王 婷 劉志勇 羅黎明 張 鴻 徐 磊曾憲保鄭梓泓劉志勇?

(1.江西中醫(yī)藥大學中醫(yī)學院,南昌 330004;2.江西省中醫(yī)基礎(chǔ)理論教研室,南昌 330004;3.江西中醫(yī)藥大學實驗動物科技中心,南昌 330004;4.江西中醫(yī)藥大學藥學院,南昌 330004)

腹瀉型腸易激綜合征(irritable bowel syndrome with predominant diarrhea,IBS-D)是一種常見的胃腸道功能紊亂性疾病,是腸易激綜合征(IBS)中最普遍的亞型。其特點是在沒有特定的器質(zhì)性病理情況下,以腹痛、腹瀉、腹脹為主要癥狀,常伴有排便習慣及大便性狀的改變,呈持續(xù)存在或反復發(fā)作[1]。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn),該病發(fā)病機制尚不明確,但是與腸道動力異常、腦腸軸功能紊亂、腸道菌群失調(diào)、內(nèi)臟高敏感性、粘膜免疫和炎性反應(yīng)等因素有關(guān)[2]。如今,腸易激綜合征的發(fā)病率已在功能性疾病中位居第一位[3],經(jīng)過文獻數(shù)據(jù)整理顯示,全球IBS 的總患病率為8.8%,北美、歐洲、澳大利亞、新西蘭等地區(qū)為8.1%、亞洲為9.6%,拉丁美洲最高,患病率為17.5%[4],其中,腹瀉型腸易激綜合征占比大,據(jù)惠州市中心人民醫(yī)院在2015 年3 月～2018年6 月調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)符合RomeⅡ診斷標準的54 例腸易激綜合征患者,腹瀉為主要癥狀患者30 例,占55.6%;便秘為主導的患者18 例,占33.3%;交替型患者6 例,占11.1%[5]?？梢?腸易激綜合征患病范圍廣、人口多,并據(jù)相關(guān)文獻研究,女性的患病率明顯高于男性[6],女性更容易感到疲勞,抑郁,焦慮等情緒,從而影響他們的生活質(zhì)量。目前,西醫(yī)多以對癥治療為主,藥物治療副作用大、不良反應(yīng)多,且停藥后易復發(fā)[7]。因此,腸易激綜合征是當今醫(yī)學領(lǐng)域研究是重點課題之一,其中腹瀉型腸易激綜合征更加應(yīng)該引起我們的重視。

當歸生姜羊肉湯作為藥膳名方,原方由當歸、生姜、羊肉組成,當歸能補血活血,調(diào)經(jīng)止痛,生姜溫中散寒,羊肉能溫補脾胃,補血益腎。具有補益氣血、溫中散寒止痛的功效。本方在張仲景的《金匱要略》記載:“寒疝,腹中痛及脅痛里急者,當歸生姜羊肉湯主之”,以及《金匱要略·婦人產(chǎn)后病脈證》曰:“產(chǎn)后腹中痛,當歸生姜羊肉湯主之;并治腹中寒疝,虛勞不足”[8],該方以脾胃為本,使驅(qū)邪而不傷正,以食物協(xié)助藥物發(fā)揮效力,既能治愈疾病,而又不損傷脾胃,主要用于病機為虛寒性疝氣、腹痛及婦女痛經(jīng)、產(chǎn)后的調(diào)理。經(jīng)現(xiàn)代文獻研究發(fā)現(xiàn),當歸生姜羊肉湯已用于呼吸、消化、免疫等系統(tǒng)疾病,均取得了較好的治療作用[9]。

近年來中醫(yī)受到越來越多人的關(guān)注,中醫(yī)治療腹瀉型腸易激綜合征以辨證論治和整體觀念出發(fā),有其副作用小和不易復發(fā)的優(yōu)勢。由于該病女性發(fā)病率更多,因此本研究以雌性大鼠作為研究對象,通過研究當歸生姜羊肉湯對脾腎陽虛型IBS-D大鼠中醫(yī)證候的影響,探討當歸生姜羊肉湯對脾腎陽虛IBS-D 大鼠脾腎陽虛證的改善作用,為當歸生姜羊肉湯用于臨床一些疾病證候的應(yīng)用提供實驗基礎(chǔ),現(xiàn)報告如下。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

