張 雄 郭文文 張彩勤?

(1.空軍軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,西安 710032;2.陜西省咸陽(yáng)市中心醫(yī)院,陜西 咸陽(yáng) 712000)

肺癌是一種起源于肺部支氣管黏膜或腺體的惡性腫瘤,依據(jù)其腫瘤細(xì)胞形態(tài),可將肺癌分為兩類(lèi),一類(lèi)為小細(xì)胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC),約占肺癌確診患者的15%,另一類(lèi)為非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC),約占肺癌確診患者的85%。其中非小細(xì)胞肺癌又可具體分為鱗狀細(xì)胞癌、腺癌以及大細(xì)胞癌3 類(lèi)。據(jù)最新臨床數(shù)據(jù)顯示[1],全球幾乎近1/4 的癌癥死亡患者屬于肺癌患者,且約57%的肺癌患者會(huì)出現(xiàn)相應(yīng)腫瘤轉(zhuǎn)移癥狀,其五年生存率低于5%。究其原因在于肺癌的臨床表現(xiàn)復(fù)雜,無(wú)法通過(guò)相關(guān)的早期診斷對(duì)患者進(jìn)行篩查,而大多數(shù)肺癌患者診斷明確時(shí),病情已發(fā)展至晚期,確診率與死亡率幾近并駕齊驅(qū)。因此,肺癌的臨床治療仍面臨著巨大的挑戰(zhàn)[2-3]。

近年來(lái),隨著以免疫檢查點(diǎn)抑制劑(immune checkpoint inhibitions,ICIs)為代表的免疫治療的發(fā)展[4-6],肺癌治療進(jìn)入了免疫治療的時(shí)代。隨之而來(lái),有大量的免疫單藥治療及聯(lián)合治療的策略亟待進(jìn)行臨床前或臨床試驗(yàn)以檢驗(yàn)治療效果。早期臨床前研究中,研究人員通常將研究焦點(diǎn)集中于腫瘤細(xì)胞本身,主要采用裸鼠、C57BL/6J 等小鼠進(jìn)行荷瘤實(shí)驗(yàn)以檢測(cè)藥物的治療效果。然而,這種模型不僅缺乏完整的腫瘤免疫微環(huán)境(tumor immune microenvironment,TME)[7],且其與人類(lèi)腫瘤細(xì)胞及免疫系統(tǒng)也存在種屬差異,造成了實(shí)驗(yàn)室結(jié)果難以轉(zhuǎn)化為臨床療法的困境。因此,選擇能夠最大程度模擬人體腫瘤微環(huán)境的臨床前動(dòng)物模型變得至關(guān)重要。為真實(shí)模擬人體腫瘤免疫微環(huán)境,以研究藥物的作用機(jī)制及確定最佳的診治方案,免疫系統(tǒng)人源化小鼠應(yīng)運(yùn)而生[8],主要包括 Hu-PBL(humanized-peripheral blood mononuclear cells)小鼠模型、Hu-HSCs(humanized-hematopoietic stem cells)小鼠模型、Hu-BLT(humanized-bone marrow,liver,thymus)小鼠模型。由于免疫系統(tǒng)人源化小鼠模型構(gòu)建已有多篇文章進(jìn)行介紹,因此本文重點(diǎn)綜述肺癌研究過(guò)程中構(gòu)建的具有人免疫系統(tǒng)的非小細(xì)胞肺癌異種移植模型在相關(guān)治療中的具體應(yīng)用,并綜合現(xiàn)階段臨床難點(diǎn)問(wèn)題,對(duì)其潛在應(yīng)用及發(fā)展方向進(jìn)行探討。

1 免疫檢查點(diǎn)抑制劑的臨床前研究

隨著越來(lái)越多免疫檢查點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)和研究,新型的免疫檢查點(diǎn)抑制劑藥物不斷研發(fā),與此同時(shí)伴隨著的是需要開(kāi)展大量臨床前藥物評(píng)估研究以明確藥物療效,以及觀(guān)察藥物的毒副作用并確定最佳用藥方案。已有研究證明人源性組織異種移植(patient-derived xenografts,PDX)模型對(duì)于常規(guī)用于腫瘤治療的化療藥物的臨床預(yù)測(cè)準(zhǔn)確度高達(dá)97%[9],因此可以推測(cè)異種移植的肺癌免疫系統(tǒng)人源化小鼠作為一種具有巨大潛力的轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)平臺(tái),是解決上述兩大難題的關(guān)鍵所在。

