安秀秀 李向?qū)?魏學良 徐玉薇 羅夢蕓 王媛媛

(西南大學動物醫(yī)學院，重慶400715)

奶牛圍產(chǎn)期共42 d，包括圍產(chǎn)前期(干奶后期)和圍產(chǎn)后期(泌乳早期)，是保證奶牛產(chǎn)后泌乳及再繁殖的重要時期[1]。圍產(chǎn)期奶牛經(jīng)歷了干奶、飼糧營養(yǎng)結(jié)構(gòu)變化、飼料環(huán)境變化、分娩及產(chǎn)奶等營養(yǎng)、代謝和生理等方面的變化[2]，干物質(zhì)采食量(dry matter intake ，DMI)下降，同時胎兒生長發(fā)育、母牛自身維持和乳房發(fā)育都需要大量營養(yǎng)物質(zhì)，導致脂肪動員加劇，產(chǎn)生大量的非酯化脂肪酸(non-esterified fatty acid，NEFA)，加重肝臟負擔，未能被肝臟清除的NEFA最終以甘油三酯(triglyceride，TG)形式儲存在肝臟，造成肝臟損傷，進而損害奶牛機體健康，降低生產(chǎn)性能[3-5]。能量負平衡(negative energy balance，NEB)狀態(tài)下，奶牛機體動用脂肪、蛋白質(zhì)等物質(zhì)增加，這在一定程度上緩解了能量的缺乏，卻導致一系列疾病，如子宮內(nèi)膜炎、乳房炎[6]、酮病和脂肪肝[7]等疾病，嚴重威脅奶牛的健康，甚至會減少奶牛的使用年限，增加牛場的淘汰率[8]。

鄭家三等[9]研究顯示，圍產(chǎn)期奶牛飼糧中添加過瘤胃膽堿(rumen-protected choline，RPC)能夠減緩血漿葡萄糖(glucose，GLU)含量的降低，降低血漿β-羥丁酸(β-hydroxybutyric acid，BHBA)、NEFA含量，有提高奶牛血漿胰島素(insulin，INS)含量的趨勢，這說明在圍產(chǎn)期奶牛飼糧中添加過瘤胃膽堿能夠改善機體脂肪代謝，促進糖異生作用，緩解奶牛NEB狀態(tài)。相關(guān)研究表明，圍產(chǎn)期奶牛飼糧中補飼鉻對圍產(chǎn)期奶牛氧化應(yīng)激狀態(tài)具有改善作用，可提高奶牛的生產(chǎn)性能，并且有提升血漿GLU含量及降低產(chǎn)后血漿NEFA含量的效果，改善圍產(chǎn)期奶牛NEB狀態(tài)[10-11]。膽堿和有機鉻作為飼料添加劑在臨床上用于改善圍產(chǎn)期奶牛的應(yīng)激及NEB狀態(tài)具有較為明顯的作用。在中國荷斯坦奶牛研究上，相對有機鉻來講，過瘤胃膽堿在圍產(chǎn)期奶牛應(yīng)用的研究相對較多，但幾乎沒有過瘤胃膽堿和有機鉻對圍產(chǎn)期奶牛血液生化及內(nèi)分泌指標影響的對比，以及二者聯(lián)合應(yīng)用對圍產(chǎn)期奶牛血液生化指標的影響的研究。因此，本試驗針對飼糧中添加過瘤胃膽堿和有機鉻以及二者聯(lián)合應(yīng)用對圍產(chǎn)期奶牛DMI、奶產(chǎn)量以及血液生化指標的影響做了一系列的研究分析。

1 材料與方法

1.1 試驗設(shè)計

試驗使用過瘤胃膽堿購于上海某生物科技股份有限公司，其中氯化膽堿含量>24%；有機鉻購于某動物營養(yǎng)科技有限公司，主要為蛋氨酸鉻，含量>1 000 mg/kg。

