陳大為， 周天琦， 張培怡， 庹順羽， 賈凌云， 候勤正， 孫 坤

(西北師范大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，甘肅 蘭州 730070)

黨參 (Codonopsispilosula(Franch) Nannf.) 為桔?？贫嗄晟荼局参?。以根入藥，用于脾肺虛弱、氣血兩虧、體倦無(wú)力等病癥治療[1]。甘肅省是我國(guó)黨參主產(chǎn)區(qū)之一，其產(chǎn)量占全國(guó)總量的70%以上，居全國(guó)第一[2]。近年來(lái)，隨著市場(chǎng)需求增大，黨參種植面積也隨之?dāng)U增。由于長(zhǎng)期連作、農(nóng)藥化肥過(guò)量使用，病蟲(chóng)害發(fā)生日益嚴(yán)重，特別是灰霉病的危害已經(jīng)成為制約甘肅黨參種植產(chǎn)業(yè)發(fā)展的主要障礙之一[3]。黨參灰霉病是由灰葡萄孢 (Botrytiscinerea) 引起的一類(lèi)真菌性病害，其寄主范圍廣，傳播能力強(qiáng)，侵染速度快，可引起1 400多種植物發(fā)生灰霉病[2,4]。目前，黨參灰霉病的防治主要以化學(xué)藥劑和抗病品種并結(jié)合一些粗放的農(nóng)業(yè)措施為主，但是隨著化學(xué)藥劑長(zhǎng)時(shí)間的大量使用，灰霉菌對(duì)很多藥劑均產(chǎn)生了不同程度的抗藥性，防治效果日益降低，同時(shí)，化學(xué)藥劑長(zhǎng)期大量使用所引起的環(huán)境污染，危害人畜健康等問(wèn)題日益加重。鑒于目前防治方法的不足，促使人們尋求黨參灰霉病新的防治措施。因此，具有高效、安全、無(wú)污染等特性的生物防治途徑成為當(dāng)下國(guó)內(nèi)外黨參灰霉病防治研究的新趨勢(shì)[5]。芽胞桿菌(Bacillusspp.)具有抗逆能力強(qiáng)、繁殖速率快、無(wú)污染等特點(diǎn)，被廣泛用于植物病害防治[6]。黃大野等[7]報(bào)道枯草芽胞桿菌 (Bacillussubtilis) NBF809對(duì)番茄葉斑病的盆栽防治效果高達(dá)73.26%；許麗婷等[8]報(bào)道枯草芽胞桿菌XC-1對(duì)馬鈴薯黑痣病大田防效為54.51%；王鐵霖等[9]從人參根部分離篩選出一株內(nèi)生解淀粉芽胞桿菌(Bacillusmyloliquefaciens) RS-3，其對(duì)灰霉菌抑菌率達(dá)到54.4%。但是，由于受環(huán)境條件的多變性和土壤系統(tǒng)復(fù)雜性的影響，生防菌對(duì)植物病害的田間防治效果往往低下。而生防菌經(jīng)過(guò)制劑化后，避免了外界因素的影響，成為當(dāng)下植物病害防治的首選方法[10]。目前，國(guó)內(nèi)外已研制出了大量芽胞桿菌制劑。美國(guó)現(xiàn)已登記并投入實(shí)際推廣應(yīng)用的芽胞桿菌制劑有枯草芽胞桿菌 (Bacillussubtilis) 制劑 6 種、解淀粉芽胞桿菌 (Bacillusamyloliquefaciens) 制劑 6 種、地衣芽胞桿菌 (Bacilluslicheniformis) 制劑 2 種、短小芽胞桿菌 (Bacilluspumilus) 制劑 3 種、堅(jiān)強(qiáng)芽胞桿菌 (Bacillusfirmus) 制劑 2 種、蠟質(zhì)芽胞桿菌 (Bacilluscereus) 制劑 1 種、巨大芽胞桿菌 (Bacillusmegaterium) 制劑 1 種、蕈狀芽胞桿菌 (Bacillusmycoides) 制劑 1 種[11-12]。而國(guó)內(nèi)在芽胞桿菌制劑研發(fā)中，枯草芽胞桿菌制劑有72 種、多粘類(lèi)芽胞桿菌 (Bacillusmarinus) 2 種、甲基營(yíng)養(yǎng)型芽胞桿菌 (Bacillusmethylotrophicus) 4 種[12]?？梢?jiàn)，芽胞桿菌屬細(xì)菌在制劑開(kāi)發(fā)方面有著巨大的潛力?？蓾裥苑蹌┦俏覈?guó)微生物源農(nóng)藥主要的劑型之一，因其具有有效成分含量高、對(duì)環(huán)境友好、生產(chǎn)所需成本低等特點(diǎn)，被廣泛用于葉部病害的防治[13]。因此，可濕性粉劑是灰霉病等葉部病害防治的最佳劑型。本研究以前期從黨參組織中分離的一株對(duì)灰霉病有較好抑制作用的內(nèi)生萎縮芽胞桿菌 (Bacillusatrophaeus) GJW2-1為試驗(yàn)材料，對(duì)其進(jìn)行制劑工藝優(yōu)化，并對(duì)所研制的可濕性粉劑的穩(wěn)定性及盆栽防治效果進(jìn)行評(píng)價(jià)，為該菌株商品化開(kāi)發(fā)及黨參灰霉病的生物防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)材料 萎縮芽胞桿菌 (Bacillusatrophaeus) GJW2-1 和黨參種子 (渭黨 1 號(hào)) 均由西北師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院逆境植物進(jìn)化與發(fā)育實(shí)驗(yàn)室提供。

