趙明月,侯玉珠,劉 鑫,王 洋,孫開(kāi)菊,龐 博,劉淑瑩,李 丹,蘇 蕊,3
(1.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué),吉林 長(zhǎng)春 130117;2.吉林大學(xué)第一醫(yī)院心內(nèi)科,吉林 長(zhǎng)春 130021;3.吉林大學(xué)無(wú)機(jī)合成與制備化學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,吉林 長(zhǎng)春 130012)
乳腺癌是世界范圍內(nèi)發(fā)病率第二的癌癥,在女性癌癥患者中發(fā)病率居首位[1]。目前,在乳腺癌的臨床治療中采用手術(shù)輔以化療的方式,常用的治療藥物有阿霉素(adriamycin, ADM),但由于阿霉素易產(chǎn)生耐藥性,成為乳腺癌化療中難以解決的難題[2-4]。枸櫞酸他莫昔芬是治療女性復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移乳腺癌的常用西藥,缺點(diǎn)是會(huì)對(duì)生殖系統(tǒng)產(chǎn)生不良影響,輕者月經(jīng)失調(diào)、閉經(jīng),重者導(dǎo)致內(nèi)膜息肉和內(nèi)膜癌,且長(zhǎng)時(shí)間(17個(gè)月以上)大量服用會(huì)出現(xiàn)視網(wǎng)膜病或角膜混濁[5-8]。而其他西藥,如依西美坦(對(duì)胎兒有影響[9]、肝功能異常[10])、氯氧喹(擾亂血液系統(tǒng)、肝功能異常[11])、來(lái)曲唑(對(duì)胎兒有影響[12])和曲妥珠單抗(具有心肌毒性[13]、肺毒性[14])對(duì)人體均會(huì)產(chǎn)生較大的不良反應(yīng)。因此,尋找毒性小、耐藥性小、靶向性強(qiáng)、有效性高的藥物是臨床上亟需解決的問(wèn)題。
中藥具有療而不傷、固本培元的優(yōu)勢(shì)[15]。研究表明,從不同中藥中提取獲得的柴胡皂苷[16-17]、姜黃素[18]、小檗堿[19]、青蒿素[20]、人參皂甙[21]等有效成分具有抗癌活性。中藥中的抗癌活性成分對(duì)乳腺癌腫瘤微環(huán)境有直接的細(xì)胞毒性作用,對(duì)乳腺癌腫瘤免疫具有間接的調(diào)節(jié)作用,能夠明顯改善化療效果[22-23]。Wang等[24]研究表明,甘草次酸能夠通過(guò)損害p38 MAPK-AP1信號(hào)軸有效抑制乳腺癌侵襲和轉(zhuǎn)移;Gunjan等[25]認(rèn)為18β-甘草次酸可通過(guò)調(diào)節(jié)Akt/FOXO3a/Bim通路誘導(dǎo)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞凋亡;Sun等[26]證實(shí)了柴胡皂苷D(SsD)可以在較低的藥物濃度下選擇性地抑制乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng), 并有望成為安全、有效、經(jīng)濟(jì)的抗癌藥物。
柴胡皂苷是柴胡中具有代表性的生物活性成分,是很多抗病毒、抗炎、抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫等藥物的有效成分[27]。近年來(lái),通過(guò)對(duì)柴胡提取物SsD進(jìn)行研究,證明SsD是柴胡中具有顯著藥用活性的三萜皂苷[28],具有抗癌、調(diào)節(jié)免疫[29]、抑制三陰性乳腺癌細(xì)胞的增殖[30]等作用,但是會(huì)誘導(dǎo)LO2肝細(xì)胞線粒體凋亡,激活細(xì)胞凋亡蛋白酶,進(jìn)而導(dǎo)致肝毒性[31]。由于乳腺癌的發(fā)生和進(jìn)展與代謝物的改變密切相關(guān),在其惡性轉(zhuǎn)化、治療過(guò)程中,乳腺癌細(xì)胞的代謝組發(fā)生了一系列重組[32],會(huì)發(fā)生糖代謝[33]、氨基酸代謝[34]、脂質(zhì)代謝[35]與核苷酸代謝[36]的紊亂。雖然SsD的藥用活性已有報(bào)道[30,37],但其在乳腺癌治療過(guò)程中機(jī)體所產(chǎn)生的代謝變化尚不明確。