SPF 級2 月齡SD 雌性大鼠72 只,體重180～220 g,江西中醫(yī)藥大學實驗動物科技中心提供[SCXK(贛)2018-0003],實驗大鼠飼養(yǎng)在江西中醫(yī)藥大學實驗動物科技中心SPF 級屏障系統(tǒng)內(nèi)[SYXK(贛)2017-0004],飼養(yǎng)環(huán)境條件為環(huán)境溫度為20℃～25℃、濕度45%～55%。整個實驗通過江西中醫(yī)藥大學實驗動物倫理委員會的審查(JZLLSC20210053),并接受其監(jiān)督,實驗過程中做到了3R 原則并對實驗動物進行倫理關(guān)懷。

1.2 主要試劑與儀器

上海麥克林生化科技有限公司提供的腺嘌呤(批號:20210307)。大鼠曠場箱,曠場裝置由3 部分構(gòu)成:長100 cm、寬100 cm、高40 cm 的箱體;視頻錄制系統(tǒng)及SMARTv 2.5.21 行為實驗分析軟件(西班牙Panlab 公司);醫(yī)用電子體溫計(TDB-1,深圳雅嵐科技有限公司);華為手機(榮耀p20,深圳華為公司);Image J 圖像分析軟件(National Institutes of Health,NIH 研發(fā));個人手提式電腦(HUAWEI MateBookD15,華為);量尺(普通市售,精度1 mm);電子天平(JH03K2,北京京衡偉業(yè)科技有限公司,最小稱量0.1 g)。

1.3 實驗方法

1.3.1 模型制備方法

由江西古漢精制中藥飲片有限公司提供煎制的番瀉葉水煎液(批號:20210411),將腺嘌呤和蒸餾水配置成濃度為20 mg/mL 的腺嘌呤藥液,番瀉葉水煎液濃度為2 g/mL,以腺嘌呤和冰番瀉葉水復合灌胃(各1 mL/100 g)30 d 造成脾腎陽虛型IBS-D模型。

1.3.2 受試物

(1)當歸生姜羊肉湯的制備

當歸生姜羊肉湯,按照《中華方劑本源劑量大典》方源東漢張仲景《金匱》卷上,組成:當歸3 兩(45 g)生姜5 兩(75 g)羊肉1 斤(250 g)用法:上三味,以水8 升(1600 mL),煮取3 L(600 mL),溫服7合(140 mL),濃縮為1 ∶2 ∶4比例的當歸生姜羊肉湯,其低、中、高劑量分別為4.2、8.4、16.8 g/kg,用于本實驗。

(2)真武湯的制備

真武湯為治療脾腎陽虛,水濕泛溢的基礎(chǔ)方,全方以助陽氣,利小便以祛水邪,主治陽虛水泛證。畏寒肢厥,小便不利,心下悸動不寧,頭目眩暈,身體筋肉瞤動,站立不穩(wěn),四肢沉重疼痛,浮腫,腰以下為甚;或腹痛,泄瀉,故本實驗采用真武湯做為對照。真武湯藥液的制備:參考全國高等醫(yī)藥院校教材《方劑學》(第五版),即茯苓9 g、芍藥9 g、生姜9 g、附子(炮)9 g,白術(shù)6 g,置于涼水中浸泡1 h,蒸煮30 min 后濃縮至質(zhì)量濃度為2 g/mL,全過程由江西古漢精制中藥飲片有限公司代煎制備。

1.3.3 動物分組

大鼠檢疫5 d,選取營養(yǎng)良好、健康活潑大鼠72 只,將72 只SD 雌性大鼠隨機分為6 組,脾腎陽虛IBS-D 造模成功后將大鼠分組為正常組、模型組、陽性組、低劑量組、中劑量組和高劑量組,每組12 只,進行灌胃。正常組和模型組每天不限飲食,陽性組每天給予真武湯,低、中、高3 個劑量組分別給與不同劑量的當歸生姜羊肉湯,連續(xù)灌胃4 周。

