陳桃香，吳海燕，黃申琴，胡成剛

(貴州中醫(yī)藥大學藥學院，貴州 貴陽 550025)

馬桑來源于馬?？浦参锺R桑CoriariasinicaMaxim多年生落葉小喬木或灌木植物，又稱醉魚草、扶桑。目前對馬桑的研究相對較少，現(xiàn)有的研究中表明它具有一定的藥用價值，馬桑具有清熱解毒、活血、祛風通絡的功效，葉用于燙傷、黃水瘡、腫毒等，研究表明馬桑的葉中含有的槲皮素Q、槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖(Q-Ara)等成分具有抗炎的功效[1]。馬桑資源豐富，廣泛分布于地中海以東至日本、新西蘭、中南美洲。在我國很多省份和地區(qū)皆有馬桑的分布，例如河南、四川、貴州、云南、湖南、陜西、甘肅等[2]。目前，筆者未見國家及地方標準收載馬桑，調研發(fā)現(xiàn)多數民族地區(qū)以馬桑葉入藥，為適應中藥材質量監(jiān)督管理要求，加強該藥材質量的控制，本實驗建立了相關質量標準，為其規(guī)范使用提供依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器

UV-2700紫外可見分光光度計(島津儀器有限公司)；MODEL BX43F 光學顯微鏡(配成像系統(tǒng))；電子天平(型號：FA1004N，廠家：上海菁海儀器有限公司)；電熱鼓風干燥箱(型號：GZX-9070MBE，廠家：上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠)；恒溫水浴鍋(型號：HWS-24型，廠家：上海一恒科學儀器有限公司)；暗箱式紫外分析儀(型號：ZF-20D，廠家：鞏義市予華儀器有限責任公司)；真空干燥箱(上海博迅實業(yè)有限公司)；人工智能氣候箱(型號：RQX-400B，廠家：常山市華普達教學儀器公司)；硅膠G薄層板。

1.2 材料

馬桑藥材均采自貴州省，共10個批次(詳細信息見表1)，由貴州中醫(yī)藥大學藥學院標本館胡成剛教授鑒定為馬桑科馬桑屬植物馬桑CoriariasinicaMaxim的葉。槲皮素對照品(批號：C09S8Y43412，廠家：上海源葉生物科技有限公司，純度≥98%)，乙醇、甲苯、乙酸乙酯、甲酸、三氯化鋁均為分析醇。

表1 樣品信息表Tab.1 Sample information

2 方法與結果

2.1 性狀鑒別

本品為橢圓形或闊橢圓形，葉對生，紙質至薄革質，長3～10 cm，先端急尖，基部圓形，全緣，兩面無毛或沿脈上疏被毛，基出3脈，弧形伸至頂端，在葉面微凹，葉背突起；葉短柄，長1～3 mm，疏被毛，紫色，基部具墊狀突起物。

2.2 顯微鑒別

葉粉末呈黃綠色。顯微鏡下觀察呈黃綠色，可見少量單細胞和多細胞的非腺毛，有各種導管及纖維束，組織細胞及葉碎片少許，表面可見平軸式氣孔，可以作為鑒定馬桑藥材真?zhèn)蔚蔫b定依據。見圖1。

圖1 馬桑藥材粉末顯微鑒定圖Fig.1 Microscopic identification of the powder ofmedicinal Coriaria sinica leaves

2.3 TLC鑒別

2.3.1 供試品、對照品溶液的制備

精密稱取馬桑藥材粉末5 g，置于250 mL的圓底燒瓶中，加60 mL60%乙醇，加熱回流提取兩次，每次1 h，過濾，合并濾液，即為供試品溶液[3]。另外精密稱取槲皮素對照品5 mg，用60%乙醇溶液制成1 mL含0.5 mg的對照品溶液。

2.3.2 方法

按照2015版《中國藥典》四部通則薄層色譜法(通則0502)[4]，分別吸取槲皮素對照品溶液和馬桑藥材的供試品溶液適量，點于已經活化及飽和后的硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干后，噴以3%三氯化鋁乙醇溶液，置于365 nm紫外光燈下檢視，在硅膠板上，槲皮素對照品溶液與不同產地的馬桑樣品在相應位置顯示清晰顏色相同的熒光斑點，分離效果及重復性良好，具體見圖2。

圖2 十個產地馬桑葉藥材薄層鑒別圖Fig.2 TLC identification of medicinal Coriaria sinica leaves from 10 producing areas

2.4 檢查與浸出物的測定

按照2015版《中國藥典》中各通則項下的實驗要求，通則0832水分測定法(烘干法)、2302灰分測定法(總灰分和酸不溶性灰分測定法以稀鹽酸測定酸不溶性灰分)、2201浸出物測定法(熱浸法測定醇溶性浸出物，以75%乙醇為溶劑)測定[4]，結果見表2。

