蒙 湘 彭小歡 許馨怡 譚艷穎 王麗華 黃先菊* 董 悅

1.中南民族大學(xué)藥學(xué)院，湖北 武漢，430074；2.武漢生物制品研究所有限責(zé)任公司，湖北 武漢 430207

胃潰瘍是臨床多發(fā)疾病，調(diào)查研究[1]顯示大約有10%的人曾患胃潰瘍。胃黏膜作為胃組織的最表層結(jié)構(gòu)，具有維持胃正常功能的作用，當(dāng)其受到酒精等因素刺激時，會首先受到損害，長時間將導(dǎo)致胃黏膜產(chǎn)生病理變化[2]。

千足蟲草，學(xué)名為“球莖燕麥”,又名“銀邊草”[3]，拉丁名為Arrhenatherumelatiusvar.bulbosum‘Variegatum’，為禾本科燕麥草屬燕麥草的變種，與原變種區(qū)別為桿基部膨大呈念珠狀，具有明顯的肉質(zhì)球莖，葉片較長，帶狀，具黃白色邊緣，中間綠。粉末顯微特征(如圖1所示)可見根含復(fù)粒淀粉粒、草酸鈣簇晶，導(dǎo)管為螺紋導(dǎo)管和梯紋導(dǎo)管；葉含單粒淀粉粒、草酸鈣方晶，導(dǎo)管為螺紋導(dǎo)管和梯紋導(dǎo)管。民間主要以其葉子入藥，也可以其根入藥，但使用葉子居多。割取葉子后用酒浸泡，以藥酒涂抹于外傷，對傷口愈合有較為明顯的作用。

注：A.根復(fù)粒淀粉粒；B.根草酸鈣簇晶；C.根螺紋導(dǎo)管；D.根梯紋導(dǎo)管；E.葉單粒淀粉粒；F.葉草酸鈣方晶；G.葉螺紋導(dǎo)管；H.葉梯紋導(dǎo)管

現(xiàn)代中藥研究[4-7]顯示中藥材中的多糖成分是其重要的藥效基礎(chǔ)，具有抗衰老、抗腫瘤、抗消化性潰瘍等多種作用。調(diào)查發(fā)現(xiàn)湖南湘西土家族醫(yī)生以千足蟲草藥涂沫于外傷處可促進傷口愈合，而現(xiàn)有文獻[8-10]表明與千足蟲草(即銀邊草)同屬的植物，如莜麥、燕麥、裸燕麥等均含有多糖成分。受此啟發(fā)，本實驗旨在觀察千足蟲草多糖成分的抗?jié)冏饔谩?/p>

1 儀器與材料

1.1 實驗動物 SPF級昆明小鼠，雌雄各半，體重(20±3)g，購自華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，實驗于中南民族大學(xué)實驗動物中心操作。動物飼養(yǎng)嚴(yán)格按照中南民族大學(xué)動物倫理委員會和國際NIH準(zhǔn)則進行，實驗室溫度20～25 ℃，濕度40%～70%，自由進食，光/暗周期為12 h。

1.2 藥品與試劑 千足蟲草，采自湖南湘西土家族苗族自治州，由湖南省永順縣靈溪鎮(zhèn)大井村民間土家族醫(yī)生彭秋生提供。中國科學(xué)院武漢藥用植物所張燕君博士鑒定為球莖燕麥。本校標(biāo)本庫保存編號：HSN13354。千足蟲草醇提物。用70%乙醇浸泡三次，回流提取，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀揮干，再以生理鹽水配制成溶液備用。無水乙醇；組織固定液(4%多聚甲醛、PBS緩沖溶液)；鹽酸雷尼替丁(廣東恒健制藥有限公司，生產(chǎn)批號：200316)。

2 實驗方法

2.1 胃黏膜損傷實驗 小鼠隨機分為正常對照組、模型組、陽性對照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組，每組10只。正常對照組和模型組以生理鹽水灌胃(0.1 mL/10 g)，陽性對照組給予45 mg/kg(0.1 mL/10 g)鹽酸雷尼替丁灌胃，低、中、高劑量組分別以250 mg/kg、350 mg/kg、450 mg/kg的千足蟲草提取物溶液灌胃給藥，連續(xù)5 d。末次給藥后對所有組別禁食不禁水24 h，除正常對照組外，其余組別均以無水乙醇0.1 mL/10 g灌胃制作潰瘍損傷模型[11-12]，1 h后眼球取血并處死動物，使胃部完整暴露，取下全胃后沿胃大彎剪開，洗凈胃內(nèi)容物，于4%甲醛溶液中固定20 min，展平全胃，以游標(biāo)卡尺測量并記錄胃黏膜出血條帶的長度、寬度，記錄出血點個數(shù)。