1.3.4 外觀檢查和中醫(yī)證候積分評價

造模過程中,觀察動物的生長情況,對動物飲食飲水和二便情況進行觀察。于給藥4 周時(即實驗結(jié)束時),分別在對應(yīng)時間點觀察各組大鼠中醫(yī)證候。參照文獻[10-11],根據(jù)國家衛(wèi)生部《中藥新藥臨床指導原則》及《中醫(yī)虛證辨證參考標準》中脾腎陽虛證判斷標準,擬定脾腎陽虛證大鼠模型證候積分評價量表(見表1),分值越高,提示中醫(yī)證候越嚴重。從大鼠精神狀態(tài)、眼睛、耳尾顏色、毛發(fā)、糞便等項目評價灌胃真武湯陽性組和灌胃當歸生姜羊肉湯低、中、高3 個劑量組對脾腎陽虛IBS-D 證候的改善情況。

表1 脾腎陽虛IBS-D 大鼠模型證候積分評價量表Table 1 Syndrome integral evaluation scale of IBS-D rat model of spleen kidney Yang deficiency

1.3.5 體重和肛溫以及腸道病理

每周對各組大鼠的體重和肛溫進行稱重和測量,測肛溫是用醫(yī)用電子體溫計TDB-1 放入大鼠肛門,待聲音提示時進行讀數(shù)并記錄,以觀察其體重和肛溫變化情況。當歸生姜羊肉湯給藥結(jié)束后取腸道進行固定并做組織切片,光鏡下觀察腸道的組織學變化。

1.3.6 飲水量和攝食量

每天記錄各組大鼠飲水量及攝食量,檢查鼠籠、水瓶,確保無漏水情況后,每天早上9:00 投放定量的500 mL 水和300 g 的飼料,于第2 天9:00 對所剩的水和飼料進行稱重和測量,以觀察其飲水量和攝食量變化情況。計算方法為:平均日進食量(g)=(添加的飼料量-剩余量)/每籠只數(shù);平均日飲水量(mL)=(添加的水量-剩余量)/每籠只數(shù)。

1.3.7 曠場實驗

行為實驗在安靜的環(huán)境下進行,實驗開始將動物放入角落區(qū),同時進行攝像和計時,記錄6 min 內(nèi)動物的活動狀態(tài),用SMARTv2.5.21 行為實驗分析軟件對后4 min 的活動狀態(tài)進行分析。

1.3.8 RGB 值

大鼠爪、尾、舌拍照及圖像處理,將大鼠的左后爪、尾巴中末端及舌面置于同一位置、同一亮度下采用華為手機拍照。圖像處理:將照片輸入電腦,用Image J 圖像分析軟件對圖片進行白平衡,用不規(guī)則曲線工具,分別框定出大鼠舌面、足底和尾部范圍,檢測其RGB 模式下的R(red,紅色),G(green,綠色),B(blue,藍色)分量值。

1.4 統(tǒng)計學方法

實驗結(jié)果的統(tǒng)計分析采用SPSS 20.0 統(tǒng)計軟件,實驗數(shù)據(jù)均表示為平均數(shù)±標準差()。多組數(shù)據(jù)若全部滿足正態(tài)分布而且方差齊,采用單因素方差分析法比較組間的差異,組間兩兩比較則選擇用LSD 法進行多重比較;如果沒有完全滿足,那么就選擇采用非參數(shù)檢驗。兩組數(shù)據(jù)的比較采取獨立樣本t檢驗。P<0.05 為差異具有研究統(tǒng)計學意義。最后采用GraphPapPrism 8.0.1 做圖。

2 結(jié)果

2.1 動物整體情況的觀察

造模結(jié)束后,模型大鼠出現(xiàn)喜歡扎堆,墊料潮濕污穢加重的情況,模型鼠糞便出現(xiàn)稀軟便溏現(xiàn)象,還可見到大便具有不消化的顆粒狀,見圖1。

圖1 脾腎陽虛IBS-D 模型鼠的表現(xiàn)及糞便狀況的改變Figure 1 Performance of IBS-D model rat with spleen kidney Yang deficiency and the changes of fecal status

2.2 中醫(yī)證候積分評價結(jié)果

正常組的精神狀態(tài)、眼睛、耳尾顏色、毛發(fā)、糞便都為正常狀態(tài),模型組與正常組相比,精神狀態(tài)、眼睛、耳尾顏色、毛發(fā)、糞便都有異常,具有顯著性差異(P<0.05),陽性組和低、中、高3 個劑量組大鼠的中醫(yī)證候積分評價結(jié)果見表2。

