葉青萍，任建敏，丁卉(麗水市中心醫(yī)院檢驗科，浙江麗水323000)

長奈瑟菌(Neisseriaelongata)屬于奈瑟菌屬。奈瑟菌屬細菌主要寄居于人或動物的口咽、鼻咽、胃腸道及泌尿生殖道等部位，人源性奈瑟菌除淋病奈瑟菌和腦膜炎奈瑟菌被認為是致病菌外[1]，其他大部分奈瑟菌(包括長奈瑟菌)被認為是健康人群口咽部的定植菌，通常不致病。由長奈瑟菌引起的感染在國內(nèi)鮮有報道，僅有的幾例報道中以引起感染性心內(nèi)膜炎多見[2-3]?，F(xiàn)我院從1例膽道感染患者的血培養(yǎng)中分離到該菌，報道如下。

1 病例摘要

患者，男，57歲，因“肝癌術后一年半，發(fā)熱3 d”于2021年6月13日收住麗水市中心醫(yī)院?；颊?年余前診斷為肝癌，曾多次入院治療。本次入院3 d前患者無明顯誘因下出現(xiàn)發(fā)熱，自述最高體溫39 ℃，自行使用吲哚美鋅栓退熱治療后體溫好轉。1 d前再次發(fā)熱，遂至我院急診就診，床邊心臟超聲示：左室擴大，主動脈瓣輕-中度關閉不全，二尖瓣輕度關閉不全。心肺聽診無殊。血液檢查示：快速超敏C反應蛋白100.79 mg/L，白細胞10.5×109/L，中性粒細胞比例77.4%，淋巴細胞比例8.2%，紅細胞3.07×1012/L，血紅蛋白96 g/L，降鈣素原2.05 ng/mL，凝血酶原時間13.0 s，國際標準化比率1.20，凝血酶時間16.8 s，D-二聚體1.07 mg/L，總膽紅素56.9 μmol/L，肌酸激酶<20 U/L，CK同工酶18 U/L，乳酸脫氫酶288 U/L，尿素9.3 mmol/L，擬“膿毒血癥、肝惡性腫瘤”收住入院。6月13日于我院急診送檢血培養(yǎng)，15 h后陸續(xù)有3瓶血培養(yǎng)報陽，經(jīng)質(zhì)譜鑒定為長奈瑟菌(Neisseriaelongata)。予氧頭孢烯類拉氧頭孢針靜滴、喹諾酮類莫西沙星口服抗感染,治療后體溫正常，C反應蛋白、降鈣素原等感染指標較前好轉,考慮抗感染治療有效。本案例中的患者為惡性腫瘤末期，全身情況欠佳，在體溫控制正常之后，臨床主要予對癥支持姑息治療，改善癥狀，緩解痛苦。

2 細菌鑒定

2.1細菌培養(yǎng)及鑒定 分別采集患者雙側2套血培養(yǎng)送檢，血培養(yǎng)采用VIRTUO全自動微生物培養(yǎng)系統(tǒng)進行，14 h 22 min后左側厭氧瓶報陽，14 h 45 min后右側厭氧瓶報陽，17 h后左側需氧瓶報陽。取陽性瓶內(nèi)菌懸液直接涂片革蘭染色(珠海貝索公司)，鏡下可見革蘭陰性桿菌，轉種于哥倫比亞血瓊脂平板和巧克力瓊脂平板(溫州康泰公司)，置35 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h后，在血平板和巧克力平板上生長良好，呈1～2 mm、淡黃色、圓形、濕潤、凸起的菌落(見圖1)，純培養(yǎng)物涂片呈陰性球桿菌。觸酶陰性，氧化酶陽性。3瓶陽性報警瓶轉種后的純培養(yǎng)物經(jīng)法國生物梅里埃Vitek MS質(zhì)譜儀鑒定均為長奈瑟菌(Neisseriaelongata)，置信度均為99.9%。將血平板及巧克力平板繼續(xù)溫育3～4 d后，呈現(xiàn)典型的奈瑟菌屬細菌的菌落形態(tài)(見圖2)。

圖1 35 ℃、5%CO2培養(yǎng)24 h菌落形態(tài)(左：血平板；右：巧克力平板)

圖2 35 ℃、5%CO2培養(yǎng)4 d菌落形態(tài)(左：血平板；右：巧克力平板)

2.2分子生物學方法 將細菌送至杭州金域醫(yī)學檢驗所有限公司利用IonPGM個人化操作基因組測序儀進行測序，其方法為檢測16S rDNA V2、V3、V4、V6、V7、V8、V9可變區(qū)，得出的序列號經(jīng)BLAST比對,顯示相似度最高的為NO.NR_104944.1，百分比為99.66%，第二NO.NR_025893.1為99.33%，第三NO.NR_028900.1為96.63%，前兩名均為Neisseriaelongata。