奶牛飼養(yǎng)試驗于2019年在重慶市巴南區(qū)光大生態(tài)牧場進行。選取40頭健康、經(jīng)產(chǎn)(平均胎次1～2胎)的中國荷斯坦奶牛，按身體健康狀態(tài)(BCS)、胎次平均分為4組，每組10頭。對照組(TO)飼喂基礎(chǔ)飼糧，膽堿組(TC)飼喂基礎(chǔ)飼糧+30 g/d過瘤胃膽堿，有機鉻組(TA)飼喂基礎(chǔ)飼糧+8 g/d有機鉻，混合組(TAC)飼喂基礎(chǔ)飼糧+30 g/d過瘤胃膽堿+8 g/d機鉻添。本試驗過瘤胃膽堿及有機鉻添加劑量參考產(chǎn)品使用說明確定。

試驗期為整個圍產(chǎn)期。進入干奶期的奶牛轉(zhuǎn)入干奶圈飼養(yǎng)，預產(chǎn)前第15天從干奶群轉(zhuǎn)入產(chǎn)房待產(chǎn)，產(chǎn)后第3天轉(zhuǎn)入泌乳牛舍，產(chǎn)前產(chǎn)后飼喂不同飼糧，基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1，均為全混合日糧(total mixed ration，TMR)，TMR每天現(xiàn)喂現(xiàn)配，產(chǎn)前每天投喂2次，投喂時間分別為08:00和20:00；產(chǎn)后每天投喂3次，投喂時間分別為08:00、14:00和20:00，牛只全天自由飲水。試驗牛每日清晨正常飼喂精料前，將添加劑拌入少量精料中，每頭牛單獨采食，之后正常飼喂，確保每頭試驗牛都能完全采食各組過瘤胃膽堿和有機鉻。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

1.2 樣品采集

1.2.1 飼料樣品

于飼喂前采集奶牛飼糧，送回實驗室，于烘箱中65 ℃烘干，粉碎后常溫保存，用于飼料營養(yǎng)成分的測定。

1.2.2 血清樣品

分別在奶牛產(chǎn)前第20天、產(chǎn)前第10天、分娩當天、產(chǎn)后第10天和產(chǎn)后第20天晨飼前用10 mL一次性獸用采血針進行尾靜脈采血，采血量5～10 mL。血樣于30 ℃下靜置5～6 h，析出血清，將血清分裝于1.5 mL離心管中，-20 ℃保存待測。

1.3 指標測定

1.3.1 DMI和奶產(chǎn)量

試驗期間，記錄各組奶牛產(chǎn)前、產(chǎn)后的采食量，計算DMI。奶牛的產(chǎn)奶量由自動擠奶系統(tǒng)完成，每日早、中、晚3次讀取奶牛完成擠奶后自動擠奶系統(tǒng)上的數(shù)值進行統(tǒng)計。

1.3.2 血液GLU與BHBA含量

針刺耳靜脈，用試紙條吸取少量血液，將試紙條置于血糖儀(三諾生物傳感股份有限公司)和AM-1型血酮儀(河北帝準生物技術(shù)有限公司)測定讀數(shù)。

1.3.3 血清脂質(zhì)代謝、肝臟功能和內(nèi)分泌指標

采用全自動生化儀(Olympus AU400，日本奧林巴斯光學工業(yè)株式會社)檢測血清TG、高密度脂蛋白(HDL)含量和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性。

血清對氧磷酶-1(PON-1)、INS、脂聯(lián)素(ADP)及瘦素(Leptin)含量采用試劑盒測定，試劑盒購于惠佳生物科技有限公司，按生產(chǎn)商說明書測定。

1.4 統(tǒng)計分析

用SPSS 22.0軟件進行單因素方差分析(one-way ANOVA)，用Duncan氏法進行多重比較，試驗結(jié)果用平均值±標準差表示，P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié) 果

2.1 過瘤胃膽堿和有機鉻對圍產(chǎn)期奶牛DMI的影響

由表2可知，各組之間奶牛產(chǎn)前、產(chǎn)后DMI無顯著差異(P>0.05)。

表2 奶牛產(chǎn)前、產(chǎn)后DMI

2.2 過瘤胃膽堿和有機鉻對圍產(chǎn)期奶牛奶產(chǎn)量的影響

由表3可知，本試驗牛場奶牛于產(chǎn)后3周達到泌乳峰值，產(chǎn)后4周奶產(chǎn)量略高于產(chǎn)后2周。產(chǎn)后1周，膽堿組和有機鉻組奶牛奶產(chǎn)量顯著高于對照組(P<0.05)；產(chǎn)后2和4周，膽堿組、有機鉻組和混合組奶牛奶產(chǎn)量均顯著高于對照組(P<0.05)，有機鉻組奶牛奶產(chǎn)量顯著高于膽堿組和混合組(P<0.05)；產(chǎn)后3周，僅有機鉻組奶牛奶產(chǎn)量顯著高于對照組(P<0.05)，膽堿組和混合組奶牛奶產(chǎn)量雖高于對照組，但差異不顯著(P>0.05)。