表2 各組大鼠中醫(yī)證候積分評價結(jié)果(,n=12)Table 2 Evaluation results of TCM syndrome score of rats in each group

表2 各組大鼠中醫(yī)證候積分評價結(jié)果(,n=12)Table 2 Evaluation results of TCM syndrome score of rats in each group

注:與正常組比較,??P<0.01,???P<0.001,????P<0.0001;與模型組比較,####P<0.0001。Note.Compared with normal group,??P<0.01,???P<0.001,????P<0.0001.Compared with model group,####P<0.0001.

與模型組相比,精神狀態(tài)、眼睛、耳尾顏色、毛發(fā)、糞便的積分有所改善,其中精神狀態(tài)、眼睛、毛發(fā)、糞便的積分都有顯著性差異(P<0.05),而低、中、高劑量組與陽性組相比,精神狀態(tài)、眼睛、耳尾顏色、毛發(fā)、糞便均較好,各組之間無顯著性差異(P>0.05)(見表2)。

2.3 體重和肛溫

從數(shù)據(jù)來看,正常組、模型組、陽性組和3 個劑量組大鼠的體重都呈緩慢上漲趨勢,各組之間的體重無顯著性差異(P>0.05)(見表3)。從數(shù)據(jù)來看,造模后模型組、陽性組和3 個劑量組大鼠的肛溫與正常組相比都有所下降,其中模型組、陽性組和低、中劑量組大鼠的肛溫與正常組相比具有顯著性差異(P<0.05),在第3 周,模型組大鼠的肛溫與正常組相比明顯更低,具有顯著性差異(P<0.05);中、高劑量組大鼠肛溫與模型組相比明顯更高,具有顯著性差異(P<0.05);低、中、高3 個劑量組大鼠的肛溫與陽性組相比無顯著性差異(P>0.05)(見表4)。

2.4 飲水量和攝食量

由圖可知,在第1 周,陽性組大鼠的攝食量與正常組相比明顯更高,具有顯著性差異(P<0.05),高劑量組大鼠的攝食量與模型組和陽性組相比都明顯更低,均具有顯著性差異(P<0.05);在第2 周,高劑量組大鼠的攝食量與模型組和陽性組相比均更低,都具有顯著性差異(P<0.05),在第3 周和第4周,高劑量組大鼠的攝食量與正常組、模型組、陽性組相比都更低,均具有顯著性差異(P<0.05),提示可能由于灌胃高劑量的當歸看生姜羊肉湯和高比例的羊肉導致高劑量組大鼠攝食量的減少(見圖2)。

從圖2 可知,模型組、陽性組和3 個劑量組大鼠的飲水量趨勢線逐漸下降,但與正常組大鼠相比還是明顯較高,具有顯著性差異(P<0.05),其中,在第1 周,高劑量組和陽性組大鼠的飲水量與模型組相比都具有顯著性差異(P<0.05);在第2 周,高劑量組大鼠的飲水量明顯高于陽性組,具有顯著性差異(P<0.05);在第3 周,中、高劑量組大鼠的飲水量與陽性組相比明顯更高,具有顯著性差異(P<0.05);在第4 周,陽性組大鼠的飲水量與模型組相比明顯更低,具有顯著性差異(P<0.05),中、高劑量組大鼠的飲水量明顯高于陽性組,具有顯著性差異(P<0.05),提示3 個劑量組的飲水量可能與灌胃當歸生姜羊肉湯有關(guān)(見圖2)。

圖2 各組大鼠每周攝食量和飲水量變化圖Figure 2 Changes of weekly food intake and water consumption of rats in each group

2.5 腸道組織病理學改變

腸道光鏡下可見,正常組織結(jié)構(gòu)正常、無或少炎性細胞浸潤,而模型鼠腸道粘膜下層出現(xiàn)大量淋巴細胞浸潤,喂食當歸生姜羊肉湯后炎性浸潤明顯減少,陽性對照組也基本正常(圖3A～3F);模型動物的腸絨毛紊亂,柱狀絨毛破壞,腸隱窩基底部有破壞現(xiàn)象,黏膜下層,黏膜下基層,肌層增寬,結(jié)構(gòu)疏松,喂食當歸生姜羊肉湯后結(jié)構(gòu)有所恢復(圖3G～3L)。