3 討論

本例患者為中老年男性，肝癌術后1年半，期間進行了多次手術及術后化療等診療措施?；颊哂?021年4月15日曾行“膽管支架植入術”，術前、術后反復發(fā)熱，血培養(yǎng)曾提示陰溝腸桿菌感染，診斷“膽道感染，敗血癥”，此次因發(fā)熱入院，在急診室就診時予以雙側雙瓶送檢血培養(yǎng)，在4瓶中出現(xiàn)3瓶陽性，鑒定結果均為長奈瑟菌(Neisseriaelongata)，同時血液中降鈣素原、CRP等感染指標均提示升高，可以排除污染可能。

關于長奈瑟菌引起的感染國內(nèi)報道極少，同時奈瑟菌屬一般被認為是健康人群口咽部及鼻咽部的正常菌群，很少引起感染，主要見于牙科手術及介入性心血管操作后[2]。本例患者在發(fā)病前并未發(fā)現(xiàn)有相關的介入性操作，其感染途徑及機制尚不明確?？赡芘c床邊心臟超聲中提示的主動脈瓣及二尖瓣關閉不全有關，已知心臟瓣膜病是感染性心內(nèi)膜炎的主要發(fā)病因素之一，且該患者為肝癌術后，多次接受化療，免疫功能低下。

奈瑟菌屬細菌鏡下形態(tài)大多為直徑不超過2 μm的球菌，單個或成雙排列。但長奈瑟菌為短桿狀[4]，本例患者血培養(yǎng)直接涂片表現(xiàn)為革蘭陰性桿菌，在血平板及巧克力平板上生長良好，轉種后純培養(yǎng)物涂片呈陰性球桿菌。直接通過Vitek MS質(zhì)譜儀鑒定為長奈瑟菌(Neisseriaelongata)，由于其形態(tài)與屬內(nèi)其他菌種相差較大，筆者再次通過質(zhì)譜儀進行復查，結果與首次一致，置信度均為99.9%。觸酶陰性，氧化酶陽性，這與參考資料描述一致[1]。最終利用16S rRNA分子生物學方法鑒定，結果亦為長奈瑟菌(Neisseriaelongata)。奈瑟菌屬細菌一般為專性需氧菌，而該患者首先陽性報警的是厭氧瓶，經(jīng)分析可能有以下幾點原因。首先，本實驗室采用的是生物梅里埃公司提供的普通型厭氧瓶，達不到完全的厭氧環(huán)境，但是其營養(yǎng)成分要比需氧瓶更好一些，通過查閱本實驗室過去2年間報陽的其他專性需氧菌(如銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌)的生長情況，也一樣存在厭氧瓶先報陽的情況；其次，該患者首先報陽的厭氧瓶血量充足，而4瓶里最終沒有報陽的那瓶血量只有1 mL，筆者認為這也是需要考慮的一部分原因，同時也應該引起采血人員的注意，在平時的工作中要注意足量規(guī)范采血。

本案例報道的長奈瑟菌引起敗血癥，基本可以明確，關于是否引起感染性心內(nèi)膜炎尚沒有明確的臨床證據(jù)證明，但是也應該引起注意。由于該細菌比較少見，使用一般的生化反應鑒定容易誤檢為其他細菌，若是臨床送檢為單套血培養(yǎng)，極易被當成污染菌而漏檢，由于本院已經(jīng)施行雙側雙瓶送檢，并且引進了Vitek MS質(zhì)譜儀，才最終得以正確的鑒定。由于長奈瑟菌引起感染的病例報道較少，對該菌的認識尚淺，也沒有相關的藥敏試驗方法推薦?；颊呷朐汉笈R床予氧頭孢烯類拉氧頭孢針2 g q12 h靜滴、喹諾酮類莫西沙星0.4 g qd口服抗感染，抗感染治療后體溫恢復正常，考慮抗感染治療有效，故在收到實驗室陽性結果后仍考慮繼續(xù)當前治療。

綜上所述，臨床微生物實驗室工作人員應該對長奈瑟菌引起一定的重視，提高該菌的鑒定準確性，并進一步研究完善其相關資料，為以后的預防、診治提供依據(jù)。同時應該提倡臨床及時規(guī)范送檢血培養(yǎng)，按標準進行足量采血，做到雙側雙瓶送檢，而微生物實驗室工作人員也應該加強與臨床的及時有效溝通，在遇到一些少見的細菌時更應如此。本病例中長奈瑟菌的及時準確鑒定依賴于質(zhì)譜技術的引進，表明質(zhì)譜技術的普及對臨床疑難菌和少見菌的快速鑒定有重大意義，可為臨床及時診治提供可靠的依據(jù)。