袁 凱，張智瑜，陳 峰，徐秀榮，趙黎明，陳祥興，許素秀，祖立闖，姚忠慧

（1.淄博市動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心，山東淄博 255000；2.山東省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心，山東濟(jì)南 250100）

禽流感（avian influenza，AI）是由A 型禽流感病毒（avian influenza virus，AIV）引起的，容易在家禽和野禽之間傳播的傳染性疾病，按照病毒致病力大小又分為高致病性（HPAI，H5、H7 亞型為主）和低致病性（LPAI，H9 亞型為主）。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為須通報(bào)動(dòng)物疫病[1-2]，我國(guó)將其列為一類動(dòng)物疫病。2004 年我國(guó)首次發(fā)生H5N1 亞型HPAI 疫情[3]，給養(yǎng)禽業(yè)造成了嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。隨后為了防控HPAI，我國(guó)采取了強(qiáng)制免疫政策[4]，使疫情得到有效控制。近年來(lái)，HPAI 病毒毒株變異速度加快，疫情形勢(shì)嚴(yán)峻復(fù)雜，養(yǎng)禽行業(yè)仍然面臨巨大風(fēng)險(xiǎn)。為評(píng)估山東省淄博市HPAI 防控工作開(kāi)展情況，根據(jù)2020 年淄博市動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)與流行病學(xué)調(diào)查計(jì)劃要求，在全市范圍內(nèi)隨機(jī)抽取養(yǎng)殖場(chǎng)戶，采集禽血清和棉拭子樣品進(jìn)行檢測(cè)，以期了解其免疫效果、病原分布情況，為下一步防控工作提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品來(lái)源

淄博市家禽養(yǎng)殖以肉雞、蛋雞、肉鴨為主，其他禽類較少（表1）。2020 年春、秋季集中免疫結(jié)束28 d 后，參照2020 年淄博市動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)與流行病學(xué)調(diào)查計(jì)劃要求，并根據(jù)各區(qū)縣轄區(qū)內(nèi)養(yǎng)殖情況，使用兩階段抽樣法隨機(jī)抽取養(yǎng)殖場(chǎng)戶。從養(yǎng)殖場(chǎng)戶平行采集禽咽喉/泄殖腔拭子和血清樣品，同時(shí)采集糞污樣品，每個(gè)場(chǎng)點(diǎn)按照群內(nèi)流行率10%，置信水平95%，檢測(cè)方法敏感性95%，預(yù)計(jì)每個(gè)場(chǎng)點(diǎn)按最大量采集禽樣品30 份（不足30 只的全采），環(huán)境樣品另外采集。共采集69 個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)戶2 070 份血清樣品和2 628 份棉拭子樣品。

表1 不同種類家禽養(yǎng)殖情況統(tǒng)計(jì)

1.2 檢測(cè)及結(jié)果判定

根據(jù)《高致病性禽流感診斷技術(shù)》（GB/T 18936—2020）[5]，采用HA和HI試驗(yàn)，對(duì)HPAI（H5N1 Re-11/Re-12 株）免疫抗體進(jìn)行檢測(cè)和結(jié)果判定。根據(jù)《禽流感病毒RT-PCR 檢測(cè)方法》（NY/T 772—2013）[6]、《禽流感病毒通用熒光RT-PCR 檢測(cè)方法》（GB/T 19438.1—2004）[7]，采用熒光定量RT-PCR方法，使用通用型AIV 檢測(cè)試劑盒進(jìn)行病原檢測(cè)，如檢測(cè)出陽(yáng)性樣品，再分別使用H5、H7、H9 亞型AIV 試劑盒進(jìn)一步檢測(cè)。

HI 抗體滴度≥24為免疫個(gè)體合格，群體合格率≥70%為群體合格。監(jiān)測(cè)陽(yáng)性個(gè)體：采用國(guó)家推薦的RT-PCR 或熒光RT-PCR 檢測(cè)方法，結(jié)果為陽(yáng)性。確診陽(yáng)性個(gè)體：監(jiān)測(cè)陽(yáng)性個(gè)體經(jīng)山東省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心確診，結(jié)果為陽(yáng)性。山東省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心難以確診的，送國(guó)家禽流感參考實(shí)驗(yàn)室確診。陽(yáng)性群體：群體內(nèi)至少檢出1 個(gè)確診陽(yáng)性個(gè)體。