圖3 各組大鼠腸道的病理組織的變化Figure 3 Pathological changes of intestinal tract of rats in each group

2.6 曠場實驗

從運動軌跡來看,正常組大鼠在箱中快速移動,頻繁經(jīng)過中心區(qū)域;模型組大鼠運動度明顯降低,在箱中移動速度緩慢,幾乎不經(jīng)過中心區(qū)域,停留角落區(qū)域時間長,表現(xiàn)出明顯的倦怠乏力;陽性組大鼠通過灌胃真武湯,與模型組相比,運動度明顯提升,在箱中移動速度較快,較多經(jīng)過中心區(qū)域,頻繁在周邊地區(qū)移動;低、中、高3 個劑量組較模型組從運動軌跡來看都有較大的改善,移動速度有依次提升的趨勢,其中中劑量和高劑量大鼠較頻繁經(jīng)過中心區(qū)域(見圖4)。

圖4 曠場實驗中各組大鼠典型運動軌跡圖Figure 4 Typical trajectories of rats in each group in open field experiments

從數(shù)據(jù)結(jié)果分析,與正常組比較,模型組大鼠在周邊區(qū)域時間過長,在中心區(qū)域時間明顯下降,具有顯著性差異(P<0.05),在周邊區(qū)域爬行的距離更短,具有顯著性差異(P<0.05),同時長時間在周邊區(qū)域休息,具有顯著性差異(P<0.05),且無論在周邊區(qū)域還是在中心區(qū)域都行動過慢,其中在中心區(qū)域的行動過慢具有顯著性差異(P<0.05),表明番瀉葉和腺嘌呤造模引起大鼠精神萎靡,活動度下降,倦怠乏力;陽性組和低、中、高3 個劑量組在中心區(qū)域和周邊區(qū)域的時間、距離、快速移動時間、慢速移動時間與模型組比較都有明顯提高,其中陽性組和中、高劑量大鼠的在中心區(qū)域和周邊區(qū)域的時間、中心區(qū)域移動的距離、在周邊休息的時間與模型組都具有顯著性差異(P<0.05);與陽性組相比,低、中劑量組大鼠在周邊區(qū)域更長和在中心區(qū)域時間更短,都具有顯著性差異(P<0.05),高劑量組大鼠在周邊區(qū)域更短和在中心區(qū)域時間更長,具有顯著性差異(P<0.05),可見陽性組灌胃真武湯和3 個劑量組灌胃的當歸生姜羊肉湯都明顯改善了大鼠的自主活動狀態(tài),而且高劑量組的活動狀態(tài)比陽性組更佳,為該方緩解倦怠乏力的脾腎陽虛癥狀提供了實驗依據(jù)(見圖5)。

圖5 各組大鼠曠場實驗結(jié)果Figure 5 Open field experiment results of rats in each group

2.7 RGB 值

2.7.1 尾部

從圖片來看,正常組大鼠的尾部紅潤,模型組大鼠的尾部蒼白,近尾尖稍紅,陽性組和低、中、高3個劑量組大鼠的尾部較模型組紅,高劑量組明顯更紅(見圖6)。

從RGB 值數(shù)據(jù)來看,模型組的R、G、B 值與正常組比較,均有明顯下降,其中G、B 值具有顯著性差異(P<0.5);與模型組比較,陽性組和低、中、高劑量組大鼠的R、G、B 值更高,其中R、B 值具有顯著性差異(P<0.5),高劑量組大鼠的G 值更高,也具有顯著性差異(P<0.5),提示灌胃真武湯和當歸生姜羊肉湯都明顯改善了大鼠尾部的色澤(見圖6)。

圖6 各組大鼠尾部圖片和尾部色度比較圖Figure 6 Comparison of tail pictures and tail chromaticity of rats in each group