目前已被美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(Food and Drug Administration,FDA)批準(zhǔn)上市的非小細(xì)胞肺癌的免疫檢查點(diǎn)抑制劑藥物 pembrolizumab、nivolumab、atezolizumab、durvalumab 和avelumab 主要抑制PD-1 和PD-L1 結(jié)合通路,而ipilimumab 主要抑制CTLA-4 和CD80/86 結(jié)合通路,大量的異種移植的非小細(xì)胞肺癌免疫系統(tǒng)人源化小鼠被應(yīng)用到免疫抑制劑藥物的研究過(guò)程中,并顯現(xiàn)出獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。

在治療效果評(píng)估方面,多項(xiàng)研究證明人源化小鼠模型具有真實(shí)存在的臨床轉(zhuǎn)化應(yīng)用價(jià)值。上海交通大學(xué)附屬胸科醫(yī)院的周箴團(tuán)隊(duì)的研究表明,肺癌Hu-PBL-PDX 模型的腫瘤生長(zhǎng)能被 PD-1 單抗抑制,并且早期PD-L1 表達(dá)水平越高,腫瘤體積抑制率(tumor growth inhibition value,TGI)越大,因此該模型或可幫助指導(dǎo)臨床用藥,預(yù)測(cè)非小細(xì)胞肺癌患者從PD-1/PD-L1 免疫治療中獲益的可能性[10]。Wang 等[11]在免疫缺陷小鼠(NSG)輻照4 h 后,將胎肝來(lái)源的CD34+HPSC(human pluripotent stem cells)通過(guò)靜脈注射移植入小鼠體內(nèi),并移植患者來(lái)源的肺癌組織構(gòu)建Onco-HuNSG-PDX 模型。在Onco-HuNSG-PDX 小鼠中,13 只小鼠中有11 只對(duì)pembrolizumab 治療有反應(yīng),進(jìn)一步通過(guò)與單純NSG小鼠組的對(duì)比發(fā)現(xiàn),Onco-HuNSG 小鼠中CD4+和CD8+T 細(xì)胞含量顯著增加,pembrolizumab 的腫瘤抑制作用在缺乏人類(lèi)免疫細(xì)胞的NSG 小鼠和hCD8+T 細(xì)胞耗盡的Onco-HuNSG 小鼠中不存在,因此可初步得出pembrolizumab 的功效取決于Onco-HuNSG小鼠中hCD8+T 細(xì)胞的人類(lèi)免疫系統(tǒng)的重建,為其成為研究免疫檢查點(diǎn)抑制劑在T 細(xì)胞活化中功效的新平臺(tái)提供了進(jìn)一步的依據(jù)。此外,雖已明確靶向PD-1/PD-L1 通路可恢復(fù)T 細(xì)胞功能,但其對(duì)于腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特征的影響仍需更加深入的研究[12],部分研究人員通過(guò)構(gòu)建此類(lèi)模型證實(shí)免疫檢查點(diǎn)抑制劑可通過(guò)上調(diào)血清中的IL-4 和IFN-γ 水平實(shí)現(xiàn)對(duì)NSCLC 的治療作用[13-14]。

在模型構(gòu)建以及模型優(yōu)化拓展應(yīng)用方面,不同的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)需要選擇不同的模型構(gòu)建方法。在研究PD-L1/PD-1 靶向免疫治療效果的人源化肺癌小鼠模型的實(shí)驗(yàn)過(guò)程中[15],研究人員通過(guò)模型構(gòu)建難度、T 細(xì)胞重建水平以及抗腫瘤藥物治療效果綜合對(duì)比首次發(fā)現(xiàn),Hu-PBL-CDX 模型優(yōu)于Hu-HSCs-CDX 模型,且后期所建立的Hu-PBL-PDX 模型可應(yīng)用于對(duì)免疫功能已經(jīng)受到PD-1/PD-L1 通路抑制的T 細(xì)胞重新恢復(fù)功能的探索性研究中。而探究新型的造模方式,也是目前解決人源化小鼠模型局限性的最佳方案,如患者自體免疫系統(tǒng)人源化小鼠模型auto-PBMC-PDX 小鼠已成為研究癌癥免疫療法的新興平臺(tái)[15-17],用于評(píng)估抗PD-L1/PD-1 抗體療法的療效,幫助指導(dǎo)臨床決策,如建議患者是否可以從PD-L1/PD-1 靶向免疫療法中獲得臨床益處等。