2.3 過瘤胃膽堿和有機鉻對圍產(chǎn)期奶牛血液營養(yǎng)物質(zhì)指標的影響

由表4可知，產(chǎn)前第20天和產(chǎn)前第10天，各組之間血液GLU含量差異不顯著(P>0.05)；分娩當天、產(chǎn)后第10天和產(chǎn)后第20天，膽堿組、有機鉻組和混合組血液GLU含量均顯著高于對照組(P<0.05)，膽堿組、有機鉻組和混合組之間差異不顯著(P>0.05)。產(chǎn)前第20天和產(chǎn)前第10天，各組之間血液BHBA含量差異不顯著(P>0.05)，分娩當天、產(chǎn)后10天和產(chǎn)后20天，膽堿組、有機鉻組和混合組血液BABA含量顯著低于對照組(P<0.05)，膽堿組、有機鉻組和混合組之間差異不顯著(P>0.05)。

表3 奶牛產(chǎn)后4周產(chǎn)奶量變化

表4 過瘤胃膽堿和有機鉻對圍產(chǎn)期奶牛血液營養(yǎng)物質(zhì)指標的影響

2.4 過瘤胃膽堿和有機鉻對圍產(chǎn)期奶牛血清脂質(zhì)代謝指標的影響

由表5可知，產(chǎn)前第20天和產(chǎn)前第10天，各組之間血清TG含量差異不顯著(P>0.05)，分娩當天、產(chǎn)后第10天和產(chǎn)后第20天，膽堿組、有機鉻組和混合組血清TG含量顯著低于對照組(P<0.05)；產(chǎn)后第10天，混合組血清TG含量顯著低于膽堿組(P<0.05)。產(chǎn)前第20天和產(chǎn)前第10天，各組之間血清HDL含量無顯著差異(P>0.05)；分娩當天、產(chǎn)后第10天和產(chǎn)后第20天，膽堿組、有機鉻組和混合組血清HDL含量均顯著高于對照組(P<0.05)；分娩當天，膽堿組血清HDL含量顯著低于有機鉻組和混合組(P<0.05)；產(chǎn)后第10天，膽堿組、有機鉻組和混合組之間血清HDL含量無顯著差異(P>0.05)；產(chǎn)后第20天，膽堿組血清HDL含量顯著低于有機鉻組(P<0.05)。

2.5 過瘤胃膽堿和有機鉻對圍產(chǎn)期奶牛血清肝臟功能指標的影響

由表6可知，產(chǎn)前第20天和產(chǎn)前第10天，各組之間血清PON-1活性無顯著差異(P>0.05)；分娩當天、產(chǎn)后第10天和產(chǎn)后第20天，膽堿組、有機鉻組和混合組血清PON-1活性顯著高于對照組(P<0.05)，膽堿組、有機鉻組和混合組之間差異不顯著(P>0.05)。產(chǎn)前第20天和產(chǎn)前第10天，各組之間血清ALT活性無顯著差異(P>0.05)；分娩當天、產(chǎn)后第10天和產(chǎn)后第20天，膽堿組、有機鉻組和混合組血清ALT活性顯著低于對照組(P<0.05)；分娩當天，膽堿組、有機鉻組和混合組之間血清ALT活性差異不顯著(P>0.05)；產(chǎn)后第10天和產(chǎn)后第20天，混合組血清ALT活性顯著低于膽堿組和有機鉻組(P<0.05)，膽堿組和有機鉻組之間差異不顯著(P>0.05)。產(chǎn)前第20天、產(chǎn)前第10天和分娩當天，各組之間血清AST活性無顯著差異(P>0.05)；產(chǎn)后第10天和產(chǎn)后第20天，膽堿組、有機鉻組和混合組血清AST活性顯著低于對照組(P<0.05)；產(chǎn)后10天時，有機鉻組和混合組血清AST活性顯著低于膽堿組(P<0.05)；產(chǎn)后第20天，膽堿組、有機鉻組和混合組之間血清AST活性差異不顯著(P>0.05)。