1.1.2 培養(yǎng)基 ①營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(NA)；②營(yíng)養(yǎng)液體培養(yǎng)基(NB)；③馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 (PDA)。

1.1.3 主要試劑與儀器設(shè)備 載體：硅藻土、高嶺土、碳酸鈣、凹凸棒土；助劑：分散劑 (木質(zhì)素磺酸鈉、羧甲基纖維素鈉、聚乙烯醇)，濕潤(rùn)劑 (十二烷基硫酸鈉、十二烷基苯磺酸鈉、丁基萘磺酸鈉)，紫外保護(hù)劑 (抗壞血酸、β-環(huán)糊精、腐殖酸)。所有載體與助劑購(gòu)自上海邁瑞爾化學(xué)技術(shù)有限公司。臺(tái)式干燥箱 (DHG-9070A，上海東麓儀器設(shè)備有限公司)；超微粉碎機(jī) (WZJ-6B，濟(jì)南天方機(jī)械有限公司)；超凈工作臺(tái) (SW-CJ-3F，上海滬凈醫(yī)療器械有限公司)；恒溫培養(yǎng)箱 (HPX-II-80，上海新諾儀器集團(tuán)有限公司)；恒溫培養(yǎng)搖床 (SLSK-2018R，上海世平實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 載體與助劑篩選 將菌株GJW2-1劃線(xiàn)接種于NA培養(yǎng)基上，28 ℃培養(yǎng)24 h，挑取單菌落接種于裝有50 mL的NB培養(yǎng)基的150 mL三角瓶中，30 ℃、180 r/min培養(yǎng)3 d，得活菌發(fā)酵液。將載體按5%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))比例與滅菌的NA培養(yǎng)基混合均勻，制成平板。取1 mL菌株GJW2-1發(fā)酵液 (1.14×109cfu/mL)用無(wú)菌水稀釋106倍后，取100 μL稀釋液，均勻涂布于含不同載體的平板上，以不含載體的平板為空白對(duì)照，每個(gè)處理3次重復(fù)，28 ℃培養(yǎng)3 d后統(tǒng)計(jì)平板菌落數(shù)，篩選出對(duì)該菌沒(méi)有影響的載體。將濕潤(rùn)劑以250 μg/mL[12-13]，分散劑以1 500 μg/mL[14-15]，保護(hù)劑以50 μg/mL[14-15]質(zhì)量濃度的比例與滅菌的NA培養(yǎng)基混合均勻，制成平板。取1 mL菌株GJW2-1發(fā)酵液 (1.14×109cfu/mL)用無(wú)菌水稀釋106倍后，取100 μL稀釋液，均勻涂布于含不同助劑的平板上，以不含助劑的平板為空白對(duì)照，每個(gè)處理3次重復(fù)，28 ℃培養(yǎng)3 d后統(tǒng)計(jì)平板菌落數(shù)，篩選出對(duì)該菌沒(méi)有影響的助劑。