本文擬構(gòu)建乳腺癌小鼠動(dòng)物模型,設(shè)置健康組、對(duì)照組和給藥組,采用不同劑量SsD對(duì)其進(jìn)行給藥治療,并利用超高效液相色譜-串聯(lián)靜電場(chǎng)軌道阱質(zhì)譜(UHPLC-Orbitrap MS)對(duì)3個(gè)組別不同給藥天數(shù)后的小鼠血清中的差異代謝物進(jìn)行篩查,并對(duì)化合物進(jìn)行鑒定,旨從代謝組學(xué)角度研究小分子代謝物的變化,闡述藥物的療效及對(duì)機(jī)體的影響。
四極桿靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜儀:美國(guó)Thermo Fisher Scientific 公司產(chǎn)品;單通道數(shù)字移液器:德國(guó)Eppendorf公司產(chǎn)品;Vortex Mixer QL-866渦旋振蕩器:上海達(dá)姆實(shí)業(yè)有限公司產(chǎn)品;D-37520 Osterode離心機(jī):德國(guó)Sigma公司產(chǎn)品;氮吹儀:上海鑫翁科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品。
SsD標(biāo)準(zhǔn)品(批號(hào):20874-52-6):上海源葉生物公司產(chǎn)品;氮?dú)?99.99%):長(zhǎng)春巨洋氣體有限責(zé)任公司產(chǎn)品;甲醇、異丙醇、乙腈:HPLC級(jí),美國(guó)Fisher化學(xué)公司產(chǎn)品;超純水:采用上海和泰儀器有限公司超純水裝置(18.25 MΩ·cm)制備;Balb-c小鼠(SPF級(jí)):購(gòu)于遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)股份有限公司;吐溫-20:上海阿拉丁生化科技股份有限公司產(chǎn)品。
1.2.1SsD腹腔注射液的配制 在20.00 mg SsD標(biāo)準(zhǔn)品中加入含1%吐溫-20的生理鹽水,定容至5.00 mL,得到50 μmol/L SsD貯備液,于4 ℃儲(chǔ)存。取適當(dāng)體積儲(chǔ)備液,稀釋獲得2.00 mg/kg(2.5 μmol/L)和0.4 mg/kg(0.5 μmol/L)的SsD腹腔注射液。
1.2.2血清提取 采用蛋白沉淀法提取小鼠血清。將取出的全血置于EP管內(nèi),4 ℃放置1 h后,以4 339 r/min離心15 min,獲得血清樣本,保存于-80 ℃。質(zhì)譜檢測(cè)前對(duì)血清樣本進(jìn)行預(yù)處理,取一定量的血清于EP管內(nèi),加入3倍血清體積的甲醇,渦旋30 s,隨后以11 134 r/min離心15 min,取上清液,氮?dú)獯蹈?;加?.5倍血清體積的超純水,渦旋15 s,過(guò)0.22 μm 水相濾膜,獲得待分析樣品。
1.2.3乳腺癌小鼠模型的構(gòu)建 選擇26只Balb-c小鼠,置于12 h晝夜更替的動(dòng)物房?jī)?nèi),自由進(jìn)食、飲水。將其分為健康組、對(duì)照組和給藥組(高(2.0 mg/kg SsD)、低(0.4 mg/kg SsD)劑量組),皮下注射4T1細(xì)胞,在腫瘤約100 mm3時(shí)完成構(gòu)建乳腺癌腫瘤模型。對(duì)乳腺癌模型小鼠進(jìn)行給藥治療,每隔1天腹腔注射給藥,每次注射200 μL SsD,連續(xù)給藥2周。在實(shí)驗(yàn)期間,記錄高、低劑量組體重、腫瘤大小以及死亡情況。30天后進(jìn)行安樂(lè)死,收集肝心脾肺腎和腫瘤組織。
1.2.4血樣采集 分別在給藥0、3、6、9、12、15、21和30天,用毛細(xì)玻璃管從眼眶靜脈叢采血,處理后進(jìn)行UPLC-Orbitrap MS測(cè)定。
1.3.1色譜條件 Thermo Accucore C18色譜柱(100 mm×2.1 mm ×1.9 μm);流動(dòng)相:0.1%甲酸水(A)和乙腈(B);梯度洗脫程序:0~1 min(10%B),1~8 min(10%~65%B),8~10 min(65%B),10~17 min(65%~85%B),17~18 min(85%~100%B),18~21 min(100%B),21~26 min(100%~10%B);流速0.3 mL/min;進(jìn)樣量10 μL;柱溫35 ℃。