表5 過瘤胃膽堿和有機鉻對圍產(chǎn)期奶牛血清脂質(zhì)代謝指標的影響

表6 過瘤胃膽堿和有機鉻對圍產(chǎn)期奶牛血清肝臟功能指標的影響

2.6 過瘤胃膽堿和有機鉻對圍產(chǎn)期奶牛血清內(nèi)分泌指標的影響

由表7可知，產(chǎn)前第20天和產(chǎn)前第10天，各組之間血清INS含量無顯著差異(P>0.05)；分娩當天，有機鉻組和混合組血清INS含量顯著高于對照組(P<0.05)，且有機鉻組顯著高于混合組(P<0.05)；產(chǎn)后第10天和產(chǎn)后第20天，膽堿組、有機鉻組和混合組血清INS含量顯著高于對照組(P<0.05)，但膽堿組、有機鉻組和混合組之間差異不顯著(P>0.05)。產(chǎn)前第20天和產(chǎn)前第10天，各組之間血清ADP含量無顯著差異(P>0.05)；分娩當天，膽堿組和有機鉻組血清ADP含量顯著高于對照組(P<0.05)，混合組血清ADP含量顯著低于對照組(P<0.05)；產(chǎn)后第10天和產(chǎn)后第20天，膽堿組、有機鉻組和混合組血清ADP含量顯著高于對照組(P<0.05)，膽堿組、有機鉻組和混合組之間差異不顯著(P>0.05)。產(chǎn)前第20天，各組之間血清Leptin含量差異不顯著(P>0.05)；產(chǎn)前第10天，有機鉻組奶牛血清Leptin含量顯著高于對照組、膽堿組和混合組(P<0.05)；分娩當天、產(chǎn)后第10天和產(chǎn)后第20天，膽堿組、有機鉻組和混合組血清Leptin含量均顯著高于對照組(P<0.05)；分娩當天，混合組血清Leptin含量顯著高于膽堿組和有機鉻組(P<0.05)；產(chǎn)后第10天，有機鉻組血清Leptin含量顯著高于膽堿組和混合組(P<0.05)；產(chǎn)后第20天，膽堿組、有機鉻組和混合組血清Leptin含量差異不顯著(P>0.05)。

表7 過瘤胃膽堿和有機鉻對圍產(chǎn)期奶牛血清內(nèi)分泌指標的影響

3 討 論

3.1 過瘤胃膽堿和有機鉻對圍產(chǎn)期奶牛DMI和奶產(chǎn)量的影響

圍產(chǎn)期奶牛臨近分娩會處于應(yīng)激狀態(tài)，DMI降低，如何提高圍產(chǎn)期奶牛采食量，增加營養(yǎng)物質(zhì)的攝入，緩解NEB，成為養(yǎng)牛業(yè)關(guān)注的重點。本試驗結(jié)果顯示，圍產(chǎn)期奶牛飼糧中添加過瘤胃膽堿和有機鉻能一定程度增加圍產(chǎn)期奶牛DMI，其中，單獨添加過瘤胃膽堿的效果較好，與對照組相比，產(chǎn)前提高了0.88 kg/d，產(chǎn)后提高了0.76 kg/d。Lima等[12]和Patton[13]研究顯示，飼糧中添加膽堿可提高奶牛采食量，與本試驗結(jié)果一致。因此，提高DMI可能是膽堿和有機鉻改善機體能量代謝的途徑之一。