1.2.2 載體與助劑最佳配比正交優(yōu)化 利用篩選出的載體和助劑進(jìn)行4因素3水平正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)(L9(34))，檢測(cè)不同配比對(duì)活菌數(shù)的影響[16]，以確定載體和助劑的最佳配比。試驗(yàn)設(shè)計(jì)如表1所示。

表1 載體和助劑配比優(yōu)化的正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)Table 1 Orthogonal experimental design table for optimization of the ratio of carrier and auxiliary agent

1.2.3 可濕性粉劑的加工及指標(biāo)檢測(cè) 將菌株GJW2-1發(fā)酵液 (1.14×109cfu/mL) 按正交優(yōu)化試驗(yàn)結(jié)果與載體和助劑混合均勻，40 ℃干燥箱中烘干，經(jīng)超微粉碎制成可濕性粉劑。稱(chēng)取1 g，無(wú)菌水稀釋106倍，取100 μL涂布于NA培養(yǎng)基上，重復(fù)3次，28 ℃培養(yǎng)3 d后測(cè)其活菌數(shù)。

1.2.4 可濕性粉劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè) ①懸浮率、濕潤(rùn)時(shí)間：分別參照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)農(nóng)藥可濕性粉劑懸浮率測(cè)定方法GB/T14825-2006[17]和國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)農(nóng)藥可濕性粉劑濕潤(rùn)性測(cè)定方法GB/T5451-2001[18]檢測(cè)可濕性粉劑懸浮率、濕潤(rùn)時(shí)間。②含水率：稱(chēng)取10 g樣品放在已經(jīng)精準(zhǔn)測(cè)量的培養(yǎng)皿中，105 ℃烘干，測(cè)量樣品及培養(yǎng)皿的總重量，根據(jù)公式計(jì)算含水率：含水率 (%)=((樣品重量+培養(yǎng)皿重量-烘干后總重量)/(烘干后總重量-培養(yǎng)皿重量))×100%。細(xì)度檢測(cè)參照李姝江等[14]方法進(jìn)行。③熱穩(wěn)定性：分別稱(chēng)取1 g可濕性粉劑于20、30、40、50、60、70 ℃條件下水浴30 min，冷卻至室溫，用無(wú)菌水稀釋106倍，取100 μL涂布于NA培養(yǎng)基上，重復(fù)3次，以未經(jīng)處理的制劑為對(duì)照，28 ℃培養(yǎng)3 d后測(cè)定其活菌數(shù)。④酸堿穩(wěn)定性：分別稱(chēng)取1 g可濕性粉劑用0.1 mol/L NaOH和0.1 mol/L HCl溶液調(diào)節(jié)pH值為4、5、6、7、8、9、10，用無(wú)菌水稀釋106倍，取100 μL涂布于NA培養(yǎng)基上，重復(fù)3次，以未經(jīng)處理的制劑為對(duì)照，28 ℃培養(yǎng)3 d后測(cè)定其活菌數(shù)。⑤紫外穩(wěn)定性：分別稱(chēng)取1 g可濕性粉劑置于紫外燈 (28 W) 下10 cm處，分別照射20、40、60、80、100、120 min后，用無(wú)菌水稀釋106倍，取100 μL涂布于NA培養(yǎng)基上，重復(fù)3次，以未經(jīng)處理的制劑為對(duì)照，28 ℃培養(yǎng)3 d后測(cè)定其活菌數(shù)。⑥儲(chǔ)藏期：將10 g可濕性粉劑在室溫 (25 ℃) 下貯存，每20 d取 1 g，用無(wú)菌水稀釋106倍，取100 μL涂布于NA培養(yǎng)基上，重復(fù)3次，28 ℃培養(yǎng)3 d后測(cè)定其活菌數(shù)。