1.3.2質(zhì)譜條件 正離子采集模式;Full-scan掃描;質(zhì)量掃描范圍m/z70~1 000;分辨率70 000;自動(dòng)增益控制(AGC):1×106;鞘氣和輔助氣均為氮?dú)?,流速分別為8.4和12.1 L/min;毛細(xì)管溫度300 ℃;噴霧電壓3.5 kV。
采用UPLC-Orbitrap MS對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行全掃描,獲得高分辨代謝物離子的質(zhì)荷比數(shù)據(jù),隨后對(duì)從樣品中提取的6 766個(gè)離子進(jìn)行全掃描的非靶向分析,工作流程示于圖1。
圖1 UPLC-Orbitrap MS 非靶向代謝組學(xué)工作流程圖Fig.1 Workflow of the UPLC-Orbitrap MS based untargeted metabolomics method
經(jīng)過(guò)“80%規(guī)則”[38]處理后保留了6 427個(gè)離子,對(duì)所選離子進(jìn)一步篩選合并,以減少冗余離子,最后確定5 835個(gè)離子作為靶離子。給藥21天后,對(duì)照組和高、低劑量給藥組的總離子流圖示于圖2,所得代謝產(chǎn)物離子峰形較好,分離度較高,離子數(shù)量豐富。此外,為考察該方法的準(zhǔn)確性和精密度,對(duì)保留離子峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)進(jìn)行計(jì)算,結(jié)果示于圖3。在正離子模式下,對(duì)提取離子的峰面積進(jìn)行積分,43.2%代謝產(chǎn)物離子的峰面積RSD為0%~5%;29.3%代謝產(chǎn)物離子的峰面積RSD為5%~10%;16.1%代謝產(chǎn)物離子的峰面積RSD為10%~15%;8.0%代謝產(chǎn)物離子的峰面積RSD為15%~20%。共計(jì)96.6%的離子峰面積RSD(n=6)小于20%,表明本方法具有較好的重復(fù)性和穩(wěn)定性。
圖2 連續(xù)給藥21天后的總離子流圖Fig.2 Total ion chromatograms after 21 days of continuous administration
圖3 血清樣本中代謝物離子的RSD分布Fig.3 RSD distribution of all metabolites in the serum samples
對(duì)小鼠連續(xù)治療30天后安樂(lè)死取腫瘤組織進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn):對(duì)照組無(wú)變化;低劑量治療組小鼠的腫瘤體積小于對(duì)照組,為對(duì)照組體積的3/5;高劑量治療組的腫瘤體積顯著減小,為對(duì)照組體積的1/10。此外,對(duì)小鼠進(jìn)行了生存期實(shí)驗(yàn),結(jié)果示于圖4??梢?jiàn),在實(shí)驗(yàn)結(jié)束(30天)時(shí),采用低劑量SsD治療的小鼠顯示了60%的存活率,高劑量治療組可以達(dá)到80%的存活率,表明SsD對(duì)乳腺癌腫瘤具有明顯的治療作用,能夠提高小鼠的存活率。
圖4 對(duì)照組和給藥組小鼠的生存期圖Fig.4 Survival curves of mice in control group andadministration groups
為排除干擾,在質(zhì)譜數(shù)據(jù)的多變量判別分析之前做以下處理:1) 將SsD的準(zhǔn)分子離子m/z781.476 4[M+H]+及其產(chǎn)生的二聚體離子以及加合產(chǎn)物離子(如m/z803.458 5[M+Na]+)排除在待分析統(tǒng)計(jì)的數(shù)據(jù)集之外。2) 經(jīng)過(guò)單因素方差分析及PLS-DA分析,只有當(dāng)代謝物特征p值小于0.05,VIP>1,才可用于統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。此外,所篩查的代謝物特征離子信息需滿足在預(yù)設(shè)的3個(gè)組別的80%以上樣品中能夠被有效提取到,才能加入訓(xùn)練集中進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。最終獲得的數(shù)據(jù)集包含所篩查的內(nèi)源性代謝物離子的保留時(shí)間、離子形式及所對(duì)應(yīng)化合物的分子式、分子質(zhì)量和結(jié)構(gòu)等信息。在將原始數(shù)據(jù)導(dǎo)入Compound Discover軟件之前,將質(zhì)量誤差設(shè)為≤10×10-6,保留時(shí)間偏差為±0.25 min。