2.7.2 足底

從圖片來看,正常組大鼠足底紅潤,模型組足底蒼白,陽性組和低、中、高3 個劑量組較模型組紅,高劑量組明顯更紅(見圖7)。

從RGB 值數(shù)據(jù)來看,模型組大鼠足底的R、G、B 值與正常組比較有明顯下降,其中R 值具有顯著性差異(P<0.5);陽性組和低、中、高3 個劑量組的R、G、B 值與模型組比較有明顯提高,其中R 值具有顯著性差異(P<0.5),同時,陽性組和中、高劑量組的G 值比模型組更高,具有顯著性差異(P<0.5);低劑量的G 值稍低于陽性組,具有顯著性差異(P<0.5),提示灌胃真武湯和當歸生姜羊肉湯都明顯改善了大鼠足底的色澤(見圖7)。

圖7 各組大鼠足底圖片和足底色度比較圖各組大鼠足底色度比較圖Figure 7 Comparison of plantar pictures and plantar chromaticity of rats in each group

2.7.3 舌面

從圖片來看,正常組大鼠舌面淡紅、薄白苔,模型組舌面胖大暗紅,薄白苔,少澤,陽性組低劑量組舌面淡紅、薄白苔,中、高劑量組舌面稍紅(見圖8)。

從RGB 值數(shù)據(jù)來看,與正常組相比,中劑量組大鼠的舌面B 值更高,具有顯著性差異(P<0.05),與模型組比,中、高2 個劑量組大鼠舌面的R 值更高,具有顯著性差異(P<0.05),與陽性組比較,低劑量組的G 值更低,具有顯著性差異(P<0.05),提示灌胃真武湯和當歸生姜羊肉湯都明顯改善了大鼠舌面的色澤(見圖8)。

圖8 各組大鼠舌面圖片和舌面色度比較圖Figure 8 Comparison of tongue surface pictures and tongue surface chromaticity of rats in each group

3 討論

本研究采用腺嘌呤和番瀉葉水煎液的方法成功建立脾腎陽虛IBS-D 的雌性大鼠模型,用中醫(yī)證候來探究當歸生姜羊肉湯對脾腎陽虛IBS-D 的干預作用,而真武湯由炮附子、白術(shù)、茯苓、芍藥、生姜組成,功效溫補脾腎陽氣、利水消腫。主治陽虛水泛,臨床應(yīng)用于小便不利、腹痛、泄瀉等癥,王曉東[12]用真武湯合小青龍湯治療腹瀉型IBS-D 和張連文[13]用真武湯合柴胡疏肝散治療腹瀉型IBS-D 均取得了較好的臨床療效。因此,本研究選其作為陽性藥。

脾腎陽虛型IBS-D 是一種消化系統(tǒng)疾病,中醫(yī)學認為,本病屬“腹痛”、“泄瀉”等范疇?！端貑枴づe痛論篇》曰:“寒氣客于小腸,小腸不得成聚,故后泄腹痛矣”,且《醫(yī)宗必讀》也指出“無濕不成泄”,可見該病與寒和濕有關(guān)。脾腎陽虛作為該病的證,《內(nèi)經(jīng)》記載,“脾居中央以灌四旁”,脾主司運化之職,是機體消化飲食、吸收輸布水谷精微和代謝津液的樞紐?！端貑枴吩?“腎者主蟄,封藏之本,精之處也。”腎藏精,精化氣,腎氣是生氣之源,是生命力活動的原動力,具有推動人體生長發(fā)育、促進人體生殖功能、防御外邪入侵的作用。脾與腎的關(guān)系主要表現(xiàn)在先后天相互滋生和水液代謝方面,脾運化水谷精微,依賴于腎陽的溫煦蒸化,才能健運,腎精依賴于脾運化的水谷精微不斷補充,才能充盛。而脾腎兩臟的陽氣虧虛,會引起消化機能失調(diào)和水液代謝的紊亂,出現(xiàn)腹痛、腹瀉等臨床表現(xiàn)。辨證論治是中醫(yī)理論的核心和精髓,中醫(yī)治病以辯證論治為基本原則,治療主要是溫腎健脾、化濕止瀉。