1.2.5 菌株 GJW2-1可濕性粉劑對(duì)黨參灰霉病的盆栽防治效果 ①黨參灰霉菌孢子懸浮液的制備：向活化7 d后的黨參灰霉病菌中加入5 mL無(wú)菌水，震蕩30 min即得分生孢子懸浮液原液，用無(wú)菌水稀釋至1×106個(gè)/mL，備用。②黨參種子發(fā)芽：挑選籽粒飽滿(mǎn)的黨參種子，用2% NaClO溶液表面消毒10 min后，用無(wú)菌水漂洗 3～4 次，25 ℃浸種24 h，置于鋪有無(wú)菌濕紗布的培養(yǎng)皿中催芽。待黨參種子發(fā)芽后，播種于裝有滅菌蛭石土的花盆 (規(guī)格：高150 mm×直徑200 mm) 中，28 ℃，相對(duì)濕度70%，16 h光照/8 h黑暗條件下培養(yǎng)。待幼苗長(zhǎng)至六到八葉期時(shí)進(jìn)行后續(xù)防效試驗(yàn)。③預(yù)防試驗(yàn)：分別取1 g可濕性粉劑，無(wú)菌水稀釋100、500、1 000 倍 (20 mL)，噴施黨參植株，以藥液完全布滿(mǎn)葉片而不滴水為度。待葉片上的液體晾干后，接種灰霉菌孢子懸浮液 (20 mL)于各處理植株，以噴施無(wú)菌水后接種灰霉菌孢子懸浮液為對(duì)照，每個(gè)處理3盆，每盆5株，25 ℃保濕48 h， 14 d后記錄發(fā)病情況，并按下述公式計(jì)算病情指數(shù)和防治效果。④治療試驗(yàn)：先將黨參灰霉菌孢子懸浮液 (20 mL) 噴施到黨參幼苗上，25 ℃保濕48 h，分別取1 g可濕性粉劑用無(wú)菌水稀釋100、500、1 000倍 (20 mL) 噴施于處理的黨參植株，以先接種灰霉菌孢子懸浮液后噴施無(wú)菌水為對(duì)照，每個(gè)處理3盆，每盆5株， 14 d后記錄發(fā)病情況，并按下述公式計(jì)算病情指數(shù)和防治效果。按病斑面積占葉片總面積進(jìn)行分級(jí)。0級(jí):無(wú)病癥；1級(jí)：10%以下；2級(jí)： 10%～20%；3 級(jí)：20%～30%；4 級(jí)：30%～60%；5 級(jí)： 60%以上[19]。病情指數(shù)=∑(各級(jí)病葉數(shù)×相對(duì)級(jí)數(shù)值) /(調(diào)查總數(shù)×最高值代表值)×100，防治效果(%)=((對(duì)照病情指數(shù)-處理病情指數(shù)) /(對(duì)照病情指數(shù)))×100%。

1.2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析 數(shù)據(jù)輸入Excel 2007軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析和作圖，并用SPSS 19.0軟件和Duncan氏新復(fù)極差法進(jìn)行多重比較(P<0.05)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同載體對(duì)菌株 GJW2-1 活性影響