2.2 觀察指標(biāo)與檢測方法 各實驗組胃黏膜損傷程度以潰瘍抑制率、損傷積分指數(shù)、潰瘍指數(shù)表示[11-12]。

潰瘍抑制率=

潰瘍指數(shù)計算方法：條索狀損傷長度大于 1 mm 者測量其長度，每1 mm計1分，寬度大于 1 mm 者加倍計分，計分總數(shù)作為該動物的潰瘍指數(shù)。

2.3 統(tǒng)計方法 實驗結(jié)果以平均值加減標(biāo)準(zhǔn)差表示。多組間計量資料比較用One-way ANOVA方法分析，均采用統(tǒng)計軟件SPSS 13.0處理。P<0.05認為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 千足蟲草對無水乙醇致小鼠胃黏膜損傷的影響 以無水乙醇損傷胃黏膜1 h后，解剖取小鼠全胃并沿胃大彎剪開，肉眼觀察可見正常對照組小鼠胃黏膜完整，未見明顯出血、潰爛。其余組別小鼠胃部均可見出血、潰爛。模型組動物胃部可見成塊出血潰爛。低、中、高劑量組均以點狀、條索狀出血為主(如圖2所示)。根據(jù)計算方法計算各組動物損傷評分(表1)。潰瘍指數(shù)計算結(jié)果：正常對照組0，模型組140，陽性對照組115，低劑量組135，中劑量組80，高劑量組108。損傷積分指數(shù)：正常對照組0，模型組14.0，陽性對照組11.5，低劑量組13.5，中劑量組8，高劑量組10.8。潰瘍抑制率：陽性對照組17.9%，低劑量組3.6%，中劑量組42.9%，高劑量組22.9%。結(jié)果證實千足蟲草提取物高、中劑量均可減輕小鼠胃黏膜損傷程度，療效優(yōu)于陽性對照組和低劑量組，其中中劑量(350mg/kg)組對小鼠胃黏膜損傷保護作用最為顯著。

注：A.正常對照組；B.模型組；C.陽性對照組；D.低劑量組；E.中劑量組；F.高劑量組

表1 各組動物胃黏膜損傷評分表

續(xù)表1

3.2 千足蟲草對無水乙醇致小鼠胃病理組織學(xué)的影響 如圖3所示，正常對照組小鼠胃組織黏膜結(jié)構(gòu)基本正常，黏膜層未見明顯壞死，未見炎性細胞浸潤；模型組小鼠胃黏膜可見壞死(黑色箭頭)，局部黏膜糜爛(藍色箭頭)，間質(zhì)毛細血管淤血，廣泛黏膜下層水腫(綠色箭頭)，個別腺體萎縮(紅色箭頭)；陽性對照組可見胃上皮輕度增生、增厚(黑色箭頭)，局部可見較多中性粒細胞和少量單核細胞浸潤(黃色箭頭)；低劑量組出現(xiàn)廣泛粘膜上皮細胞脫落、缺失(黑色箭頭)，可見2處粘膜輕度壞死伴出血(藍色箭頭)，局部粘膜下層可見散在的炎性細胞浸潤(黃色箭頭)；中劑量組胃黏膜上皮完整，粘膜肌層平滑肌細胞排列緊密，未見明顯異常，未見明顯炎性細胞浸潤；高劑量組胃黏膜上皮完整，未見明顯壞死和脫落，固有層腺體數(shù)量豐富，可見主細胞和壁細胞，形態(tài)結(jié)構(gòu)未見明顯異常，有粘膜下層水腫，可見少量中性粒細胞和單核細胞浸潤(黃色箭頭)。

注：A.正常對照組；B.模型組；C.陽性對照組；D.低劑量組；E.中劑量組；F.高劑量組

4 討論

胃潰瘍屬消化性潰瘍，主要發(fā)病機制為胃黏膜防御與攻擊因子失衡[13-14]?，F(xiàn)代醫(yī)藥主要以降低各種攻擊因素的作用及增強胃黏膜防御功能來治療胃潰瘍[15]。