當歸生姜羊肉湯,本方當歸能補血活血、溫中止痛,在《名醫(yī)別錄》中記載,“能溫中止痛,補五臟,生肌肉”李時珍認為當歸可補血活血,甄權(quán)認為凡虛寒證,宜重用當歸,經(jīng)現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)當歸能抗炎、促進造血功能,保肝、護腎,調(diào)節(jié)免疫等藥理作用[14];生姜能溫中散寒,驅(qū)除表邪,《食療本草》中記載生姜“除壯熱,治轉(zhuǎn)筋、心滿”《珍珠囊》中生姜“益脾胃,散風寒”有抗炎、抗腫瘤,增強免疫功能,抗動脈粥樣硬化等藥理作用[15];羊肉暖中補虛,補中益氣,益腎氣,治虛勞寒冷,五勞七傷。三者合用,具有補益氣血、溫中散寒、調(diào)經(jīng)止痛的功效,此方藥借食味,食助藥性,有“藥食同源”、“寓藥于食”的特點,以脾胃為本,以后天滋養(yǎng)先天,補益脾腎,促進脾運化水谷精微、統(tǒng)攝血液的功能,提高機體免疫應(yīng)答和造血的能力,腎為一身元陽之本,能提高腎溫煦機體的作用,推動人體的生命活動。經(jīng)查文獻可知,當歸生姜羊肉湯對寒性疾病有良好的治療效果[16-17]?；诖?本研究立足于中醫(yī)基礎(chǔ)理論,探討當歸生姜羊肉湯對脾腎陽虛型IBS-D 大鼠中醫(yī)證候的影響,為中醫(yī)治療脾腎陽虛IBS-D 提供實驗支撐和指導臨床實驗,為進一步研究IBS-D 的作用機制打下基礎(chǔ)。本研究采用雌性大鼠,為擴大當歸生姜羊肉湯適用人群提供一定的實驗基礎(chǔ)。

從實驗結(jié)果來看,給雌性大鼠灌胃低、中、高不同劑量的當歸生姜羊肉湯后中醫(yī)癥候評分明顯低于模型組,具有顯著性差異(P<0.05),體重、肛溫、攝食量、飲水量也有相應(yīng)的恢復,可見當歸生姜羊肉湯補益脾腎,提高機體免疫能力,有效的改善脾腎陽虛所引起大鼠精神萎靡、眼睛乏神、毛發(fā)稀疏發(fā)黃、糞便稀溏、食欲不振的癥狀。

曠場實驗可以用于實驗動物的虛證的探索,通過曠場實驗可見,灌胃當歸生姜羊肉湯后,低、中、高3 個劑量組大鼠的活動度與模型組比明顯提高,具有顯著性差異(P<0.05),提示當歸生姜羊肉湯有其溫中散寒的作用,能有效的改善脾腎陽虛所引起的畏寒肢冷,倦怠乏力懶動的癥狀。腺嘌呤造模腎陽虛對腎造成損害,經(jīng)藥理研究發(fā)現(xiàn)當歸對腎具有保護作用,尤其在腎小球的過濾與腎小管的重吸收作用中有很明顯的效果,減輕腎損傷[18]。曠場實驗有助于我們對由于脾腎原因?qū)е碌臍馓摶顒佣葴p少的定量評價具有重要的參考意義。

中醫(yī)四診是中醫(yī)診病的重要方法,動物的四診等由于實驗動物的特殊性,難以定性和定量判斷,建立圖像和軟件分析的方法可以幫助進行診斷。從RGB 值數(shù)據(jù)來看,低、中、高劑量組大鼠尾部、足底、舌面的R、G、B 值與模型組比較更高,具有顯著性差異(P<0.05)。表明當歸生姜羊肉湯具有補血活血的作用,能明顯改善了大鼠尾部、足底、舌面的色澤。這可能其中當歸含有的多糖有關(guān),它能推動脾臟內(nèi)源性結(jié)節(jié)的生長,使得MSCs 增殖,促進骨髓細胞DNA 的合成,刺激機制的造血功能,從而緩解缺血性癥狀[19]。

本研究表明,使用曠場實驗和舌、爪、尾的RGB值可以在一定程度上和中醫(yī)的四診在實驗動物上進行定量分析,有助于實驗動物模型的中醫(yī)證候指標的建立。結(jié)合實驗中的大鼠的中醫(yī)證候的表現(xiàn),當歸生姜羊肉湯對脾腎陽虛SD 雌性大鼠中醫(yī)證候具有改善作用,且呈現(xiàn)出一定的劑量效應(yīng)關(guān)系。