由圖1可知，不同載體均對(duì)菌株 GJW2-1活菌數(shù)有一定的影響。其中，硅藻土對(duì)菌株GJW2-1 活菌數(shù)影響最小，與對(duì)照無(wú)顯著性差異 (P>0.05)。因此選用高嶺土用作可濕性粉劑載體。

圖1 不同載體對(duì)菌株 GJW2-1活性的影響Fig.1 Effect of different carriers on activity of strain GJW2-1A：硅藻土；B：高嶺土；C：碳酸鈣：D：凹凸棒土；E：無(wú)菌水 (對(duì)照)。不同小寫(xiě)字母表示在0.05水平上差異顯著，下同A: Diatomite; B: Kaolin; C: Calcium carbonate; D: Palygorskite; E: Sterile water (CK).The different lowercase letters represent significant differences at 0.05 level，the same as below

2.2 不同助劑對(duì)菌株 GJW2-1 活性影響

2.2.1 不同分散劑對(duì)菌株 GJW2-1 活性影響 由圖2可知，不同分散劑均對(duì)菌株 GJW2-1 活菌數(shù)有一定的影響。其中添加羧甲基纖維素鈉后對(duì)菌株 GJW2-1 活菌數(shù)影響最小，為102.33×107cfu/mL，與對(duì)照無(wú)顯著性差異 (P>0.05)。因此選用羧甲基纖維素鈉用作可濕性粉劑分散劑。

圖2 不同分散劑對(duì)菌株 GJW2-1活性的影響Fig.2 Effect of different dispersant on activity of strain GJW2-1A：木質(zhì)素磺酸鈉；B：羥甲基纖維素鈉；C：聚乙烯吡咯啉酮；D：無(wú)菌水 (對(duì)照)A: Sodium ligninsulfonate; B: Carboxymethylcellulose sodium; C: Polyvinyl pyrrolidone; D: Sterile water (CK)

2.2.2 不同紫外保護(hù)劑對(duì)菌株 GJW2-1 活性影響 由圖3可知，不同紫外保護(hù)劑對(duì)菌株 GJW2-1活菌數(shù)均有一定影響。其中， β-環(huán)糊精對(duì)菌株GJW2-1 活菌數(shù)影響最小，為102.00×107cfu/mL，與對(duì)照無(wú)顯著性差異 (P>0.05)。因此選用 β-環(huán)糊精用作可濕性粉劑紫外保護(hù)劑。

圖3 不同紫外保護(hù)劑對(duì)菌株 GJW2-1活性的影響Fig.3 Effect of different UV Protective agents on activity of strain GJW2-1A：抗壞血酸；B： β-環(huán)糊精；C：腐殖酸；D：無(wú)菌水 (對(duì)照)A: Ascorbic acid; B: β-Cyclodextrin; C: Humic acid; D: Sterile water (CK)

2.2.3 不同濕潤(rùn)劑對(duì)菌株 GJW2-1 活性影響 由圖 4 可知，不同濕潤(rùn)劑對(duì)菌株 GJW2-1活菌數(shù)均有一定影響。其中，十二烷基苯磺酸鈉對(duì)菌株GJW2-1 活菌數(shù)影響最小，為97.33×107cfu/mL，與對(duì)照無(wú)顯著性差異 (P>0.05)。因此選用十二烷基苯磺酸鈉用作可濕性粉劑濕潤(rùn)劑。

圖4 不同濕潤(rùn)劑對(duì)菌株 GJW2-1活性的影響Fig.4 Effect of different wetting agents on activity of strain GJW2-1A：十二烷基硫酸鈉；B：十二烷基苯磺酸鈉；C：丁基萘磺酸鈉；D：無(wú)菌水 (對(duì)照)A: Sodium dodecyl sulfate; B: Sodium dodecyl benzene sulfonate; C: Naphthalenesulfonic acid; D: Sterile water (CK)