膽堿是脂蛋白的重要組成成分，同時可清除肝臟組織內(nèi)的TG，有機鉻可以合成葡萄糖耐量因子(GTF)，與INS發(fā)揮協(xié)同作用。本試驗結(jié)果顯示，在圍產(chǎn)期奶牛飼糧中添加過瘤胃膽堿和有機鉻，試驗組奶牛產(chǎn)后4周內(nèi)的奶產(chǎn)量均高于對照組，雖部分時間內(nèi)不存在顯著差異，但在DMI相同的條件下，奶產(chǎn)量呈現(xiàn)增加的趨勢。本試驗飼糧中添加過瘤胃膽堿和有機鉻提高了奶牛的產(chǎn)奶量，可能是膽堿發(fā)揮了清除肝臟組織中TG的作用，促進了脂蛋白的合成，加快了脂類從肝臟和脂肪組織進入乳腺的效率，同時，有機鉻與INS進行協(xié)同，增加奶牛的采食量，為奶牛的泌乳性能提供物質(zhì)和能量保障。本試驗中，血液TG含量的降低也印證了膽堿和有機鉻對肝臟功能的維護起到了關(guān)鍵的作用。

3.2 過瘤胃膽堿和有機鉻對圍產(chǎn)期奶牛血液GLU和BHBA含量的影響

研究顯示，圍產(chǎn)期奶牛飼糧中添加過瘤胃膽堿具有提升產(chǎn)后血液GLU含量、降低BHBA含量的作用[1,14]。但也有研究表明，圍產(chǎn)期奶牛飼糧中添加過瘤胃膽堿，對血清BHBA、NEFA含量并無顯著影響[15]。圍產(chǎn)期奶牛飼糧中補飼蛋氨酸鉻可以降低產(chǎn)后血清NEFA含量以及升高產(chǎn)后21天血清GLU含量[11]，且飼喂蛋氨酸鉻的試驗組奶牛與對照組相比，具有較高的血清NEFA含量及較低的BHBA含量，并且血清GLU和胰高血糖素含量也顯著高于對照組[16]。本試驗在對血液GLU和BHBA含量的研究中發(fā)現(xiàn)，分娩當天奶牛血液GLU含量迅速下降，奶牛圍產(chǎn)期GLU缺乏引發(fā)奶牛調(diào)動體內(nèi)脂肪儲備，血液中脂肪酸含量增加，高脂肪酸含量可干擾INS信號途徑，從而降低INS敏感性[17]。此外，GLU的缺乏伴隨著脂解作用，產(chǎn)生的部分脂肪酸導致機體出現(xiàn)一系列應(yīng)激和炎癥反應(yīng)。這一系列由GLU代謝失衡導致的應(yīng)激和免疫抑制乃至疾病都會導致泌乳性能的下降[18]。試驗組添加過瘤胃膽堿和有機鉻對奶牛產(chǎn)前血液GLU和BHBA含量影響不明顯，與對照組相比，在分娩當天及產(chǎn)后，各試驗組均存在不同程度地提高了奶牛產(chǎn)后血液GLU含量，降低了產(chǎn)前、產(chǎn)后血液BHBA含量，提高了能量物質(zhì)的供給，減少脂質(zhì)動員，降低脂肪肝和酮病等營養(yǎng)代謝病的發(fā)生率，緩解奶牛圍產(chǎn)期NEB狀態(tài)。血液GLU含量在奶牛產(chǎn)犢后大幅度下降，恰恰反映了高產(chǎn)奶牛乳腺對GLU的極大需求。而圍產(chǎn)期奶牛DMI下降所導致的NEB，其實質(zhì)是GLU的缺乏，更確切的說是升糖前體物質(zhì)缺乏所導致的GLU代謝失衡。