在模型潛在應(yīng)用價(jià)值方面,我們發(fā)現(xiàn)移植患者來(lái)源肺癌組織的Hu-PBL 和Hu-HSCs 模型個(gè)體中進(jìn)行的免疫檢查點(diǎn)抑制劑如pembrolizumab、nivolumab療效評(píng)估[11,14,18],其應(yīng)答率與臨床試驗(yàn)中的應(yīng)答率基本一致,因此該類(lèi)模型可能代表了一種理想的對(duì)病人的選擇和對(duì)治療反應(yīng)的預(yù)測(cè)因子評(píng)估平臺(tái),可用于對(duì)于腫瘤標(biāo)志物的篩選。日本學(xué)者Fukui等[19]在驅(qū)動(dòng)基因突變顯著的患者人群臨床研究中發(fā)現(xiàn),中性粒細(xì)胞-淋巴細(xì)胞比率(neutrophil-tolymphocyte rate,NLR)可用于前瞻性預(yù)測(cè),作為篩選對(duì)于PD-1 以及PD-L1 阻斷治療有效的患者的指標(biāo),但由于樣本量不足以及實(shí)驗(yàn)樣本具有特殊性的原因,并不能完美轉(zhuǎn)化為臨床標(biāo)準(zhǔn)。NLR 真正作為預(yù)測(cè)指標(biāo)在臨床上得到應(yīng)用有較多工作需要進(jìn)行,如成本-效果評(píng)價(jià)、NLR 在腫瘤以及外周血一致性評(píng)價(jià)、預(yù)期設(shè)計(jì)NLR 具體界限評(píng)價(jià)等[20-22]。異種移植的免疫系統(tǒng)人源化小鼠可為推動(dòng)NLR 生物標(biāo)志物研究,解決此類(lèi)問(wèn)題提供良好的臨床前研究模型。

2 免疫聯(lián)合治療

免疫檢查點(diǎn)抑制劑的出現(xiàn)極大程度上改善了非小細(xì)胞肺癌患者的生存率,但仍有大量患者對(duì)于單一免疫檢查點(diǎn)抑制劑藥物的作用效果不明顯,因此急需基于免疫治療的聯(lián)合化療、放療、靶向藥物治療等的聯(lián)合治療方案來(lái)提高免疫治療的效果。目前較為常見(jiàn)的非小細(xì)胞肺癌的聯(lián)合治療方案包括雙免疫檢查點(diǎn)聯(lián)合治療[23-24]、PD-1/PD-L1 與抗血管生成藥物聯(lián)合治療[25-26]、PD-1/PD-L1 與含鉑類(lèi)藥物聯(lián)合治療[27]等。但大多聯(lián)合治療缺乏臨床前實(shí)驗(yàn)證據(jù),具體的用藥方案也有待進(jìn)一步明確和優(yōu)化。目前的免疫系統(tǒng)和腫瘤雙人源化的小鼠模型可作為此類(lèi)研究的一種有效的臨床前動(dòng)物模型,該類(lèi)模型的應(yīng)用可為新藥研發(fā)和新型治療方案的確立提供可靠的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。