將篩查的5 835個(gè)靶離子信息導(dǎo)入統(tǒng)計(jì)軟件的數(shù)據(jù)集中,使用非監(jiān)督PCA和監(jiān)督PLS-DA進(jìn)行多元模式識(shí)別,實(shí)驗(yàn)結(jié)果示于圖5。可知,在PCA分?jǐn)?shù)圖中,給藥治療0天、3天后,對(duì)照組和治療組(高、低劑量)無(wú)法達(dá)到明確區(qū)分;給藥治療9天后,對(duì)照組和低劑量治療組無(wú)法明顯區(qū)分,但與高劑量組可以清晰判別;給藥治療15天后,3個(gè)組別可以基本判別;給藥治療21天后,能夠顯著將3個(gè)組別區(qū)分開(kāi)。
注:a.0天;b.3天;c.9天;d.15天;e.21天圖5 對(duì)照組、低劑量和高劑量給藥組的PCA分?jǐn)?shù)圖Fig.5 PCA score plots of mice with control group, SsD low concentration group and SsD high concentration group
采用監(jiān)督PLS-DA進(jìn)行組別區(qū)分時(shí),能夠較清晰地區(qū)分3個(gè)組別的血清樣本,示于圖6。PLS-DA模型中涉及2個(gè)重要參數(shù):R2為解釋率,是原始數(shù)據(jù)信息百分比的平方;Q2為PLS-DA模型的預(yù)測(cè)能力。本研究通過(guò)擬合,在正離子模式中得到R2>0.82、Q2>0.71,表明實(shí)驗(yàn)構(gòu)建的模型穩(wěn)定有效,不存在過(guò)度擬合的情況。因此,在接下來(lái)的組內(nèi)、組間特征離子篩查實(shí)驗(yàn)中,采用分離情況較好的PLD-DA模型中的VIP值(VIP>1)篩查特征代謝化合物離子,隨后將代謝物離子信息導(dǎo)入在線代謝組學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)(HMDB)進(jìn)行化合物結(jié)構(gòu)鑒定。
注:a.0天;b.3天;c.9天;d.15天;e.21天圖6 對(duì)照組、低劑量和高劑量給藥組的PLS-DA分?jǐn)?shù)圖Fig.6 PLS-DA score plots of mice with control group, SsD low concentration group and SsD high concentration group
本實(shí)驗(yàn)分別考察了同一組內(nèi)(對(duì)照組、低劑量和高劑量給藥組內(nèi))小鼠血清內(nèi)代謝物隨飼養(yǎng)天數(shù)的變化情況(橫向代謝物變化研究),以及3個(gè)組別之間在給藥21天后小鼠血清內(nèi)代謝物的變化情況(縱向代謝物變化研究),并研究橫縱向篩查所得化合物的重合性,以提高特征離子篩查的準(zhǔn)確度。
組內(nèi)代謝物變化結(jié)果表明,隨著飼養(yǎng)天數(shù)的增加,3個(gè)組別代謝物均有明顯變化;對(duì)照組中,小鼠飼養(yǎng)過(guò)程中腫瘤體積隨天數(shù)增加明顯增大。將VIP值從大到小排序,篩查并列出VIP>1的前50個(gè)代謝物離子,示于圖7。以對(duì)照組篩查的代謝物為目標(biāo),比對(duì)治療組篩查獲得的代謝物離子,結(jié)果列于表1。對(duì)照組篩查獲得12個(gè)目標(biāo)代謝物離子,且在腫瘤生長(zhǎng)過(guò)程中趨勢(shì)變化顯著,其強(qiáng)度隨給藥時(shí)間變化的趨勢(shì)示于圖8,并對(duì)這12個(gè)化合物離子的生物學(xué)意義進(jìn)行考察。