2.3 載體與助劑配比的優(yōu)化

由表2可知，載體與助劑不同配比對(duì)菌株 GJW2-1活菌數(shù)均有一定影響。其中，按第4組配比后，可濕性粉劑中活菌數(shù)最多，為105.00×107cfu/g。因此，載體和助劑最佳配比為高嶺土35%、羧甲基纖維素鈉4%、十二烷基苯磺酸鈉10%、β-環(huán)糊精3%。

表2 載體和助劑正交試驗(yàn)結(jié)果Table 2 Proportioning optimization result of the carriers and additives in orthogonal test

2.4 可濕性粉劑的指標(biāo)檢測(cè)

參照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)對(duì)菌株GJW2-1 可濕性粉劑六項(xiàng)主要指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果可知，活菌數(shù)為1×109cfu/g，懸浮率為81%，濕潤(rùn)時(shí)間為57 s，pH值為7.1，細(xì)度為99%，含水量2.03%。六項(xiàng)指標(biāo)在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)，說(shuō)明該可濕性粉劑合格，可以用來(lái)防治植物病害(表3)。

表3 菌株 GJW2-1 可濕性粉劑性能指標(biāo)Table 3 Performance index of strain GJW2-1wettable powder

2.5 菌株GJW2-1可濕性粉劑穩(wěn)定性

對(duì)菌株GJW2-1可濕性粉劑穩(wěn)定性進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，菌株GJW2-1可濕性粉劑經(jīng)不同溫度處理后，其活菌數(shù)隨著溫度的升高而下降，在20～40 ℃范圍內(nèi)，活菌數(shù)無(wú)顯著性差異 (P>0.05)，說(shuō)明該可濕性粉劑在高溫環(huán)境中能保持一定活性 (圖5A)。紫外穩(wěn)定性測(cè)定表明，菌株GJW2-1可濕性粉劑中活菌數(shù)隨著紫外輻射時(shí)長(zhǎng)的增加而減少，但在120 min時(shí)仍能保持一定活性，說(shuō)明該可濕性粉劑具有較好的紫外耐受性 (圖5B)。酸堿穩(wěn)定性測(cè)定表明，隨著pH值的增大，該可濕性粉劑中活菌數(shù)呈現(xiàn)先增加后減少的趨勢(shì)，pH 6～8時(shí)，其活菌數(shù)無(wú)顯著性差異 (P>0.05)，說(shuō)明pH過(guò)高或者過(guò)低，均會(huì)對(duì)該菌劑活性產(chǎn)生一定的影響 (圖5C)。儲(chǔ)藏期測(cè)定表明(圖5D)，該可濕性粉劑在0～60 d內(nèi)活菌數(shù)無(wú)顯著性差異 (P>0.05)，60 d 后活菌數(shù)有一定下降，但仍能保持一定活性，說(shuō)明該可濕性粉劑在120 d內(nèi)能保持較好的活性。

圖5 菌株GJW2-1可濕性粉劑的穩(wěn)定性測(cè)定Fig.5 Determination of the stability of strain GJW2-1 wettable powderA:熱穩(wěn)定性；B:紫外穩(wěn)定性；C:酸堿穩(wěn)定性；D:儲(chǔ)藏期A: Thermal stability; B: Ultraviolet stability; C: pH stability; D: Storage period

2.6 菌株GJW2-1可濕性粉劑對(duì)黨參灰霉病盆栽防治效果

盆栽試驗(yàn)結(jié)果表明(表4)，菌株GJW2-1可濕性粉劑對(duì)黨參灰霉病有較好的預(yù)防效果和防治效果，且預(yù)防效果優(yōu)于治療效果，隨著稀釋倍數(shù)的增大，防治效果均表現(xiàn)出遞減的趨勢(shì)。稀釋100倍噴施后，菌株GJW2-1可濕性粉劑對(duì)黨參灰霉病的預(yù)防效果達(dá)81.75%，治療效果為71.56%，且各處理間差異性顯著 (P<0.05)。