表2 樣品水分、總灰分酸不溶性灰分和浸出物含有測定結果(%，n=3)Tab.2 Determination results of the contents of moisture，total ash，acid-insoluble ash and extract(%，n=3)

2.5 槲皮素的含量測定

2.5.1 對照品溶液的制備

取槲皮素對照品適量，精密稱定，加60%乙醇溶液制成每1 mL中含3.2 μg槲皮素對照品溶液。

2.5.2 供試品溶液的制備

精密稱取馬桑粉末0.5 g，加60%乙醇超聲0.5 h，冷卻補重，過濾，移取0.1 mL續(xù)濾液置25 mL的容量瓶中，定容，即可得到供試品溶液[5]。

2.5.3 檢測波長選擇

將對照品溶液、供試品溶液分別在400～700 nm波長范圍內掃描，發(fā)現(xiàn)供試品在274 nm處的吸收峰與對照品在257 nm處吸收峰的峰形相似，與結合所查文獻資料槲皮素含量測定所選擇波長254 nm及256 nm相比較，選擇257 nm作為馬桑葉中槲皮素含量測定的波長。

2.5.4 線性關系考察

精密稱取槲皮素標準品2 mg，置于100 mL容量瓶中，加入60%乙醇溶解，定容至刻度搖勻。分別取2 mL、3 mL、5 mL、10 mL、12 mL、16 mL置于25 mL容量瓶定容至刻度。按照紫外分光光度法(《中國藥典》2015年版四部)，在257 nm的波長處測定吸收度，以吸光度為縱坐標，槲皮素質量濃度為橫坐標，得到線性回歸方程為Y=61.631X+0.0867(r=0.9997)，槲皮素質量濃度在1.6～12.8 μg/mL范圍內，吸光度與濃度呈良好的線性關系。

2.5.5 精密度實驗

取“2.5.1”項下制備的槲皮素對照品溶液適量，在紫外分光光度計257 nm波長下連續(xù)測定6次，RSD值為0.34%，儀器精密度良好。

2.5.6 穩(wěn)定性實驗

取“2.5.2”項下供試品溶液分別在10 min、20 min、30 min、40 min、50 min、60 min內測定吸光度，槲皮素含量為0.25%，RSD值為0.25%，表明樣品溶液在60 min內穩(wěn)定。

2.5.7 重復性實驗

取馬桑粉末(過二號篩)6份，精密稱定，按照“2.5.2”項下的方法制備供試品，測得槲皮素含量為2.57%，RSD值為2.32%，表明該方法重復性良好。

2.5.8 加樣回收實驗

精密稱取已知槲皮素含量的馬桑粉末6份各0.25g，置于錐形瓶中，分別加入槲皮素對照品0.7 mg，按照上述“2.5.2”項下方法提取，測定其吸光度，計算槲皮素含量及回收率，槲皮素回收率在95.41%～100.33%范圍內，平均回收率為97.63%，RSD值小于3%，結果見表3。

表3 槲皮素回收率結果(n=6)Tab.3 Quercetin recovery results(n=6)

2.5.9 樣品含量測定

精密稱取各產地馬桑粉末0.5 g，平行3份，按“2.5.2”項下的方法操作，測其吸光度，計算槲皮素含量，實驗結果表明不同產地的馬桑藥材的2-甲氧基1，4-萘醌的含量差異較大，其中，含量最高的為銅仁松桃采集的樣品，含量為0.35%；含量最低的為花溪區(qū)采集的樣品，含量為0.202%，10個批次樣品平均含量為0.28%，結果見表4。

表4 不同產地鳳仙花的含量測定(n=3)Tab.4 Content determination of quercetin in medicinal Coriariasinica leaves from different producing areas(n=3)

3 結論與討論

本次研究分別從定性鑒別、定量測定兩部分對馬桑進行了研究，馬桑藥材比較常見，外觀辨識度較高，因此主要對馬桑粉末進行顯微鑒定，并對10批次的馬桑藥材水分、總灰分、酸不溶性灰分及浸出物進行測定，最終擬定馬桑藥材各檢查指標含有量為水分不超過17.0%，總灰分不超過11.0%，酸不溶性灰分不超過0.72%，醇溶性浸出物不低于33.0%。

在實驗研究中，對薄層展開劑、溫度、濕度等條件進行考察，選擇以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶4∶1)為展開劑，噴以3%三氯化鋁乙醇溶液，常溫常濕條件下，置于365 nm紫外光燈下檢視。同時，考察了提取溶劑濃度、提取時間、料液比等3個單因素，在單因素考察的基礎上，運用正交實驗設計方法優(yōu)選出馬桑中槲皮素成分提取的最佳提取方法為60%乙醇，料液比為1∶12，提取時間為1 h。根據文獻報道及紫外掃描顯示，最大吸收波長選擇257 nm作為其檢測波長。