現(xiàn)代中醫(yī)藥學(xué)研究[16]發(fā)現(xiàn)，中草藥提取物多糖成分可通過抑酸、抑制胃蛋白酶分泌、抑制炎癥反應(yīng)、改善氧化防御能力、促進胃黏液分泌、改善胃黏膜血管微循環(huán)等對胃潰瘍起到防治作用。胃黏膜攻擊因素主要是胃酸和胃蛋白酶[16]。胃蛋白酶由胃蛋白酶原經(jīng)胃酸活化產(chǎn)生，胃酸分泌過多時導(dǎo)致胃蛋白酶原過度活化生成胃蛋白酶，侵襲胃黏膜，導(dǎo)致胃潰瘍產(chǎn)生。胃黏膜發(fā)生炎癥時，組織缺氧，能量代謝發(fā)生障礙，將導(dǎo)致氧自由基釋放，氧自由基具有強細胞毒性，其可與細胞膜上的不飽和脂肪酸結(jié)合形成丙二醛，對胃黏膜細胞造成損傷[17]。超氧化物歧化酶(SOD)可清除氧自由基，減輕氧化應(yīng)激損傷。此外，胃黏膜血管微循環(huán)作為胃防御損傷的另一因素，為保障胃黏膜完整，其通過血液循環(huán)為胃黏膜傳遞營養(yǎng)和清除有害代謝物[18]。微循環(huán)受損將導(dǎo)致胃黏膜受到損害。

目前，臨床對胃潰瘍的治療以西藥為主。西醫(yī)多采用化學(xué)藥物如奧美拉唑、泮托拉唑等對胃潰瘍進行治療，雖療效顯著，但復(fù)發(fā)率高；對比而言中醫(yī)藥學(xué)對疾病的治療則講究調(diào)節(jié)整體，中藥多靶點、多層次、多途徑的作用機制在治愈疾病的同時還提升了人體免疫力，減小藥物不良反應(yīng)、降低復(fù)發(fā)率[19-20]。多糖在胃潰瘍的臨床治療上具有廣闊的前景，有較高的臨床應(yīng)用價值，未來在相應(yīng)的科研工作當(dāng)中還需要更深入探究其藥理學(xué)機制，推進多糖在臨床治療胃潰瘍的進一步應(yīng)用。

本實驗對土家藥千足蟲草多糖提取物的抗小鼠急性酒精性胃潰瘍效果做了初步探究。根據(jù)現(xiàn)有研究顯示，大量攝入酒精后，酒精可對胃黏膜上表皮細胞造成損害，導(dǎo)致胃黏膜破損，并刺激胃黏膜釋放細胞因子與炎癥介質(zhì)，導(dǎo)致炎癥因子浸潤，酒精急性胃潰瘍的產(chǎn)生與這些因素緊密相關(guān)[21-22]。實驗結(jié)果顯示，以千足蟲草提取物350 mg/kg(0.1 mL/10g)的劑量給藥治療無水乙醇致小鼠急性胃潰瘍具有較好效果。潰瘍抑制率42.9%，相較于其他給藥組較為理想，且大于陽性對照17.9%；病理切片結(jié)果同樣顯示中劑量組胃黏膜損傷程度優(yōu)于其他組別。說明在本實驗設(shè)計劑量范圍內(nèi)，其作用符合“鐘型”反應(yīng)規(guī)律，即在中劑量組已達最大效能，今后的研究中可設(shè)計此劑量為高劑量組。

研究[23-26]表明，燕麥類的主要功能成分除了多糖還有β-葡聚糖，其含量由3%～16%不等，臨床研究已證實其具有降血糖、降血脂、抗氧化、調(diào)節(jié)免疫、促進傷口愈合等功能。最新研究[27]顯示燕麥β-葡聚糖能夠?qū)π∈缶凭毙晕笣兤鸬搅己脤棺饔?。由此分析千足蟲草多糖提取物抗無水乙醇致小鼠急性胃潰瘍的主要作用成分可能為多糖和β-葡聚糖，但千足蟲草中多糖和β-葡聚糖的具體含量以及與同類藥用植物相比千足蟲草具有哪些優(yōu)勢，有待進一步設(shè)計相關(guān)實驗進行分析探討。

綜上，千足蟲草提取物350mg/kg劑量對胃黏膜具有一定保護作用，具有較好開發(fā)利用前景。其藥理作用與劑量之間的關(guān)系、作用機理、具體藥效成分等有待進一步探究。