2.1 免疫聯(lián)合代謝阻斷治療

除了與傳統(tǒng)的治療方案的聯(lián)合,還可針對(duì)腫瘤細(xì)胞糖酵解代謝的關(guān)鍵途徑來(lái)促進(jìn)免疫治療效果。Oxamate 是一種能夠阻斷腫瘤細(xì)胞糖酵解的抗癌藥物,有研究通過(guò)構(gòu)建Hu-PBL-CDX 非小細(xì)胞肺癌模型,研究 Oxamate 與免疫檢查點(diǎn)抑制劑pembrolizumab 聯(lián)合治療對(duì)肺癌腫瘤細(xì)胞的作用[28],證實(shí)Oxamate 與pembrolizumab 雖在單獨(dú)治療時(shí)均可起到延遲腫瘤生長(zhǎng)的作用,但當(dāng)二者合用時(shí),Oxamate 可通過(guò)抑制LDH-A 的活性來(lái)阻斷腫瘤細(xì)胞糖酵解過(guò)程以及增加腫瘤中心CD8+T 細(xì)胞浸潤(rùn),抑制腫瘤細(xì)胞活性,進(jìn)而增強(qiáng)pembrolizumab 的抗腫瘤療效,且該聯(lián)合療法即使在劑量較大的情況下,也不會(huì)對(duì)機(jī)體正常細(xì)胞造成過(guò)度影響。因此,人源化異種移植小鼠模型還可作為靶向代謝途徑和免疫聯(lián)合治療方案的臨床前模型,利用該模型來(lái)進(jìn)行免疫聯(lián)合代謝阻斷治療的全面評(píng)估,評(píng)估結(jié)果可為臨床研究的順利開(kāi)展奠定堅(jiān)實(shí)的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。

2.2 雙免疫聯(lián)合治療

T 細(xì)胞雙特異性抗體 (T-cell bispecific antibodies,TCB)通過(guò)將T 細(xì)胞與靶向腫瘤細(xì)胞交聯(lián)來(lái)引發(fā)抗腫瘤反應(yīng),且其介導(dǎo)的多克隆T 細(xì)胞活化與T 細(xì)胞受體特異性無(wú)關(guān),無(wú)需共刺激信號(hào)介導(dǎo)。肺癌免疫治療的研究中[29],研究人員先將健康人來(lái)源的PBMC 注射到NCG 小鼠體內(nèi),并移植高表達(dá)PD-L1 的HCC827 肺腫瘤細(xì)胞成功構(gòu)建肺癌的Hu-PBL-CDX 小鼠模型,然后當(dāng)小鼠接種腫瘤后4 d 靜脈給予雙特異性抗體ACE-05 治療,發(fā)現(xiàn)在10 只ACE-05 治療的小鼠中,有9 只預(yù)先建立的腫瘤在第12 天完全消退,表明雙特異性抗體 ACE-05 可有效誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌腫瘤消退,在后續(xù)研究中也證明了其可降低脫靶毒性。此外,在人胃腺癌異種移植小鼠模型(Hu-HSCs-CDX)中 TCB 已被證明可以上調(diào)T 細(xì)胞上的PD-1 表達(dá)和癌細(xì)胞上PD-L1 表達(dá),且與TCB 單藥治療或抗PD-L1 單藥治療相比,TCB與抗PD-L1 的聯(lián)合用藥具有更強(qiáng)的抗腫瘤作用[30],因此利用肺癌異種移植小鼠模型進(jìn)一步探索雙免疫聯(lián)合方案具有較好的應(yīng)用價(jià)值。

3 新輔助/輔助治療

新輔助治療是指在腫瘤患者接受手術(shù)前進(jìn)行一定治療處理,達(dá)到縮小腫瘤體積、減少腫瘤轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)、提高耐受性和手術(shù)治療等可能目的的一種新治療手段,主要包括新輔助化療(neoadjuvant chemotherapy,NACT)、新輔助免疫治療(neoadjuvant the immune checkpoint inhibition,NAICI)以及新輔助內(nèi)分泌治療(neoadjuvant hormonal therapy,NAHT)。針對(duì)非小細(xì)胞肺癌而言,已有多種新輔助治療手段開(kāi)始逐步應(yīng)用,例如新輔助化療已經(jīng)獲批非小細(xì)胞肺癌患者的一線(xiàn)應(yīng)用,但對(duì)于患者的長(zhǎng)期生存改善并不明顯。另外,如何根據(jù)患者人群的異質(zhì)性,選擇合適的藥物或確定合適治療時(shí)機(jī),及其是否存在相關(guān)治療不良效應(yīng)仍是臨床工作的巨大障礙。研究人員用4 周大的雄性無(wú)胸腺 NMRI-Foxn1 nu/nu 小鼠 (JanvierTM) 和 C57BL/6J (JanvierTM) 小鼠通過(guò)移植人肺癌細(xì)胞系(A549 或 LNM-R)構(gòu)建Hu-CDX 模型,然后進(jìn)行新輔助化療,并聯(lián)合進(jìn)行免疫治療。結(jié)果顯示,基于順鉑的NACT 可通過(guò) AKT 激活以劑量依賴(lài)性方式快速增加 PD-L1 表達(dá),且延緩腫瘤的生長(zhǎng),與單藥治療相比,腫瘤體積減少了47%[31],雖結(jié)果比較理想,但若想在臨床前實(shí)驗(yàn)中較為可靠地評(píng)估新輔助治療療效和最佳治療時(shí)機(jī),則需進(jìn)一步研究微環(huán)境中免疫細(xì)胞的數(shù)量和功能對(duì)聯(lián)合ICI 和NAC 結(jié)果的影響,而免疫人源化的異種移植小鼠模型則是進(jìn)一步探究的首選動(dòng)物模型。本研究也通過(guò)構(gòu)建免疫人源化的異種移植小鼠模型發(fā)現(xiàn)CD8+PD-1+T 細(xì)胞水平與后續(xù)治療積極結(jié)果密切相關(guān),具體而言,外周血中CD8+PD-1+T 細(xì)胞的變化可以預(yù)測(cè)腫瘤微環(huán)境的重編程,進(jìn)一步有助于確定手術(shù)的最佳時(shí)間。

