。60 d后低氮與高氮處理下的土壤有機(jī)碳激發(fā)效應(yīng)分別降至為-42.67和-54.67 mg C·kg-1dry soil,相對激發(fā)效應(yīng)分別降至-35.44%和-45.40%。其一級反應(yīng)方程土壤有機(jī)碳礦化量速率、累積礦化量、激發(fā)效應(yīng)、相對激發(fā)效應(yīng)的均方根誤差(Root mean square error,RMSE)與擬合度(R-squared,R2)如表1所示。其中,土壤有機(jī)碳礦化速率均方根誤差的值為0.752 1~1.950 6,說明該組實測值的離散程度較低;土壤有機(jī)碳累積礦化量的R2的值為0.996 2~0.999 8,約近于1,說明一級反應(yīng)方程對累積礦化量實測值的擬合程度好。
表1 土壤有機(jī)碳礦化量速率、累積礦化量、激發(fā)效應(yīng)、相對激發(fā)效應(yīng)擬合方程的均方根誤差與擬合度
圖3 高氮和低氮處理對芒屬植物長期定植后的根際土壤有機(jī)碳礦化過程的影響
不同施氮量處理下礦化培養(yǎng)后土壤理化性質(zhì)差異如表2所示。施氮對土壤微生物生物量與微生物生物量氮的比值(MB/MBN)無顯著影響,但對土壤pH值、總氮(TN)、總有機(jī)碳(TOC)、可溶性有機(jī)碳(DOC)、可溶性有機(jī)氮(DON)、可溶性有機(jī)碳與可溶性有機(jī)氮的比值(DOC/DON)、微生物生物量(MB)、微生物生物量氮(MBN)、銨態(tài)氮(NH4+-N)、硝態(tài)氮(NO3--N)以及微生物代謝熵(qCO2)有顯著影響(P<0.05)。隨著施氮量的增加,土壤pH值、DOC、qCO2呈現(xiàn)下降趨勢,減幅分別為10.46%~14.07%,63.00%~68.36%,38.21%~46.44%。土壤TOC在低氮與高氮處理下無顯著差異,但與對照處理下的土壤有顯著差異(P<0.05);土壤TN與DOC/DON在對照與低氮處理下無顯著差異,但與高氮處理下的土壤具顯著差異,其中高氮組TN增加,DOC/DON下降。相較于對照組,土壤DON與NO3--N在低氮處理下顯著降低,高氮處理下顯著上升。不同施氮量處理下土壤MB,MBN與NH4+-N均顯著上升,且在低氮水平達(dá)到最高值,分別為272.62 mg·kg-1,42.59 mg·kg-1和33.14 mg·kg-1。
表2 不同施氮量對長期定植芒草根際土壤礦化培養(yǎng)后(60 d)理化性質(zhì)的影響
分析不同施氮量處理下土壤理化指標(biāo)及有機(jī)碳總礦化量之間的相關(guān)性發(fā)現(xiàn)(表3),供試土壤有機(jī)碳總礦化量(TM)與土壤pH值、總氮(TN)、可溶性有機(jī)碳(DOC)、微生物代謝熵(qCO2)之間均存在著極顯著正相關(guān)性關(guān)系(P<0.01),且作線性擬合得出最佳理論曲線及方程(圖4),擬合度為0.82~0.91;而與可溶性有機(jī)氮(DON)、可溶性有機(jī)碳與可溶性有機(jī)氮的比值(DOC/DON)、微生物生物量(MB)、微生物生物量氮(MBN)、銨態(tài)氮(NH4+-N)、硝態(tài)氮(NO3--N)之間無顯著相關(guān)性關(guān)系。土壤NH4+-N與NO3--N之間存在著顯著負(fù)相關(guān)性關(guān)系(P<0.05),而土壤DOC,DON,MBN之間均無顯著相關(guān)性關(guān)系,其中的土壤NH4+-N與DOC,DON,MBN之間呈現(xiàn)顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05),土壤NO3--N與DON之間呈現(xiàn)顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05)。
表3 土壤理化性質(zhì)之間、土壤有機(jī)碳總礦化量與土壤理化性質(zhì)的相關(guān)性
圖4 土壤有機(jī)碳總礦化量與土壤pH值、可溶性有機(jī)碳、微生物代謝熵、總氮的并置擬合圖