3.3 過瘤胃膽堿和有機鉻對圍產(chǎn)期奶牛血清脂質(zhì)代謝指標的影響

HDL主要合成于小腸和肝臟，用于將肝外的膽固醇運到肝臟內(nèi)，并且能夠與血液循環(huán)中的極低密度脂蛋白(VLDL)進行物質(zhì)交換[19]。一方面VLDL接受高密度脂蛋白-膽固醇(HDL-C)的載脂蛋白CⅡ(APOCⅡ)，激活脂蛋白脂肪酶(LPL)，催化VLDL攜帶的TG分解，進入組織細胞氧化供能或脂肪組織儲存，未被LPL催化水解的TG會返回肝臟加重肝臟脂肪變性[20]。另一方面HDL-C可與VLDL交換磷脂、膽固醇和膽固醇酯并帶回肝臟，返回肝臟的膽固醇一部分會合成膽汁酸，膽汁酸可以促進腸道脂肪的乳化吸收，減輕自體脂肪的分解代謝，促進胰腺分泌INS并且提高INS的敏感性；另一部分HDL-C會重新參與到脂蛋白的合成，促進TG的轉(zhuǎn)運。TG蓄積會造成肝細胞脂質(zhì)浸潤和脂肪肝的發(fā)生，進而造成內(nèi)源GLU合成不足，加劇NEB。相關(guān)的試驗表明補飼膽堿可降低TG在肝臟的蓄積[21]，圍產(chǎn)期奶牛飼糧中補飼有機鉻顯著降低了產(chǎn)后血清TG及總膽固醇含量[22]。本試驗研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加過瘤胃膽堿和有機鉻均提高了血清HDL含量，降低血清TG含量。血液中的HDL與富含TG脂蛋白進行膽固醇酯與TG的交換，富含TG的HDL容易被肝脂酶和內(nèi)皮脂酶所脂解，從而形成較小的HDL顆粒被腎小球過濾和重吸收，最終在遠曲小管降解。產(chǎn)后試驗組奶牛血清HDL含量顯著高于對照組，同時TG含量也顯著低于對照組，說明補飼過瘤胃膽堿和有機鉻在一定程度上減輕了肝臟中TG的沉積，能夠緩解NEB對奶牛肝臟造成的損傷。

3.4 過瘤胃膽堿和有機鉻對圍產(chǎn)期奶牛血清肝臟功能指標的影響

PON-1主要由肝臟分泌進入血液，當肝臟損傷時，肝臟合成PON-1減少，血液中PON-1活性會下降。ALT和AST作為常見的監(jiān)測肝臟損傷的指標，二者活性升高往往是由于肝細胞受損壞死引起細胞膜通透性提高，肝細胞內(nèi)這2種酶釋放入血所造成的。而ALT只存在于肝細胞胞質(zhì)內(nèi)，具有較高的特異性，如果肝細胞出現(xiàn)1%的損傷，那么血液中ALT活性就會升高1倍，因此，ALT被認為是檢測肝臟功能損害的最敏感指標。馬晨等[21]研究發(fā)現(xiàn)，圍產(chǎn)期奶牛血清ALT、AST活性隨著過瘤胃膽堿的添加量升高而降低。本試驗中，各組奶牛產(chǎn)后血清PON-1活性低于產(chǎn)前，血清AST、ALT活性均高于產(chǎn)前，說明母牛產(chǎn)后體脂過度動員產(chǎn)生大量的TG聚集于肝臟，對肝臟功能造成了一定的損害，所以監(jiān)測圍產(chǎn)期奶牛肝臟功能指標，對評價奶牛健康狀況及預測圍產(chǎn)期疾病發(fā)生具有重要意義。而產(chǎn)后20天開始慢慢恢復至產(chǎn)前的狀態(tài)，這與奶牛肝臟自我修復機制的作用密切相關(guān)，且飼糧中添加過瘤胃膽堿和有機鉻的奶牛會更快地恢復到產(chǎn)前的狀態(tài)。圍產(chǎn)期奶牛飼糧中添加過瘤胃膽堿和有機鉻具有減少奶牛肝臟脂質(zhì)沉積的作用，能較好地保護肝臟組織的生理功能。