4 CAR-T 免疫療法的臨床前研究

嵌合抗原受體修飾T 細(xì)胞(chimeric antigen receptor modified T cells,CAR-T cells)療法是一種過(guò)繼性細(xì)胞免疫治療。該療法是用基因工程合成受體轉(zhuǎn)導(dǎo)患者T 細(xì)胞以靶向癌細(xì)胞表面抗原,進(jìn)而介導(dǎo)抗腫瘤作用。CAR-T 目前主要應(yīng)用于血液系統(tǒng)惡性腫瘤[32],而在NSCLC 等實(shí)體瘤中效果不甚顯著,其原因是大多實(shí)體瘤的腫瘤相關(guān)抗原(tumorassociated antigen,TAA)靶標(biāo)在覆蓋率和特異性方面呈現(xiàn)出異質(zhì)性,即大多實(shí)體瘤無(wú)真正的腫瘤特異性抗原。

為了更好地將CAR-T 療法應(yīng)用于實(shí)體瘤,需選擇和確定具有相對(duì)廣的覆蓋率和較強(qiáng)的特異性的靶標(biāo)。在早期研究中發(fā)現(xiàn),LunX (即BPIFA1、PLUNC、SPLunc1)在肺癌細(xì)胞中高度表達(dá)[33]。前期細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中,使用LunX 抗體可以通過(guò)誘導(dǎo)LunX表達(dá)下調(diào)和阻斷LunX 下游通路抑制LunX 陽(yáng)性的肺癌腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)[34],因此研究人員構(gòu)造了以L(fǎng)unX 為靶標(biāo)的CAR-T 細(xì)胞進(jìn)行深入研究[35],同時(shí)構(gòu)建Hu-PDX 模型對(duì)其療效進(jìn)行評(píng)估,與PBS 組以及非特異性靶標(biāo)CAR-TCD19比較發(fā)現(xiàn)CAR-TLunX療法不僅可以減緩腫瘤引起的小鼠體重減輕的癥狀,而且有效延長(zhǎng)荷瘤小鼠的生存時(shí)間,通過(guò)Log-rank時(shí)序檢驗(yàn)分析可得出CAR-TLunX療法大大提高了荷瘤小鼠存活率的結(jié)論。為了進(jìn)一步研究其潛在的治療機(jī)制,研究者進(jìn)行了免疫熒光分析,結(jié)果顯示CAR-TLunX在首次治療7 d 后可以充分滲透進(jìn)入PDX 腫瘤模型內(nèi)部,進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤細(xì)胞有效的殺傷。因此,異種移植小鼠PDX 模型為開(kāi)展大量此類(lèi)靶標(biāo)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)[36]以及研究新型CAR 如可轉(zhuǎn)換CAR、抑制性CAR、靶向雙TAA 的CAR 等提供了平臺(tái)[37-40]。