1.3 數(shù)據(jù)分析

免疫合格樣品：HI 抗體滴度≥24的血清樣品；免疫合格場(chǎng)戶：樣品免疫合格率≥70%的養(yǎng)殖場(chǎng)戶；個(gè)體免疫合格率=免疫合格樣品數(shù)/檢測(cè)樣品總數(shù)×100%；群體免疫合格率=免疫合格場(chǎng)戶數(shù)/檢測(cè)場(chǎng)戶總數(shù)×100%。用Excel 對(duì)采樣數(shù)、樣品數(shù)和檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，對(duì)個(gè)體和群體免疫抗體合格率等進(jìn)行計(jì)算、分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 總體情況

2020 年，全市共檢測(cè)養(yǎng)殖場(chǎng)戶69 個(gè)，其中免疫合格場(chǎng)戶65 個(gè)，群體免疫合格率為94.2%；檢測(cè)血清樣品2 070 份，其中Re-11 株免疫合格數(shù)1 966 份，個(gè)體免疫合格率95.0%；Re-12 株免疫合格數(shù)1 975 份，個(gè)體免疫合格率95.4%，均超過(guò)了農(nóng)業(yè)農(nóng)村部要求的不低于70%的標(biāo)準(zhǔn)。病原學(xué)檢測(cè)樣品2 628 份，結(jié)果均為陰性。

2.2 場(chǎng)點(diǎn)分布

本次共檢測(cè)規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)46 個(gè)、散養(yǎng)戶23 個(gè)。從場(chǎng)點(diǎn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果（表2）來(lái)看，規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)Re-11、Re-12 株個(gè)體合格率分別為98.8%、98.5%，群體平均合格率為97.8%；散養(yǎng)戶Re-11、Re-12株個(gè)體合格率為87.2%、89.3%，群體平均合格率分別為87.0%。規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)平均個(gè)體、群體免疫合格率均高于散養(yǎng)戶。

表2 不同類型場(chǎng)點(diǎn)檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì) %

2.3 地區(qū)分布

從地區(qū)分布（表3）來(lái)看，張店區(qū)個(gè)體免疫合格率最低，Re-11/Re-12 株均為74.7%，其他地區(qū)平均個(gè)體合格率均在87.0%以上，其中4 個(gè)區(qū)縣（周村區(qū)、沂源縣、高新區(qū)、經(jīng)開(kāi)區(qū)）均達(dá)到100%；張店區(qū)群體免疫合格率也最低，為80.0%，其他地區(qū)均在85.0%以上，其中6 個(gè)區(qū)縣（周村區(qū)、臨淄區(qū)、桓臺(tái)縣、沂源縣、高新區(qū)、經(jīng)開(kāi)區(qū)）均達(dá)到100%。

表3 不同區(qū)縣檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì) %

3 討論

2020 年淄博市采用二階段隨機(jī)抽樣策略來(lái)確定抽檢的各個(gè)區(qū)縣養(yǎng)殖場(chǎng)戶，隨機(jī)抽樣提高了樣品的代表性，可以更好地反映全市HPAI 總體情況。檢測(cè)結(jié)果顯示，HPAI 免疫個(gè)體合格率和群體合格率均在70%以上，均達(dá)到農(nóng)業(yè)農(nóng)村部和山東省相關(guān)要求，病原學(xué)檢測(cè)未發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性樣品，說(shuō)明全市HPAI 整體防控效果較好，疫情發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)較低。

全市規(guī)模場(chǎng)群體免疫合格率為97.8%，散養(yǎng)戶群體合格率為87.0%，規(guī)模場(chǎng)高于散養(yǎng)戶。由于規(guī)模場(chǎng)飼養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，管理規(guī)范，專業(yè)技術(shù)水平較高，大多數(shù)堅(jiān)持程序化免疫，而且生物安全意識(shí)較高，免疫的積極主動(dòng)性相對(duì)較高，因此免疫抗體合格率更高。散養(yǎng)戶的防疫意識(shí)還相對(duì)較為淡薄，自身對(duì)免疫工作重視不足，單純依靠政府春秋兩季集中免疫，因此散養(yǎng)戶抗體合格率相對(duì)較低。H7N9 疫情以后，市場(chǎng)管理部門(mén)加強(qiáng)了對(duì)農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)等活禽交易地點(diǎn)的管理，嚴(yán)格禁止活禽交易，均采取冰鮮上市的模式，因此本次監(jiān)測(cè)未涉及活禽交易市場(chǎng)。

統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，仍有個(gè)別場(chǎng)戶強(qiáng)制免疫工作存在漏洞，免疫效果較差，免疫合格率未達(dá)到70%，相關(guān)部門(mén)已經(jīng)通報(bào)各區(qū)縣對(duì)不合格場(chǎng)點(diǎn)開(kāi)展調(diào)查，及時(shí)查明原因，進(jìn)行補(bǔ)充免疫，確保免疫效果，防止HPAI 疫情傳入和發(fā)生。