3.5 過瘤胃膽堿和有機鉻對圍產(chǎn)期奶牛血清內(nèi)分泌指標的影響

在奶牛泌乳期間，營養(yǎng)利用需要組織間的協(xié)調(diào)，而INS參與了這一調(diào)節(jié)過程[23]，INS能夠促進機體組織攝取利用GLU，維持血液GLU平衡，抑制脂質(zhì)代謝、肝臟糖異生和糖原分解。圍產(chǎn)期奶牛常處于INS敏感性與反應(yīng)性降低，這是一種自身穩(wěn)態(tài)的適應(yīng)性反應(yīng)，目的在于刺激肝臟糖異生增加，同時增強脂肪組織的脂解、NEFA的釋放，增加血清其他游離脂肪酸含量以支持機體功能。本試驗中，產(chǎn)后第10天，血清INS含量顯著上升，說明外周組織INS敏感性顯著降低，出現(xiàn)了一定程度的INS抵抗，適度的INS抵抗能夠加速機體脂肪代謝，緩解NEB狀態(tài)；產(chǎn)后第20天，血清INS含量逐漸降低，說明NEB狀態(tài)得到了緩解。圍產(chǎn)期奶牛血液GLU與INS含量呈顯著負相關(guān)，且皆于分娩當天出現(xiàn)拐點，原因在于INS用于維持血液GLU含量穩(wěn)定，而血液GLU含量受到肝臟、激素和神經(jīng)系統(tǒng)的共同調(diào)節(jié)，肝臟主要通過糖異生、糖原轉(zhuǎn)化、糖轉(zhuǎn)脂肪等方式調(diào)節(jié)機體對糖的需求。神經(jīng)系統(tǒng)主要通過調(diào)節(jié)INS、胰高血糖素、腎上腺素等激素來實現(xiàn)對血液GLU含量的調(diào)控，分娩當天突然遭受分娩與啟動泌乳，血液GLU含量驟然降低，能量供應(yīng)不足，脂肪動員加劇，便會產(chǎn)生大量的生酮前體物質(zhì)，增加了奶?；纪〉娘L險。而本試驗中發(fā)現(xiàn)，分娩當天血清INS含量升高，之后慢慢降低，短暫的高血清INS含量可抑制脂質(zhì)分解，降低生酮前體物質(zhì)的生成，降低患酮病的風險。

ADP和Leptin都是脂肪組織分泌的激素，可以抑制肝臟脂肪合成，降低TG含量，促進脂肪氧化分解，增強肝臟脂肪氧化作用，減少肝臟脂肪堆積[24]。本試驗中，產(chǎn)后第20天，各試驗組奶牛血清ADP含量顯著高于對照組，血清TG含量顯著低于對照組，二者存在相關(guān)性，分析原因可能是ADP在肝細胞中與其受體結(jié)合，激活過氧化物酶體增殖物激活受體α信號通路及腺苷酸活化蛋白激酶信號通路，增加了肝臟脂肪的氧化，降低了肝臟脂質(zhì)生成和聚積而使奶牛處于相對健康狀態(tài)[25]。Leptin可以向中樞神經(jīng)系統(tǒng)傳遞能量狀況的信號從而對機體進行調(diào)控，調(diào)節(jié)攝食行為和能量消耗[26]。血清低Leptin含量表明能量缺乏，且研究結(jié)果表明，圍產(chǎn)期奶牛血清Leptin與GLU含量呈極顯著正相關(guān)[27]。Leptin通過限制TG在非脂肪細胞中的沉積來影響肝臟的功能，同時，Leptin可以提高INS敏感性[28]，從而調(diào)節(jié)糖脂代謝。本試驗中，隨著產(chǎn)后血清Leptin含量的逐漸上升，血清INS含量也逐漸下降，也印證Leptin提高INS敏感性的作用。研究顯示，圍產(chǎn)期奶牛NEB越嚴重，血清Leptin和ADP含量越低[29-30]。本試驗發(fā)現(xiàn)，產(chǎn)后第10天和產(chǎn)后第20天，試驗組奶牛血清ADP和Leptin含量顯著高于對照組。在調(diào)控脂肪代謝中，Leptin可通過自分泌方式抑制脂肪生成，并能促進TG分解，抑制脂肪酸合成酶表達和脂肪組織對INS反應(yīng)能力，最終發(fā)揮調(diào)控脂肪合成作用，增強INS敏感性，加快肝臟脂肪分解，抑制體脂動員，減輕NEB所導致的糖脂代謝紊亂，同時產(chǎn)后血清Leptin含量逐漸恢復，也反映了機體能量供應(yīng)的加強。

4 結(jié) 論

本試驗條件下，飼糧中單獨添加過瘤胃膽堿和有機鉻以及二者聯(lián)合應(yīng)用均可提高圍產(chǎn)期奶牛奶產(chǎn)量，改善奶牛機體能量供應(yīng)，調(diào)節(jié)糖、脂代謝，減輕肝臟負擔，緩解NEB狀態(tài)。