5 納米藥物臨床前評(píng)估

除免疫治療和手術(shù)治療外,化療仍是臨床上使用較為廣泛的延長(zhǎng)非小細(xì)胞肺癌患者生存率的手段,但傳統(tǒng)的抗腫瘤藥物缺乏對(duì)腫瘤細(xì)胞的特異性,其伴隨產(chǎn)生的細(xì)胞毒素則較易誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生耐藥性。納米靶向藥物是一種以納米材料作為藥物載體,通過(guò)對(duì)其表面進(jìn)行修飾,使其可特異性靶向選擇腫瘤細(xì)胞,對(duì)于提高藥物的利用率以及減少對(duì)正常組織細(xì)胞損傷有著重要的意義。而其在研究過(guò)程中,需要大量人源化模型對(duì)其治療效果以及適宜人群進(jìn)行評(píng)斷。

含釓金屬富勒醇是一種新型納米藥物,其微粒直徑約為1 nm,主要特點(diǎn)是能夠在各種pH 濃度中通過(guò)非共價(jià)鍵凝集成為20～120 nm 的顆粒藥物,可抑制多種腫瘤活性。中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院尹東濤[41]課題組通過(guò)構(gòu)建Hu-PDX 模型對(duì)含釓金屬富勒醇納米藥物的生物安全性以及對(duì)不同類(lèi)型非小細(xì)胞肺癌作用效果差別進(jìn)行研究,結(jié)果顯示含釓金屬富勒醇對(duì)生長(zhǎng)速度相對(duì)緩慢的鱗癌有較好的抑制效果(80.34%,P<0.01),而對(duì)大細(xì)胞肺癌抑制效果則相對(duì)較弱(53.26%,P<0.05),但總體治療效果要優(yōu)于單純順鉑治療(33.86%,P<0.05)。同時(shí),在模型構(gòu)建過(guò)程中發(fā)現(xiàn)[42],鱗癌的構(gòu)建成功率要略高于腺癌,而患者性別、吸煙史、腫瘤分化程度、TNM 分期、移植方法對(duì)肺癌PDX 模型成功率均無(wú)顯著性影響。

此外,納米技術(shù)也開(kāi)始和其他治療手段聯(lián)合達(dá)到靶向治療的目的。如KRAS/TP53突變是導(dǎo)致肺腺癌出現(xiàn)的主要原因,因此抑制KRAS致癌基因和恢復(fù)p53 功能是肺腺癌最有力的治療策略。Gu等[43]通過(guò)核糖核酸RNAi 與納米技術(shù)結(jié)合構(gòu)成LbL模式藥物,靶向作用于KRAS/TP53,致力于探究該方案可行性。研究人員通過(guò)構(gòu)建原位異種移植小鼠模型Hu-PDX 研究腫瘤治療效果,結(jié)果顯示該治療藥物在荷瘤小鼠的肺中優(yōu)先攝取,且用LbL 模式藥物治療的小鼠其中位生存期達(dá)23.5 d,與任何單獨(dú)的核糖核酸治療(中位生存期9.0 d)或順鉑治療(中位生存期15.5 d)相比,可觀(guān)察到明顯增強(qiáng)的抗腫瘤功效和延長(zhǎng)的存活時(shí)間,進(jìn)一步的分子實(shí)驗(yàn)證實(shí)了該模式藥物可降低單純順鉑治療帶來(lái)的肝毒性和腎毒性的影響。因人源化異種移植小鼠模型可高度擬和人體病變經(jīng)過(guò),故其應(yīng)用顯示出LbL 模式藥物在肺腺癌治療上具有直接的轉(zhuǎn)化潛力,有望進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段。除核糖核酸可與化療藥物結(jié)合起到靶向治療的作用外,美國(guó)丹娜-法伯癌癥研究所在一項(xiàng)國(guó)際性NSCLC 臨床試驗(yàn)中使用了一種名為trastuzumab deruxtecan 的抗體偶聯(lián)藥物[44],該藥物將化療藥物與高度靶向HER2基因突變的抗體相結(jié)合對(duì)患者進(jìn)行治療,結(jié)果顯示超過(guò)一半的帶有HER2基因突變的非小細(xì)胞肺癌患者體內(nèi)的腫瘤在較長(zhǎng)的一段觀(guān)察期內(nèi)停止生長(zhǎng),甚至出現(xiàn)縮小的現(xiàn)象,進(jìn)一步表明了抗體偶聯(lián)藥物的治療前景。而該藥物的進(jìn)一步療效評(píng)估可通過(guò)免疫系統(tǒng)和腫瘤雙人源化的動(dòng)物模型進(jìn)行研究,以期為進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段奠定良好基礎(chǔ)。