本論文研究施氮對芒草修復(fù)后的貧瘠紅壤土壤礦化過程的影響,發(fā)現(xiàn)在試驗培養(yǎng)第1—5 d,高氮處理下的土壤有機(jī)碳礦化速率高于低氮處理2.72%~28.59%,且呈正激發(fā)效應(yīng),但在培養(yǎng)的第7 d開始,高氮處理下的土壤有機(jī)碳礦化速率低于低氮處理2.54%~24.76%,呈顯著的負(fù)激發(fā)效應(yīng)。與對照組相比,60 d低氮與高氮處理下土壤有機(jī)碳礦化速率分別降低了35.47%和45.43%,土壤有機(jī)碳累積礦化量分別降低了19.04%和27.85%??赡苁怯捎诠┰嚫H土壤中氮量受限,培養(yǎng)前期氮素處理對此起到緩解的作用,短時間內(nèi)表現(xiàn)為土壤有機(jī)碳礦化速率增加,進(jìn)而施氮對土壤礦化呈正激發(fā)效應(yīng)。隨著培養(yǎng)時間的延長,土壤中易被利用的碳被大量消耗的同時,高氮與土壤中易被利用的碳反應(yīng)也變得結(jié)構(gòu)復(fù)雜化不易分解[19],兩者共同影響導(dǎo)致土壤中易被利用的碳含量降低,微生物碳源進(jìn)而受到限制,所以在培養(yǎng)的第7 d后土壤有機(jī)碳礦化速率降低,呈現(xiàn)負(fù)激發(fā)效應(yīng)。Zang等人對小麥(TriticumaestivumL.)根際土進(jìn)行不同施氮量處理培養(yǎng)56 d后,土壤有機(jī)碳累積礦化量與對照(不加氮)相比下降了27%~42%,和本研究結(jié)果趨勢一致[14]。但其他研究也有發(fā)現(xiàn)施氮對土壤礦化會出現(xiàn)促進(jìn)、抑制和無影響三種情況。對此差異,Zang等人分析了13項研究中施氮對土壤激發(fā)效應(yīng)的影響,包括158項不同土壤類型和利用方式的試驗結(jié)果,表明大多數(shù)研究發(fā)現(xiàn)激發(fā)效應(yīng)隨施氮量的升高而呈指數(shù)下降[14]。除此之外,也有研究認(rèn)為施氮或會降低了酸性土壤pH值[20-21]、qCO2,從而改變了土壤理化性質(zhì),使土壤微生物呼吸速率降低[22],抑制土壤有機(jī)碳的礦化。綜上所述,在芒草改良后的土壤進(jìn)行農(nóng)業(yè)生產(chǎn)活動時,依然需要嚴(yán)格控制施氮量,以維持改良后的土壤質(zhì)量。
土壤理化性質(zhì)是體現(xiàn)土壤綜合質(zhì)量的重要指標(biāo)[23]。本研究以氯化銨作氮素對土壤進(jìn)行處理,土壤pH值隨施氮量的增加而降低,這與前人的研究結(jié)果一致[24-25]。銨態(tài)氮可溶解在土壤溶液中,供植物直接吸收利用;也可被土壤膠體吸附呈交換態(tài),通過硝化作用轉(zhuǎn)化為硝態(tài)氮并釋放出H+。與此同時,植物吸收NH4+的同時釋放H+以維持體內(nèi)的電荷平衡,從而酸化土壤[26]??扇苄杂袡C(jī)碳(DOC)是土壤微生物最容易利用的碳源,微生物代謝熵(qCO2)是指每單位微生物CO2排放速率,兩者均隨施氮量的增加而降低。說明微生物從土壤中吸收的有機(jī)碳更多用于其自身的生長發(fā)育,而不是轉(zhuǎn)化為CO2排放[14]。
不同施氮量處理下土壤微生物生物量(MB)、微生物生物量氮(MBN)均顯著上升,且在低氮水平達(dá)到最高值,分別為272.62 mg·kg-1,42.59 mg·kg-1,比高氮處理高2.54%,6.16%,而MB/MBN無顯著差異。和對照組相比,低氮處理中的MB,MBN含量上升,結(jié)果與前人研究相似[27]。朱靈等[27]認(rèn)為這是由于在土壤本身氮素虧缺情況下,通過一定量的氮投入,使原本受氮素限制的土壤微生物含量與活性上升,因而使土壤MB,MBN含量在一定范圍內(nèi)上升。本研究中,高氮處理下MB,MBN含量明顯降低,這是由于土壤中氮含量超過一定范圍后,造成土壤酸化和土壤團(tuán)聚體結(jié)構(gòu)改變[28-29],進(jìn)而改變土壤微生物的生長環(huán)境,阻礙施氮對土壤MB,MBN的正激發(fā)效應(yīng)。
目前關(guān)于施氮對土壤有機(jī)碳礦化影響的研究,其設(shè)定的最高施氮量為208 mg N·kg-1soil,暫未發(fā)現(xiàn)其氮閾值[14]。猜想若施氮量達(dá)到閾值的基礎(chǔ)上,再添加施氮量,其土壤有機(jī)碳礦化量為一定值,不再隨著施氮量的變化而變化,但仍需要更加詳細(xì)的試驗進(jìn)行驗證。
施氮顯著降低了芒草改良后貧瘠紅壤土壤有機(jī)碳礦化量且隨著施氮量的升高而降低,呈現(xiàn)負(fù)激發(fā)效應(yīng);施氮通過降低土壤pH值、土壤可溶性有機(jī)碳來抑制土壤有機(jī)碳礦化過程。隨著人為添加氮素的持續(xù)增加,修復(fù)后的邊際貧瘠紅壤有機(jī)碳的礦化作用會受到抑制,有利于土壤有機(jī)碳的穩(wěn)定與積累。但對于改良修復(fù)后的貧瘠紅壤田間管理,施加少量氮肥更能豐富土壤微生物生物量,有利于作物生長;而施加大量氮肥反而導(dǎo)致土壤酸化,不利于耕作。