圖7 對(duì)照組(a)、低劑量(b)和高劑量(c)給藥組的離子篩查 VIP 得分圖Fig.7 VIP score plots of the control group (a), SsD low concentration group (b), and SsD high concentration group (c)
研究表明,哌可酸(m/z130.086 98)在人體的含量與乳腺癌進(jìn)展速度呈正相關(guān)[39-40]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在對(duì)照組小鼠血漿中,m/z130.086 98離子強(qiáng)度隨癌癥患病時(shí)間延長(zhǎng)而顯著增加;在治療組中,隨著腹腔注射時(shí)間延長(zhǎng),低劑量給藥組小鼠血清中m/z130.086 98強(qiáng)度升高,但離子強(qiáng)度增加趨勢(shì)較對(duì)照組下降;高劑量給藥組m/z130.086 98離子強(qiáng)度變化不大,表明SsD能夠抑制哌可酸的增加,示于圖8a。N-丙烯酰甘氨酸(m/z130.051 48)是在甘氨酸N-?;D(zhuǎn)移酶作用下的產(chǎn)物。Tian等[41]研究表明,甘氨酸N-?;D(zhuǎn)移酶的異常表達(dá)與乳腺癌進(jìn)程密切相關(guān)。圖8b表明,在對(duì)照組和治療組中,m/z130.051 48離子隨時(shí)間增加均呈現(xiàn)降低趨勢(shì);給藥治療相同時(shí)間(9天、21天),m/z130.051 48離子在給藥組中強(qiáng)度與對(duì)照組相比呈現(xiàn)升高的趨勢(shì),表明了SsD具有干預(yù)治療作用。3-亞甲基吲哚(m/z130.066 68)是3-甲基吲哚的代謝產(chǎn)物之一,與生物體內(nèi)色氨酸代謝途經(jīng)相關(guān)[42],但與乳腺癌進(jìn)展的關(guān)系尚不明確。從圖8c可知,在對(duì)照組與低劑量治療組中,隨癌癥患病天數(shù)增加,m/z130.066 68離子強(qiáng)度呈下降趨勢(shì);在高劑量治療組中,該離子強(qiáng)度明顯上升,表明SsD能夠促進(jìn)小鼠體內(nèi)血清中3-亞甲基吲哚含量增加。L-犬尿氨酸(m/z209.093 98)是一種免疫抑制代謝產(chǎn)物,可顯著抑制T細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)T細(xì)胞凋亡,其含量變化與肝臟的代謝調(diào)節(jié)有關(guān)[43-44]。在SsD治療乳腺癌的過(guò)程中,即使是0.4 mg/kg SsD也可以使L-犬尿氨酸離子強(qiáng)度顯著下降,而在對(duì)照組中,隨小鼠癌癥患病天數(shù)增加,m/z209.093 98離子強(qiáng)度呈顯著上升趨勢(shì),表明SsD對(duì)L-犬尿氨酸具有顯著的抑制作用,示于圖8d。苯乙胺(m/z122.097 08)具有抑制人乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖的能力[45]。在對(duì)照組中,m/z122.097 08離子強(qiáng)度隨時(shí)間增長(zhǎng)而明顯降低;在低劑量組中,m/z122.097 08離子強(qiáng)度的降低趨勢(shì)有所減緩;在高劑量組中,苯乙胺水平變化不顯著,示于圖8e。給藥21天時(shí),苯乙胺含量順序?yàn)椋焊邉┝拷M>低劑量組>對(duì)照組,表明SsD影響苯乙胺在小鼠體內(nèi)的生成和代謝,列于表2。由圖8f可知,對(duì)照組中DL-2-氨基辛酸(m/z160.133 58)離子強(qiáng)度隨時(shí)間變化呈現(xiàn)顯著上升趨勢(shì);在低劑量SsD給藥后,該離子上升趨勢(shì)變得緩慢,得到抑制;在高劑量給藥組中,該離子強(qiáng)度發(fā)生顯著下降,表明SsD可能通過(guò)抑制DL-2-氨基辛酸的合成來(lái)控制乳腺癌的發(fā)展。次黃嘌呤(m/z137.046 98)是一種潛在的有毒化合物,也是乳腺癌診斷的潛在生物標(biāo)志物[46],圖8k表明,次黃嘌呤離子強(qiáng)度在3組中變化不大,但組間比較表明,其離子強(qiáng)度在高劑量組低于低劑量組和對(duì)照組。