6 展望

目前有報(bào)道稱(chēng)腫瘤干細(xì)胞是造成腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的主要細(xì)胞亞群[45],對(duì)于腫瘤的發(fā)生與發(fā)展起作用,但具體調(diào)節(jié)機(jī)制并不明確。目前已有團(tuán)隊(duì)通過(guò)結(jié)腸癌患者的PDX 模型進(jìn)行相關(guān)研究[46],力圖發(fā)現(xiàn)克服免疫抑制屏障的新方法,因此人源化模型或可在靶向腫瘤干細(xì)胞聯(lián)合免疫治療晚期肺癌,以及新輔助/輔助治療早期肺癌的臨床前研究中發(fā)揮不可替代的作用。此外,在免疫聯(lián)合化療、免疫聯(lián)合放療的臨床前研究階段所采用的腫瘤、免疫系統(tǒng)及治療抗體大多都是鼠源性的而非人源性的[47-48],與人體免疫相應(yīng)的過(guò)程存在一定的差別,因此實(shí)驗(yàn)結(jié)果雖有指導(dǎo)意義,但并不能充分證明其臨床應(yīng)用價(jià)值和前景,需在進(jìn)一步的臨床前研究中使用基于免疫系統(tǒng)人源化的小鼠異種移植模型則可能更加高度擬和臨床患者表現(xiàn),則可為治療方案的臨床轉(zhuǎn)化應(yīng)用提供更加有力的證據(jù),如在三陰性乳腺癌的臨床前研究中,研究團(tuán)隊(duì)通過(guò)構(gòu)建免疫系統(tǒng)人源化小鼠來(lái)比較免疫單藥治療和免疫聯(lián)合治療的效果差異,結(jié)果顯示OKI-179 和nivolumab 的組合比單獨(dú)使用nivolumab 顯著抑制腫瘤生長(zhǎng)(TGI=77%),且OKI-179 的使用會(huì)增加腫瘤浸潤(rùn)細(xì)胞的表達(dá),與臨床患者表型具有顯著的一致性[49]。因此在非小細(xì)胞肺癌的相關(guān)研究中,也期望能夠通過(guò)免疫和腫瘤雙人源化的小鼠模型獲得有效的臨床前研究數(shù)據(jù),來(lái)加速新型治療藥物或新型治療方案的臨床轉(zhuǎn)化。

7 總結(jié)

基于免疫系統(tǒng)人源化小鼠在非小細(xì)胞肺癌研究中的應(yīng)用正如火如荼的開(kāi)展,關(guān)于肺癌的治療手段也在一步步的趨向于個(gè)體化。因此針對(duì)非小細(xì)胞肺癌的治療手段的臨床前分析也應(yīng)該逐步向個(gè)體化治療、靶向治療邁進(jìn)。選擇特異腫瘤標(biāo)志物、搭建高效靶向轉(zhuǎn)運(yùn)體、確定合理聯(lián)合治療給藥系統(tǒng)、制定合適免疫治療方案以及選取恰當(dāng)新輔助/輔助治療的時(shí)機(jī)仍為目前尚待解決的棘手難題,需進(jìn)行詳細(xì)的臨床前研究,以期獲得更加完善的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

另外,雖現(xiàn)階段人源化小鼠模型在各種治療手段的臨床前評(píng)估體現(xiàn)了獨(dú)特的優(yōu)越性,但其也存在著各種亟待解決的問(wèn)題,如B 細(xì)胞、NK 細(xì)胞重建水平不高、供體來(lái)源受限、不能完全擬合人體內(nèi)免疫微環(huán)境以及部分模型重建效果穩(wěn)定性不強(qiáng)等[11]。因此,我們研究室致力于進(jìn)一步改進(jìn)模型構(gòu)建方法中存在的一些問(wèn)題,以期構(gòu)建更為完備有效的臨床前評(píng)估模型[28,50],幫助其進(jìn)一步在非小細(xì)胞肺癌的治療研究中煥發(fā)新的活力。