表4 菌株GJW2-1可濕性粉劑對(duì)黨參霉病的盆栽防效試驗(yàn)Table 4 The control efficiency of strain GJW2-1wettable powder against gray mold of C. pilosula

3 討 論

微生物源農(nóng)藥在植物病蟲(chóng)害防控中發(fā)揮著越來(lái)越大的作用。但是，由于發(fā)酵工藝和制劑工藝優(yōu)化技術(shù)研究薄弱，進(jìn)入市場(chǎng)投入使用的生物藥劑仍為數(shù)不多。因此，高效生防菌的篩選和工業(yè)化生產(chǎn)以及實(shí)際應(yīng)用等是目前需要迫切解決的問(wèn)題[20]。生防菌存活力是決定其在實(shí)際應(yīng)用中防效高低的重要因素之一，含有活菌的生物制劑的研發(fā)不僅能夠提高農(nóng)作物的品質(zhì)，還能保護(hù)自然環(huán)境[21]。因此，在載體和助劑研究中，活菌數(shù)是衡量可濕性粉劑最佳配方的重要因素。本研究采用單因素和正交試驗(yàn)相結(jié)合的方法，以探究載體與助劑對(duì)萎縮芽胞桿菌活性的影響，以此來(lái)篩選出載體和助劑最佳的配比，最終研制的菌株GJW2-1可濕性粉劑活菌數(shù)高達(dá)1×109cfu/g，且各項(xiàng)指標(biāo)均達(dá)到國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。載體在可濕性粉劑中占有較大比例，因此載體對(duì)制劑的濕潤(rùn)性和懸浮率具有一定的影響，雖然載體是一種惰性材料，但不同種類(lèi)的載體對(duì)活體微生物的影響較大。本研究通過(guò)篩選發(fā)現(xiàn)，高嶺土對(duì)菌株GJW2-1活性影響最小，這與李姝江等[14]報(bào)道以高嶺土為載體，對(duì)解淀粉芽胞桿菌BA-1活性影響最小的結(jié)論一致。助劑不僅可以提高防效，還能降低成本[21]。本研究通過(guò)單因素篩選最終確定紫外保護(hù)劑為 β-環(huán)糊精。據(jù)報(bào)道 β-環(huán)糊精被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、環(huán)境等領(lǐng)域，且對(duì)微生物具有良好的紫外保護(hù)作用[22]。分散劑為羧甲基纖維素鈉，因其具有良好的分散、懸浮、成膜、持水等性能，被廣泛應(yīng)用于食品、造紙、涂料等領(lǐng)域[23]。濕潤(rùn)劑為十二烷基苯磺酸鈉，具有良好的表面活性，親水性較強(qiáng)[24]。菌株GJW2-1可濕性粉劑穩(wěn)定性測(cè)定表明，制劑優(yōu)化后，菌株GJW2-1在高溫、酸堿性、紫外光環(huán)境下具有較好的穩(wěn)定性，貯存期較長(zhǎng)。因此，該可濕性粉劑可在復(fù)雜多變的環(huán)境中，保持較好的活性。在盆栽防效試驗(yàn)中，該可濕性粉劑防效隨著稀釋倍數(shù)的增加而降低，但是稀釋1 000倍時(shí)，防效仍高于60%，說(shuō)明該可濕性粉劑效果良好，適用于下一階段大田試驗(yàn)。

本研究經(jīng)過(guò)制劑工藝優(yōu)化所研制的萎縮芽胞桿菌可濕性粉劑，穩(wěn)定性強(qiáng)，且在盆栽試驗(yàn)中對(duì)黨參灰霉病表現(xiàn)出了良好的防治效果，具有實(shí)際應(yīng)用潛力。但本研究研制的可濕性粉劑在田間試驗(yàn)防效及進(jìn)一步制劑優(yōu)化等方面還需進(jìn)一步研究。