圖8g和圖8l表明,N(6)-甲基賴(lài)氨酸(m/z161.128 88)和己酰肉堿(m/z260.188 28)在對(duì)照組中呈下降趨勢(shì),而在高、低劑量組變化不明顯,表明SsD可能對(duì)這3個(gè)代謝物離子產(chǎn)生影響,使之趨于正?;?。由圖8h和8j可知,吲哚乙醛(m/z160.076 38)和己酰甘氨酸(m/z174.112 68)的離子強(qiáng)度在3個(gè)組別中均呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。3-甲基組胺(m/z126.103 58)能夠抑制淋巴細(xì)胞活化,在手術(shù)切除乳腺癌腫瘤后,尿液中3-甲基組胺含量會(huì)顯著下降[47-48]。由圖8i可知,給藥后,3-甲基組胺的增長(zhǎng)速率會(huì)明顯下降,表明SsD對(duì)其代謝途徑存在影響。
注:a.哌可酸;b.N-丙烯酰甘氨酸;c.3-亞甲基吲哚;d.L-犬尿氨酸;e.苯乙胺;f.DL-2-氨基辛酸;g.N(6)-甲基賴(lài)氨酸;h.吲哚乙醛;i.3-甲基組胺;j.己酰甘氨酸;k.次黃嘌呤;l.己酰肉堿圖8 組內(nèi)篩查獲得的12種代謝產(chǎn)物離子強(qiáng)度隨給藥時(shí)間變化的趨勢(shì)圖Fig.8 Intensity variations of potential 12 biomarkers obtained by intra-group screening
表2 給藥21天后,對(duì)照組、低劑量和高劑量給藥組組間小鼠血清的差異代謝物及其變化情況Table 2 Differential metabolite ions in serum screening of control group, SsD low concentration group and SsD high concentration group after 21 administration days
取給藥治療21天后的血清進(jìn)行代謝物變化篩查,研究組間代謝組學(xué),對(duì)組間變化明顯的化合物進(jìn)行篩查和鑒定,所得信息列于表2??芍?種化合物組間變化趨勢(shì)明顯。其中,在對(duì)照組、低劑量給藥組和高劑量給藥組中,m/z130.065 88離子強(qiáng)度呈上升趨勢(shì),m/z122.097 08、130.086 88、209.093 98、160.076 48和144.103 48離子強(qiáng)度呈明顯下降趨勢(shì),并且所獲得的5種離子和表2中篩查的離子重合,分別是3-亞甲基吲哚、苯乙胺、哌可酸、L-犬尿氨酸、吲哚乙醛。實(shí)驗(yàn)結(jié)果得到交互驗(yàn)證,說(shuō)明代謝物離子篩查結(jié)果準(zhǔn)確可靠。5-乙酰氨基-6-氨基-3-甲基尿嘧啶(m/z227.080 08)可在體內(nèi)產(chǎn)生,需經(jīng)過(guò)肝臟和腎臟的調(diào)節(jié),存在于生物體的血液、尿液和糞便中。目前未見(jiàn)5-乙酰氨基-6-氨基-3-甲基尿嘧啶與乳腺癌代謝相關(guān)的報(bào)道,其變化的產(chǎn)生可能與SsD相關(guān),需要進(jìn)一步研究。脯氨酸甜菜堿(m/z144.103 48)對(duì)腎臟的滲透調(diào)節(jié)有積極作用,雖然之前未明確脯氨酸甜菜堿與乳腺癌進(jìn)展的關(guān)系,但其在食管鱗狀癌與甲狀腺癌中都發(fā)生了明顯變化[49-50],推測(cè)小鼠血清中脯氨酸甜菜堿含量的變化可能與SsD藥物作用相關(guān)。
本工作建立了一種代謝組學(xué)方法用于研究柴胡皂苷D對(duì)乳腺癌的治療作用及其治療過(guò)程中藥物作用對(duì)機(jī)體代謝物產(chǎn)生的影響。結(jié)果表明,SsD對(duì)乳腺癌小鼠具有較好的治療效果,能夠顯著提高小鼠的存活率。此外,隨著給藥次數(shù)和天數(shù)的增加,通過(guò)研究對(duì)照組、SsD低劑量和SsD高劑量給藥組小鼠血清中的代謝物離子變化,篩查與藥物影響作用較大的代謝物離子,并對(duì)其進(jìn)行定性分析和變化趨勢(shì)研究。SsD在治療乳腺癌過(guò)程中的代謝變化主要表現(xiàn)為氨基酸代謝與核苷酸代謝,這給藥物作用靶點(diǎn)和潛在腫瘤標(biāo)志物篩查研究提供了理論依據(jù)。